一种红细胞保存液的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物技术材料，具体涉及一种红细胞保存液。
【背景技术】
[0002] 红细胞膜表面有很多种抗原，如ABH抗原、Rh抗原等。这些抗原能够特异性地与 抗体结合，所以红细胞被广泛地应用于血型血清学试验。目前，红细胞都是从人血细胞中获 得，无法用其他来源的物质代替，这使得红细胞的获得和保存受到极大的限制。若是将新鲜 的红细胞放入生理盐水中，1~2天便会发生溶血，无法使用。因而红细胞的保存方法一直 是相关研究者关注的问题。尤其是一些稀有血型，由于来源稀少、保存时间不长，极大的阻 碍了血型血清学试验的顺利进行。
[0003]最常见的红细胞保存方法是将红细胞悬浮于红细胞保存液中，4。°C冷藏，这样保 存的优点在于可以减缓红细胞的代谢速度，保护红细胞在体外保存时结构和功能的完整 性，从而延长其保存时间，减少红细胞的浪费，如将红细胞保存于GM红细胞保存液中。但 GM红细胞保存液的保存期仅为42天，其保存的红细胞在第4周左右就会发生长菌，保存效 果受到很大的影响。
[0004] 中国专利CN02148958. 0公开了 一种红细胞保存液，可以较长时间地保存和稳定 红细胞，其保存期限为2个月。
[0005]为了满足更长的保存时间要求，需要提出新的红细胞保存方法和保存液。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种红细胞保存液，能够更长时间更好效果地保存红细胞。
[0007]为实现上述目的，本发明提供的技术方案是，一种红细胞保存液，所述红细胞保存 液的组成和含量如下：
[0008]
[0014] 本发明还提供一种试剂红细胞，所述试剂红细胞是将洗涤红细胞保存于上述红细 胞保存液中，保存期限不少于14周。
[0015] 所述洗涤红细胞是指将保存期内的全血、悬浮红细胞用大量等渗溶液洗涤，去除 80%以上的白细胞和99%以上的血浆成分和部分非红细胞成分的红细胞成分血。
[0016] 本发明以葡萄糖、腺嘌呤、肌苷等构成红细胞的营养体系，红细胞的长期保存需要 不断地为新陈代谢提供能量，而红细胞中没有细胞核、线粒体等细胞器，因此这种能量主要 来自于糖酵解。红细胞通过糖酵解获得生长所需能量，糖酵解产生的ATP是细胞生命活动 所需能量的直接来源，可增强细胞代谢活性，而糖酵解以葡萄糖为底物。腺嘌呤是三磷酸腺 苷来源，可以提高ATP的活性水平。肌苷是腺嘌呤的前体，能直接透过细胞膜进入红细胞， 参与能量代谢。
[0017] 氧化钠注射液是细胞的等渗溶液，因此添加氧化钠后，不仅可以维持红细胞的渗 透压，保护细胞膜结构的完整性，还可以保持红细胞内外的离子平衡。
[0018] 本发明添加硫酸新霉素和氧霉素，有效地防止了微生物的侵袭，保护了红细胞的 正常代谢。
[0019] 相较于现有技术，本发明的有益效果在于：
[0020] 1、保存时间长。在第十四周时，本发明保存的红细胞悬液的游离血红蛋白浓度仍 符合国家标准（洗涤红细胞在储存末期溶血率小于红细胞总量的〇. 8% )。
[0021 ] 2、在保存期内，本发明保存的红细胞悬液保持了较高的抗原效价。
【附图说明】
[0022] 图1是游离血红蛋白浓度测定结果对比。其中，1是实施例1的测定结果，2是实 施例2的测定结果，3是实施例3的测定结果。
[0023] 图2是红细胞悬液的抗原效价测定结果对比。其中，其中，1是实施例1的测定结 果，2是实施例2的测定结果，3是实施例3的测定结果，4是市售红细胞悬液的测定结果。
【具体实施方式】
[0024] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明 而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明的内容之后，本领域技术人员可 以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本发明所限定的范围。
[0025] 洗涤红细胞的制备：
[0026] 将5份新鲜的A型健康人的红细胞吸出血清后混合，加入2~3倍体积的氧化钠 注射液，吹打混匀，置于离心机中3000rpm离心5min，将离心好的A型红细胞试管取出，吸 去上清液及附着在红细胞表层的白细胞、血小板等成分，再加入2~3倍体积的氧化钠注射 液，混匀后在离心机中3000rpm离心5min，并重复两遍。在第4次离心后，吸出绝大多数上 清液，留下压积红细胞备用。将洗好的红细胞吸出100y1到已加入9. 9mL红细胞保存液的 滴管瓶中，配制出IOmL1%的不同保存液保存的红细胞悬液各2瓶，其中一瓶用于检测，另 一瓶静置观察，均放于4°C冰箱冷藏保存。
[0027] 对于B型健康人红细胞也进行上述过程制得洗涤红细胞悬液。
[0028] 1)实施例1
[0029] 按以下成分和含量配制红细胞保存液：
[0030]
[0031] 将实施例1的红细胞保存液与洗涤红细胞一同配制为1 %红细胞悬液。
[0032] 2)实施例2
[0033] 按以下成分和含量配制红细胞保存液：
[0034]
[0035] 将实施例2的红细胞保存液与洗涤红细胞一同配制为I%红细胞悬液。
[0036] 3)实施例3
[0037] GMA红细胞保存液：
[0040] 将实施例3的GM红细胞保存液与洗涤红细胞一同配制为1 %红细胞悬液。
[0041] 将实施例1~3的红细胞悬液，检测红细胞悬液中的游离血红蛋白浓度。将实施 例1~3的红细胞悬液和市售红细胞悬液一起，检测红细胞悬液的抗原效价。
[0042] 1、游离血红蛋白浓度测定
[0043] 红细胞主要由红细胞膜和大量的血红蛋白组成，当红细胞膜破裂时，膜表面抗原 被破坏，血红蛋白逸出，发生溶血现象。所以游离血红蛋白浓度可以作为红细胞体外保存效 果的质量指标之一。
[0044] 血红蛋白具有过氧化酶作用，可以使过氧化氢分解产生新生态氧，新生态氧氧化 联苯胺为蓝色或绿色的衍生物，在酸性条件下颜色变为黄绿色，吸收峰在435nm处。根据吸 光度与已知浓度的血红蛋白的吸光度进行比较，可求得其浓度。
[0045] 用30mL冰乙酸溶解邻甲联苯胺0.lg，加蒸馏水至50mL，配制为0. 2%的邻甲联苯 胺溶液，4°C保存；吸取3. 67mL