专利名称：水牛属产品分子诊断试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及水牛属产(制)品的检验、诊断用的试剂盒，属于分 子生物学技术领域。
技术背景当前鉴别水牛属产(制)品所采用的主要方法是通过观察(肉眼 或显微镜)和气味辨别。在鉴别与水牛同为牛亚科的其它牛种产(制) 品时，上述几种方法均无法区分，这是由于动物的表型由编码蛋白的 基因所决定，牛亚科内物种间同源蛋白差异极小，它们的产(制)品 外观、气味甚至纹理极其相似。在科分类及以上物种产(制)品间鉴别，如牛羊源性成分的鉴别检测，已有与本发明类似的PCR鉴别过程，但所采用的基因位点无法应用于亚科内物种间的鉴别；而且，科分类 及以上物种产(制)品间表型差异较大，其鉴别工作，除了无法观察 或其它感官鉴别的情形，可以通过观察和气味辨别替代。 发明内容本发明的目的是针对现有鉴别水牛属产(制)品的方法存在的不 足，提供一种检出率高、假阳性率低，使用方便的水牛属产(制)品 分子诊断试剂盒。本发明的目的是这样实现的水牛属产品分子诊断试剂盒，包括 盒体，其特征是盒体内设有以水牛属特异性基因位点为基础设计的水牛属特异性引物对和PCR体系。所述的水牛属特异性引物对，即上游: 5' -GCGCTCCACAGAATCTCGA-3 ，，下游5' -GAGTGCAGCAGGGGCCAGC-3 ，的 部分或全部。所述的PCR体系中Mgcl2浓度为lmM， Taq酶1U/25W，退火温度60-64°C。本发明科学合理，通过大量的测序工作和比对分析，获得属间物 种特异性基因位点，采用PCR扩增和电泳检测方法解决了属间物种产 (制)品的鉴别难题。试剂盒所采用的分子生物学试剂均为商品化产 品，对水牛属产(制)品鉴别检出率很高，假阳性率低，结果稳定， 重复性好。经过对29个水牛基因组模板进行PCR反应试验，均检出特 异性扩增条带，检出率很高，在3次水牛、黄牛和牦牛基因组样本的 混合检测试验中，均检出水牛样本，并且未出现假阳性结果。水牛属 产(制)品分子诊断试剂盒，应用于食品检验领域和畜牧技术领域。
图1是以水牛、黄牛和牦牛基因组样本同批混合检测，用特异性 引物进行PCR反应，结果获得指示剂位置(200 bp左右)附近的水牛 特征条带(203bp)，而黄牛和牦牛基因组样本未见特征条带的图片(采 用其它条件时，三种基因组样本均出现较多条带)，图中1，2道为 水牛样本；3，4，5道为黄牛样本；6，7，8道为牦牛样本。图2是对29个水牛样本进行超过40次PCR检测，均检出特征条带 的图片，图中l-13道为不同水牛个体样本。
具体实施方式
1、 基因组样本的制备参考商品化成套试剂说明和分子生物学实验 手册；2、 根据所制备的不同样本的DNA模板，用本发明中的特异性引物 和试剂按说明要求进行PCR反应；3、 通过琼脂糖凝胶电泳检测(需PCR仪和相应设施)，在指示剂 位置(200 bp左右)检测到PCR条带的样本可判定为水牛来源。图1所示，以水牛、黄牛和牦牛基因组样本同批混合检测，用特异性引物进行PCR反应，结果获得指示剂位置(200 bp左右)附近的 水牛特征条带(203bp)，而黄牛和牦牛基因组样本未见特征条带(采 用其它条件时，三种基因组样本均出现较多条带)，1,2道为水牛样 本；3，4，5道为黄牛样本；6，7，8道为牦牛样本。图2所示，对29个水牛样本进行超过40次PCR检测，均检出特征 条带，1-13道为不同水牛个体样本。
权利要求
1、一种水牛属产品分子诊断试剂盒，包括盒体，其特征是盒体内设有以水牛属特异性基因位点为基础设计的水牛属特异性引物对和PCR体系。
2、 根据权利要求1所述的水牛属产品分子诊断试剂盒，其特征是 所述的水牛属特异性引物对，即上游5'-GCGCTCCACAGAATCTCGA-3'，下 游5'-GAGTGCAGCAGGGGCCAGC-3'的部分或全部。
3、 根据权利要求1所述的水牛属产品分子诊断试剂盒，其特征是 所述的PCR体系中Mgcl2浓度为lmM, Taq酶1U/25W，退火温度60-64°C 。
全文摘要
本发明公开了一种水牛属产品分子诊断试剂盒，包括盒体，其特征是盒体内设有以水牛属特异性基因位点为基础设计的水牛属特异性引物对和PCR体系。原理是通过测序和比对分析，获得属间物种特异性基因位点，采用PCR扩增和电泳检测方法解决了牛亚科内水牛属与其它属间物种产(制)品的鉴别难题。试剂盒所采用的分子生物学试剂均为商品化产品，对水牛属产(制)品鉴别检出率很高，假阳性率低，结果稳定，重复性好，可应用于食品检验技术领域和畜牧技术领域。
文档编号C12Q1/68GK101215603SQ20071019237
公开日2008年7月9日 申请日期2007年12月26日 优先权日2007年12月26日
发明者冀德君, 孙辰晨, 洪 常, 常春芳, 杨章平 申请人:扬州大学