专利名称：从酶组合物中除去亚硫酸氢盐副产物的方法
从酶组合物中除去亚硫M盐副产物的方法 5 背景技术[oooi]在起治疗剂作用的口月蹄跻U中可包括不同类型的酶。例如，包括水 解口服多聚糖或抑制细菌生长的酶。更具体地说，例如，己报道为了除去血小板沉淀，在口月蹄跻仲可采用诸如变聚糖斷mutanase)、葡聚糖酶、木瓜蛋白酶 和1,3-葡聚糖等酶。io
通常，由其性质而言，酶对环境诸如pH、温駄离子浓度的改变是敏感的，因ltbil常有必要采取措施保护酶以维持所述酶的预期口腔护理功效。 为了改善酶的性能，己建议使用酶稳定剂，诸如螯合剂和抗氧化剂。这样酶稳 定剂的实例是EDTA、葡萄糖酸钠、亚硫M钠、金属没食子酸盐、锡酸钠和 抗坏血酸。15
然而，在酶稳定剂中，亚硫酸氢盐物质(bisulfitematerials),即含有亚硫,盐离子的化合物，显示对一齡体有毒，和/或往往改变口腔护理制剂的 感官性质。因此，在所述组合物进一步加工和提供给消费者之前，希望能除去 或降低酶组合物中的亚硫酸氢盐物质。虽然亚^1M盐物质可通过常规技术诸 如碱性提取和氧化剂中和除去，但这些技术往往对口腔组合物中酶的催化活性20产生不利影响。因此，希望引入对治疗组合物中酶活性没有负面影响的的除去 亚硫,盐物质的替代性方法。迄今为止， 一直没有可在中性非氧化条件下实 施的从酶组合物中除去亚硫酸氢盐物质的常规方法。发明内容25
根据本发明，提供一种从包含亚硫酸氢盐物质和一种或多种酶的组合物中除去亚硫酸氢盐物质的方法。所述方法包括将组合物与包含至少一个醛 官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物；由此可/Ai^述组合物中分离 所述醛-亚硫,盐复合物。
在一个实施方式中，所述方法包括将组合物与包含至少一个醛官能30团诸如醛糖的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物，然后从组合物中分离该醛-亚硫酸驢复合物，其中所述酶选自木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、丝氨酸蛋白 酶、膨疑乳蛋白酶、无花果蛋白酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶乳糖过氧化物酶、乳铁传递蛋白、溶菌酶、脂肪分解酶、碱性蛋白酶(alcalase)、糖酶0 cait)ohydrase)、葡萄糖淀粉斷glucoamylasae)、葡聚糖酶、变位斷mutase)、丹宁 5 ，率^(tannase:)和脂肪酶。
在另一个实施方式中，提供一种从包含亚硫酸氢盐物质和酶的组合 物中除去亚硫酸氢盐物质的方法，其中所述方^^括将组合物与具有至少一个 醛官能团的基质接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物，然后从所述组合物中分离结 合了基质的亚硫酸氢盐。 io
在又一个实施方式中，进一步提供一种基本上不含亚硫酸氢盐物质的酶组合物。所述酶组合物通过将组合物与含有至少一个醛官能团的化合物接 触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物然后从所述组合物中分离所述醛-亚硫酸氢盐复 合物获得。1具体实施方式
本发明涉及一种从包含一种或多种酶的组合物中除去亚硫酸氢盐物 质的方法。更具体而言，发明涉及一种通过将酶组合物与含有至少一个酸官能 团的化合物接触以形成醛-亚硫M盐复合物然后从所述组合物中分离所^IE硫 M盐复合物的方法。本发明也涉及一种不含亚硫M盐的酶组合物，所述组20合物fflii将酶组合物与含有至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫,M盐复合物然后从所述组合物分离所述亚硫酸氢盐复合物而制备。
本发明提供一种从酶组合物中除去亚硫酸氢盐物质的方法，所述方 法通过使用具有至少一个与亚硫酸氢盐物质形成复合物的醛官能团的化合物， 然后从所述组合物中分离所述醛-亚硫&複盐复合物。4腿为，所述方法在基本 25中性非氧化条件下进行，从而获得基本上不含亚硫酸氢盐的包含基本上未卩絲军 的酶的组合物。[OOIO]本文使用的术语"卩絲牟"表示相对于未提取亚硫酸氢盐物质的酶组合 物而言酶活性的降低。根据本发明，在亚硫酸氢盐接触醛的步骤以及其后分离 亚硫Jt^盐-醛复合物的歩骤之后，或在这两个步骤之后，{ 保持酶活性的50% 30 以上，80%以卜-或90%以上。
术语"亚硫酸氢盐物质'表示包含化学键合的亚硫酸氢根离子或者包 含亚硫酸氢根离子作为化学复合物组分的化合物，诸如亚硫酸氢钠或其他亚硫 ,盐。
为了从酶组合物中除去亚硫酸氢盐，本发明4OT包含至少一个醛官 5育姻的化合物。 "麼'定义为一类具有R-CHO结构的羰基化合物，其中R基可以 是芳f^团或者脂肪族基团。为了获得基本上不含亚硫L酸氢盐的包含基本上未 ,率酶的组合物，可希望选择在中性非氧化条件下能与亚硫酸氢盐物质形成复 合物的醛。本发明的,以是具剤氐^T量例如小于约1000道尔顿的单官能醛。 所述醛可以是醛糖。io
M31/A^述组合物分离亚硫酸氢盐-醛复合物获得基本上不含亚硫酸 氢盐的组合物。这样的分离可通过本领域已知的任何分离方法诸如化学或者物 理方法、或者化学及物理方法的结合完成。适合于本发明的分离方法的实例包 括但不限于过滤、差异扩散、柱分离和珠子分离和通过局部化或鳌合分离。
另外，所述分离可通过将所述组合物与结合有醛的物体或物品相接15触，形成复合物，并除去结合有醛-亚硫酸氢盐复合物的物体或物品实现。作为 另外一种选择，为了获得具有基本上未P絲军酶的组合物，希望在^h亚^l酸氢 盐物质与酶组合物接触以及其后分离亚硫酸氢盐-醛复合物的步骤中都基本维持 中性非氧化劍牛。例如，酶溶液的pH可保持在约5到约8的范围内，并且保持 离子浓度。20
本发明的除去亚硫酸氢盐的方法可适用于包含任何类型酶的组合 物。有利的是，本发明可用于处理最终接触人或动物皮肤或者粘膜的酶组合物。 例如，酶组合物可以是任何一种能包含在口腔护理或者个人护理产品中的酶组 合物。这种酶的实例包括但不限于糖酶诸如葡糖淀粉酶；从天然果品中提取的 酶诸如蛋白酶，糖酶诸如a-淀粉酶、|3-淀粉酶和丹宁^*军酶，和脂肪酶诸如植25物脂肪酶、胃脂肪酶和胰脂肪酶。,为，经本发明处理的组合物中的酶可由 植物来源获得。在本发明的实践中可用的酶可以选自由a和P-淀粉酶、葡聚糖 酶、变聚糖斷mutanase)、天然酶诸如木瓜蛋白酶(来自木瓜)和菠萝蛋白酶(来 自菠萝)、丝氨酸蛋白酶诸如胰凝乳蛋白酶、无花果蛋白酶、碱性蛋白瞰alcalase)、 溶菌酶、果胶酶和葡聚糖酶组成的组。30
根据本发明的实施方式，提供一种禾,包含至少一个醛官能团的基质以实现方便地除去亚硫酸氢盐-醛复合物的方法。所,用包含至少一个醛官 能团的基质的方法可与不采用基质除去亚硫酸氢盐的方法在相同的条件下实施。具有醛官能团的基质可以是常规的基质，例如选自多孑L和无孔珠子(porous and non-porous beads)、薄膜、微粒禾口颗粒(specks,andpaiticles)组成的组。在另一5实施方式中，包含至少一个醛官能团的基质可分散在载体上以助于分离亚硫酸 誠-醛复合物。本领域已知的粗可类型的载体都可用于本发明。载体的实例包 括但不限于柱、容器、过滤器、海绵和;疑胶。
在又一实施方式中，提供一种基本上不含亚硫酸氢盐物质的酶组合 物，该酶组合物根据本发明的除去亚硫酸氢盐物质的方法制备，其中通过与包 io含至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫,盐复合物并从所述组合物 中分离该醛-亚硫M盐复合物以制得所述酶组合物。因为本发明的酶组合物是 在中性非氧化条件下制备的，所以组合物中酶的活性基本上没有卩絲军。雌为， 酶活性的约90%保持未卩絲军。由本发明方法生产的酶组合物基本上不含亚硫酸 氢盐物质，因此可以有利地用于口腔护理或个人护理产品，诸如洁齿剂、皮肤 15护理产品及头发和指甲护理产品。
虽然提及的具体实例已经对本发明进行了描述，但对本领域技术人 员来说显而易见的各种修改都属于本发明的范围。
权利要求
1.一种从包含亚硫酸氢盐物质和酶的组合物中除去亚硫酸氢盐物质的方法，所述方法包括将组合物与包含至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物，由此可从组合物中分离所述醛-亚硫酸氢盐复合物。
2. 权利要求1的方法，其中所述方法进一步包括从组合物中分离所述醛-亚硫,盐复合物。
3. 权利要求2的方法，其中包含至少一个醛官能团的化合物是具剤氏^T 量的单官能醛。
4.权利要求3的方法，其中单官能醛是调味剂或者香料。
5. 权利要求3的方法，其中单官能醛是醛糖。
6. 权利要求2的方法，其中所述分离选自过滤、差异扩散、柱分离和珠子分离。
7. 权利要求l的方法，其中包含至少一个醛官能团的化合物在pH约5到 15约8的范围内与所述组合物结合。
8. 权利要求2的方法，其中在形成醛-亚^lM盐复合物的步骤之后所述 一种或多种,本上不P絲军。
9. 权利要求2的方法，其中在分离醛-亚硫,盐复合物的步骤之后所述 ltt本上不,率。
10. ;R利要求l的方法，其中所述酶来自植物来源。
11.权利要求1的方法，其中酶选自木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、丝氨酸蛋 白酶、胰凝乳蛋白酶、无花果蛋白酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶乳糖过氧 化物酶、乳铁传递蛋白、溶菌酶、脂肪懒军酶、碱性蛋白酶、糖酶、葡萄糖淀 粉酶、葡聚糖酶、变位酶、丹宁分解酶和脂肪酶。
12.权利要求2的方法，其中在分离歩骤后酶活性的90%以上未卩絲牟。
13. —种从包含亚硫酸氢盐和酶的组合物中除去亚硫酸氢盐的方法，所述 方法包括将组合物与具有至少一个醛官能团的基质接触以形成醛-亚硫酸氢盐复 合物，由此可从组合物分离结合基质的亚硫酉 盐。
14. 权利要求13的方法，其中所述方法进一歩包括从组合物中分离结合基 30质的亚硫,盐。
15. 权利要求13的方法，其中所述基质选自多孑L和无孔珠子、薄膜、微粒 和颗粒。
16. 权利要求13的方法，其中所述基质分散在载体上。
17. 权利要求16的方法，其中所述载体选自柱、容器、过滤器、海绵和凝5胶。
18. 权利要求13的方法，其中醛是醛糖。
19. 一种基本上不含亚硫酸氢盐物质的酶组合物，所述酶组合物通过以下 步骤获得(a) 将组合物与含有至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐 io复合物；禾口(b) /A^述组合物中分离该醛-亚硫麟盐复合物。
20. 权利要求19的酶组合物，其中酶活性的约90%保持未糊率。
全文摘要
本发明提供的是从包含亚硫酸氢盐物质和酶的组合物中除去亚硫酸氢盐物质的方法。该方法包括将组合物与包含至少一个醛官能团的化合物接触以形成醛-亚硫酸氢盐复合物，由此可从所述组合物中分离该醛-亚硫酸氢盐复合物。
文档编号C12N9/00GK101243180SQ200680029963
公开日2008年8月13日 申请日期2006年8月16日 优先权日2005年8月17日
发明者J·G·马斯特斯, J·布拉姆斯 申请人:高露洁-棕榄公司