一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用。所述一种粪肠球菌的复配增效方法主要包括微生物菌种复配、活菌繁殖促进剂复配等。发明中所述的微生物菌种主要由粪肠球菌、屎肠球菌、嗜酸链球菌、酵母菌中的一种或多种混合组成；所述活菌繁殖促进剂主要由木糖醇、乳糖、低聚果糖、低聚木糖、壳聚糖、酵母粉、叶酸、柠檬酸中的一种或多种混合而成。本发明菌株复配增效方法实现了不同微生物菌株间协同作用，加速了对水体污染物的净化过程，促进养殖生态系统的物流及能流的平衡。在水产养殖过程中使用本品，可以有效平衡水体菌相和藻相，快速分解残饵、粪便、动物尸体等污染物，改善养殖水体水质，增加养殖水体稳定性，防止养殖水体老化。
【专利说明】一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用【技术领域】
[0001]本发明属于微生物技术应用领域，具体涉及一种粪肠球菌的复配增效方法，还涉及到一种粪肠球菌复合微生物菌剂在水产养殖上的应用。
【背景技术】
[0002]粪肠球菌也叫粪链球菌，其菌体形态为链球或球状，菌体直径大小0.3 Mm-0.7 Mm之间，无芽孢，稀释后在肉汤琼脂平板上形成的菌落圆形，乳白色，表面凸起湿润，有光泽，边缘整齐，大多数成双或短链状排列，通常不运动。粪肠球菌为D族链球菌中肠球菌的代表种，通常所谓的粪肠球菌主要包括粪链球菌、粪链球菌液化亚种、粪链球菌产酶亚种、尿链球菌、牛链球菌、马肠链球菌、鸟链球菌等。其中前四种主要存在于人肠道，称肠球菌；后三种主要存在于家畜及家禽的粪便内。
[0003]粪肠球菌的繁殖营养要求低，在普通营养琼脂上也可生长。能在10°C或45°C pH
9.6或含6.5% NaCl肉汤培养基中生长，并能耐65°C、30分钟。它可利用精氨酸为能源，发酵山梨醇，不发酵阿拉伯糖。
[0004]1989年，美国食品与药品管理局(Food and Drug Administration, FDA)和美国饲料管理协会(Association of American Feed Control Officials, AAFC0)公布了 44种“可直接饲喂且通常认为是安全的微生物(Generally Recognized as Safe, GRAS) ”作为微生态制剂的出发菌株，其中均有粪肠球菌。
[0005]我国农业部1999年第105号文件公布允许使用的微生物种类是12种，也包括益生肠球菌。目前国内用于微生态调节剂的菌种主要有乳酸杆菌、双歧杆菌、大肠杆菌、链球菌、芽孢杆菌及某些酵母和真菌。这些微生物可以单个使用，也可以混合使用。
·[0006]粪肠球菌是目前专用的微生物青贮接种剂主要菌种之一，属兼性厌氧革兰氏阳性菌。已被广泛应用于养殖业中，为减少和避免使用抗生素发挥了巨大作用。它经过系列工艺制成的微生物制剂直接投喂养殖动物后，有利于改善肠道内微生态平衡，防治动物肠道菌丛区系紊乱，有分解蛋白质为水肽、合成B族维生素等功效，也可以促进养殖动物的免疫反应，提高抗体水平，增强巨嗜细胞的活性。
[0007]饲料里添加粪肠球菌能使饲料里的纤维变软，提高饲料的转化吸收率。另外粪肠球菌在生长和代谢过程中会产生的乳酸、氨基酸、维生素、酶等特殊营养成分弥补了常规饵料的营养缺陷，对各种养殖动物幼体起到了十分重要的营养强化和促生长作用。粪肠球菌还可以分泌肽或蛋白质类的细菌素。因此，粪肠球菌被作为一种优良的饲料添加剂广泛使用，在饲料添加中粪肠球菌，既有防腐作用，又增加饲料的风味，促进养殖动物的食欲。
[0008]日本最早开发粪肠球菌用于治疗各种肠道疾病。日本目前市场上出售的含有粪肠球菌的酸奶制品或药品有清水制药生产的Lascpanj^日啤酒株式会社生产的新Lacton、若素制药生产的Lebenin、武田制药生产的Biosmin、韩国生产的用于治疗婴幼儿肠道疾病的益生菌制剂如妈咪爱等。其中有些产品，如妈咪爱等目前已打入中国市场。在欧洲一些国家如德国和瑞典生产的益生菌制品中也都含有屎肠球菌。目前国内市场上对肠球菌的应用多用作畜禽、水产饲料添加剂和改良水质的微生态制剂，菌种主要集中在粪肠球菌和屎肠球菌。
[0009]目前，国外已有此类产品进入到我国市场，如瑞士的粪链球菌微胶囊“赐美健”、荷兰的“百福菌”等，但是价格很高，难以大规模使用。国内市场上由于存在菌种的筛选、活菌数、菌种失活、杂菌含量的多少、使用条件等问题而导致益生肠球菌制剂活性降低，出现使用效果的重复性和稳定性较差等。目前国内对粪肠球菌的研究开发多集中在提高发酵液或产品中的活菌数，以及包埋技术的突破上，如新菌种的筛选、高浓度发酵工艺提升、微胶囊化包被工业化途径，却很少关注如何提高菌体活力。
[0010]申请号为200910232711.0的专利公布了一株粪肠球菌及其应用，是为了获得高浓度酪胺液；申请号为201110268516.0的专利提供了一种粪肠球菌的高浓度富集方法。关于活菌增殖方面的研究已有不少，如李丹丹(2008)牛蒡菊糖的制备、对双歧杆菌的增殖及应用研究，潘宝海等(2012) 3种植物多糖与枯草芽孢杆菌协同作用的研究等，但是还没有关于粪肠球菌增效方面的专利或文献报道。
[0011]本发明涉及一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，具体来讲，我们对粪肠球菌进行了菌种复配，并添加了菌种繁殖促进剂。该复配方法有效增强肠球菌制剂的菌活力和效果稳定性。
[0012]本发明涉及一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，具体来讲，表现在养殖水体改良方面，将其成品施用在水产养殖水体中，可有效分解水中残饵、粪便等有机污染物，减少池塘淤泥沉积，降低水中氨态氨、亚硝酸盐等，明显改善了养殖水体环境，减少水体污染。
【发明内容】
[0013]本发明的目的在于提供了一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，较为独特的是，遵循了菌种复配的多元化原则，利用多种功能互补的有益菌种，进行科学组合，形成高效的粪肠球菌复合菌剂。更为独特的是本发明添加了活菌繁殖促进剂，保证了该粪肠球菌制剂的高效、稳定。解决了目前市场上的粪肠球菌制剂存在活菌存活率低，产品性状不稳定，使用效果不理想等问题。
[0014]为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现:一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，含多种功能不同的有益菌种和活菌繁殖促进剂。所述各有益菌种均为市售产品，来源易得。具体来说，一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，其复配方法如下:
多功能有益菌组合包括粪肠球菌，屎肠球菌，嗜酸链球菌、酿酒酵母菌等四个菌群，按照1-10份:1-8份:1-8份:1飞份的重量份比例混合制成。活菌繁殖促进剂包括乳糖、低聚果糖、壳聚糖、酵母粉、叶酸、柠檬酸等，按0.1-2.5份:0.1-2.5份:0.1-2.5份:0.1-2.5份:
0.1-2.5份:0.1-2.5的重量份比例混合制成。将上述复合菌粉与活菌繁殖促进剂充分混合后，低温真空冷冻干燥制成粉状产品。
[0015]优选的范围及最佳值为:
I优选范围I最佳值
粪肠球菌 4-10 10_
g肠球菌 b-8 8
_链球菌 W 6 ~
11酒酵母菌|2-6 |3 —
【权利要求】
1.一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，其特征在于:复合微生物菌剂和活菌繁殖促进剂按重量份数比I飞:0.5~2配伍；其优选范围为3~5：1~2 ;其最佳值为5:1.6。
2.根据权利要求书I所述的一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，其特征在于，复合微生物各菌种按重量份数计各组分为:粪肠球菌1-10份，屎肠球菌1-8份，嗜酸链球菌1-8份，酿酒酵母菌1-6份；其优选范围为粪肠球菌4-10份，屎肠球菌2-8份，嗜酸链球菌2-8份，酿酒酵母菌2-6份；其最佳值为粪肠球菌10份，屎肠球菌8份，嗜酸链球菌6份，酿酒酵母菌3份。
3.根据权利要求书I所述的一种粪肠球菌的复配增效方法及其应用，其特征在于，活菌繁殖促进剂按重量份数计各组分为:乳糖0.1-2.5份，低聚果糖0.1-2.5份，壳聚糖0.1-2.5份，酵母粉0.1-2.5份，叶酸0.1-2.5份，柠檬酸0.1_2.5份；其优选范围乳糖0.5-2.5份，低聚果糖0.5-2.5份，壳聚糖0.5-2.5份，酵母粉0.5-2.5份，叶酸0.5-2.5份，柠檬酸0.5-2.5份；最佳值为乳糖1.4份，低聚果糖1.2份，壳聚糖0.8份，酵母粉1.2份，叶酸0.8份，柠檬酸1.5份。
4.如权利要求书1-4，任一一项所述粉末制剂的制备方法，其特征在于:将原料及辅料过40目筛，以25-40°C低温干燥，配料充分混匀，低温真空冷冻干燥后按剂量无菌包装制成。
5.如权利要求书1-4所得复合粪肠球菌菌剂，其特征在于，将所述复合粪肠球菌菌剂加入到10-20倍各类养殖水体中，活化2-4小时，直接泼洒。
【文档编号】C12N1/18GK103667140SQ201310668157
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2013年12月11日 优先权日:2013年12月11日
【发明者】荣克明, 张学振, 冯宪斌 申请人:武汉市天辰生物科技有限公司