细胞冷冻保存用具的制作方法
【专利摘要】细胞冷冻保存用具（1）具有：细胞保持构件（2），其具有主体部（23）和细胞保持部（21）；以及筒状收纳构件（3），其一端封闭，能够收纳细胞保持构件（2）。细胞保持构件（2）的细胞保持部（21）具有细长的细胞附着保持部（22），细胞附着保持部（22）具有沿长度方向延伸的导热体（25、26）。在将细胞保持构件（2）收纳到筒状收纳构件（3）中时，导热体能够与筒状收纳构件（3）的内表面接触。
【专利说明】细胞冷冻保存用具
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种在将哺乳动物的卵子、胚胎等卵，造血干细胞、多能干细胞等干细胞，精子等，各种细胞冷冻保存时所使用的细胞冷冻保存用具。
【背景技术】
[0002]哺乳动物胚胎的冷冻保存能够保存特定的系统、品种的遗传资源。此外，对于维持濒临灭绝危机的动物种类也是有效的。并且，在人类的不孕治疗中也是有用的。
[0003]作为哺乳动物胚胎的冷冻保存方法，在专利文献I (日本特开2000 - 189155)中提出了这样的方法:利用足够包裹哺乳动物胚胎或者卵子的最少量的玻璃化液将这些胚胎或者卵子粘在经灭菌处理后的冷冻吸管、冷冻瓶或者冷冻管等冷冻保存用容器的内表面，将该冷冻保存用容器密封，然后使该容器与液氮接触而对该容器进行急速冷却。而且，在融解方法中，将利用上述方法保存的冷冻保存用容器从上述液氮中取出，使容器的一端部开口，向该容器内直接注入33°C~39°C的稀释液，使胚胎或者卵子的冷冻融解稀释。采用该方法，具有能够无因病毒、细菌而感染之忧地以较高的存活率保存和融解稀释哺乳动物胚胎或者卵子这样的优异的效果。
[0004]但是，利用足够包裹胚胎或者卵子等卵的最少量的玻璃化液粘在冷冻吸管、冷冻瓶或者冷冻管等冷冻保存用容器的内表面的作业未必容易。
[0005]在先技术文献
[0006]专利文献
[0007]专利文献1:日本 特开2000 - 189155
[0008]专利文献2:日本特开2004 - 329202 (美国公开2004 — 0259072)
[0009]专利文献3:日本特开 2002 — 315573 (W002 — 0851 IOAl)
【发明内容】
[0010]发明要解决的问题
[0011]此外，本申请发明人也提出了专利文献2 (日本特开2004 — 329202、美国公开2004 - 0259072)。专利文献2的卵冷冻保存用具I具有由耐液氮材料形成的卵冷冻保存用管2和用于保护管2的金属制筒状保护构件3。管2具有主体部21和内径为0.1mm~
0.5mm的卵保存用细径部22，并且能够被在细径部的顶端侧热封，能够被在主体部21热封。筒状保护构件3具有用于收纳管2的细径部22的顶端部的筒状部31和用于收纳细径部22的未被筒状部31收纳的部分及主体部21的顶端部21a的半筒状部32。
[0012]在上述专利文献I及专利文献2中，需要进行将卵收纳在管内的操作，需要为此花费作业时间。
[0013]此外，本申请发明人提出了专利文献3 (日本特开2002 - 315573、W002 —085110A1)。专利文献3的卵冷冻保存用具I由主体部2、卵附着保持用条带3和筒状构件4构成，该主体部2由耐寒性材料 形成，该卵附着保持用条带3安装在主体部2的一端，由挠性、透明性且耐液氮性材料形成，该筒状构件4由耐寒性材料形成，其能够包裹卵附着保持用条带3且装拆自如地安装在主体部2的这一端被封锁。对于该专利文献3的卵冷冻保存用具，将卵载置在条带上即可，具有无需将卵收纳在管内的操作，卵冷冻操作容易这样的优点。
[0014]但是，在对比文献3的卵冷冻保存用具中，卵不得不与用于玻璃化的冷却介质(具体而言是液氮)接触。卵与液氮接触并不会对卵自身产生影响，但如果可以的话，期望卵不与液氮直接接触。
[0015]本发明的目的在于，提供一种将细胞载置于细胞冷冻保存用具的操作容易，且能够在使细胞不与冷却介质直接接触的情况下将细胞冷冻的细胞冷冻保存用具。
[0016]用于解决问题的方案
[0017]达到上述目的的细胞冷冻保存用具如下。
[0018]一种细胞冷冻保存用具，其具有:细胞保持构件，其具有由耐寒性材料形成的主体部和由耐寒性材料形成的细胞保持部；以及筒状收纳构件，其一端封闭，能够收纳上述细胞保持构件，且由耐寒性材料形成，在该细胞冷冻保存用具中，上述细胞保持构件的上述细胞保持部具有细长的细胞附着保持部，上述细胞附着保持部具有沿上述细胞附着保持部的长度方向延伸的导热体，在将上述细胞保持构件收纳到上述筒状收纳构件中时，上述导热体能够与上述筒状收纳构件的内表面接触。
【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1是本发明的实施例的细胞冷冻保存用具在细胞保持构件被收纳在筒状收纳构件中的状态下的主视图。
[0020]图2是本发明的实施例的细胞冷冻保存用具在细胞保持构件未被收纳在筒状收纳构件中的状态下的主视图。
`[0021]图3是图2所示的筒状收纳构件的纵剖视图。
[0022]图4是图2所示的细胞冷冻保持构件的顶端侧部分的放大主视图。
[0023]图5是图4所示的细胞冷冻保持构件的右视图。
[0024]图6是图4的A — A剖视图。
[0025]图7是图4的B — B剖视图。
[0026]图8是图4所示的细胞冷冻保持构件的放大仰视图。
[0027]图9是用于说明图4的被C 一 C线截取而得到的截面的说明图。
[0028]图10是本发明的另一实施例的细胞冷冻保存用具所使用的细胞保持构件的放大仰视图。
[0029]图11是用于说明图10所示的细胞保持构件的截面构造的说明图。
[0030]图12是图1的D — D放大剖视图。
[0031]图13是本发明的另一实施例的细胞冷冻保存用具的顶端部的放大主视图。
[0032]图14是用于说明图13所示的细胞冷冻保存用具的筒状收纳构件的截面构造的说明图。
[0033]图15是本发明的另一实施例的细胞冷冻保存用具的顶端部的放大主视图。
[0034]图16是用于说明图15所示的细胞冷冻保存用具的筒状收纳构件的截面构造的说明图。
[0035]图17是本发明的另一实施例的细胞冷冻保存用具的顶端部的放大主视图。
[0036]图18是用于说明图17所示的细胞冷冻保存用具的筒状收纳构件的截面构造的说明图。
[0037]图19是本发明的另一实施例的细胞冷冻保存用具的顶端部的放大主视图。
[0038]图20是用于说明图19所示的细胞冷冻保存用具的筒状收纳构件的截面构造的说明图。
[0039]图21是本发明的另一实施例的细胞冷冻保存用具所使用的筒状收纳构件的局部省略放大主视图。
[0040]图22是使用了图21所示的筒状收纳构件的卵冷冻保存用具的放大横剖视图。
[0041]图23是本发明的另一实施例的细胞冷冻保存用具所使用的筒状收纳构件的局部省略剖视图。
[0042]图24是本发明的另一实施例的细胞冷冻保存用具所使用的筒状收纳构件的局部省略剖视图。
[0043]图25是本发明的细胞冷冻保存用具所使用的盖构件的主视图。
[0044]图26是图25所示的盖构件的纵剖视图。
【具体实施方式】
`[0045]使用图示的实施例说明本发明的细胞冷冻保存用具。
[0046]本发明的细胞冷冻保存用具I具有:细胞保持构件2，其具有由耐寒性材料形成的主体部23和由耐寒性材料形成的细胞保持部21 ；以及筒状收纳构件3，其一端封闭，能够收纳细胞保持构件2,且由耐寒性材料形成。细胞保持构件2的细胞保持部21具有细长的细胞附着保持部(卵附着保持部)22，细胞附着保持部22具有沿细胞附着保持部的长度方向延伸的导热体25、26。而且，在将细胞保持构件2收纳到筒状收纳构件3中时，导热体25、26能够与筒状收纳构件3的内表面接触。
[0047]本发明的细胞冷冻保存用具I由细胞保持构件2和用于收纳细胞保持构件2的筒状收纳构件3构成。特别是，该实施例的细胞冷冻保存用具I是卵冷冻保存用具，细胞保持构件2为卵保持构件。另外，本发明的细胞冷冻保存用具I能够用于冷冻保存卵子、胚胎等卵，造血干细胞、多能干细胞等干细胞，精子等，各种细胞，特别是能够用于冷冻保存上述那样的活细胞。此外，在该实施例的细胞冷冻保存用具I中，具有安装在筒状收纳构件3的开口部的盖构件4。
[0048]如图1、图2、图4~图9所示,细胞保持构件(具体而言是活细胞保持构件、卵保持构件)2具有由耐寒性材料形成的主体部23和由耐寒性材料形成的细胞保持部(具体而言是活细胞保持部、卵保持部)21。在该实施例中，如图4~图6 (特别是图6)所示,在细胞保持部21的基端部形成有向顶端方向延伸规定长度的孔部21a，在主体部23的顶端部设有能够进入到上述孔部21a内的延伸规定长度的突出部24。而且，通过将主体部23的突出部24插入到细胞保持部21的孔部21a内，将两者固定在一起。
[0049]细胞保持部21的截面为大致矩形形状，其具有像上述那样与主体部23相连接的基端部和自该基端部向顶端侧突出的细胞附着保持部22。而且，在该实施例中，细胞附着保持部22为细长且宽度较窄的带状。而且，其表面形成细胞附着保持面(卵附着保持面)。
[0050]特别是，在该实施例的细胞保持构件2中，如图4~图9所示，在细胞附着保持部22的表面形成有细胞收纳用凹部(具体而言是活细胞收纳用凹部、卵收纳用凹部)。特别是，在该实施例中，在细胞附着保持部22的表面，在长度方向上设置有多个细胞收纳用凹部(活细胞收纳用凹部、卵收纳用凹部)28&、2813、28(3、28(1、286。如图6、图9所示，细胞收纳用凹部28a、28b、28c、28d、28e为大致半球状的凹部。此外，多个凹部28a、28b、28c、28d、28e自比细胞保持构件2的顶端靠基端侧规定长度的位置向基端侧以直线状排列，而且，各凹部以大致等间隔隔开。在该实施例中，凹部设有多个，但也可以是I个。此外，在设有多个凹部的情况下，优选为2个~8个。凹部的深度优选为0.05mm~0.5mm,凹部的上表面的开口直径优选为0.1mm~0.5mm。此外，凹部之间的间隔距离优选为1mm~3mm。并且,在该实施例中，形成有细胞收纳用凹部28a、28b、28c、28d、28e的部分的背面侧部分形成为鼓出部38a、38b、38c、38d、38e，形成细胞收纳用凹部的部分并不是薄壁，而具有充分的强度。另外，也可以不设置细胞收纳用凹部，而平坦地形成细胞保持构件2的表面，将其平坦面作为细胞附着保持部。此外，细胞附着保持部22的宽度优选为0.4mm~1.0mm，长度优选为5mm~30mm，整体的厚度和凹部部分的厚度优选为0.08mm~1.0mm。此外，细胞保持部21的厚壁的基端部的长度优选为5mm~30mm,主体部的长度优选为20mm~100mm。
[0051]而且，在本发明的细胞保持构件2中，如图4~图9所示，细胞附着保持部22具有沿细胞附着保持部22的长度方向延伸的导热体25、26。特别是，在该实施例的细胞保持构件2中，导热体25、26设于细胞附着保持部22的两个侧部。另外，导热体也可以仅设于细胞附着保持部22的一个侧部。而且，导热体25、26至少位于细胞附着保持部22的形成有细胞收纳用凹部28a、28b、28c、28d、28e的部分的一个或者两个(在该实施例中是两个)侧部，且导热体25、26的顶端面暴露于细胞附着保持部22的顶端面。因而，多个卵收纳用凹部28a、28b、28c、28d、28e位于两根导热体25、26之间。并且，在该实施例中，导热体25、26的沿轴线方向延伸的侧面的一部分暴露出来，如图12所示，能够与筒状收纳构件3的内表面接触，具体而言能够与在内部具有细胞保持构件收纳部31的筒状体30的内表面接触。由此，能良好地经由筒状收纳构件3导热。特别是，在该实施例中，导热体25、26形成为仅一部分暴露出来而其他部分(未暴露的部分)被埋设在细胞附着保持部22的状态。
[0052]此外，在该实施例中，导热体25、26由线状构件或者较细的棒状构件形成。而且，顶端部面和侧部的一部分暴露出来。
[0053]并且，在该实施例的细胞保持构件2中，如图8及图9所示，具有设于细胞附着保持部22的形成有细胞收纳用凹部28a、28b、28c、28d、28e的部分的两侧部且沿细胞附着保持部22的长度方向延伸的两个侧部鼓出部35、36。因此，细胞保持构件2由于在细胞收纳用凹部的两侧部具有鼓出部，因此能够可靠地抑制在载置细胞时细胞向侧部方向移动，并且还能够防止载置后的细胞自细胞收纳凹部脱出。因而，在该实施例中，形成为带状部将两个鼓出部35、36之间连结起来的形态，在该带状部形成有上述细胞收纳用凹部28a、28b、28c、28d、28e。
[0054]此外，也可以像图10及图11所示的细胞保持构件2a那样，鼓出部整体由导热体.25a、26a形成。在该实施例中，导热体25a、26a设于细胞附着保持部22的形成有细胞收纳用凹部28a、28b、28c、28d、28e的部分的两侧部且沿细胞附着保持部22的长度方向延伸，并且形成了两个侧部鼓出部。此外，导热体25a、26a的大部分暴露出来。
[0055]并且，在该实施例的细胞保持构件2中，如图4~图9所示，细胞附着保持部22具有设于细胞附着保持部22的比细胞收纳用凹部28a、28b、28c、28d、28e靠顶端侧的位置的突出部27。突出部27自细胞附着保持部22的顶端向上表面侧(形成细胞收纳用凹部那一侧)突出。此外，如图6所示，突出部27的顶端面形成为向基端侧稍稍倾斜的倾斜面。通过形成这样的突出部27，假如细胞自细胞收纳部脱离而向顶端侧移动时，能够防止其自细胞保持构件2落下，换言之能够防止其自细胞附着保持部22落下。特别是，在该实施例的细胞保持构件2中，通过与像上述那样设于细胞附着保持部22的两侧部的鼓出部35、36协同动作，从而防止细胞落下。
[0056]并且，在该实施例的细胞保持构件2中，如图4~图9所示，细胞附着保持部22具有与细胞收纳用凹部28a、28b、28c、28d、28e连通且沿细胞附着保持部22的长度方向延伸的槽部29a、29b、29c、29d、29e、29f。特别是，在该实施例中，槽部29b、29c、29d、29e将相邻的细胞收纳用凹部连结起来。具体而言，槽部29b将凹部28a和凹部28b连通，槽部29c将凹部28b和凹部28c连通，槽部29d将凹部28c和凹部28d连通，槽部29e将凹部28d和凹部28e连通。
[0057]并且，在该实施例中，如图6所示，细胞附着保持部22具有自细胞附着保持部22的最靠顶端侧的细胞收纳用凹部28a向顶端侧延伸的槽部29a，该槽部29a的端部到达上述突出部或者延伸至上述突出部附近。并且，在该实施例中，细胞附着保持部22具有自细胞附着保持部22的最靠基端侧的细胞收纳用凹部28e向基端侧延伸的槽部29f。
[0058]通过设置这样的与细胞收纳用凹部连通的槽部，与细胞一同被收纳在细胞收纳用凹部中的冷冻保存液的剩余部分流入到该槽部内，因此，能够抑制细胞被过量的冷冻保存液覆盖，从而能够迅速地进行冷冻。并且，由于相邻的细胞收纳用凹部由槽部连通，因此，冷冻保存液变得容易自细胞收`纳用凹部移动，而且，残留在多个细胞收纳用凹部的冷冻保存液量也变得均匀。作为槽部的宽度，优选为IOOym~500μπι，而且，作为槽部的深度，优选为 50 μ m ~500 μ m。
[0059]此外，作为导热体，并不限定于上述那样的线状体或者棒状体，也可以为板状。可以像上述的导热体25、26那样配置两根板状的导热体。
[0060]主体部23和细胞保持部21由耐寒性材料形成。特别是,主体部23和细胞保持部21优选为耐液氮性材料，换言之优选为即使与液氮接触也不会发生脆化的材料。此外，细胞保持部21优选为透明或者半透明体，而且，优选具有一些挠性。作为主体部23和细胞保持部21的形成材料，优选使用例如3 —氟化聚乙烯、低密度聚乙烯、中密度聚乙烯、高密度聚乙烯、聚碳酸酯、尼龙、聚砜、聚酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、超高分子量聚乙烯、乙烯一醋酸乙烯酯共聚物等合成树脂，以及由这些合成树脂形成的薄膜的层叠体。
[0061]导热体25、26由导热材料形成。作为导热材料，能够优选使用银、铜、铝、不锈钢等金属类，氮化铝、氮化硅、氧化铝等导热陶瓷，金属粉末、氮化铝等导热陶瓷粉末，含有碳纤维等高导热性物质的导热性树脂等。
[0062]如图1~图3所示，筒状收纳构件3是一端封闭、能够收纳细胞保持构件2且由耐寒性材料形成的筒状体。筒状收纳构件3是具有顶端封闭部33、基端开口部34以及在内部的细胞保持构件收纳部31的筒状体30。[0063]此外，作为该实施例的筒状收纳构件，优选具有导热构件。特别是，在图13及图14所示的实施例的细胞冷冻保存用具Ia中，筒状收纳构件3a在筒状体30a的顶端部设有导热构件32。筒状收纳构件3a具有固定在其开口的顶端部的导热构件32。而且，该导热构件32的内表面暴露于筒状收纳构件3a内，并且能够与上述细胞保持构件2的导热体25、26所暴露的顶端面接触。此外，导热构件32具有形成凹部的较短的筒状部32a。此外，筒状部32a的外表面缩径成锥形状。与此相对应地，筒状收纳构件3a的开口部55的内径朝向开口顶端去而扩径。而且，导热构件32的筒状部32a插入筒状收纳构件3a的开口部55而固定于筒状收纳构件3a。而且，在该实施例中，设于筒状收纳构件3a的导热构件32的外表面暴露出来。另外，导热构件32也可以被收纳在筒状收纳构件3a内。
[0064]并且，作为筒状收纳构件，也可以像图23所示的筒状收纳构件3f那样，筒状体30f的基端开口部为朝向基端去而扩径的扩径基端开口部34a。此外，作为筒状收纳构件，也可以像图24所示的筒状收纳构件3g那样，筒状体30g在基端开口部34具有切口部34b。通过设置这样的扩径部、切口部，容易向筒状收纳构件插入细胞保持构件2。
[0065]筒状体30由耐寒性材料形成。特别是，筒状体30优选为耐液氮性材料，换言之优选为即使与液氮接触也不会发生脆化的材料。此外，筒状体30优选为能够用眼睛对内部进行确认的透明或者半透明体。作为筒状体30的形成材料，优选使用例如3 —氟化聚乙烯、低密度聚乙烯、中密度聚乙烯、高密度聚乙烯、聚碳酸酯、尼龙、聚砜、聚酯、聚苯乙烯、聚酰亚胺、超高分子量聚乙烯、乙烯一醋酸乙烯酯共聚物等合成树脂，以及由这些合成树脂形成的薄膜的层叠体。
[0066]此外，筒状收纳构件3的细胞保持构件收纳部31的长度优选比细胞保持构件2的全长长IOmm~50mm。此外，筒状收纳构件3 (筒状体30)的全长优选为50mm~150mm,内径优选为2mm~5mm。
[0067]导热构件32由导热材料形成。作为导热材料，能够优选使用银、铜、铝、不锈钢等金属类，氮化铝、氮化硅、氧化铝等导热陶瓷，金属粉末、氮化铝等导热陶瓷粉末，含有碳纤维等高导热性物质的导热性树脂等。
`[0068]另外，作为设于筒状收纳构件3的导热构件的形态，并不限定于上述那样的方式，例如像图15及图16所示的实施例的细胞冷冻保存用具Ib那样，导热构件32具有固定在筒状收纳构件3b的筒状体30b的顶端部(具体而言是将开口的顶端部封闭)并且向筒状体30b的内部延伸规定长度的筒状部32b。该筒状部32b形成为在如图16所示将细胞保持构件2收纳到筒状收纳构件3b中时能够包裹细胞保持构件2的细胞收纳用凹部形成部的长度。而且，在该实施例中，导热体25、26所暴露的侧面部分能够与导热构件32的筒状部32b的内表面接触。
[0069]此外，作为导热构件的形态，例如也可以像图17及图18所示的实施例的细胞冷冻保存用具Ic那样，导热构件是固定在筒状收纳构件3c的侧面的环状构件。在该实施例中，如图17及图18所示，环状的导热构件37、38固定于在将细胞保持构件2收纳到筒状收纳构件3c中时筒状体30c的包裹细胞保持构件2的细胞收纳用凹部形成部的一部分或者包裹整个细胞收纳用凹部形成部的部分。而且，环状的导热构件37、38设于不会妨碍从外部用眼睛对细胞收纳用凹部进行确认的位置。具体而言，顶端侧的导热构件37固定于在将细胞保持构件2收纳在筒状收纳构件3c中时筒状体30c的处于比细胞保持构件2的细胞收纳用凹部形成部靠顶端侧的位置的外表面，基端侧的导热构件38固定于在将细胞保持构件2收纳在筒状收纳构件3c中时筒状体30c的处于比细胞保持构件2的细胞收纳用凹部形成部靠顶端侧的位置的外表面。
[0070]另外，虽然会妨碍从外部用眼睛对细胞收纳用凹部进行确认，但导热构件也可以是包裹大致整个细胞保持构件2的细胞收纳用凹部形成部的筒状构件。
[0071]并且，作为导热构件的形态，也可以像图19及图20所示的实施例的细胞冷冻保存用具Id那样，导热构件是被埋设在筒状收纳构件3d的侧面的环状构件。在该实施例中，如图19及图20所示，环状的导热构件39、40被埋设于在将细胞保持构件2收纳到筒状收纳构件3d中时筒状体30d的包裹细胞保持构件2的细胞收纳用凹部形成部的一部分或者包裹整个细胞收纳用凹部形成部的部分。而且，环状的导热构件39、40设于不会妨碍从外部用眼睛对细胞收纳用凹部进行确认的位置。具体而言，顶端侧的导热构件39被埋设于在将细胞保持构件2收纳在筒状收纳构件3d中时筒状体30d的处于比细胞保持构件2的细胞收纳用凹部形成部靠顶端侧的位置的部位，基端侧的导热构件40被埋设于在将细胞保持构件2收纳在筒状收纳构件3d中时筒状体30d的处于比细胞保持构件2的细胞收纳用凹部形成部靠顶端侧的位置的部位。此外，被埋设的环状的导热构件39、40暴露于筒状收纳构件3d的内表面，能够与导热体25、26所暴露的侧面部分接触。
[0072]此外，在该实施例中，虽然也会妨碍从外部用眼睛对细胞收纳用凹部进行确认，但导热构件也可以是是包裹大致整个细胞保持构件2的细胞收纳用凹部形成部的筒状构件。
[0073]并且，作为导热构件的形态，也可以像图21及图22所示的实施例的细胞冷冻保存用具那样，导热构件是被埋设在筒状收纳构件3e的侧面且沿轴线方向延伸的线状构件。在该实施例中，如图21及图22所示，筒状体30e埋设有与其中心轴线平行地沿轴线方向延伸的多个(具体而言是2根~6根,在该实施例中是3根)导热构件51a、51b、51c。被埋设的线状的导热构件51a、51b、51c暴露于筒状收纳构件3e的内表面，如图22所示，能够与细胞保持构件2的导热体25、26所暴露的侧面部分接触。
[0074]此外，在该实施例的细胞冷冻保存用具I中，具有安装在筒状收纳构件3的开口部的盖构件4。盖构件4具有:盖主体部41，其具有用于安装在筒状收纳构件3的开口部的端部的凹部43 ；以及延伸部42，其自盖主体部41的下表面延长规定长度且能够进入到筒状收纳构件3内。如图1所示，通过安装该盖构件4，能够防止细胞保持构件2自筒状收纳构件3内脱离，并且能够抑制细胞保持构件2在细胞冷冻保存用具I内运动。
[0075]接着，说明本发明的细胞冷冻保存用具I的使用方法。
[0076]在该说明中，以冷冻保存作为活细胞的卵子的情况为例进行说明。
[0077]首先，提取多个卵子，进行将卵子的细胞内液置换为平衡液的作业，再进行将细胞外液置换为玻璃化液的作业。然后，在显微镜下，使卵子与少量的玻璃化液一同配置附着在设于细胞保持构件2的细胞附着保持部22的各个细胞收纳用凹部28a、28b、28c、28d、28e。将附着有卵子的细胞保持构件2从细胞附着保持部22侧插入到筒状收纳构件3内，形成为细胞保持构件2的细胞附着保持部22的导热体25、26的暴露部与筒状收纳构件3的内表面接触的状态。然后，将收纳有细胞保持构件2的筒状收纳构件3从顶端侧浸溃在预先准备好的液氮中将其冷冻(玻璃化)。通过使筒状收纳构件3与液氮接触，使筒状收纳构件3急剧冷却，该冷却会自细胞保 持构件2的细胞附着保持部22的与筒状收纳构件3的内表面接触的导热体25、26急剧地夺取温度，从而使被保持在细胞附着保持部22的卵子也被急剧冷却。然后，根据需要，在将盖构件4安装在筒状收纳构件3的开口部之后，将附着保持玻璃化了的卵子的细胞保持构件2与筒状收纳构件3 —起收纳在收纳容器(cane)中，之后，将收纳容器放入液氮罐内保存起来。
[0078]产业h的可利用件
[0079]本发明的细胞冷冻保存用具如下。
[0080](I) 一种细胞冷冻保存用具，其具有:细胞保持构件，其具有由耐寒性材料形成的主体部和由耐寒性材料形成的细胞保持部；以及筒状收纳构件，其一端封闭，能够收纳上述细胞保持构件，且由耐寒性材料形成，在该细胞冷冻保存用具中，上述细胞保持构件的上述细胞保持部具有细长的细胞附着保持部，上述细胞附着保持部具有沿上述细胞附着保持部的长度方向延伸的导热体，在将上述细胞保持构件收纳到上述筒状收纳构件中时，上述导热体能够与上述筒状收纳构件的内表面接触。
[0081]在本发明的细胞冷冻保存用具中，在吸取在冷冻保存液中处理后的细胞(例如卵子)并将其配置在细胞保持构件的细胞附着保持部上之后，通过将保持着细胞的细胞保持构件插入到筒状收纳构件中，使被保持于细胞保持构件的细胞被筒状收纳构件保护，并且并未暴露于外部。然后，以使收纳有细胞保持构件的筒状收纳构件的顶端侧处于下方的方式使该筒状收纳构件与冷却介质(例如液氮)接触，且以使液氮不会流入到内部的方式进行操作，由此，使筒状收纳构件冷却，且细胞保持构件的与筒状构件接触的导热体也被冷却，从而使细胞保持构件及附着在该细胞保持构件的细胞也被迅速冷却。因而，采用本发明的细胞冷冻保存用具，将细胞载置于细胞冷冻保存用具的操作容易，且能够在使细胞不与冷却介质直接接触的情况下将细胞冷冻。
[0082]而且，本发明的实施方式也可以如下。
[0083](2)根据上述(1)所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述筒状收纳构件具有导热构件。
[0084](3)根据上述(2)所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述导热构件的一部分暴露于上述筒状收纳构件的内部空间，在将上述细胞保持构件收纳到上述筒状收纳构件中时，上述细胞保持构件的上述导热体能够与上述导热构件的暴露部接触。
[0085](4)根据上述(1)~(3)中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述导热体以自上述细胞附着保持部的顶端部向基端侧延伸的方式设于上述细胞附着保持部的一个或者两个侧部。
[0086](5)根据上述(2)~(4)中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述导热构件设于上述筒状收纳构件的顶端部。
[0087](6)根据上述(2)~(4)中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述导热构件设于上述筒状收纳构件的侧面。
[0088](7)根据上述(1)~(6)中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述导热体以自上述细胞附着保持部的顶端部向基端侧延伸的方式设于上述细胞附着保持部的两个侧部。
[0089](8)根据上述(1)~(7)中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述细胞附着保持部具有细胞收纳用凹部，上述导热体至少位于上述细胞附着保持部的形成有上述细胞收纳用凹部的部分的一个或者两个侧部。[0090](9)根据上述(8)所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述细胞附着保持部具有与上述细胞收纳用凹部连通的剩余冷冻保存液排出通路。
[0091](10)根据上述(I)~(9)中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述耐寒性材料是耐液氮性材料。
[0092](11)根据上述(I)~(10)中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述导热体由金属、导热陶瓷或者导热性塑料形成。
[0093](12)根据上述(2)~(11)中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中，上述导热构件由金属、导热陶瓷或者导热性塑`料形成。
【权利要求】
1.一种细胞冷冻保存用具，其具有:细胞保持构件，其具有由耐寒性材料形成的主体部和由耐寒性材料形成的细胞保持部；以及筒状收纳构件，其一端封闭，能够收纳上述细胞保持构件，且由耐寒性材料形成， 该细胞冷冻保存用具的特征在于， 上述细胞保持构件的上述细胞保持部具有细长的细胞附着保持部，上述细胞附着保持部具有沿上述细胞附着保持部的长度方向延伸的导热体，在将上述细胞保持构件收纳到上述筒状收纳构件中时，上述导热体能够与上述筒状收纳构件的内表面接触。
2.根据权利要求1所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述筒状收纳构件具有导热构件。
3.根据权利要求2所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述导热构件的一部分暴露于上述筒状收纳构件的内部空间，在将上述细胞保持构件收纳到上述筒状收纳构件中时，上述细胞保持构件的上述导热体能够与上述导热构件的暴露部接触。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述导热体以自上述细胞附着保持部的顶端部向基端侧延伸的方式设于上述细胞附着保持部的一个或者两个侧部。
5.根据权利要求2~4中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述导热构件设于上述筒状收纳构件的顶端部。
6.根据权利要求2~ 4中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述导热构件设于上述筒状收纳构件的侧面。
7.根据权利要求1~6中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述导热体以自上述细胞附着保持部的顶端部向基端侧延伸的方式设于上述细胞附着保持部的两个侧部。
8.根据权利要求1~7中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述细胞附着保持部具有细胞收纳用凹部，上述导热体至少位于上述细胞附着保持部的形成有上述细胞收纳用凹部的部分的一个或者两个侧部。
9.根据权利要求8所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述细胞附着保持部具有与上述细胞收纳用凹部连通的剩余冷冻保存液排出通路。
10.根据权利要求1~9中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述耐寒性材料是耐液氮性材料。
11.根据权利要求1~10中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述导热体由金属、导热陶瓷或者导热性塑料形成。
12.根据权利要求2~11中任一项所述的细胞冷冻保存用具，其中， 上述导热构件由金属、导热陶瓷或者导热性塑料形成。
【文档编号】C12M3/00GK103874761SQ201280048931
【公开日】2014年6月18日 申请日期:2012年10月1日 优先权日:2011年10月4日
【发明者】井上太 申请人:株式会社北里生物制药