生产3-乙酰氨基-4-羟基苯甲酸的方法
【专利摘要】本发明提供一种通过使用微生物的工艺便捷有效地生产3-乙酰氨基-4-羟基苯甲酸型化合物的方法，所述化合物是稳定的化合物。具体地，本发明提供一种具有生产3-乙酰氨基-4-羟基苯甲酸能力的微生物，其经过修饰以增加自磷酸二羟基丙酮和天冬氨酸半醛形成3-氨基-4-羟基苯甲酸的活性，其中所述微生物经过修饰以增加N-羟基芳基胺-O-乙酰转移酶(NHoA)活性，以及提供一种使用该微生物生产3-乙酰氨基-4-羟基苯甲酸型化合物的方法。
【专利说明】生产3-乙醜氨基-4-超基苯甲酸的方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种生产3-己醜氨基-4-轻基苯甲酸等的方法。
【背景技术】
[0002] 氨基轻基苯甲酸型化合物可用作染料、农药、药物和其他合成有机产品中间体，W 及用作具有高性能、耐热的聚合物聚苯并嗯哇单体。3-氨基-4-轻基苯甲酸（3, 4-AHBA)是 用磯酸二轻丙丽值HAP)和天冬氨酸半酵（ASA)作为底物，在GriI和GriH作用下通过两步 反应而生物合成的，其中GriI是催化在具有氨基基团的C4化合物与C3或C4化合物之间 发生碳-碳结合反应的酶，GriH是在脱駿的情况下催化C7化合物环化或C8化合物环化的 酶。
[0003][化学物1]
【权利要求】
1. 一种具有生产3-氨基-4-羟基苯甲酸能力的微生物，其经过修饰以增加自磷酸二羟 基丙酮和天冬氨酸半醛形成3-氨基-4-羟基苯甲酸的活性，其中所述微生物经过修饰以增 加N-羟基芳基胺-0-乙酰转移酶（NhoA)活性。
2. 根据权利要求1的微生物，其中所述N-羟基芳基胺-0-乙酰转移酶活性的增加是通 过用含有编码NhoA的DNA的重组载体转化赋予的。
3. 根据权利要求2的微生物，其中所述NhoA是以下（I)至（III)中任一种的蛋白： (I) 包含SEQIDN0:2氨基酸序列的蛋白； (II) 包含在SEQIDN0:2氨基酸序列上具有一个或几个氨基酸取代、缺失、插入或添加 的氨基酸序列，并具有N-羟基芳基胺-0-乙酰转移酶活性的蛋白；或 (III) 包含与SEQIDN0:2氨基酸序列具有70%或更多同一性的氨基酸序列，并具有 N-羟基芳基胺-0-乙酰转移酶活性的蛋白。
4. 根据权利要求2的微生物，其中所述编码NhoA的DNA是以下（i)至（iii)中任一种 的DNA: ⑴包含SEQIDN0:3核苷酸序列的DNA; (ii) 在严格条件下与同SEQIDN0:3核苷酸序列互补的核苷酸序列杂交并编码具有 N-羟基芳基胺-0-乙酰转移酶活性的蛋白的DNA;或 (iii) 包含与SEQIDN0:3核苷酸序列具有70%或更多同一性的核苷酸序列并编码具 有N-羟基芳基胺-0-乙酰转移酶活性的蛋白的DNA。
5. 根据权利要求1-4中任一项的微生物，其中所述微生物属于埃希氏菌属 (Escherichia)，泛菌属（Pantoea)或棒杆菌属（Corynebacterium)。
6. 根据权利要求1-5中任一项的微生物，其中所述微生物属于大肠杆菌（Escherichia coli)，菠萝泛菌（Pantoeaananatis)或谷氨酸棒杆菌（Corynebacteriumglutamicum)。
7. 根据权利要求1-6中任一项的微生物，其中所述生产3-氨基-4-羟基苯甲酸的能力 是通过用包含编码以下蛋白的DNA的重组载体转化赋予的，所述蛋白具有自磷酸二羟基丙 酮和天冬氨酸半醛形成3-氨基-4-羟基苯甲酸的活性。
8. 根据权利要求7的微生物，其中所述具有形成3-氨基-4-羟基苯甲酸活性的蛋白是 Gril和GriH。
9. 根据权利要求8的微生物，其中所述Gril是以下（A)至（C)中任一种的蛋白，且所 述GriH是以下⑶至（F)中任一种的蛋白： (A) 包含SEQIDN0:9或SEQIDN0:18氨基酸序列的蛋白； (B) 包含在上述（A)所示氨基酸序列上具有一个或几个氨基酸取代、缺失、插入或添加 的氨基酸序列并具有醛缩酶活性的蛋白； (C) 包含与上述（A)所示氨基酸序列具有70%或更多同一性的氨基酸序列并具有醛缩 酶活性的蛋白； (D) 包含SEQIDN0:11或SEQIDN0:20氨基酸序列的蛋白； (E) 包含在上述（D)所示氨基酸序列上具有一个或几个氨基酸取代、缺失、插入或添加 的氨基酸序列并具有3-氨基-4-羟基苯甲酸合酶活性的蛋白；和 (F) 包含与上述（D)所示氨基酸序列具有70%或更多同一性的氨基酸序列并具有 3_氨基-4-羟基苯甲酸合酶活性的蛋白。
10. 根据权利要求7的微生物，其中编码具有形成3-氨基-4-羟基苯甲酸活性的蛋白 的DNA是以下（a)至（c)中任一种的DNA，且所述griH基因是以下（d)至（f)中任一种的 DNA： (a) 包含SEQIDNO: 10或SEQIDNO: 19核苷酸序列的DNA; (b) 在严格条件下与同上述（a)所示核苷酸序列互补的核苷酸序列杂交并编码具有醛 缩酶活性的蛋白的DNA; (c) 与上述（a)所示的核苷酸序列具有70%或更多同一性并编码具有醛缩酶活性的蛋 白的DNA; ⑷包含SEQIDNO: 12或SEQIDN0:21核苷酸序列的DNA; (e) 在严格条件下与同上述（d)所示核苷酸序列互补的核苷酸序列杂交并编码具有 3_氨基-4-羟基苯甲酸合酶活性的蛋白的DNA;和 (f) 与上述（d)所示的核苷酸序列具有70%或更多同一性并编码具有3-氨基-4-羟 基苯甲酸合酶活性的蛋白的DNA。
11. 一种生产3-乙酰氨基-4-羟基苯甲酸型化合物的方法，包括培养根据权利要求 1-10中任一项的微生物以形成所述3-乙酰氨基-4-羟基苯甲酸型化合物。
12. -种生产3-氨基-4-羟基苯甲酸型化合物的方法，包括以下⑴和（2): (1) 通过根据权利要求11的方法形成3-乙酰氨基-4-羟基苯甲酸型化合物；并 (2) 使所述3-乙酰氨基-4-羟基苯甲酸型化合物脱乙酰化以形成3-氨基-4-羟基苯 甲酸型化合物。
13. -种生产含有3-氨基-4-羟基苯甲酸型化合物作为组分的聚合物的方法，包含以 下（1'）和（2'） ： (1'）通过根据权利要求12的方法形成3-氨基-4-羟基苯甲酸型化合物；并 (2'）聚合3-氨基-4-羟基苯甲酸型化合物以获得含有3-氨基-4-羟基苯甲酸型化 合物作为组分的聚合物。
14. 根据权利要求13的方法，其中所述聚合物是聚苯并口恶唑聚合物。
【文档编号】C12N1/15GK104379742SQ201380027849
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2013年3月5日 优先权日:2012年5月29日
【发明者】正瑞文, 田岛义教, 横山敬一 申请人:味之素株式会社