一种交替单胞菌及其用它生产凝胶型浒苔多糖降解酶的方法
【专利摘要】本发明涉及一种海洋细菌，其特征是该菌是在青岛海域的海水中分离的交替单胞菌A321(Alteromonas?cdwelliana?A321)，保藏单位简称CCTCC，保藏号为M?2012132；本发明的菌种具有营养要求简单、易培养、代时短的特点。该菌的生长温度范围为10-40℃，最适生长温度为28℃；生长pH范围为4-11，最适pH为7。本发明还公开了一种利用交替单胞菌生产凝胶型浒苔多糖降解酶的方法及按该方法得到的凝胶型浒苔多糖降解酶。用本发明的方法生产的凝胶型浒苔多糖降解酶能高效的降解凝胶型浒苔多糖，可用于低聚糖的制备。同化学方法相比，其制备过程简单、产物得率高、质量稳定、在制备过程中活性基团不受破坏，为低聚糖的活性研究和开发提供保证。
【专利说明】一种交替单胞菌及其用它生产凝胶型浒苔多糖降解酶的方法【技术领域】
[0001 ] 本发明涉及一种交替单胞菌，特别是一种分离自青岛海域的交替单胞菌A321 (Alteromonas cdwel liana A321),已于2012年4月23日保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC NO:M 2012132 ;本发明还涉及该菌株生产凝胶型浒苔多糖降解酶的方法及其产品。
【背景技术】
[0002]將苔(Entermorpha)是一种大型绿藻,在我国野生藻类中资源丰富，在东南沿海均有分布。近年来由于全球变暖效应和海水污染，海水中的碳、氮、磷源持续增多，导致浒苔疯狂生长和蔓延。浒苔爆发引起“绿潮”，还可能带来一系列次生环境危害，因此浒苔的资源化利用成为研究的热点。目前对浒苔的综合利用究范围还很小，生产链主要划分为低端与高端两个层面。低端生产链主要集中于生物质肥料和生物质能源的开发；高端生产链主要围绕食品及其添加剂、饲料、药品、浒苔生物活性物质以及工程材料等几个方面。
[0003]浒苔中各成分含量(干基)为:粗蛋白含量为22.0%、粗脂肪1.24%、膳食纤维61.36%。海藻膳食纤维是 从海洋植物中提取的能抗人体小肠消化吸收，而在人体大肠能部分或全部发酵的可食植物性成分、碳水化合物及类似物质的总和，包括多糖、寡糖、木质素以及相关植物物质，分为水溶性膳食纤维及水不溶性膳食纤维。其中被广泛研究的是水溶性膳食纤维中的多糖部分，这部分被称为浒苔多糖。
[0004]目前对浒苔多糖的研究主要集中在浒苔多糖的提取、纯化、鉴定及其生理功能的研究方面。据相关文献报道，浒苔多糖具有降血脂、抗衰老、对皮肤癌抑制作用等。但是较寡糖而言，多糖有其自身的不足如溶解性较寡糖差，表现出的生理活性也较寡糖弱等。因此要想更加深入研究浒苔生物活性，需要完善浒苔多糖的降解技术。
[0005]目前对浒苔多糖的降解主要通过稀硫酸水解，水解液经液相色谱分析主要含有葡萄糖、鼠李糖和木糖，并且还含有少量甘露糖和半乳糖。稀硫酸降解浒苔多糖要在高压灭菌锅中121°C处理90min，这样处理强度会破坏多糖和寡糖的生物活性。因此经过稀硫酸降解得到的水解液主要用于乙醇发酵。要得到具有较好活性的寡糖，酶解是最理想的降解方法。目前研究较为广泛的褐藻寡糖、岩藻寡糖和壳寡糖均通过酶法制备而得。酶作为一种特殊的催化剂，具有极强的底物特异性和产物专一性。酶法制备寡糖具有催化效率高、产物专一性好、降解过程及其产物的分子量或聚合度易控制等优势。使用酶法制备寡糖能容易地对反应实施实时监控，及时作出条件的调整，获得想要的聚合度的低聚糖。而且与物理和化学方法相比，该方法是在较为温和的条件进行的，不需加入很多其它的化学试剂，故对环境污染相应也就较少。然而，据本发明人查阅相关文献和书籍，目前国内外还未发现有关浒苔多糖降解酶的报道。
[0006]本发明以凝胶型浒苔多糖为原料，从青岛海域中分离一株菌株暂时命名为Alteromonas cdwel liana A321,该菌株能分泌一种凝胶型將苔多糖降解酶,该酶能够为浒苔的资源化利用提供相应的技术指导。
【发明内容】
[0007]本发明的一个目的是针对目前浒苔多糖降解难的问题，提供一株能生产凝胶型浒苔多糖降解酶的菌株，利用其分泌的酶完善酶法制备体系。
[0008]本发明的另一个目的是提供一种制备凝胶型浒苔多糖降解酶的方法及其产品，可用于低聚糖的制备，它能克服现有酸解、氧化降解、物理降解浒苔多糖技术上的缺陷。
[0009]本发明通过以下技术方案来达到本发明的两个目的。
[0010]本发明的特征包括交替单胞菌A321 (Alteromonas cdwel liana A321)本身，以及利用该菌株生产凝胶型浒苔多糖降解酶的方法，及其利用该方法生产的凝胶型浒苔多糖降解酶产品。
[0011]本发明中提及的菌株是在青岛海域的海水中分离的交替单胞菌A321 (Alteromonas cdwel liana A321),该交替单胞菌 A321 于 2012 年 4 月 23 日保藏在位于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M2012132。
[0012]一、本发明菌株的形态特征与生理生化特征
[0013](一)菌株为革兰氏阴性棒状杆菌、无荚膜、无芽孢、有端生鞭毛、大小约为
0.3-0.7 μ mX 1.8-2.4 μ m,形态特征如图1所示。该菌株在凝胶型浒苔多糖培养基上28°C培养48h后，菌落直径2-3_、圆形乳黄色、边缘光滑、中间隆起、湿润、易挑取。在培养后的平板滴加碘液，能产生明显的凝胶型浒苔多糖降解透明圈(图2)。
[0014](二)菌株的生理生化特征
[0015]菌株A321的生理生化特征见表I。菌株A321能水解淀粉，氧化酶阴性，吲哚试验阴性，产生色素，不能氧化乙醇到乙酸，不能液化明胶，不产生H2S,不能利用柠檬酸盐、丙二酸盐，不能利用纤维二糖、蔗糖、D-葡萄糖、D-麦芽糖、D-甘露糖、L-阿拉伯醇、古老糖、D-塔格糖、D-海藻糖、D-甘露醇，能利用α -葡萄糖，能利用硝酸钠、氯化铵、硝酸铵、硫酸铵。
[0016]表IAlteromonas cdwel liana A321 的生理生化特征
[0017]
【权利要求】
1.一种菌，其特征是该菌为交替单胞菌，命名为Alteromonas cdwelliana A321,保藏单位简称CCTCC，保藏号为M2012132。
2.一种交替单胞菌A321 (Alteromonas cdwel liana A321),其特征是用它来生产凝胶型浒苔多糖降解酶。
3.一种用交替单胞菌生产凝胶型浒苔多糖降解酶的方法，包括把菌放入凝胶型浒苔多糖发酵培养基中，在一定的培养温度，培养一定时间，以硫酸铵盐析收集沉淀蛋白，再进行分离，最后冷冻干燥。
4.一种凝胶型浒苔多糖降解酶，其特征是它能降解凝胶型浒苔多糖，以制备低聚糖。
5.如权利要求3所述的一种用交替单胞菌生产凝胶型浒苔多糖降解酶的方法，其特征是所述的培养温度是28°C，所述的`培养时间为12-18h，所述的提酶剂为60%的硫酸铵。
【文档编号】C12N9/24GK103451119SQ201210201604
【公开日】2013年12月18日 申请日期:2012年6月3日 优先权日:2012年6月3日
【发明者】王鹏, 李银平, 江晓路 申请人:中国海洋大学