体外受精培养筛及体外受精方法
【专利摘要】本发明公开了一种体外受精培养筛，包括筛体，筛体边缘设有上侧边框和下侧边框，筛体上设有一能使吸管通过的小孔及孔道，孔道位于筛体上侧，筛体上遍布孔径小于卵子直径且能使正常精子自由通过的微孔。采用本发明的体外受精培养筛进行体外受精的方法为：(1)将体外受精培养筛放置入体外培养四孔皿的孔中，将培养液添加至体外培养四孔皿中；(2)将通过取卵术获得的卵冠丘复合体放置在培养筛上；(3)取精液，液化后采用密度梯度离心法分离精子，将精子通过小孔加入到体外培养四孔皿的底部，进行体外受精。本发明的体外受精培养筛，可达到优选精子受精的目的，且能减少凋亡细胞对受精卵的不良影响，有利于受精卵和胚胎的发育。
【专利说明】体外受精培养筛及体外受精方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种体外受精培养筛，是一种生殖医学试验中使用的设备及方法。
【背景技术】
[0002]体外受精(In vitro Fertilizat1n, IVF)技术是应用特殊方法获取精子和成熟卵子，在体外完成受精过程的技术。受精卵在体外分裂成为胚胎后再将胚胎植入女方子宫内，使胚胎成长为胎儿。这种体外受精一胚胎移植技术的诞生打破了传统的女性输卵管阻塞生育无望的定论，使无数家庭享受到生儿育女的快乐。
[0003]获取精子后精子需要经体外处理以筛选优质精子，经典的做法是应用密度梯度离心法分离精子，有的实验室还要经过一次上游过程，以获得优质精子，处理后前向运动精子能达到90?95%，但仍有部分质量差的精子混于其中，因此，有些实验室会采用二次上游的方法继续筛选，但如此做费事费力，还会因增加离心次数进而造成对精子的损伤。
[0004]体外受精通常是卵泡成熟后利用取卵术获取卵冠丘复合体放入盛有培养液的培养皿，适时加入处理后的精子。最常用的培养皿是四孔培养皿。这种培养皿没有特殊设计，精子和卵冠丘复合体简单的放在一起完成受精过程。随着受精过程的进行，卵冠丘复合体颗粒细胞不断有细胞凋亡进而脱离复合体，随培养时间的延长，也会有一些精子死去，但由于培养皿过于简单的结构致使凋亡细胞和死精子积聚在受精卵周围，这可能会影响受精卵和胚胎发育。
【发明内容】
[0005]针对上述现有技术，为解决体外受精过程中死精子及卵子周围的颗粒细胞凋亡后积聚在卵子周围有可能对受精卵发育造成不良影响的问题，本发明提供了一种体外受精培养筛及体外受精方法，利用本发明的体外受精培养筛进行体外受精，可使受精过程中产生的死精子和凋亡颗粒细胞远离受精卵，从而以利于受精卵发育。
[0006]本发明是通过以下技术方案实现的:
[0007]一种体外受精培养筛，包括筛体，筛体边缘设有上侧边框和下侧边框，筛体上设有一能使吸管通过的小孔及孔道，孔道位于筛体上侧，筛体上分布多个孔径小于卵子直径(卵子直径约100 μ m)且能使正常精子自由通过的微孔。
[0008]优选的,所述小孔设在筛体边缘处或靠近边缘处。
[0009]优选的，所述筛体呈圆形，直径为200mm,厚度0.2mm,上侧边框高0.5mm,下侧边框高2mm，小孔直径2mm，孔道高0.5mm,微孔直径10 μ m(大约为3?4倍精子头部宽度)。
[0010]优选的，所述体外受精培养筛的材质为聚苯乙烯。
[0011]本发明的体外受精培养筛，使用时与经典的体外培养四孔皿结合使用(放入体外培养四孔皿的孔内，由于下侧边框的存在，可使筛体距离孔底部一定的距离，约为孔深的1/3)，采用本发明的体外受精培养筛进行体外受精的方法为:(I)将本发明的体外受精培养筛放置入体外培养四孔皿的孔中，然后通过小孔将培养液添加至体外培养四孔皿中，培养液液面高出筛体2_ ;在CO2培养箱内平衡过夜；(2)将通过取卵术获得的卵冠丘复合体(卵子)放置在培养筛上；(3)取精液，液化后采用密度梯度离心法分离精子，分离的精子用培养液洗涤一次后，利用吸管将精子通过小孔加入到体外培养四孔皿的底部，精子会通过微孔上游到培养筛上层，与卵子相遇，进行体外受精。在受精过程中，活动力好的精子会通过微孔较早上游到筛体上方与卵子结合，达到优选精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘复合体的颗粒细胞也会脱离受精卵进而沉入体外培养四孔皿底部，从而减少了凋亡细胞对受精卵的不良影响，有利于受精卵和胚胎的发育。与经典体外受精技术(精子、卵子同时放入四孔培养皿中)相比，本发明的体外受精方法将卵子和精子分别放置；卵子放置在筛体上，而精子放在筛体底部，精子需经过上游至筛体上与卵子结合，通过上游法筛选高质量精子；同时受精过程中会产生凋亡颗粒细胞和死亡精子，这些细胞会通过微孔沉入四孔培养皿底部，以免凋亡细胞对受精卵发育造成的不良影响。
[0012]本发明的体外受精培养筛，使用时与经典的体外培养四孔皿结合使用，靠近培养筛边缘处有一能使吸管通过小孔，小孔上设有孔道以高出培养筛平面，以防卵子落入小孔。筛体上遍布孔径小于卵子且能使正常精子自由通过的微孔，体外受精时，加入培养液后，洗涤过的精子用吸管通过小孔加到四孔皿的底部，卵冠丘复合体(包含卵子)放在培养筛上，活动力好的精子会较早上游到培养筛上与卵子结合，达到优选精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘复合体的颗粒细胞也会脱离受精卵而沉入四孔皿底部，从而减少了凋亡细胞对受精卵的不良影响，有利于受精卵和胚胎的发育。
【专利附图】
【附图说明】
[0013]图1:本发明的体外受精培养筛的结构示意图。
[0014]图2:本发明的体外受精培养筛的俯视图。
[0015]图3:图2中A处结构放大示意图。
[0016]图4:常规的体外培养四孔皿示意简图(俯视图)。
[0017]图5:常规的体外培养四孔皿的照片。
[0018]其中，1、筛体；2、上侧边框；3、下侧边框；4、小孔；5、孔道；6、微孔。
【具体实施方式】
[0019]下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
[0020]一种体外受精培养筛，包括筛体，如图1、图2所示，筛体边缘设有上侧边框和下侧边框，筛体边缘处设有一能使吸管通过的小孔及孔道，孔道位于筛体上侧，筛体上分布多个孔径小于卵子直径(卵子直径约100 μ m)且能使正常精子自由通过的微孔，如图3所示。
[0021]所述筛体呈圆形，直径为200mm,厚度0.2mm,上侧边框高0.5mm,下侧边框高2mm,小孔直径2mm，孔道高0.5mm,微孔直径10 μ m(大约为3?4倍精子头部宽度)。
[0022]所述体外受精培养筛的材质为聚苯乙烯。
[0023]本发明的体外受精培养筛，使用时与经典的体外培养四孔皿(如图4、图5所示)结合使用(放入体外培养四孔皿的孔内，由于下侧边框的存在，可使筛体距离孔底部一定的距离，约为孔深的1/3)，采用本发明的体外受精培养筛进行体外受精的方法为:(I)将本发明的体外受精培养筛放置入体外培养四孔皿的孔中，然后通过小孔将培养液添加至体外培养四孔皿中，培养液液面高出筛体2mm ;在CO2培养箱内平衡过夜；(2)将通过取卵术获得的卵冠丘复合体(卵子)放置在培养筛上；(3)取精液，液化后采用密度梯度离心法分离精子，分离的精子用培养液洗涤一次后，利用吸管将精子通过小孔加入到体外培养四孔皿的底部，精子会通过微孔上游到培养筛上层，与卵子相遇，进行体外受精。在受精过程中，活动力好的精子会通过微孔较早上游到筛体上方与卵子结合，达到优选精子受精的目的；而大部分凋亡的卵冠丘复合体的颗粒细胞也会脱离受精卵进而沉入体外培养四孔皿底部，从而减少了凋亡细胞对受精卵的不良影响，有利于受精卵和胚胎的发育。与经典体外受精技术(精子、卵子同时放入四孔培养皿中)相比，本发明的体外受精方法将卵子和精子分别放置；卵子放置在筛体上，而精子放在筛体底部，精子需经过上游至筛体上与卵子结合，通过上游法筛选高质量精子；同时受精过程中会产生凋亡颗粒细胞和死亡精子，这些细胞会通过微孔沉入四孔培养皿底部，以免凋亡细胞对受精卵发育造成的不良影响。
【权利要求】
1.一种体外受精培养筛，其特征在于:包括筛体，筛体边缘设有上侧边框和下侧边框，筛体上设有一能使吸管通过的小孔及孔道，孔道位于筛体上侧，筛体上分布多个孔径小于卵子直径且能使正常精子自由通过的微孔。
2.根据权利要求1所述的体外受精培养筛，其特征在于:所述小孔设在筛体边缘处或靠近边缘处。
3.根据权利要求1所述的体外受精培养筛，其特征在于:所述筛体呈圆形，直径为200mm,厚度0.2mm,上侧边框高0.5mm,下侧边框高2mm,小孔直径2mm,孔道高0.5mm,微孔直径 10 μ m。
4.根据权利要求1所述的体外受精培养筛，其特征在于:所述体外受精培养筛的材质为聚苯乙烯。
5.利用权利要求1?4中任一项所述的体外受精培养筛进行体外受精的方法，其特征在于:包括以下步骤:(I)将体外受精培养筛放置入体外培养四孔皿的孔中，然后通过小孔将培养液添加至体外培养四孔皿中，培养液液面高出筛体2mm ;在CO2培养箱内平衡过夜；(2)将卵冠丘复合体放置在筛体上；(3)取精液，液化后采用密度梯度离心法分离精子，分离的精子用培养液洗涤一次后，利用吸管将精子通过小孔加入到体外培养四孔皿的底部，精子会通过微孔上游到培养筛上层，与卵子相遇，进行体外受精。
【文档编号】C12M1/00GK104450496SQ201410717130
【公开日】2015年3月25日 申请日期:2014年12月2日 优先权日:2014年12月2日
【发明者】张丽红, 盖凌, 张伟, 王时灿, 孙林, 丁海清, 刘蓓, 王琳琳, 蒋宝宏, 吕雪梅, 李青 申请人:张丽红