专利名称：一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法
技术领域：
本发明属于生物工程中微生物发酵的方法，特别涉及一种"秸秆微贮生物 添加剂"的固定化培养方法。
背景技术：
本项专利是在专利"秸秆发酵生物添加剂及其配制方法"(专利号ZL 97119176)(以下简称秸秆微贮生物添加剂)的基础上迸行的生产工艺技术 的改进研究。"秸秆微贮生物添加剂"可在7-10天内使半黄或干黄的各类农 作物秸秆变成气味酸香、湿润柔软、适口性好的反刍家畜粗词料。该项专利 具有很好的经济效益和社会效益。但在该菌剂的批量生产中存在需耗费大量 人力、物力制种和生产稳定性较差、生产成本较高等缺点，影响了该项专利 的产业化进程，而广泛应用的固定化技术恰好弥补了这些不足。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种"秸秆微贮生物添加剂"的固 定化培养方法。本项技术方法提供了适合"秸秆微贮生物添加剂"发酵的固 定化培养技术。
本发明的技术方案是
一种"秸秆微贮生物添加剂"的固定化培养方法，其特征在于 将固定化包埋载体8%的聚乙烯醇和2%海藻酸钠分别用热水熬化，按体积
比0.6:1.4比例混合，用Ca(0H)2溶液调节其pH值为7.2，灭菌后冷却，与活 化的"秸秆微贮生物添加剂"菌剂增殖培养18h后(其中菌液浓度为 109cfU/ml)的混合发酵菌剂按体积比1:1混合，在超净台内用10ml医用注射 器和其配套的针头将混有菌体的包埋剂滴入灭过菌(15磅，30mirO的0. 2M CaCl2溶液中，控制滴速，制成颗粒状(胶球直径为2-3mm)，使混合菌剂被包 埋在其中，在CaCl2溶液中浸泡30min，用无菌水冲洗2-3次后，加入增殖培 养基进行定时培养。
其培养基配方为每升含以下成分:酵母膏7. 5g，葡萄糖10g，蛋白胨7. 5g， 磷酸二氢钾2g，西红柿汁100ml，其pH值为6.5-7.0。"秸秆微贮生物添加剂"菌体固定化发酵条件为最适的培养温度为30°C;最适pH值为6.0的静止发酵培养。该条件可使"秸秆微贮生物添加剂"固定化发酵的稳定性达10个批次以上。
本发明效果是
本一种"秸秆微贮生物添加剂"的固定化培养方法能够达到充分发挥菌株的活性，提高其耐受性，提高菌剂生产的操作稳定性和简化操作工艺，简化反应后期微生物的回收问题，降低其生产成本和劳动强度，充分发挥微生物反应的优势，实现微生物的在线再生，从而可以保证工艺的可行性。
通过对"秸秆微贮生物添加剂"菌体的游离和固定化两种发酵培养的比较研究发现菌剂的固定化发酵可以达到游离发酵相同的效果，却使生产成本降低了 7%，生产的稳定性提高了 1. 5倍。
具体实施例方式
本项一种"秸秆微贮生物添加剂"的固定化培养方法提供了适合"秸秆微贮生物添加剂"发酵的固定化培养技术。
工艺过程为将活化的"秸秆微贮生物添加剂"菌剂加入增殖培养基中，
(增殖培养基每升配方为酵母膏7. 5g，葡萄糖10g，蛋白胨7.5g，磷酸二氢钾2g，西红柿汁100ml， pH值为6. 5-7.0)
将固定化包埋载体8%的聚乙烯醇和2%海藻酸钠分别用热水熬化，按体积比0. 6:1. 4比例混合，用Ca(0H)2溶液调节其pH值为7. 2，灭菌后冷却与增殖培养18h (菌液浓度为109cfu/ml)的混合发酵菌剂按体积比1:1混合，在超净台内用10ml医用注射器和其配套的针头将混有菌体的包埋剂滴入灭过菌
(15磅，30min)的0. 2M CaCl2溶液中，控制滴速，制成颗粒状(胶球直径为2-3mm)，使混合菌剂被包埋在其中，在CaCl2溶液中浸泡30min，用无菌水冲洗2-3次后，加入增殖培养基进行定时培养。
通过对"秸秆微贮生物添加剂"菌体的游离和固定化两种发酵培养的比较研究发现菌剂的固定化发酵可以达到游离发酵相同的效果，却使生产成本降低了7%，生产的稳定性提高了 1.5倍。"秸秆微贮生物添加剂"菌体固定化发酵条件为3(TC为最适的培养温度；6. 0为最适pH值的静止发酵培养。该条件可使"秸秆微贮生物添加剂"固定化发酵的稳定性达10个批次以上。
权利要求
1、一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法，其特征在于将固定化包埋载体8％的聚乙烯醇和2％海藻酸钠分别用热水熬化，按体积比0.6∶1.4比例混合，用Ca(OH)2溶液调节其pH值为7.2，灭菌后冷却，与活化的“秸秆微贮生物添加剂”菌剂增殖培养18h后-其中菌液浓度为109cfu/ml-的混合发酵菌剂按体积比1∶1混合，在超净台内用10ml医用注射器和其配套的针头将混有菌体的包埋剂滴入灭过菌-15磅，30min-的0.2MCaCl2溶液中，控制滴速，制成颗粒状-胶球直径为2-3mm-，使混合菌剂被包埋在其中，在CaCl2溶液中浸泡30min，用无菌水冲洗2-3次后，加入增殖培养基进行定时培养。
2、 根据权利要求l所述的"秸秆微贮生物添加剂"的固定化培养方法，其特 征在于其培养基配方为每升含有以下成分酵母膏7.5g，葡萄糖10g，蛋白 胨7. 5g，磷酸二氢钾2g，西红柿汁100ml，其pH值为6. 5-7.0。
3、 根据权利要求l所述的"秸秆微贮生物添加剂"的固定化培养方法，其特征在于"秸秆微贮生物添加剂"菌体固定化发酵条件为最适的培养温度为3(TC;最适pH值为6.0的静止发酵培养。
全文摘要
一种“秸秆微贮生物添加剂”的固定化培养方法将活化的“秸秆微贮生物添加剂”菌剂与固定化包埋载体(8％聚乙烯醇和2％海藻酸钠按体积比0.6∶1.4的混合物)按体积比1∶1混合后，在超净台内用10ml医用注射器和其配套的针头将混有菌体的包埋剂滴入灭过菌的0.2M CaCl<sub>2</sub>溶液中，控制滴速，制成颗粒状，使混合菌剂被包埋在其中，在CaCl<sub>2</sub>溶液中浸泡，用无菌水冲洗，加入增殖培养基进行定时培养。本方法能够达到充分发挥菌株的活性，提高其耐受性，提高菌剂生产的操作稳定性和简化操作工艺，简化反应后期微生物的回收问题，降低其生产成本和劳动强度，充分发挥微生物反应的优势，实现微生物的在线再生，保证工艺的可行性。
文档编号C12N11/00GK101659951SQ20081005434
公开日2010年3月3日 申请日期2008年8月29日 优先权日2008年8月29日
发明者寰 范 申请人:天津市农业生物技术研究中心