专利名称：一株低温异养硝化菌的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株异养硝化菌。
背景技术：
近年来，随着城市规模不断扩大，城市周边水体环境受到严重影响。在我国204条河流的409个地表水监测断面中，IV V类和劣V类水质的断面比例分别为23.7%和16.4%，其中氨氮为主要污染指标之一。我国采用的常规净水工艺(混凝、沉淀、过滤)难以有效去除水中过量的氨氮。尽管折点氯化可以去除水中氨氮，然而投氯量的增加致使产生机卤化物的风险加大，从而导致水质毒理学安全性下降。传统生物硝化法中硝化菌为化能自养型专性好氧微生物，最适生长温度为10 28°C，生长速度缓慢，对环境条件非常敏感，当水中氨氮浓度较低的条件下，难以有效发挥作用。异养硝化菌可氧化水中氨氮，并转化为氮气，由于其利用有机物生长，因此生长速度较快，且对环境适应性强。目前已有一些关于异养硝化菌分离、筛选、降解氨氮效能方面的研究报道。名称为“脱氮不动杆菌及其降解废水中氨氮的方法(中国专利号:ZL200410019474.7，申请日:2004年06月04日，授权公告H:2006年07月26日)”的专利中公开了一株脱氮不动杆菌(Acinetobacter sp) YY-5,CGMCC N0.1154,降解废水中氨氮的方法，可在好氧条件下将废水中的氨氮直接氧化成氮气，但是该菌株应用时进水氨氮浓度均较高，最低时进水氨氮浓度也在50mg/L以上，不适用于处理氨氮浓度在5mg/L以下的微污染水源水，而且在降解氨氮时，控制温度为15 40°C，不适用于低温处理。名称为“可低温、好氧条件下同步去除微污染水源水中有机物及氨氮的细菌及筛选驯化方法(中国专利号:ZL200910071571.3，申请日:2009年03月18日，授权公告日:2011年01月05日)”的专利中公开了一株鲁菲不动杆菌SRAlO (Acinetobacter lwoffii), CGMCC N0.2889,该菌的生长温度范围为2 30°C，可固定于活性炭上，降解8h后将5mg/L氨氮去除94%。名称为“可低温、好氧条件下去除微污染水源水中氨氮的细菌(中国专利号:ZL200910071569.6，申请日:2009年03月18日，授权公告日:2011年03月23日)”的专利中公开了一株细菌SRA13 (Brevibacterium mcbrellneri), CGMCC N0.2890,该菌固定于活性炭上，在 2 10°C,初始氨氮浓度5mg/L时，降解8h后可去除92%氨氮。然而，在饮用水处理工艺中，微生物的降解时间一般为20 40min，最高只有lh，菌株SRAlO和SRA13无法满足饮用水处理的时间要求。
发明内容
本发明目的是提供一株低温异养硝化菌；适用于低温饮用水氨氮处理工艺。一株低温异养硝化菌，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGM CC N0.7486，保藏日期为2013年4月18日，保藏地址为北京市朝阳区北辰路I号院3号,它命名为哈工大异养硝化不动细菌L7 (Acinetobacter HeteronitrifihitL7)。
哈工大异养硝化不动细菌L7 (Acinetobacter Heteronitrifihit L7),菌株的形态特征:它为球杆菌，长为0.8 1.2μηι,宽为1.2 1.3 μ m,无鞭毛；革兰氏染色阴性,但不易脱色；无芽孢；菌落圆形，光滑，凸起。哈工大异养硝化不动细菌L7 (Acinetobacter Heteronitrifihit L7),菌株的生理生化特征:它为专性好氧菌，可在2 35°C、pH6 8条件下生长；8°C，pH值7.2为最适生长条件，为耐低温菌；接触酶阴性，氧化酶阴性，可进行硝酸盐的还原，可以乙酸钠为单一碳源进行生长，不水解葡萄糖，可利用甲基丙酮酸，乳酸甲酯，L-乳酸，氨基戊二酸，I %乳酸钠；对洁霉素，万古霉素，利福霉素抗性较强。哈工大异养硝化不动细菌L7 (Acinetobacter Heteronitrifihit L7),菌株的分子生物学鉴定结果:16S rRNA序列GenBank注册号为KC843488，与其相近种属不动细菌的鲁菲不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)的相似性为98 应用DNA-DNA杂交方法，哈工大异养硝化不动细菌L7 (Acinetobacter Heteronitrifihit L7)与鲁菲不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)进行杂交，同源杂交率为36.2%,为一新种细菌。本发明一株低温异养硝化菌，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC N0.7486，保藏日期为2013年4月18日，保藏地址为北京市朝阳区北辰路I号院3号，它命名为哈工大异养硝化不动细菌L7 (AcinetobacterHeteronitrifihit L7)。本发明一株低温异养硝化菌，所属分类学“种”为一新种，哈工大异养硝化不动细菌 L7 (Acinetobacter Heteronitrifihit L7),为首次命名的分类学新菌种。6+04511101%,Genbank序列注册号为KC843488。主要脂肪酸组成为C12:_，C16:1, C16:0, C18llo 本发明一株低温异养硝化菌，它命名为哈工大异养硝化不动细菌L7 (Acinetobacter Heteronitrifihit L7)，进行低温饮用水氨氮降解，在菌株量达到IO7 IO9个/ml,以葡萄糖或乙酸钠为 碳源，C/N比2 8，在温度2°C，pH值7.2，150rpm(溶解氧大于5mg/L)下，降解速率可达5.23mg NH4+/L.h ；30min内对氨氮降解率达到50%以上。
图1为具体实施方式
一中哈工大异养硝化不动细菌L7 (AcinetobacterHeteronitrifihit L7)的电子显微结构形态图。
具体实施例方式具体实施方式
一:本实施方式一株低温异养硝化菌，已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC N0.7486，保藏日期为2013年4月18日，保藏地址为北京市朝阳区北辰路I号院3号，它命名为哈工大异养硝化不动细菌L7 (Acinetobacter Heteronitrifihit L7)。本实施方式中一株低温异养硝化菌，它使用常规的分离、纯化和筛选方法获得，过程如下:取冬季松花江水样5ml,接种至50ml筛选培养基中，在2°C、150rpm/min下富集7 IOd,梯度稀释后,接种于固体培养基上,在2°C下培养3 5d,选取典型的单一菌落进行纯化培养，将最终获得的纯培养菌株进行氨氮降解试验，选取30min内对氨氮降解率达到50%以上的菌株。筛选培养基为=NH4Cl0.1 0.5g/L, CH3CH2ONa0.2 1.0g/L, MgSO4.7Η200.01
0.05g/L, K2HPO40.05 0.2g/L, NaCl0.05 0.12g/L, MnSO4.4H200.01g/L, FeSO40.0lg/L,维生素C0.002g/L, NADPH0.0Olg/L和余量的蒸馏水，pH值7.0 7.4。结果:所得到的菌，其菌体形态如图1所示，它为球杆菌，长为0.8 1.2 μ m，宽为
1.2 1.3 μ m，无鞭毛；革兰氏染色阴性，但不易脱色；无芽孢；菌落圆形，光滑，凸起；参照“常见细菌系统鉴定手册.北京:科学出版社，2001.东秀珠，蔡妙英”进行生理生化特征测定；它为专性好氧菌，可在2 35°C、pH6 8条件下生长；8°C，pH值7.2为最适生长条件，为耐低温菌；接触酶阴性，氧化酶阴性，可进行硝酸盐的还原，可以乙酸钠为单一碳源进行生长，不水解葡萄糖，可利用甲基丙酮酸，乳酸甲酯，L-乳酸，氨基戊二酸，I %乳酸钠；对洁霉素，万古霉素，利福霉素抗性较强。所得到的菌进行分子生物学鉴定:16S rDNA测序方法，提取细菌基因组DNA后进行16S rDNA序列扩增，用于扩增的PCR反应引物为通用引物:正向引物5，-GAGCGGATAACAATTTCACACAGG-3 ’ ；反向引物 5 ’ -CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-3 ’。PCR 反应体系如下:模板DNA50 lOOng，25 μ LTaq酶混合液，0.5yL正向引物，0.5yL反向引物，加入无菌去离子水至50 μ L。PCR扩增条件:94°C预变形5min，之后94°C变性lmin，50 55°C扩增lmin， 72°C延伸1.5min，经过30次循环后，72°C延伸5min。将获得片段用于测序。参见 SEQ ID No:3o结果:16S rRNA序列GenBank注册号为KC843488，与其相近种属不动细菌的鲁菲不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)的相似性为98 %，应用DNA-DNA杂交方法“具体参照文献方法(常见细菌系统鉴定手册.北京:科学出版社，2001.东秀珠，蔡妙英.)”，哈工大异养硝化不动细菌L7(Acinetobacter Heteronitrifihit L7)与鲁菲不动杆菌(Acinetobacter lwoffii)进行杂交，同源杂交率为36.2%,为一新种细菌。一株低温异养硝化菌，它为哈工大异养硝化不动细菌L7 (AcinetobacterHeteronitrifihit L7),低温饮用水氨氮降解工艺:将哈工大异养硝化不动细菌L7培养至IO7 IO9个/ml，取50ml在6000g离心IOmin获得菌体沉淀，用无菌去离子水对菌体沉淀清洗2 3次，将菌体转入50ml、氨氮浓度为5mg/L的降解溶液中，用葡萄糖或乙酸钠作为碳源，将C/N比2 8，在2°C，pH值7.2，150rpm(溶解氧大于5mg/L)条件下,对氨氮降解30min后，降解速率可达5.23mg NH4+/L *h ；可见，哈工大异养硝化不动细菌L7的降解时间仅为30min，相对于菌株SRA10和SRA13的降解时间，缩短了 7.5小时，更符合在饮用水处理工艺中，微生物的降解时间(20 40min)，能够满足饮用水处理的时间要求。
权利要求
1.一株低温异养硝化菌，其特征在于它已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC N0.7486，保藏日期为2013年4月18日，保藏地址为北京市朝阳区北辰路I号院3号，它命名为哈工大异养硝化不动细菌L7 (AcinetobacterHeteronitri fihit L7)。
全文摘要
一株低温异养硝化菌，它涉及一株异养硝化菌。一株低温异养硝化菌已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.7486，保藏日期为2013.4.18，保藏地址为北京市朝阳区北辰路1号院3号，它命名为哈工大异养硝化不动细菌L7(Acinetobacter Heteronitrifihit L7)。本发明哈工大异养硝化不动细菌L7进行低温饮用水氨氮降解，在菌株量达到107～109个/ml，以葡萄糖或乙酸钠为碳源，C/N比2～8，在温度2℃，pH值7.2，150rpm(溶解氧大于5mg/L)下，降解速率可达5.23mg NH4+/L·h；30min内对氨氮降解率达到50％以上。
文档编号C12N1/20GK103224903SQ20131019204
公开日2013年7月31日 申请日期2013年5月22日 优先权日2013年5月22日
发明者李伟光, 黄晓飞, 张多英, 秦雯 申请人:哈尔滨工业大学