5′－核糖核苷酸含量高的醇母提取物及其制备方法

专利名称：5′－核糖核苷酸含量高的醇母提取物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物及其制备方法。
背景技术：
酵母提取物作为天然调料被广泛利用，为了提高呈味性(呈味性)，提出了各种5’-核糖核苷酸含量提高了的5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物或其制备方法。例如，在专利文献1中，公开了使用核酸含量高的酵母菌体，预先加热使酵母菌体的核糖核酸酶失活后，在pH8～12的范围提取RNA和提取物成分，然后，让5’-磷酸二酯酶和5’-腺苷酸脱氨基酶作用，使5’-核苷酸合计含有14重量％或以上的方法。在专利文献2中，公开了在易于提取RNA的碱性条件下，将酵母悬浮液的在RNA不分解成非呈味性核苷酸的温度下，并且为了抑制其它成分的提取，在短时间内结束提取工序后，让5’-磷酸二酯酶和5’-腺苷酸脱氨基酶作用，使含有5’-鸟苷酸和5’-肌苷酸各8重量％或以上，且肽和游离氨基酸合计16重量％或以上的方法。另外，在专利文献3中，公开了将用酸性水溶液处理(pH2～5，30～90℃，10～60分钟)的酵母菌体悬浮在水中，提取RNA和提取物成分后，让5’-磷酸二酯酶和脱氨基酶作用，制备分别含有10重量％或以上的5’-鸟苷酸、5’-肌苷酸、5’-胞苷酸、5’-尿苷酸的5’-核苷酸含量高的酵母提取物的制备方法。
专利文献1特公平7-93871号公报专利文献2专利第2604306号说明书专利文献3特开2002-101846号公报
发明内容本发明的目的在于提供5’-核糖核苷酸和氨基酸含量比以往更高的、呈味性进一步提高的酵母提取物及其制备方法。
本发明人为了提高酵母提取物的5’-核糖核苷酸和氨基酸含量，不断进行悉心的研究，结果发现，将食用酵母的酸性水溶液处理与离心分离后水洗沉淀物、用放线菌产生的酶类处理相结合，可以得到与以往的酵母提取物相比，5’-核糖核苷酸和氨基酸含量大大提高的高质量的酵母提取物，从而完成了本发明。
即，本发明提供(1)5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物，其特征在于含有5’-肌苷酸和5’-鸟苷酸合计24重量％或以上(以钠盐水合物计)、肽20重量％或以上、以及肽和游离氨基酸合计28重量％或以上，(2)上述(1)所述的酵母提取物，其含有5’-肌苷酸和5’-鸟苷酸各12重量％或以上(以钠盐水合物计)，(3)上述(1)所述的5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物制备方法，其特征在于用酸性水溶液处理食用酵母，离心分离，所得沉淀物用水洗涤后，与放线菌产生的酶接触，(4)上述(3)所述的制备方法，其中在pH1.0～2.0，50～90℃下，进行酸性水溶液的处理10～60分钟。
(5)上述(3)所述的制备方法，其中在pH4.0～6.0，50～90℃下，进行水洗处理10～60分钟，(6)上述(3)所述的制备方法，其中在酶反应前，在70～100℃下，加热10～60分钟，在pH6.0～8.0与放线菌产生的酶接触，和(7)上述(3)所述的制备方法，其中浓缩所得5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物，所得浓缩液在50℃或以上加热，并喷雾干燥。
通过本发明可以得到5’-核糖核苷酸和氨基酸含量比以往大幅提高且呈味性显著得到改善的高质量的酵母提取物。

图1是表示试验例2中的洗涤处理pH与IG含量的关系的图。
图2是表示试验例3的洗涤处理中酵母悬浮浓度与IG含量的关系的图。
具体实施方式用作本发明酵母提取物原料的酵母只要是食用酵母，对其没有特别的限定，鲜酵母、用其公知的方法适当干燥得到的干酵母均可，例如，可以使用葡萄酒酵母、面包酵母、清酒酵母、啤酒酵母等。特别优选RNA含量高的产蛋白假丝酵母(Candida utilis)，从工业上的产率看，优选以干酵母的形式使用。
本发明的酵母提取物的特征在于，以钠盐水合物计，含有5’-肌苷酸和5’-鸟苷酸合计24重量％或以上，肽20重量％或以上以及肽和游离氨基酸合计28重量％或以上。特别优选含有5’-肌苷酸和5’-鸟苷酸各12重量％或以上。
这里，肽是总氨基酸量减去游离氨基酸量的值，5’-核糖核苷酸含量、总氨基酸量、游离氨基酸量是用后面所示的方法测定的值。
本发明的酵母提取物是粉末、液体、糊等任何形态均可，用后面所示的方法测定的溶解色是1.0或以下的淡色，在粉末的情况下，优选粗比体积(粗比容)2.0或以下、休止角为40度或以下的流动性好的酵母提取物。
本发明的酵母提取物可以如下制备用酸性水溶液处理食用酵母，然后离心分离，所得沉淀物用水洗涤后，与放线菌产生的酶接触。
用酸性水溶液处理酵母时，作为原料酵母，使用例如干酵母时，通常以5～30重量％，优选10～20重量％的浓度，将酵母悬浮在水(例如，离子交换水等)中。悬浮液的浓度过低时，导致产率降低，而浓度过高时，粘度过于增高，搅拌等变得困难。用盐酸等酸将该悬浮液调节到pH1.0～2.0，在50～90℃加热、搅拌10～60分钟，进行酸性水溶液处理。
接着，用常规方法离心分离，收集含有RNA的酵母菌体的沉淀物。
将所得沉淀物以例如1～30重量％的浓度再次悬浮在水中，用氢氧化钠等碱调节到pH4.0～6.0，在50～90℃加热、搅拌10～60分钟，洗涤，再次离心分离。该洗涤可以提高5’-核糖核苷酸的含量。洗涤时固体成分浓度越低，可以更有效地提高含量。使这里所得的沉淀物与放线菌产生的酶接触，进行酶处理。
作为在本发明中使用的放线菌产生的酶类，可以举出以5’-磷酸生成型核酸酶、脱氨基酶和蛋白酶作为必需构成酶的酶类，例如，用本身公知的方法培养链霉菌属的菌株，含有5’-磷酸生成型核酸酶、脱氨基酶和蛋白酶的培养物可以直接使用，或者使用培养滤液、菌体、菌体破碎物、它们的提取液、其浓缩物、干燥物等，或者用公知的方法收集以5’-磷酸生成型核酸酶、脱氨基酶和蛋白酶作为必需构成酶的酶类，可以使用其粗制物或以纯化酶的形式使用。
由于培养液要么体积大，要么为防止腐败需要冷冻保存等措施，添加量增多时，存在在生产现场的计量等费力等问题，最好以没有这些问题的适于工业生产的干酵母形式使用，特别是以酶效价不降低而粉末化的酶形式使用。作为干燥方法，只要是品温(品温)在80℃以下，不使酶失活的干燥方法，公知的例如恒温干燥、减压(真空)干燥、冷冻干燥等任何方法均可，优选冷冻干燥等。
作为放线菌产生的酶类，例如，使用干燥培养液的水溶性部分而得到的干燥物时，通常相对于酵母，使用0.1～3.0重量％左右。也可以使用以该干燥物换算的效价为基准，用水适当稀释干燥培养液的水溶性部分得到的物质，另外，使用培养液本身时，通常相对于酵母，可以以5.0～50.0重量％左右的比例使用。
酶处理时，例如，以5～30重量％，优选10～20重量％的浓度将上述沉淀物悬浮在水中，用碱调节到pH6.0～8.0，在70～100℃，加热10～60分钟后，在35～60℃，优选35～45℃的初期温度下，该酵母固体成分中添加0.1～3.0重量％；优选0.2～2.0重量％的放线菌产生的酶类，经3～10小时，优选3～8小时，升温至60～70℃。接着，在60～70℃，优选62～68℃，对该液体作用1～8小时，优选2～5小时。酶处理后，在90～100℃加热10～60分钟使酶失活，然后冷却至约60℃以下。
对所得液体进行精密过滤。精密过滤按照本身公知的方法，例如，用采用平均孔径0.05～0.2μm，优选0.1～0.2μm的氧化铝陶瓷膜的微孔过滤器进行。这种氧化铝陶瓷膜例如可以从日本ガイシ(株)、ノリタケカンパニ-リミテド购得。另外，对过滤温度没有特别的限定。
与高分子膜材料比较，氧化铝陶瓷材质的膜由于膜面的细孔径分布均匀且分布窄，因此可以得到高的过滤精度，与高分子膜材质相比，耐热、耐压、耐磨损性、耐盐或酸、碱和醇等有机溶剂耐性非常优异，可以高过滤压力运转、对高粘性高浆液有效、可以蒸汽杀菌等，在卫生上是优选的。
通过这种精密过滤，可以得到透明且味道、气味、颜色等外观等优异、风味良好的所需的5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物。
根据需要，精密过滤后，也可以浓缩使滤液的固体成分浓度为10～50重量％，优选30～40重量％。对浓缩方法没有特别的限定，例如，可以采用常压加热浓缩、减压过热浓缩、冷冻浓缩等公知的浓缩方法。而且，也可以用公知的方法，干燥、制成粉末。特别优选加热至50℃以上并喷雾干燥作为防止浓缩液凝胶化的方法。
本发明的5’-核糖核苷酸含量高的酵母提取物可以和公知的酵母提取物一样使用，例如，可以将所得酵母提取物用在农产加工食品(包括蔬菜、水果、谷物等加工品)、水产加工食品(包括鱼贝类、海藻等加工品)、畜产加工食品(包括畜肉、蛋、乳制品等加工品)、海带、木鱼煮的汤、高汤、调味汁、酱油、豆酱、所有调合在一起的调料等中。
通过以下的实施例和试验例更详细地说明本发明，但本发明不限定于它们。另外，除非特别说明，“％”是指重量％。
在下面的实施例和试验例中，固体成分浓度是按照《食品卫生检查指南》理化学编厚生省主编社团法人日本食品卫生协会(1991年)的试验法1.水分(3)干燥助剂法，在105℃经3小时测定水分，由100减去测定的水分算出。
食盐浓度用《卫生试验法注解》日本药学会编，金原出版(1990)(10)氯离子1)摩尔法测定。
总氮量用微量凯氏定氮法(ミクロケルダ一ル法)测定。另外，总氮量乘以6.25为蛋白质量。
对于RNA含量，用社团法人日本化学会编，生化学实验讲座2，“核酸的化学L-分离精制-”，6-8页(1975年，株式会社东京化学同人发行)中记载的Schmidt-Thannhauser-Schneider法，测定用适当蒸馏水稀释试样，用膜滤器(0.45μm)过滤而制备的检测液。
对于5’-核苷酸含量，用日立制作所制的高效液相色谱仪L5020型测定用适量蒸馏水稀释试样，用膜滤器(0.45μm)过滤制备的检测液。另外，柱子使用Develosil ODS-UG5(野村化学制)，检测在254nm处进行，流动相液体使用用蒸馏水将85％磷酸13ml和磷酸钾0.34g溶解并定容为1L的液体。
对于总氨基酸，将试样(相当于蛋白质5mg)与20％盐酸1ml一起放入耐热性玻璃容器中，密封，在110℃水解20小时后，用蒸发器除去盐酸，和以下游离氨基酸的测定同样地进行测定。
对于游离氨基酸，使用岛津制作所制的高效液相色谱仪LC-10氨基酸分析系统，测定用适量蒸馏水稀释试样，最终稀释是用pH2的柠檬酸缓冲液稀释，用膜滤器(0.45μm)过滤制备的检测液。
对于溶解色，用分光光度计，在测定波长440nm、1cm比色杯中测定用蒸馏水稀释试样成为固体成分1％的水溶液，用膜滤器(0.45μm)过滤制备的检测液。
对于比体积，将试样用漏斗平稳地倒入量筒中，测定倒入的试样的重量和容积，用每单位重量的体积表示。
实施例1用36％盐酸将产蛋白假丝酵母(Candida utilis)(RNA11％)的10％悬浮液调节到pH1.7，在60℃加热10分钟。将其离心分离，得到沉淀物。往该沉淀物中加水，制成8％悬浮液，用30％NaOH调节至pH5.0，离心分离，得到沉淀物。在90℃下加热该沉淀物的10％悬浮液10分钟后，用30％NaOH调节至pH7.7，加入放线菌产生的酶类干燥粉末，在40℃至65℃保持12小时。反应结束后，在90℃加热10分钟，冷却至60℃。过滤反应结束后的液体，用蒸发器浓缩滤液。将浓缩液保温在60℃，用喷雾干燥机干燥，得到粉末。
所得酵母提取物的成分分析值示于表1中。
表1
※15’-肌苷酸2钠7水合物的形式※25’-鸟苷酸2钠7水合物的形式※3总氨基酸-游离氨基酸实施例2用36％盐酸将产蛋白假丝酵母(Candida utilis)(RNA11％)的10％悬浮液调节到pH1.7，在60℃加热10分钟。将其离心分离，得到沉淀物。往该沉淀物中加水，制成2％悬浮液，用30％NaOH调节至pH5.0，在90℃下加热30分钟后，离心分离，得到沉淀物。用30％NaOH将该沉淀物的10％悬浮液调节至pH7.7，加入放线菌产生的酶类干燥粉末，在40℃至65℃保持12小时。反应结束后，在90℃加热10分钟，冷却至60℃。过滤反应结束后的液体，用蒸发器浓缩滤液。将浓缩液保温在60℃，用喷雾干燥机干燥，得到粉末。
所得酵母提取物的成分分析值示于表2中。
表2
※15’-肌苷酸2钠7水合物的形式※25’-鸟苷酸2钠7水合物的形式※3总氨基酸-游离氨基酸试验例1对含有5’-核糖核苷酸的酵母提取物的洗涤处理条件的研究(1)用36％盐酸将产蛋白假丝酵母(Candida utilis)(RNA11％)的10％悬浮液调节到pH1.7，在60℃加热10分钟。将其离心分离，得到沉淀物。往该沉淀物中加水，分别离心分离以下部分制成2％悬浮液的物质(试验区A)；制成2％悬浮液后，在90℃加热30分钟得到的物质(试验区B)；和制成2％悬浮液后，调节至pH5.0，在90℃加热30分钟得到的物质(试验区C)，得到沉淀物。将这些沉淀物制成10％的悬浮液，只将试验区A在90℃加热10分钟。用30％NaOH将各试验区的10％悬浮液调节至pH7.7，加入放线菌产生的酶类干燥粉末，在40℃至65℃保持12小时。反应结束后，在90℃加热10分钟，冷却至60℃。测定离心分离反应结束后的液体所得上清液中以固形物计的5’-核糖核苷酸含量，结果如表3所示。沉淀物的2％悬浮液经pH调节、加热处理的试验区C的5’-核糖核苷酸含量最高。
表3
※5’-肌苷酸和5’-鸟苷酸试验例2对含有5’-核糖核苷酸的酵母提取物的洗涤处理条件的研究(2)用36％盐酸将产蛋白假丝酵母(Candida utilis)(RNA11％)的10％悬浮液调节到pH1.7，在60℃加热10分钟。将其离心分离，得到沉淀物。往该沉淀物中加水，制成2％悬浮液，调节至pH3～7后，进行加热处理和非加热处理，分别离心分离，得到沉淀物。将这些沉淀物制备成10％的悬浮液，只对非加热处理区在90℃加热10分钟。之后，用30％NaOH将各10％的悬浮液调节至pH7.7，加入放线菌产生的酶类的干燥粉末，在40℃至65℃保持12小时。反应结束后，在90℃加热10分钟，冷却至60℃。
测定离心分离反应结束后的液体所得上清液中以固形物计的5’-核糖核苷酸含量。
结果示于图1中。
如图1所示，调节至pH5和6且加热的液体的5’-核糖核苷酸的含量(图中IG含量)最高。
试验例3对含有5’-核糖核苷酸的酵母提取物的洗涤处理条件的研究(3)用36％盐酸将产蛋白假丝酵母(Candida utilis)的10％悬浮液调节到pH1.7，在60℃加热10分钟。将其离心分离，得到沉淀物。往该沉淀物中加水，制成2～8％悬浮液，调节至pH5后，在90℃加热30分钟后，分别离心分离，得到沉淀物。用30％NaOH将这些沉淀物的10％悬浮液调节至pH7.7，加入放线菌产生的酶类的干燥粉末，在40℃至65℃保持12小时。反应结束后，在90℃加热10分钟，冷却至60℃。
测定离心分离反应结束后的液体所得上清液中以固形物计的5’-核糖核苷酸含量。
结果示于图2中。
如图2所示，悬浮浓度越低，5’-核糖核苷酸含量(图中IG含量)越高。
工业实用性如以上所记载的，本发明可以得到5’-核糖核苷酸和氨基酸含量非常高、呈味性显著得到改善的酵母提取物。
权利要求
1.一种5′-核糖核苷酸含量高的酵母提取物，其特征在于含有5′-肌苷酸和5′-鸟苷酸合计24重量％或以上(以钠盐水合物计)，肽20重量％或以上，以及肽和游离氨基酸合计28重量％或以上。
2.权利要求1所述的酵母提取物，含有5′-肌苷酸和5′-鸟苷酸各12重量％或以上(以钠盐水合物计)。
3.权利要求1所述的5′-核糖核苷酸含量高的酵母提取物的制备方法，其特征在于用酸性水溶液处理食用酵母，离心分离，所得沉淀物用水洗涤后，与放线菌产生的酶接触。
4.权利要求3所述的制备方法，其中在pH 1.0～2.0、50～90℃下，进行酸性水溶液的处理10～60分钟。
5.权利要求3所述的制备方法，其中在pH 4.0～6.0、50～90℃下，进行水洗处理10～60分钟。
6.权利要求3所述的制备方法，其中在酶反应前，在70～100℃下，加热10～60分钟，在pH 6.0～8.0下与放线菌产生的酶接触。
7.权利要求3所述的制备方法，其中将所得5′-核糖核苷酸含量高的酵母提取物浓缩，所得浓缩液在50℃或以上加热，并喷雾干燥。
全文摘要
本发明提供5′－核糖核苷酸和氨基酸含量比以往更高的酵母提取物及其制备方法。用酸性水溶液处理食用酵母，离心分离，所得沉淀物用水洗涤后，与放线菌产生的酶接触，由此制备含有5′－肌苷酸和5′－鸟苷酸合计24重量％或以上，肽20重量％或以上，以及肽和游离氨基酸合计28重量％或以上的5′－核糖核苷酸含量高的酵母提取物。
文档编号C12P21/06GK1961743SQ20051012494
公开日2007年5月16日 申请日期2005年11月9日 优先权日2004年11月9日
发明者小谷弘一, 木田隆生, 波多野广行, 宫垣太郎, 三柳一树 申请人:武田麒麟食品株式会社