一种核酸分离方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明提供了一种核酸分离方法及其应用，本发明提供的分离方法能够有效地从核酸样本中分离核糖体RNA。
【专利说明】—种核酸分离方法及其应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，具体涉及一种核糖体RNA的分离方法和分离试剂以及应用。
【背景技术】
[0002]在生物体中，细胞和组织在不同的发育和分化阶段，以及不同的生理和病理状态下，所表达的基因的种类和丰度都是受到严格调控的，阐明这些精细的基因调控机制是功能基因组研究的重要内容。
[0003]近年来，人们相继开展了一系列大规模的基因表达检测技术，例如，大规模 EST 测序(Okubo et at.1991)、微阵列基因芯片研究(microarray) (Bemmo 2008,Sokolovic2008)、以及基因表达的 SAGE 研究(serial analysis of gene expression)(Takamura2008, Hashimoto 2008)。
[0004]这些方法都能够定性及定量地对基因的表达产物mRNA进行检测，并绘制基因表达谱。这些高通量的基因表达谱的研究技术，被广泛地应用于正常细胞或组织基因的表达研究、疾病相关基因的表达研究、基因功能的研究、药物作用机制的研究、以及毒理学研究等。
[0005]从基因组水平来看，在组成人类基因组的30亿个碱基对中，只有不足2%的序列用于蛋白质基因的编码，其余大部分序列编码非蛋白质基因(non-coding gene,ncRNA)。虽然近年来tiling array的研究结果提示细胞中存在大量长的ncRNA转录本，但由于研究手段、尤其是ncRNA转录本分离技术的制约，目前ncRNA的研究主要集中在小ncRNA(microRNA, siRNA,piRNA)部分，并逐步阐明了内源性小ncRNA(主要是microRNA)的生物合成(biogenesis)、成熟以及功能效应过程相关的蛋白因子和具体的作用机制。研究表明，microRNA的前体pr1-miRNA是由RNA聚合酶Pol 11或Pol 111负责转录的，前体pr1-miRNA在核内经由Drosha/DGCR8复合物剪切,在转运蛋白Exportin5的协助下转运至胞浆，随后在胞浆中被Dicer/TRBP蛋白复合物再次剪切，形成成熟的miRNA分子。成熟的microRNA首先与RISC复合体中的Ago蛋白家族成员结合，介导RISC复合体对靶基因中互补序列的识别，抑制靶基因的表达。miRNA在物种间具有高度的保守性、以及表达组织和时相的特异性，提示它们在生物体的发育过程中具有重要的调节作用。报道的文献表明，miRNA 的表达异常与肿瘤具有相关性(Lum 2007 ；Lee 2007 ；Mott 2007 ；Gaur 2007 ；Mayr2007)，例如在慢性淋巴细胞性白血病(CLL)人中，miR-15a和miR-16-l基因的表达被下调或关闭，miR-15a和miR-16-l的表达与Bcl2的表达呈负相关，这两个miRNA在转录后水平上对Bcl-2的表达起负调节作用。在白血病细胞系中还观察到，miR-15a和miR-16-l能诱导肿瘤细胞凋亡。另外，在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、结直肠癌及肺癌中也观察到miRNA的表达异常。在肺癌中，miRNA基因芯片分析已经鉴定了一些具有统计学意义的表型，能够从分子水平区分肺癌和良性病变，研究还发现某些miRNA如hsa-mir-155和hsa-let-7a_2与肿瘤预后关系密切(Yanaihara2006)。[0006]这些研究表明miRNA在肿瘤发生、发展过程中扮演着重要的角色，提示其它ncRNA,尤其是长的ncRNA在其中也可能具有重要的作用。长ncRNA是指长度大于500个核苷酸、不具有蛋白编码潜能的内源性转录本。根据tiling array、生物信息学分析和现有实验研究的结果，人们推测哺乳动物中存在数以万条的长ncRNA，这部分RNA转录本可能通过RNA-RNA、RNA-DNA或RNA-蛋白等多种相互作用方式，在包括表观遗传修饰(如DNA甲基化、组蛋白修饰)、基因转录、转录后翻译以及蛋白质功能活性等层面上发挥功能，表明长ncRNA对细胞生命活动中的重要功能发挥重要的调控作用，可能是细胞乃至机体整体生命活动调控网络的关键因素。因此，长ncRNA及其相关蛋白的研究，以及它们之间的相互作用，正在成为生命科学研究领域的一个新的焦点。
[0007]自上世纪末第一个具有调控功能的长ncRNA-XIST被发现以来，越来越多的长ncRNA得到了鉴定,但相关的生理功能和作用机制的研究还很少(Guttman M, et al.Nature2009)。通过对肿瘤细胞和正常细胞基因表达谱的分析，人们还发现多种长ncRNA的异常表达与肿瘤的发生相关。例如0CC-1 (结肠癌过表达基因-1) RNA在结肠癌细胞中过量表达。而在前列腺肿瘤中，一种名为PCGEMl的长ncRNA的过量表达，导致了肿瘤细胞的增殖和克隆形成。MALAT-1 RNA是另一种已知的肿瘤相关长ncRNA，多篇文献报道了它的高表达与非小细胞性肺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌、肝癌等肿瘤的恶性化程度密切相关，并且MALAT-1的同源基因在小鼠肝癌细胞中也是高表达的。
[0008]在基因表达的研究中，为了避免在细胞中大量存在的核糖体RNA的干扰，特别是18S rRNA和28S rRNA的干扰，人们利用成熟的mRNA都具有polyA尾的特点，利用体外合成的oligo (dT)寡核苷酸，将带有polyA尾的mRNA分离出，随后对分离出的部分进行研究。这种纯化方式虽然能够有效的去除大量存在的核糖体RNA，但同时也去除了其它不含有PolyA尾的转录本，包括大部分的非编码RNA。由于技术上的这种制约，人们长久以来对不能够被通过oligo (dT)寡核苷酸与polyA的结合而分离出的那一部分转录本的了解非常少。
[0009]基于以上原因，为了有效分离核糖体RNA以减少对基因表达研究的干扰，迫切需要开发出一种能够将核糖体RNA与其它基因转录本进行稳定、有效分离的新方法。`
【发明内容】
[0010]本发明涉及以下按顺序编号的段落中定义的主题:
[0011]1、一种核糖体RNA的分离方法，其特征在于包括以下步骤:
[0012]I)将一种与可筛选标记物偶连的核糖体RNA分离试剂与生物体或细胞来源的分离的核酸样本进行接触；
[0013]2)在一定条件下，使核酸样本中的核糖体RNA与核糖体RNA分离试剂杂交，形成复合物；
[0014]3)利用与核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物，使步骤2)中形成的复合物与核酸样本中的其他成分进行分离。
[0015]2、段落I所述的分离方法，其特征在于所述生物体和细胞为人类和来源于人类的细胞。
[0016]3、段落I所述的分离方法，其特征在于所述生物体和细胞为猴和来源于猴的细胞。
[0017]4、段落I所述的分离方法，其特征在于所述生物体和细胞为大鼠和来源于大鼠的细胞。
[0018]5、段落I所述的分离方法，其特征在于所述生物体和细胞为小鼠和来源于小鼠的细胞。
[0019]6、段落I所述的分离方法，其特征在于所述生物体和细胞为果蝇和来源于果蝇的细胞。
[0020]7、段落1-6任一项所述的分离方法，其特征在于所述核糖体RNA分离试剂选自以下寡聚核酸分子中的一种或多种:
[0021]I)与一种生物体的18s rRNA的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子；
[0022]2)与I)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子；
[0023]3)与一种生物体的28s rRNA的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子；
[0024]4)与3)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子。
[0025]8、段落1-6任一项所述的分离方法，其特征在于所述核糖体RNA分离试剂选自以下寡聚核酸分子中的一种或多种: [0026]I)与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5所示核酸序列的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子；
[0027]2)与I)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子；
[0028]3)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6所示核酸序列的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子；
[0029]4)与3)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子。
[0030]9、段落1-6任一项所述的分离方法，其特征在于所述核糖体RNA分离试剂选自SEQID NO: 101-SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:201-SEQ ID NO:220所示核酸序列或其部分序列的寡聚核酸分子。
[0031]10、段落1-9任一项所述的分离方法，其特征在于所述核糖体RNA分离试剂含有至少一个化学修饰的核苷酸。
[0032]11、段落10所述的分离方法，其中所述的化学修饰为以下化学修饰中的一种或多种:
[0033]I)对所述寡聚核酸分子中连接核苷酸的磷酸二酯键的修饰；
[0034]2)对所述寡聚核酸分子中的核糖的2’ -OH的修饰；
[0035]3)对所述寡聚核酸分子中碱基的修饰；
[0036]4)对所述寡聚核酸分子的锁核酸修饰。
[0037]12、段落1-11任一项所述的分离方法，其特征在于与所述核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物为生物素、地高辛或特异性核酸序列。
[0038]13、段落12所述的分离方法，其特征在于与所述核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物为生物素，将所述核糖体RNA与核糖体RNA分离试剂杂交形成的复合物与核酸样本中的其他成分进行分离的方法包括:利用生物素与亲和素或链亲和素之间特异性的相互作用，将与固相支持物偶连的亲和素或链亲和素以及与生物素偶连的核糖体RNA分离试剂-核糖体RNA复合物共同孵育，通过固相支持物使与生物素偶连的复合物得到分离。[0039]14、段落12所述的分离方法，其特征在于与所述核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物为地高辛，将所述核糖体RNA与核糖体RNA分离试剂杂交形成的复合物与核酸样本中的其他成分进行分离的方法包括:利用抗地高辛抗体与地高辛之间特异性的相互作用，将与固相支持物偶连的抗地高辛抗体以及与地高辛偶连的核糖体RNA分离试剂-核糖体RNA复合物共同孵育，通过固相支持物使与地高辛偶连的复合物得到分离。
[0040]15、段落12所述的分离方法，其特征在于与所述核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物为特异性核酸序列，将所述核糖体RNA与核糖体RNA分离试剂杂交形成的复合物与核酸样本中的其他成分进行分离的方法包括:利用与固相支持物偶连的且能够与所述特异性核酸序列杂交的核酸序列与所述特异性核酸序列之间特异性的相互作用，将与固相支持物偶连的且能够与所述特异性核酸序列杂交的核酸序列以及与所述特异性核酸序列偶连的核糖体RNA分离试剂-核糖体RNA形成的复合物共同孵育，通过固相支持物使与所述特异性核酸序列偶连的复合物得到分离。
[0041]16、段落1-15中任一项所述的分离方法，其特征在于所述固相支持物为琼脂糖凝胶珠或磁珠。
[0042]17、段落1-16中任一项所述的分离方法在制备转录本鉴定所需样本中的应用。
[0043]18、段落1-16中任一项所述的分离方法在制备基因表达研究所需样本中的应用。
[0044]19、一种寡聚核酸分子，选自以下寡聚核酸分子中的一种或多种:
[0045]I)与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5所示核酸序列的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子·；
[0046]2)与I)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子；
[0047]3)与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6所示核酸序列的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子；
[0048]4)与3)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子。
[0049]20、段落19所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子具有SEQ ID NO:101-SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:201_SEQ ID NO:220所示核酸序列或其部分序列。
[0050]21、段落19-20任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述寡聚核酸分子含有至少一个化学修饰的核苷酸。
[0051]22、段落21所述的寡聚核酸分子，其中所述的化学修饰为以下化学修饰中的一种或多种:
[0052]I)对所述寡聚核酸分子中连接核苷酸的磷酸二酯键的修饰；
[0053]2)对所述寡聚核酸分子中的核糖的2’ -OH的修饰；
[0054]3)对所述寡聚核酸分子中碱基的修饰；
[0055]4)对所述寡聚核酸分子的锁核酸修饰。
[0056]23、段落19-22任一项所述的寡聚核酸分子，其特征在于与所述寡聚核酸分子与可筛选标记物偶联，可筛选标记物为生物素、地高辛或特异性核酸序列。
[0057]24、段落23所述的寡聚核酸分子，其特征在于所述特异性核酸序列选自oligodT、oligo dA、oligo dC 或 oligo dG。
[0058]25、段落19-24任一项所述的寡聚核酸分子在核糖体RNA分离中的应用。
[0059]26、段落19-24任一项所述的寡聚核酸分子在制备转录本鉴定所需样本中的应用。
[0060]27、段落19-24中任一项所述的寡聚核酸分子在在制备基因表达研究所需样本中的应用。
[0061]本发明的目的在于提供一种稳定、有效的核糖体RNA去除方案，以解决核糖体RNA对基因表达研究的干扰。
[0062]一方面，本发明提供了一种核糖体RNA的分离方法，该方法包括以下步骤:1)将一种与可筛选标记物偶连的核糖体RNA分离试剂与生物体或细胞来源的分离的核酸样本进行接触；2)在一定条件下，使核酸样本中的核糖体RNA与核糖体RNA分离试剂杂交，形成复合物；3)利用与核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物，使步骤2)中形成的复合物与核酸样本中的其他成分进行分离。
[0063]一方面，本发明所述生物体的种类没有特别的限制，例如，所述生物体可以为动物、植物、微生物以及昆虫，进一步优选为动物。适于本发明的动物可以为哺乳动物和非哺乳动物，例如，所述哺乳动物可以为伴侣动物(宠物)包括猫和狗等；农场动物包括牛、马、绵羊、猪和山羊等；实验室动物，包括大鼠、小鼠、兔子和非人灵长类动物(如猴子、猩猩等)；动物园动物；以及人类。例如，所述非哺乳动物可以为鸟、鱼、爬行动物、两牺动物、以及昆虫等。
[0064]优选的，本发明所述的生物体为常见的实验动物；更优选的，本发明所述的生物体或细胞为人类、猴、大鼠、小鼠 、果蝇，或来源于人类、猴、大鼠、小鼠、果蝇的细胞。
[0065]一方面，本发明所述来源生物体或细胞的分离的核酸样本可以通过本领域技术人员公知的方法得到，例如，可以根据《分子克隆实验指南》第三版(J.萨姆布鲁克和D.W.拉塞尔著)第7章(关于真核细胞mRNA的提取、纯化和分析)记载的方法提取总RNA，还可以使用总RNA提取试剂盒(invitrogen公司，15596026)根据试剂盒的说明书记载的方法提取总RNA，本领域技术人员可以在适当的范围内对提取总RNA的方法进行各种改进。
[0066]—方面，本发明提供的核糖体RNA分离试剂选自以下寡聚核酸分子中的一种或多种:
[0067]I)与一种生物体的18s rRNA的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子；2)与I)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子；3)与一种生物体的28srRNA的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子；4)与3)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子。
[0068]优选的，本发明提供的核糖体RNA分离试剂选自以下寡聚核酸分子中的一种或多种:
[0069]I)与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5所示核酸序列的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子；2)与I)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子；3)与SEQ ID NO:2SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6所示核酸序列的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子；4)与3)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子。
[0070]优选的，本发明提供的核糖体RNA分离试剂选自具有SEQ ID N0:101-SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:201-SEQ ID NO:220所示核酸序列或其部分序列的寡聚核酸分子。
[0071]优选的，本发明提供的核糖体RNA分离试剂中包含至少一个经过化学修饰的核苷酸；更优选的，所述化学修饰为以下化学修饰中的一种或多种:1)对所述寡聚核酸分子中连接核苷酸的磷酸二酯键的修饰；2)对所述寡聚核酸分子中的核糖的2’ -OH的修饰；3)对所述寡聚核酸分子中碱基的修饰；4)对所述寡聚核酸分子的锁核酸修饰(LNA, Lockednucleic acid)。
[0072]一方面，本发明中与核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物可以为生物素、地高辛或特异性核酸序列。
[0073]优选的，与核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物为生物素，将所述核糖体RNA与核糖体RNA分离试剂杂交形成的复合物与核酸样本中的其他成分进行分离的方法包括:利用生物素与亲和素或链亲和素之间特异性的相互作用，将与固相支持物偶连的亲和素或链亲和素以及与生物素偶连的核糖体RNA分离试剂-核糖体RNA复合物共同孵育，通过固相支持物使与生物素偶连的复合物得到分离。
[0074]所述生物素(biotin)又称维生素H，分子量为244.31，存在于蛋黄中。所述亲和素(Avidin)又称卵白蛋白或抗生物素，是指一种糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，在pH9-13缓冲液中性质均稳定，耐热并耐多种蛋白水解酶的作用。天然亲合素为碱性蛋白，由4个相同的亚单位构成4聚体；每个亲合素亚单位通过其结构中的色氨酸残基与生物素中的Ureido环结合。因此，I个亲合素分子存在4个与生物素分子结合位点。所述链亲和素(Streptavidin)是指与亲合素有类似生物学特性的一种蛋白质。是由Streptomycesavidin菌在培养过程中分泌的一种蛋白质产物，链亲和素也可通过基因工程手段生产。分子量为65000，由4条序列相同的肽链构成，每条链亲和素肽链可以结合I个生物素分子。因此与亲和素一样，每个链亲和素分子也具有4个可与生物素分子结合位点。
[0075]优选的，与所述核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物为地高辛，将所述核糖体RNA与核糖体RNA分离试剂杂交形成的复合物与核酸样本中的其他成分进行分离的方法包括:利用抗地高辛抗体与地高辛之间特异性的相互作用，将与固相支持物偶连的抗地高辛抗体以及与地高辛偶连的核糖体RNA分离试剂-核糖体RNA复合物共同孵育，通过固相支持物使与地高辛偶连的复合物得到分离。
[0076]优选的，与所述核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物为特异性核酸序列，将所述核糖体RNA与核糖体RNA分离试剂杂交形成的复合物与核酸样本中的其他成分进行分离的方法包括:利用与固相支持物偶连的且能够与所述特异性核酸序列杂交的核酸序列与所述特异性核酸序列之间特异性的相互作用，将与固相支持物偶连的且能够与所述特异性核酸序列杂交的核酸序列以及与所述特异性核酸序列偶连的核糖体RNA分离试剂-核糖体RNA与复合物共同孵育，通过固相支持物使与所述特异性核酸序列偶连的复合物得到分离。
[0077]一方面，本发明所述的固相支持物的种类为本领域技术人员所公知，可选自:平板、微平板、微量板、载玻片、皿、微珠、颗粒、微粒、杯子、条状物、芯片、微芯片、带状物、膜、微阵列和试管。所述可分离载体的制造材料选自:玻璃、硅、塑料、聚苯乙烯、聚乙烯、聚丙烯和聚碳酸酯。优选的，所述固相支持物为琼脂糖凝胶珠或磁珠。
[0078]—方面，本发明提供了所述核糖体RNA的分离方法和核糖体RNA分离试剂在核酸样本核糖体RNA去除中的应用；优选的，本发明提供了所述核糖体RNA的分离方法和核糖体RNA分离试剂在转录本鉴定中的应用；优选的，本发明提供了所述核糖体RNA的分离方法和核糖体RNA分离试剂在基因表达研究中的应用。[0079]有益效果本发明通过使用特异性的核糖体RNA分离试剂或其组合，有效地将核糖体RNA从生物体或细胞来源的核酸样本中去除，从而解决核糖体RNA对基因表达研究的干扰。与现有技术相比，本发明提供的分离试剂具有更高的分离效率，并且操作简便，成本低。
【具体实施方式】
[0080]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应当理解，这些实施例仅用于说明本发明而不能用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人,分子克隆:实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press, 1989)中所述的条件,或按照制造厂商所建议的条件。本发明所使用的DNA寡聚核酸由Invitrogen北京分公司合成。
[0081 ] 表1核糖体RNA基因序列表[0082]
【权利要求】
1.一种核糖体RNA的分离方法，其特征在于包括以下步骤: 1)将一种与可筛选标记物偶连的核糖体RNA分离试剂与生物体或细胞来源的分离的核酸样本进行接触； 2)在一定条件下，使核酸样本中的核糖体RNA与核糖体RNA分离试剂杂交，形成复合物； 3)利用与核糖体RNA分离试剂偶联的可筛选标记物，使步骤2)中形成的复合物与核酸样本中的其他成分进行分离。
2.权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述生物体和细胞为人类和来源于人类的细胞。
3.权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述生物体和细胞为猴和来源于猴的细胞。
4.权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述生物体和细胞为大鼠和来源于大鼠的细胞。
5.权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述生物体和细胞为小鼠和来源于小鼠的细胞。
6.权利要求1所述的分离方法，其特征在于所述生物体和细胞为果蝇和来源于果蝇的细胞。
7.权利要求1-6任一项所述的分离方法，其特征在于所述核糖体RNA分离试剂选自以下寡聚核酸分子中的一种或多种: 1)与一种生物体的18srRNA的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子； 2)与I)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子； 3)与一种生物体的28srRNA的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子； 4)与3)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子。
8.权利要求1-6任一项所述的分离方法，其特征在于所述核糖体RNA分离试剂选自以下寡聚核酸分子中的一种或多种: 1)与SEQID NO:1或SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:5所示核酸序列的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子； 2)与I)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子； 3)与SEQID NO:2或SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:6所示核酸序列的部分核酸序列互补的寡聚核酸分子； 4)与3)所述寡聚核酸分子的核酸序列的同源性在90%或以上的寡聚核酸分子。
9.权利要求1-6任一项所述的分离方法,其特征在于所述核糖体RNA分离试剂选自SEQID NO: 101-SEQ ID NO:120或SEQ ID NO:201-SEQ ID NO:220所示核酸序列或其部分序列的寡聚核酸分子。
10.权利要求1-9任一项所述的分离方法，其特征在于所述核糖体RNA分离试剂含有至少一个化学修饰的核苷酸。
【文档编号】C12Q1/68GK103571821SQ201210249946
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2012年7月19日 优先权日:2012年7月19日
【发明者】杜权 申请人:杜权