专利名称：具有胞内可裂解的键的免疫共轭物的制作方法
技术领域：
本发明涉及靶向不同癌细胞、传染病生物体的能力改进和/或用于治疗自身免疫性疾病的治疗共轭物，该共轭物包含靶向(结合)部分和属于药物的喜树碱基团的治疗部分。靶向部分与治疗部分经由增加治疗效力的胞内可裂解的键连接。
背景技术：
多年来，在特异性靶向药物疗法领域中科学家的一个目的是使用单克隆抗体 (MAb)用于向人癌症特异性递送毒性剂。已经开发了肿瘤相关MAb与适当毒性剂的共轭物，但在癌症的治疗中成败参半，在其他疾病诸如传染病和自身免疫性疾病中几乎无应用。毒性剂是最通常的化疗药物，尽管还已经将发射粒子的放射性核素、或细菌或植物毒素与MAb共轭，尤其是用于癌症疗法(Siarkey和Goldenberg，CA Cancer J Clin. 2006 Jul-Aug ；56 (4) :226-243)，以及最近，利用放射免疫共轭物用于某些传染病的临床前治疗 (Dadachova 和 Casadeval 1，Q J Nucl Med Mol Imaging 2006 ；50 (3) :193-204 ；通过引用并入本文)。利用MAb-化疗药物共轭物的益处是(a)化疗药物本身结构是充分确定的；(b) 化疗药物通常在远离MAb抗原结合区的特定位点利用非常确定的共轭化学与MAb蛋白连接；(c)与涉及MAb和细菌或植物毒素的化学共轭物相比，MAb-化疗药物共轭物的制备更具有可重复性，因此更有商业发展前途并且容易获得管理批准；和(d) MAb-化疗药物共轭物的系统毒性比放射性核素MAb共轭物的数量级低。对蛋白-药物共轭物的早期工作指出，一旦被靶细胞内化，为了蛋白-化疗药物共轭物成为有用的治疗，药物优选地以它原来的形式释放。Trouet等(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79 :626-629(1982))显示了在药物和靶向部分之间利用特定肽接头的益处，所述肽接头被溶酶体裂解以释放出完整药物。尤其是，根据肿瘤中的PH经常低于正常生理pH的发现，开发了使用温和的酸可裂解的接头(如包含腙的接头)制备的MAb-化疗药物共轭物 (Willner 等，美国专利 5，708，146 ;Trail 等(Science 261:212-215(1993))。第一种批准的MAb-药物共轭物吉妥珠单抗奥佐米星，在抗-CD33抗体人化P67. 6与强效的卡奇霉素衍生物之间掺入相似的酸不稳定性腙键。Sievers等，J Clin Oncol. 19 =3244-3254(2001)； Hamann等，Bioconjugate Chem. 13 :47-58 (2002)。在一些情况，制备在化疗药物与MAb之间具有还原性不稳定的阻隔的二硫键的MAb-化疗药物共轭物(Liu等，Proc Natl Acad Sci USA 93 :8618-8623(1996))。又一种可裂解的接头包括组织蛋白酶B-不稳定的二肽间隔物，诸如Phe-Lys或 Val-Cit，类似于Trouet等的包含1至4个氨基酸的溶酶体不稳定性肽间隔物，在药物与二肽之间另外掺入可折叠的间隔物(Dubowchik等，Bioconjugate Chem. 13 =855-869(2002)； Firestone 等，美国专利 6，214，345B1 ；Doronina 等，Nat Biotechnol. 21 :778-784 (2003)) 后一种方法也可用于制备喜树碱的免疫共轭物(Walker等，Bioorg Med Chem Lett. 12 217-219(2002))。已经研究的另一种可裂解的部分是掺入抗体与化疗药物之间的接头中的酯键。Gillimard和Saragovi已经发现，当紫杉醇的酯与抗-大鼠p75MAb即MC192或抗-人TrkA MAb即5C3共轭时，发现共轭物表现靶特异性毒性。Gillimard和Saragovi， Cancer Res. 61 :694-699 UOOl)。在许多情况下，本发明的共轭物具备比未共轭或“裸”抗体或抗体片段更大的效力，尽管这种未共轭的靶向分子已经用于特定的情形。例如，对于癌症，裸抗体已经在淋巴瘤(坎帕斯 和RITUXAN )、结肠直肠癌和其他癌(ERBITUX 和阿瓦斯汀⑧)、乳腺癌(赫赛汀 )以及目前处于临床开发的许多癌症(如，依帕珠单抗)的治疗中起作用。在大多数此类情况中，临床使用已经包括将这些裸抗体或未共轭抗体与其他疗法诸如化疗或放疗组合。大量抗体也可用于治疗自身免疫疾病和其他免疫失调疾病，诸如肿瘤坏死因子 (TNF)和B细胞(RITUXAN )抗体用于治疗关节炎，并且正被研究用于其他这类疾病，诸如 B细胞抗体、RITUXAN 和依帕珠单抗用于治疗系统性红斑狼疮和舍格伦氏综合症、以及青少年糖尿病和多发性硬化。裸抗体也正被研究用于败血症和败血病性休克、阿尔茨海默病、 和传染性疾病。抗-传染性单克隆抗体的开发最近由Reichert和Dewitz综述(Nat Rev Drug Discovery 2006 ;5 :191-195)，通过引用并入本文，概述了已经寻求针对其的裸抗体疗法的重点病原体，只有针对2种病原体(呼吸道合胞病毒和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus))的抗体处于III期临床试验或被销售，针对25种其他病原体的抗体处于临床研究，针对20种病原体的抗体在临床研究期间中断。对开发更强效的抗-病原体或抗癌症抗体和其他结合部分存在需要。可开发这种抗体介导的治疗以裸(未共轭)、放射性标记、或药物/毒素共轭物的形式用于治疗许多不同病原体，包括细菌、真菌、病毒和寄生虫。对开发更有效的用于治疗癌症、病原体和其他疾病的带有胞内可裂解接头的抗体共轭物进一步存在需要。在递送药物/毒素或放射性核素共轭物的情形中，这可通过直接抗体共轭或通过称为预靶向的间接方法实现，其中双特异性的抗体用于靶向病损，而治疗剂通过与集中在病原体、癌症或被治疗的无论何种病损的双特异性抗体的臂之一结合而二次靶向(Goldenberg等，J Clin Oncol. 2006 FeblO ； 24(5) :823-34. ；Goldenberg 等，J Nucl Med. 2008 Jan ；49(1) :158_63，各自通过引用全文并入本文)。
发明概要通过提供用于制备药物-结合部分共轭物的改进方法和组合物，本发明解决了本领域未满足的需要。公开的方法和组合物可用于治疗其他治疗形式难治的或对其他治疗形式响应性差的多种疾病和病症，并可包括针对其可开发的或可获得或已知的用于选择性靶向的适合的靶向(结合)部分的疾病。优选地，靶向部分是抗体、抗体片段、双特异性的或其他多价抗体、或其他基于抗体的分子或化合物。抗体可以是各种同种型，优选地IgGl、 IgG2a、IgG3、IgG4或IgA，可以是嵌合人-小鼠抗体、嵌合人-灵长类动物抗体、人化抗体(人构架区与鼠高变(CDR)区)、或完全人抗体、以及其变体，诸如半_IgG4抗体(称为“单抗体(unibodies) ”)，如 van der Neut Kolfschoten 等(Science 2007 ；317 :1554-1557) 所述，通过引用并入本文。然而，可使用本领域已知的其他结合部分，诸如适体、avimer或靶向肽。针对其存在这种靶向部分的优选疾病或病症为，例如，癌症、免疫失调病症(包括自身免疫性疾病和炎性疾病)、和感染性生物造成的疾病。因此，公开的方法和组合物可适用于治疗靶向部分用于对其递送细胞毒性剂的疾病和病症。这种疾病或病症的特征可以是，存在当例如在癌症或病原性生物体感染的免疫疗法中使用未共轭或裸露的靶向部分时没有充分受影响的靶分子或靶细胞 (关于用于疾病疗法的抗体与同位素、药物和毒素的免疫共轭物的制备方法，参见，例如美国专利 No. 4，699，784 ;4，824，659 ;5，525，338 ;5，677，427 ;5，697，902 ;5，716，595 ； 6，071，490 ；6，187，284 ；6，306，393 ；6，548，275 ；6，653，104 ；6，962，702 ；7，033，572 ； 7，147，856 ；7，259，240 和美国专利申请公布 No. 20050175582(目前弃权)；20050136001 ； 20040166115(目前弃权)；20040043030 (目前弃权)；20030068322 (目前弃权)和 20030026764(目前弃权)，上述每一个专利和专利申请的实施例部分通过引用并入本文)。在优选实施方案中，喜树碱(CPT)及其类似物和衍生物是优选的化疗部分，尽管本发明不限于此。在本发明范围中的其他化疗部分有紫杉烷(如，浆果赤霉素III、 泰素)、埃坡霉素、蒽环霉素药物(如，阿霉素(DOX)、表柔比星、吗啉代阿霉素(吗啉代-D0X)、氰基吗啉代-阿霉素(氰基吗啉代-D0X)和2-吡咯啉基阿霉素Q-PD0X)；参见 Priebe W(编著)，ACS symposium series 574 (ACS 专题论文集系列 574)，American Chemical Society (美国化学学会)，WashingtonD. C.出版，1995 (332pp)和 Nagy 等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93 :2464-2469,1996)，由格尔德霉素示例的苯醌袢霉素(DeBoer等， Journal of Antibiotics 23 :442-447,1970 ；Neckers 等，Invest. New Drugs 17 :361-373, 1999)、等等。优选地，在本发明优选实施方案的免疫共轭物中，靶向部分连接于至少一个化疗部分；优选地1至约5个化疗部分；最优选地约7至约12个化疗部分。关于药物的CPT基团，在含水缓冲液中不溶性的问题和其结构中E-环的δ -内酯部分在生理条件下不稳定的问题是相关的。一种方法是用氨基酸酰化20-羟基，并偶联该氨基酸的 α-氨基与聚-L-谷氨酸(Singer 等，The Camptothecins =Unfolding Their Anticancer Potential (喜丰对喊展现其抗癌潜力),Liehr J. G. ， Giovanella, B. C.禾口 Verschraegen(编著)，NYAcad Sci. , NY 922 136-150 (2000)) 这一方法依赖于聚合分子向肿瘤位置的被动扩散。这种甘氨酸共轭也已被报道为制备CPT的水溶性衍生物 (Vishnuvajjala 等，美国专利 No. 4，943，579)和制备 PEG 衍生化 CPT (Greenwald 等 J. Med. Chem. 39 :1938-1940(1996))的方法。在后一种情形，已经在开发CPT的水溶性和长效作用形式的范畴中设想该方法，藉以增强CPT的体内半衰期，药物在体内循环中从其共轭物逐渐释放。水溶性CPT衍生物的一个例子是CPT-11。有关CPT-Il的药理学和其体内转化为活性 SN-38 的深入临床数据是可获得的(Iyer 和 Ratain，Cancer Chemother Pharmacol. 42 S31-43(1998) ；Mathijssen 等，Clin Cancer Res. 7 :2182-2194(2002) ；Rivory, Ann NY Acad Sci. 922 :205-215, 2000))。活性形式SN-38比CPT-11更强效约2至3个数量级。在某些示例性实施方案中，抗体或抗体片段的药物共轭物可用于将治疗药物靶向于病原体，诸如细菌、病毒、真菌和寄生虫。在优选实施方案中，这种药物-共轭靶向部分可与其他治疗方式，诸如抗真菌、抗生素和抗病毒药物和/或裸抗体、免疫调节剂(如干扰素、 白介素、和/或细胞因子)联合使用。放射免疫疗法用于治疗感染性生物的用途公开于，例如，美国专利 No. 4，925，648 ；5，332，567 ；5，439，665 ；5，601，825 ；5，609，846 ；5，612，016 ； 6，120，768 ；6，319，500 ；6，458，933 ；6，548，275 ；和美国专利申请公布 No. 20020136690 和 20030103982，上述每一个专利和专利申请的实施例部分通过引用并入本文。在有关癌症治疗的某些实施方案中，药物共轭物可与手术、放疗、化疗、使用裸抗体的免疫疗法、放射免疫疗法、免疫调节剂、疫苗等等联合使用。相似的组合在对靶向部分顺从的其他疾病诸如自身免疫性疾病的治疗中是优选的。例如，喜树碱共轭物可与TNF抑制剂、B细胞抗体、干扰素、白介素和用于治疗自身免疫性疾病的其他有效药剂联合，所述自身免疫性疾病诸如类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、舍格伦氏综合症、多发性硬化、血管炎以及I型糖尿病(青少年糖尿病)。这些组合疗法可允许在组合中给予较低剂量的每种治疗剂，从而减少某些严重的副作用，并可能减少所需的治疗过程。对于病毒性疾病，药物免疫共轭物可与其他治疗药物、免疫调节剂、裸MAb或疫苗(如，针对肝炎、HIV或乳头瘤病毒的MAb、或基于这些病毒的免疫原的疫苗)组合。针对这些和其他病毒病原体的抗体和基于抗原的疫苗是本领域已知的，在一些情况中，已经处于市售。在一个实施方案中，本发明涉及制备共轭物的方法，其中药物首先用第一接头衍生化，该第一接头包含能够与另外包含靶向部分-偶联基团的第二接头联合的反应性部分；其中第一接头还具备用于水溶性的确定的聚乙二醇(PEG)部分、和任选地胞内肽酶可裂解的或胞内体和溶酶体囊泡环境的低PH环境可裂解的胞内可裂解部分、和任选的药物与第一接头之间的氨基酸间隔物；其中第二接头包含能够通过称为‘链接化学’的铜(+1) 离子催化的乙炔-叠氮化物环加成反应与药物_(第一接头)共轭物反应的反应性基团。优选地，确定的PEG部分是具有确定数目的单体亚基的低分子量PEG，如以下讨论的。另一实施方案涉及制备如上段讨论的共轭物的方法，其中第二接头具有单个靶向部分-偶联基团，但多个反应性基团能够与药物_(第一接头)共轭物反应，从而放大与靶向部分共轭的药物分子的数目。进一步的实施方案涉及制备共轭物的方法，其中接头首先与药物共轭，从而产生药物-接头共轭物；其中所述药物-接头共轭物制备包括选择性保护和脱保护包含多个官能团的药物中更具反应性的基团；其中所述药物-接头共轭物任选地不纯化；且其中所述药物-接头共轭物随后与单克隆抗体或片段共轭。又一实施方案是用本文所述的共轭物治疗癌症(恶性肿瘤)、自身免疫性疾病、感染、或传染性病损的方法。替代实施方案涉及由所要求保护的方法制备的药物-靶向部分共轭物和/或进行所要求保护的方法的试剂盒。在一个实施方案中，本发明涉及免疫共轭物，包括(a)靶向部分；(b)化疗部分；和(c)经由靶向部分-结合基团共价连接于靶向部分和经由胞内可裂解部分共价连接于化疗部分的接头。在另一实施方案中，本发明涉及免疫共轭物，包括(a)靶向部分；(b)化疗部分；和
(c)经由靶向部分-结合基团共价连接于靶向部分和经由胞内可裂解部分共价连接于化疗部分的接头；其中与治疗部分连接的所述接头还包括L-氨基酸或由最多4个 L-氨基酸构成的多肽。在一个实施方案中，胞内可裂解部分是碳酸酯，包括化疗部分的活化羟基和取代的乙二胺部分或4-氨基苄醇，4-氨基苄醇经由其氨基连接于结束于靶向部分-结合基团的交联接头；且其中取代的乙二胺部分衍生自天然L氨基酸，该氨基酸的羧酸基团被羟甲基部分代替；且其中4-氨基苄醇任选地在苄型位置被C1-Cltl烷基取代。在优选实施方案中，胞内可裂解部分是碳酸酯，包括化疗部分的活化羟基和取代的乙二胺，取代的乙二胺经由其氨基连接于L-氨基酸或包括最多4个L-氨基酸部分的多肽；其中N末端连接于结束于靶向部分-结合基团的交联接头；且其中取代的乙二胺部分衍生自天然L氨基酸，该氨基酸的羧酸基团被羟甲基部分代替。在另一优选实施方案中，胞内可裂解部分是碳酸酯，包括化疗部分的活化羟基和 4-氨基苄醇或在苄型位置被C1-Cltl烷基取代的取代的4-氨基苄醇，4-氨基苄醇经由其氨基连接于L-氨基酸或包括最多4个L-氨基酸部分的多肽；其中N末端连接于结束于靶向部分-结合基团的交联接头。在某些实施方案中，化疗部分的氨基与取代的、胺保护的、乙醇胺部分或4-氨基苄醇的活化羟基偶联，4-氨基苄醇经由其氨基连接于L-氨基酸或包括最多4个L-氨基酸部分的多肽；其中N末端连接于结束于靶向部分-结合基团的交联接头；其中所述取代的乙二胺部分任选地衍生自L氨基酸，该氨基酸的羧酸基团被羟甲基部分代替；且其中4-氨基苄醇任选地在苄型位置被C1-Cltl烷基取代。然后双官能的药物衍生物与靶向部分共轭以获得如以上讨论的免疫共轭物。在免疫共轭物靶向疾病部位后，免疫共轭物被胞吞和分解代谢以释放药物-接头部分；其中取代的乙二胺部分的自由氨基通过在氨基甲酸酯部分的羰基亲核攻击而参与游离药物的释放。附图简述
图1.用MAb-CL2A-SN_38共轭物对携带Capan 1人胰腺癌的无胸腺裸小鼠的临床前体内疗法。图2.用MAb-CL2A-SN_38共轭物对携带BxPC3人胰腺癌的无胸腺裸小鼠的临床前体内疗法。图3.用hMN-14-CL2A-SN-38共轭物对携带LS174T人结肠癌的无胸腺裸小鼠的临床前体内疗法。发明详述定义在以下的说明中，使用了许多术语，并提供以下定义以促进对要求保护的主题的理解。未在本文明确定义的术语按照其普通和通常的含义使用。除非另外指明，否则二表示“一个或多个”。如本文所用，术语大约指在一个数字的加或减10%范围内。例如，“大约100”指 90和110之间的任何数字。如本文所用，术语靶向部分指与靶分子、细胞、颗粒、组织或聚集物特异件结合或选择性结合的分子、复合物或聚集物。本领域技术人员将理解，特异性结合是指结合特定靶而对其他靶没有交叉反应性，而选择性结合是指优先结合特定靶。在优选实施方案中，靶向部分是抗体、抗体片段、双特异性的抗体或其他基于抗体的分子或化合物。然而，靶向部分的其他例子是本领域已知的并可使用，诸如适体、avimer、受体结合配体、核酸、生物素-亲和素结合对、结合肽或蛋白、等等。术语“靶向部分”和“结合部分”在本文同义使用。如本文所述，M指全长(即天然存在的或者通过正常的免疫球蛋白基因片段重组过程形成的)免疫球蛋白分子(如IgG抗体)，或者免疫球蛋白分子的抗原结合部分，如抗体片段。在所要求保护的主题范围内，抗体或抗体片段可被共轭或以其他方式衍生化。这种抗体包括但不限于IgGU IgG2a、IgG3、IgG4(和IgG4亚型)、以及IgA同种型。抗体片段是抗体的一部分，如F(ab‘ )2,F(ab)2,Fab'、Fab、Fv、scFv (单链Fv)、单结构域抗体(DAB或VHH)等等，包括以上提到的IgG4的半分子(van der Neut Kolfschoten 等(Science2007 ；317(14Sept) :1554-1557)。无论结构如何，抗体片段与完整抗体识别的相同抗原结合。术语“抗体片段”还包括通过结合特异抗原形成复合体，执行抗体类似作用的任何合成或遗传工程蛋白质。例如，抗体片段包括由可变区组成的分离片段，如由重链和轻链的可变区组成的“Fv”片段，其中轻链和重链可变区通过肽连接体连接的重组单链多肽分子(“scFv蛋白”)和由氨基酸残基组成的模仿高变区的最小识别单位，如CDR。可以以不同方法构建Fv片段，得到多价和/或多特异性结合形式。在多价的情况下，其具有抗特异性表位的一个以上结合位点，而多特异形式与一个以上表位(相同抗原的或抗一种抗原和不同抗原)结合。本文所用的术语抗体组分包括整个抗体、融合蛋白及其片段。棵抗体一般是未与治疗剂共轭的整个抗体。之所以这样，是因为抗体分子的Fc部分提供了效应子或免疫功能，如补体固定和ADCC (抗体依赖性细胞毒性)，该功能使得可能导致细胞裂解的机制运转起来。不过，可能Fc部分并非是抗体的治疗功能所必需的，而是其他机制如细胞凋亡、抗血管发生、抗转移活性、抗粘附活性(诸如抑制异型粘附或同型粘附)和干扰信号转导途径，开始运行并干扰疾病进展。裸抗体包括包括鼠抗体的多克隆抗体和单克隆抗体及其片段、以及某些重组抗体，如嵌合抗体、人化抗体或人抗体及其片段。 因此，在一些情况，“裸抗体”也可是指“裸”抗体片段。如本文定义的，“裸”与“未共轭”同义，表示未与治疗剂连接或共轭。自身免疫性疾病是身体产生针对其自身组织的免疫应答导致的病症。例子包括 III类自身免疫性疾病，诸如免疫介导的血小板减少症、急性特发性血小板减少性紫癜和慢性特发性血小板减少性紫癜、皮肌炎、舍格伦氏综合症、多发性硬化、西登哈姆氏舞蹈病 (Sydenham' s chorea)、重症肌无力、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、风湿热、多腺体综合征、 大疱性类天疱疮、糖尿病、亨-舍二氏紫癜、链球菌感染后肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、阿狄森氏病、类风湿性关节炎、结节病、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾病、结节性多动脉炎、强直性脊柱炎、古德帕斯丘综合征、闭塞性血栓性脉管炎、舍格伦综合征、原发性胆汁性肝硬变、桥本甲状腺炎、甲状腺毒症、硬皮病、慢性活动性肝炎、类风湿性关节炎、多肌炎/皮肌炎、多软骨炎、寻常天疱疮、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、肌萎缩侧索硬化、脊髓痨、巨细胞动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急进性肾小球肾炎和纤维化肺泡炎，如2002年3月 1日提交的美国临时申请序列No. 60/360, 259公开的，其实施例部分通过引用并入本文。嵌合抗体是这样的重组蛋白，其含有包括源于一个物种抗体(优选为啮齿动物抗体，更优选为鼠抗体)的互补决定区(CDR)在内的重链抗体和轻链抗体二者的可变结构域，而该抗体分子的恒定结构域源于人抗体的恒定结构域。对于兽医应用，嵌合抗体的恒定结构域可源于其他物种如灵长类动物、猫或狗的恒定结构域。人化杭体是这样的重鉬蛋白，其中将来自干一个物种杭体如鼠杭体的⑶R从鼠抗体的重链和轻链可变链上转移到人重链和轻链可变结构域(构架区)之中。该抗体分子的恒定结构域源于人抗体的恒定结构域。在一些情况中，可修饰人化抗体构架区的特定残基， 尤其是接触或接近CDR序列的残基，例如用来自原始的鼠科动物、啮齿类动物、非人灵长类动物或其他抗体的相应残基代替。ASi述是例如由转基因小鼠获得的抗体，该小鼠已被“改造”以响应抗原刺激产生人抗体。在这种技术中，将人重链和轻链基因座的元件引入到衍生自含有内源重链和轻链基因座的靶向破坏的胚胎干细胞系的小鼠株系中。转基因小鼠可合成对各种抗原具有特异性的人抗体，并且该小鼠可用于生产分泌人抗体的杂交瘤。用于获得来自转基因小鼠的人抗体的方法由 Green等，Nature Genet. 7 13 (1994)，Lonberg等，Nature 368:856(1994)以及I^aylor等，Int. Immun. 6 :579 (1994)描述。也可通过基因或染色体转染法、以及噬菌体展示技术构建全人抗体，所有这些方法都是本领域公知的。例如参见McCafTerty等，Nature 348 =552-553(1990)关于由来自未免疫供体的免疫球蛋白可变结构域基因库在体外生产人抗体及其片段。在这种技术中，将抗体可变结构域基因框内克隆到丝状噬菌体的主要或次要外壳蛋白基因中，并作为功能性抗体片段展示在噬菌体颗粒的表面。由于该丝状颗粒含有所述噬菌体基因组的单链DNA拷贝，所以基于所述抗体功能性质的选择也导致编码表现出那些性质的抗体的基因的选择。以这种方式，所述噬菌体模拟B细胞的一些性质。噬菌体展示能够以多种形式进行，有关综述，参见如Johnson和Chiswell，Current Opinion in Structural Biology3 :5564-571 (1993)。人抗体也可由体外活化的B细胞产生。参见美国专利No. 5，567，610和5，229，275，上述每一个专利的实施例部分通过引用并入本文。本文所用的传染病是包括病原体诸如细菌、立克次氏体、支原体、原生动物、真菌、病毒、寄生虫、或其他微生物剂感染的疾病。例子包括导致AIDS的人免疫缺陷病毒 (HIV)、结核分支杆菌(Mycobacterium of tuberculosis)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、嗜肺性军团病菌(Legionella pneumophilia)、 酉良脓链球菌(Streptococcus pyogenes)、大肠杆菌(Escherichia coli)、淋病奈瑟氏菌 (Neisseria gonorrhosae)、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)、肺炎球菌属 (Pneumococcus)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、荚膜组织胞菜菌(Histoplasma capsulatum) > B Mi^t^Bf ^lff^ (Hemophilis influenzae B)(Treponema pallidum)、莱姆病螺旋体、西尼罗病毒、绿脓假单胞菌(I^seudomonas aeruginosa)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium 1印rae)、流产杆菌(Brucella abortus)、狂犬病病毒、流感病毒、巨细胞病毒、I型单纯疱疹病毒、II型单纯疱疹病毒、人血清细小样病毒、呼吸道合胞病毒、水痘-带状疱疹病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、麻疹病毒、腺病毒、人T细胞白血病病毒、埃-巴二氏病毒(Epstein-Barr virus)、鼠白血病病毒、腮腺炎病毒、水泡性口膜炎病毒、辛德比斯病毒(sindbis virus)、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、疣病毒、 蓝舌病病毒、仙台病毒、猫白血病病毒、呼肠孤病毒、脊髓灰质炎病毒、猿猴病毒40、鼠乳房肿瘤病毒、登革热病毒、风疹病毒、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)、间日疟原虫 (Plasmodium vivax)、鼠弓形体(Toxoplasma gondii)、让氏维虫(Trypanosoma rangeli)、克氏Hl虫(Trypanosoma cruzi)、罗德西亚Ifl虫(Trypanosoma rhodesiensei)、布氏||1 虫 (Trypanosoma brucei)、曼森血吸虫(Schistosoma mansoni)、日本血吸虫(Schistosoma japanicum)、牛巴贝虫(Babesia bovis)、柔嫩艾美球虫(Elmeria tenella)、盘尾丝虫 (Onchocerca volvulus)、热带禾丨」什曼原虫(Leishmania tropica)、方宠毛线虫(Trichinella spiralis)、小泰累尔梨菜虫(Theileria parva)、水泡绦虫(Taenia hydatigena)、 羊绦虫(Taenia ovis)、牛肉绦虫(Taenia saginata)、细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)、科特氏中殖孑L 缘虫(Mesocestoides corti)、关节炎支原体(Mycoplasma arthritidis)、猪鼻支原体(M. hyorhinis)、口腔支原体(M. orale)、精氨酸支原体 (M. arginini)、莱氏无胆甾原体(Achol印lasma laidlawii)、唾液支原体(M. salivarium) 和肺炎支原体(M. pneumoniae)。列出针对感染性生物体(抗毒素和抗病毒抗体)、以及其他靶的抗体的综述包含于Casadevall，Clin Immunol 1999 ；93(1) :5_15，通过引用并入本文。追_是与结合部分如抗体或抗体片段、或其亚片段分别、同时或相继地给药的分子或原子，并且可用于疾病的治疗。治疗剂的实例包括但不限于抗体、抗体片段、共轭物、 药物、细胞毒性剂、促细胞凋亡剂、毒素、核酸酶(包括DNA酶和RNA酶)、激素、免疫调节剂、 螯合剂、硼化合物、光敏剂或染料、放射性同位素或放射性核素、寡核苷酸、干扰RNA、肽、抗血管发生剂、化疗剂、细胞因子、趋化因子、前药、酶、结合蛋白或肽、或其组合。兹轭 是与治疗剂例如上所述的治疗剂共轭的抗体组分或其他靶向部分。本文所用的术语“共轭物”和“免疫共轭物”可交换地使用。如本文所用，术语抗体融合蛋白指重组制备的抗原结合分子，其中一种或多种天然抗体、单链抗体或抗体片段连接(融合)于另一部分，诸如蛋白或肽毒素、细胞因子、激素等等。在某些优选实施方案中，融合蛋白可包括融合在一起的两种或多种相同或不同的抗体、抗。体片段或单链抗体，这些抗体可结合于相同抗原或不同抗原上的相同表位、不同表位。抗体融合蛋白至少包括一个特异性结合位点。融合蛋白的化合价指示融合蛋白对单个抗原或表位具有的结合臂或位点的总数；即单价、双价、三价或多价。抗体融合蛋白的多价意味着它在与抗原结合时可以利用多个相互作用，因而可以增强与抗原、或与不同抗原结合的亲和力。特异性指示抗体融合蛋白能与多少种抗原或表位结合；即单特异性、双特异性、三特异性、多特异性。根据这些定义，天然抗体如IgG为双价，因为它有两个结合臂，但是它是单特异性，因为它结合一种抗原或表位。单特异性、多价融合蛋白对同一抗原或表位具有多于一个的结合位点。例如，单特异性二链抗体是具有两个与同一抗原有反应性的结合位点的融合蛋白。融合蛋白可包含不同抗体组分的多价或多特异性组合、或者同一抗体组分的多个拷贝。融合蛋白可额外包含治疗剂。免疾调节剂是一种治疗剂，当存在时，它改变、抑制或刺激身体的免疫系统。典型地，有用的免疫调节剂刺激免疫细胞增殖或者在免疫应答级联中激活，例如巨噬细胞、树突状细胞、B-细胞和/或T-细胞。然而，在一些情况中，免疫调节剂可阻遏免疫细胞的增殖或活化，如对自身免疫性疾病的治疗性治疗。本文描述的免疫调节剂的例子是细胞因子，其是与特异性抗原接触时一个细胞群(例如预处理的T淋巴细胞)释放的大约5-20kDa的可溶性小蛋白，它作为细胞间的细胞间介质起作用。如本领域技术人员应理解的那样，细胞因子的例子包括淋巴因子、单核因子、白介素和几种相关的信号传导分子，例如肿瘤坏死因子(TNF)和干扰素。趋化因子是一组细胞因子。一些白介素和干扰素是刺激T细胞或其他免疫细胞增殖的细胞因子的例子。 CPT是喜树碱的缩写，并且在本申请中CPT用于表示喜树碱本身或喜树碱的类似物或衍生物。具有所示的编号和用字母A-E标记的环的喜树碱和一些其类似物的结构在以
下图表1中以式1提供。图表权利要求
1.一种下式的药物与靶向部分的共轭物TM-[L2]-[Ll]-[AA]m-[A’ ]-药物，其中TM是疾病靶向部分；药物是化疗部分；L2是包含抗体_偶联部分和一个或多个乙炔基或叠氮化物基的交联接头的部分；Ll在一端包含带有与L2中的乙炔部分或叠氮化物部分互补的叠氮化物或乙炔的确定的PEG，在另一端包含反应性基团诸如羧酸或羟基；AA是L氨基酸，其中m是数值为0、1、2、3或4的整数；且当m > 1时，由AA表示的氨基酸可相同或不同；且A’是另外的间隔物。
2.如权利要求1所述的共轭物，其中AA选自由以下组成的组丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
3.如权利要求1所述的共轭物，其中所述A’间隔物选自由以下组成的组乙醇胺、 4-羟基苄醇、4-氨基苄醇、取代的乙二胺和取代的乙二胺。
4.如权利要求3所述的共轭物，其中A’是取代的乙二胺，且衍生自选自以下的L-氨基酸丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸，其中所述氨基酸的羧酸基团被羟甲基部分代替。
5.如权利要求1所述的共轭物，其中所述疾病靶向部分是鼠、嵌合、灵长类动物化、人化、或人单克隆抗体(MAb)，且所述抗体是呈完整、片段(Fab、Fab，、F(ab)2、F(ab，)2)或亚片段(单链构建体)形式。
6.如权利要求4所述的共轭物，其中所述疾病靶向部分是嵌合、灵长类动物化、人化或人单克隆抗体(MAb)，且所述抗体具有人IgGl或人IgG4抗体的恒定结构域和铰链结构域。
7.如权利要求5所述的共轭物，其中所述疾病靶向部分具有人IgG4抗体的恒定结构域和铰链结构域，其中所述铰链的丝氨酸228被脯氨酸代替。
8.如权利要求5所述的共轭物，其中所述抗体具有人IgGl抗体的恒定结构域和铰链， 其中一个或多个Fc氨基酸被突变以增加所述抗体在血液中的半衰期，或其中Fc的一个或多个糖部分被缺失、或一个或多个糖部分被添加以增加所述抗体的血液半衰期。
9.如权利要求5所述的共轭物，其中所述MAb是内化抗体。
10.如权利要求5所述的共轭物，其中所述抗体连接于1至12个药物部分。
11.如权利要求5所述的共轭物，其中所述MAb选自由以下组成的组LL1、LL2、RFB4、 A19、A20、1F5、RS7、PAM4、MN-3、MN-14、MN-15、Mu_9、Rl、AFP-31、L19、G250、J591、CC49、 L243、AB-PG1-XG1-026、D2/B 和 Immu_31。
12.如权利要求5所述的共轭物，其中所述抗体_偶联部分是硫醇反应性的，且选自由以下组成的组马来酰亚胺、乙烯砜、溴乙酰胺和碘乙酰胺。
13.如权利要求1所述的共轭物，其中所述PEG是具有1-30个单体单元的确定的PEG， 优选地是具有1-12个单体单元的确定的PEG。
14.如权利要求1所述的共轭物，其中所述药物选自由以下组成的组阿霉素(DOX)、表柔比星、吗啉代阿霉素(吗啉代-D0X)、氰基吗啉代-阿霉素(氰基吗啉代-D0X)、2-吡咯啉基阿霉素(2-PD0X)、喜树碱(CPT)UO-羟基喜树碱、SN-38、托泊替康、勒托替康、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱、紫杉烷、格尔德霉素、袢霉素和埃坡霉素。
15.如权利要求1所述的共轭物，其中所述药物选自由以下组成的组喜树碱(CPT)、10-羟基喜树碱、SN-38、托泊替康、勒托替康、9-氨基喜树碱和9-硝基喜树碱。
16.如权利要求15所述的共轭物，其中所述药物是SN-38。
17.如权利要求16所述的共轭物，所述共轭物具有选自MAb-CL2A-SN-38、 MAb-CL6-SN-38、MAb_CL7-SN_38、MAb-CLX-SN-38 和 MAb_CLY-SN_38 的结构式，其中结构由以下表示
18.如权利要求17所述的共轭物，其中MAb-CL2A-SN-38或MAb-CL6_SN_38或 MAb-CL7-SN-38或MAb-CLX-SN-38中SN-38的10-羟基位置是利用‘C0R，部分的10_0_酯或 10-0-碳酸酯衍生物，其中R基团是取代的烷基残基诸如"N(CH3)2-(CH2)n-”，其中η是2-10， 且其中末端氨基任选地呈用于增强水溶性的季盐形式；或烷基残基诸如"CH3-(CH2)η-”，其中 η 是 0-10 ；或烷氧基残基诸如"CH3-(CH2) η-0-”，其中 η 是 0-10 ；或“N(CH3)2-(CH2)η_0_”， 其中η是2-10 ；或"R1O-(CH2-CH2-O)n-CH2-CH2-0-”，其中R1是乙基或甲基且η是数值为010 的整数。
19.如权利要求1所述的共轭物，其中[AA]m是肽部分，优选地为二肽、三肽或四肽，选自 Ala-Leu、Leu-Ala-Leu 禾口 Ala-Leu-Ala-Leu。
20.如权利要求5所述的共轭物，其中所述MAb结合于选自由以下组成的组的抗原碳酸酐酶 IX、B7、CCCL19、CCCL21、CSAp、HER-2/neu、BrE3、CD1、CDla、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、 CDl 1A, CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、 CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD67、CD70、 CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138、CD147、CD154、CEACAM5, CEACAM—6、甲胎蛋白(AFP)、VEGF、ED-B 纤连蛋白、EGP_1、EGP_2、EGF 受体(ErbBl)、ErbB2、ErbB3、因子 H、 FHL-I、Flt-3、叶酸受体、Ga 733、GROB, HMGB-1、缺氧诱导因子(HIF)、HMl. 24、HER-2/neu、 胰岛素样生长因子(ILGF)、IFN- y、IFN- α、IFN- β、IL-2R、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、 IL-17R、IL-18R、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、IP-10、IGF-1R、la、 HMl. 24、神经节糖苷、HCG, HLA-DR、CD66a_d、MAGE、mCRP、MCP-1、MIP-1A、MIP-1B、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5、胎盘生长因子(PlGF)、PSA (前列腺特异性抗原)、PSMA、PSMA 二聚物、PAM4 抗原、NCA-95、NCA-90、A3、A33、Ep-CAM、KS-ULe (y)、 间皮素、S100、腱生蛋白、TAC、Tn抗原、Thomas-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、肿瘤血管生成抗原、TNF-α、TRAIL受体(Rl和R2)、VEGFR、RANTES、T101、癌干细胞抗原、补体因子 C3、C3a、C3b、C5a、C5和致癌基因产物。
21.如权利要求5所述的共轭物，其中所述MAb是多特异性的，具有靶向靶细胞或病原体中包含的至少两个不同抗原或表位的多个结合臂，并且一个或多个靶向臂与CPT共轭。
22.如权利要求21所述的共轭物，其中所述多特异性的MAb是包含选自以下的一种或多种抗体的双特异性和/或二价抗体构建体LL1、LL2、RFB4、A19、A20、1F5、RS7、PAM4、 MN-3、MN-14、MN-15、Mu-9、Rl、AFP-31、L19、G250、J591、CC49、L243、AB-PG1-XG1-026、D2/B禾口 Immu-31。
23.如权利要求21所述的共轭物，其中所述多特异性的抗体结合选自以下的组的两种或多种抗原碳酸酐酶 IX、B7、CCCL19、CCCL21、CSAp、HER-2/neu、BrE3、CD1、CDla、CD2、 CD3、CD4、CD5、CD8、CDl 1A, CD14、CD15、CD16、CD18、CD 19, CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、 CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、 CD59、CD64、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138、CD147、CD154、 CEACAM5、CEACAM-6、甲胎蛋白(AFP)、VEGF、ED_B 纤连蛋白、EGP_1、EGP_2、EGF 受体(ErbBl)、 ErbB2、ErbB3、因子 H、FHL-l、Flt-3、叶酸受体、Ga 733、GR0B、HMGB_1、缺氧诱导因子(HIF)、 HMl. 24、HER-2/neu、胰岛素样生长因子(ILGF)、IFN-γ、IFN-α、IFN-β、IL-2R、IL-4R、 IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、 IL-25、IP-10、IGF-1R、la、HMl. 24、神经节糖苷、HCG、HLA-DR、CD66a_d、MAGE、mCRP、MCP-1、 MIP-1A、MIP-1B、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5、胎盘生长因子(PlGF)、PSA (前列腺特异性抗原)、PSMA, PSMA 二聚物、PAM4 抗原、NCA-95、NCA-90、A3、 A33、Ep-CAM、KS-ULe (y)、间皮素、S100、腱生蛋白、TAC、Tn 抗原、Thomas-Friedenreich 抗原、肿瘤坏死抗原、肿瘤血管生成抗原、TNF-α、TRAIL受体(Rl和R2)、VEGFR、RANTES、T101、 癌干细胞抗原、补体因子C3、C3a、C3b、C5a、C5和致癌基因产物。
24.如权利要求1所述的共轭物，其中所述靶向部分是融合蛋白。
25.如权利要求24所述的共轭物，其中所述融合蛋白包括抗体或抗体片段。
26.如权利要求24所述的共轭物，其中所述融合蛋白通过对接锁定技术构建。
27.如权利要求5所述的共轭物，其中所述MAb是与癌症、恶性细胞、感染性生物或自身免疫性疾病相关的抗原或所述抗原的表位具有反应性。
28.如权利要求27所述的共轭物，其中所述癌症是造血肿瘤、癌、肉瘤、黑素瘤或神经胶质肿瘤。
29.如权利要求27所述的共轭物，其中所述感染性生物选自由以下组成的组人免疫缺陷病毒(HIV)、结核分支杆菌、无乳链球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、嗜肺性军团病菌、酿脓链球菌、大肠杆菌、淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎球菌属、B型流感嗜血杆菌、苍白密螺旋体、莱姆病螺旋体、西尼罗病毒、绿脓假单胞菌、麻风分枝杆菌、流产杆菌、狂犬病病毒、流感病毒、巨细胞病毒、I型单纯疱疹病毒、II型单纯疱疹病毒、人血清细小样病毒、呼吸道合胞病毒、水痘_带状疱疹病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒、腺病毒、人T细胞白血病病毒、埃-巴二氏病毒、鼠白血病病毒、腮腺炎病毒、水泡性口膜炎病毒、辛德比斯病毒、 淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、疣病毒、蓝舌病病毒、仙台病毒、猫白血病病毒、呼肠孤病毒、脊髓灰质炎病毒、猿猴病毒40、鼠乳房肿瘤病毒、登革热病毒、风疹病毒、恶性疟原虫、间日疟原虫、鼠弓形体、让氏锥虫、克氏锥虫、罗德西亚锥虫、布氏锥虫、曼森血吸虫、日本血吸虫、牛巴贝虫、柔嫩艾美球虫、盘尾丝虫、热带利什曼原虫、旋毛线虫、小泰累尔梨浆虫、水泡绦虫、羊绦虫、牛肉绦虫、细粒棘球绦虫、科特氏中殖孔绦虫、关节炎支原体、猪鼻支原体、口腔支原体、精氨酸支原体、莱氏无胆留原体、唾液支原体和肺炎支原体。
30.如权利要求27所述的共轭物，其中所述自身免疫性疾病选自由以下组成的组免疫介导的血小板减少症、皮肌炎、舍格伦氏综合症、多发性硬化、西登哈姆氏舞蹈病、重症肌无力、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、风湿热、类风湿性关节炎、多腺体综合征、大疱性类天疱疮、糖尿病、亨-舍二氏紫癜、链球菌感染后肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、阿狄森氏病、结节病、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾病、结节性多动脉炎、强直性脊柱炎、古德帕斯丘综合征、闭塞性血栓性脉管炎、原发性胆汁性肝硬变、桥本甲状腺炎、甲状腺毒症、硬皮病、慢性活动性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多软骨炎、寻常天疱疮、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、肌萎缩侧索硬化、脊髓痨、巨细胞动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急进性肾小球肾炎、纤维化肺泡炎和青少年糖尿病。
31.如权利要求1所述的共轭物，其中所述共轭物呈适于胃肠外施用的形式。
32.一种用于产生权利要求1所述的共轭物的方法，其中所述接头首先与所述药物共轭，从而产生药物-接头共轭物，且其中所述药物-接头共轭物随后与疾病靶向部分共轭。
33.如权利要求32所述的方法，其中双官能的药物部分如下制备首先经由酰胺键将 A’连接于AA的C末端，然后将AA的胺末端与Ll的羧酸基团偶联；其中，如果m是零，A’经由酰胺键与Ll直接连接；其中所述交联接头[Ll]-[AA]m-[A’ ]与药物上的羟基或氨基连接，随后通过Ll和L2中的叠氮化物(或乙炔)基团与乙炔(或叠氮化物)基团经由链接化学反应而连接到Ll部分。
34.如权利要求32所述的方法，其中‘AA’选自由以下组成的组丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、 甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸。
35.如权利要求32所述的方法，其中A’是取代的乙二胺，且衍生自选自以下的L-氨基酸丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸，其中所述氨基酸的羧酸基团被羟甲基部分代替；或A’是4-氨基苄醇部分；或A’是取代的乙二胺。
36.如权利要求32所述的方法，其中所述疾病靶向部分是鼠、嵌合、灵长类化、人化、或人单克隆抗体(MAb)，且所述抗体呈完整、片段(Fab、Fab，、F(ab)2、F(ab，)2)或亚片段(单链构建体)形式。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述MAb是内化抗体。
38.如权利要求36所述的方法，其中所述抗体连接于1至12个药物部分。
39.如权利要求36所述的方法，其中所述MAb选自由以下组成的组LL1、LL2、RFB4、 A19、A20、1F5、RS7、PAM4、MN-3、MN-14、MN-15、Mu_9、Rl、AFP-31、L19、G250、J591、CC49、 L243、AB-PG1-XG1-026、D2/B 和 Immu_31。
40.如权利要求36所述的方法，其中所述抗体-偶联部分是硫醇反应性的，且选自由以下组成的组马来酰亚胺、乙烯砜、溴乙酰胺和碘乙酰胺。
41.如权利要求32所述的方法，其中所述PEG是具有1-30个单体单元的确定的PEG， 优选地是具有1-12个单体单元的确定的PEG。
42.如权利要求32所述的方法，其中所述药物选自由以下组成的组阿霉素(DOX)、表柔比星、吗啉代阿霉素(吗啉代-D0X)、氰基吗啉代-阿霉素(氰基吗啉代-D0X)、2-吡咯啉基阿霉素O-PD0X)、喜树碱(CPT)UO-羟基喜树碱、SN-38、托泊替康、勒托替康、9-氨基喜树碱、9-硝基喜树碱、紫杉烷、格尔德霉素、袢霉素和埃坡霉素。
43.如权利要求32所述的方法，其中所述药物选自由以下组成的组喜树碱(CPT)、10-羟基喜树碱、SN-38、托泊替康、勒托替康、9-氨基喜树碱和9-硝基喜树碱。
44.如权利要求43所述的方法，其中所述药物是SN-38。
45.如权利要求44所述的方法，其中所述共轭物具有选自MAb-CL2A-SN-38、 MAb-CL6-SN-38、MAb_CL7-SN_38、MAb-CLX-SN-38 和 MAb_CLY-SN_38 的结构式，其中结构由以下表示
46.如权利要求45所述的方法，其中MAb-CL2A-SN-38或MAb-CL6_SN_38或 MAb-CL7-SN-38 或 MAb-CLX-SN-38 中 SN-38 的 10-羟基位置是利用 ‘C0R，部分的 10-0-酯或10-0-碳酸酯衍生物，其中R基团是取代的烷基残基诸如"N(CH3)2-(CH2)n-”，其中η是 2-10，且其中末端氨基任选地呈用于增强水溶性的季盐形式；或烷基残基诸如"CH3-(CH2) η_”，其中 η 是 0-10 ；或烷氧基残基诸如"CH3-(CH2) η-0-”，其中 η 是 0-10 ；或“N(CH3)2-(CH2) η-0_”，其中η是2-10 ；或"R1O-(CH2-CH2-O)n-CH2-CH2-O-",其中R1是乙基或甲基且η是数值为0-10的整数。
47.如权利要求32所述的方法，其中[々々凡是肽部分，优选地二肽、三肽或四肽，选自
48.如权利要求35所述的方法，其中所述MAb结合于选自由以下组成的组的抗原碳酸酐酶 IX、B7、CCCL19、CCCL21、CSAp、HER-2/neu、BrE3、CD1、CDla、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、 CDl 1A, CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、 CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD67、CD70、 CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138、CD147、CD154、CEACAM5、CEACAM—6、甲胎蛋白(AFP)、VEGF、ED-B 纤连蛋白、EGP_1、EGP_2、EGF 受体(ErbBl)、ErbB2、ErbB3、因子 H、 FHL-I、Flt-3、叶酸受体、Ga 733、GROB, HMGB-1、缺氧诱导因子(HIF)、HMl. 24、HER-2/neu、 胰岛素样生长因子(ILGF)、IFN- y、IFN- α、IFN- β、IL-2R、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、 IL-17R、IL-18R、IL-2、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、IP-10、IGF-1R、la、 HMl. 24、神经节糖苷、HCG, HLA-DR、CD66a_d、MAGE、mCRP、MCP-1、MIP-1A、MIP-1B、巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5、胎盘生长因子(PlGF)、PSA (前列腺特异性抗原)、PSMA、PSMA 二聚物、PAM4 抗原、NCA-95、NCA-90、A3、A33、Ep-CAM、KS-ULe (y)、 间皮素、S100、腱生蛋白、TAC、Tn抗原、Thomas-Friedenreich抗原、肿瘤坏死抗原、肿瘤血管生成抗原、TNF-α、TRAIL受体(Rl和R2)、VEGFR、RANTES、T101、癌干细胞抗原、补体因子 C3、C3a、C3b、C5a、C5、和致癌基因产物。
49.如权利要求36所述的方法，其中所述MAb是多特异性的，具有靶向靶细胞或病原体中包含的至少两个不同抗原或表位的多个结合臂，并且一个或多个靶向臂与CPT共轭。
50.如权利要求32所述的方法，其中所述靶向部分是融合蛋白。
51.如权利要求50所述的方法，其中所述融合蛋白包括抗体或抗体片段。
52.如权利要求50所述的方法，其中所述融合蛋白通过对接锁定技术构建。
53.如权利要求36所述的方法，其中所述MAb对癌症、恶性细胞、感染性生物或自身免疫性疾病相关的抗原或其表位是反应性的。
54.一种治疗疾病的方法，所述方法包括向受治疗者施用权利要求1所述的共轭物。
55.如权利要求M所述的方法，其中所述共轭物与选自以下的一种或多种治疗方式联合施用未共轭抗体、放射性标记抗体、药物-共轭抗体、毒素-共轭抗体、基因疗法、化疗、 治疗肽、寡核苷酸、局部放疗、手术和干扰RNA疗法。
56.如权利要求M所述的方法，其中所述疾病是癌症、病原性生物感染或自身免疫性疾病。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述癌症是造血肿瘤、癌、肉瘤、黑素瘤或神经胶质肿瘤。
58.如权利要求56所述的方法，其中所述病原性生物选自由以下组成的组人免疫缺陷病毒(HIV)、结核分支杆菌、无乳链球菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、嗜肺性军团病菌、 酿脓链球菌、大肠杆菌、淋病奈瑟氏菌、脑膜炎奈瑟氏菌、肺炎球菌属、B型流感嗜血杆菌、苍白密螺旋体、莱姆病螺旋体、西尼罗病毒、绿脓假单胞菌、麻风分枝杆菌、流产杆菌、狂犬病病毒、流感病毒、巨细胞病毒、I型单纯疱疹病毒、II型单纯疱疹病毒、人血清细小样病毒、 呼吸道合胞病毒、水痘-带状疱疹病毒、乙型肝炎病毒、麻疹病毒、腺病毒、人T细胞白血病病毒、埃-巴二氏病毒、鼠白血病病毒、腮腺炎病毒、水泡性口膜炎病毒、辛德比斯病毒、淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、疣病毒、蓝舌病病毒、仙台病毒、猫白血病病毒、呼肠孤病毒、 脊髓灰质炎病毒、猿猴病毒40、鼠乳房肿瘤病毒、登革热病毒、风疹病毒、恶性疟原虫、间日疟原虫、鼠弓形体、让氏锥虫、克氏锥虫、罗德西亚锥虫、布氏锥虫、曼森血吸虫、日本血吸虫、牛巴贝虫、柔嫩艾美球虫、盘尾丝虫、热带利什曼原虫、旋毛线虫、小泰累尔梨浆虫、水泡绦虫、羊绦虫、牛肉绦虫、细粒棘球绦虫、科特氏中殖孔绦虫、关节炎支原体、猪鼻支原体、口腔支原体、精氨酸支原体、莱氏无胆留原体、唾液支原体和肺炎支原体。
59.如权利要求56所述的方法，其中所述自身免疫性疾病选自由以下组成的组免疫介导的血小板减少症、皮肌炎、舍格伦氏综合症、多发性硬化、西登哈姆氏舞蹈病、重症肌无力、系统性红斑狼疮、狼疮性肾炎、风湿热、类风湿性关节炎、多腺体综合征、大疱性类天疱疮、糖尿病、亨-舍二氏紫癜、链球菌感染后肾炎、结节性红斑、高安氏动脉炎、阿狄森氏病、 结节病、溃疡性结肠炎、多形性红斑、IgA肾病、结节性多动脉炎、强直性脊柱炎、古德帕斯丘综合征、闭塞性血栓性脉管炎、原发性胆汁性肝硬变、桥本甲状腺炎、甲状腺毒症、硬皮病、 慢性活动性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多软骨炎、寻常天疱疮、韦格纳氏肉芽肿病、膜性肾病、 肌萎缩侧索硬化、脊髓痨、巨细胞动脉炎/多肌痛、恶性贫血、急进性肾小球肾炎、纤维化肺泡炎和青少年糖尿病。
全文摘要
本发明涉及具有靶向不同患病细胞的改进能力，并包含靶向部分(诸如抗体或抗体片段)、接头和治疗部分的治疗共轭物，还涉及用于制备和使用所述共轭物的方法。
文档编号C12P21/08GK102448494SQ200980156218
公开日2012年5月9日 申请日期2009年12月2日 优先权日2009年2月13日
发明者D·M·苟登堡, S·V·戈文丹, S-J·木 申请人:免疫医疗公司