一种抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品及其制备方法与流程

本发明提供一种抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品，属于保健食品技术领域。

背景技术：

每年新发癌症病例约380万，死亡人数约229万，总体癌症发病率平均每年上升3.9％左右，发病率及死亡率呈现逐年上升趋势。癌症已成为我国四大慢性病之一，严重影响我国人民健康。

针对癌症的治疗，我国提倡多学科、规范化综合治疗。在肿瘤的综合治疗中，中医药不仅辅助了西医手术、放化疗的治疗，还能独当一面地辩证施治不同阶段的不同癌种。

目前已有一些虫草制品、富硒制品被用于防癌抗癌的辅助治疗中，但其疗效尚有待进一步提高。

技术实现要素：

针对现有技术的上述问题，本发明提供一种具有抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品，具有有双重抗癌功效，既能抑制肿瘤细胞增殖，还可提高机体免疫力，是肿瘤病人在手术、放化疗和康复期间的营养伴侣。

为实现上述目的，本发明包括如下技术方案：

一种抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品，其是由以下重量份的原料制成：蛹虫草粉13-25份、松花粉6-15份、富硒麦芽粉5-15份、裸藻粉3-12份、果蔬杂粮粉20-70份，甜菊糖苷0-5份。

如上所述的抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品，优选地，由如下重量份的原料制成：蛹虫草粉17-20份、松花粉10-12份、富硒麦芽粉9-11份、裸藻粉6-8份，果蔬杂粮粉50-60份，甜菊糖苷0-2份。

如上所述的抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品，优选地，所述蛹虫草粉采用以下方法制备：人工培养的蛹虫草子实体鲜品，经干燥、粉碎、过筛工艺制得，虫草素含量1wt％。

如上所述的抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品，优选地，所述松花粉采用以下方法制备：人工采集的松花粉过120目筛，气流粉碎破壁，粗多糖含量1.5wt％。优选地，破壁机频率为55hz～60hz，气源压力0.7～1.0mpa。

如上所述的抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品，优选地，所述富硒麦芽粉采用富硒麦芽苗为原料，经清洗、干燥、粉碎工艺制得，硒含量30-50mg/kg。

如上所述的抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品，优选地，所述裸藻粉是裸藻的种子经过培养浓缩干燥过筛制得，β-葡聚糖含量50wt％。

如上所述的抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品，优选地，所述果蔬杂粮粉选自橙粉、南瓜粉、胡萝卜粉、麦芽粉中的一种或多种制成，果蔬粉为对应果蔬的水提物。

另一方面，本发明提供如上所述的抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品的制备方法，该方法包括如下步骤：称取所述原料混合均匀，灌装即得。

又一方面，本发明提供如上所述的抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品作为抑制肿瘤、提高免疫力的食疗产品中的应用，口服剂量为5～10g/天。

如上所述的应用，优选地，所述肿瘤为人肺癌细胞a549、人乳腺癌细胞mcf-7或人慢性髓原白血病细胞k562。

本发明甄选优质原料，源自天然，高于天然，提供一种具有肿瘤细胞抑制作用的保健食品及其制备方法，功效可靠、安全、口感好。

中医认为，虫草入肺、肾二经，既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是唯一的一种能同时平衡、调节阴阳的中药。《中华药海》记载：蛹虫草，别名北冬虫夏草，性味甘、平，入肺、肾二经。本品既补肾阳，又益肺阴，保肺益肾，秘精益气，对肺肾不足、久咳虚喘、劳嗽痰血者有较好疗效。《全国中草药汇编》记载：蛹虫草的子实体及虫体也可代替冬虫夏草入药。

松花粉是中国医学古籍中收载的药食兼用品种。李时珍在《本草纲目》中记载：松花，甘、温、无毒；润心肺，益气，除风止血。松花粉含有糖类、脂类、蛋白质及氨基酸、核酸、维生素、矿物质等营养成分达200余种，包括人体所必需的8种氨基酸、14种维生素和24种微量元素，被誉为“微型营养库”，具有调节免疫，抗疲劳，改善胃肠功能，调血脂和保护肝脏等多种功能。

硒是人体必需的微量元素，在人体中不能合成，又是一种易排泄的元素，随着年龄的增长，体内的存硒量逐渐下降。研究发现，硒与肿瘤的发生、发展有密切的关系。硒能协助清除体内自由基，修复膜分子损伤，防止机体细胞发生遗传变异或癌变；硒对dna修复系统有激活作用，能对抗致癌剂对dna的损伤；硒能够诱导肿瘤细胞凋亡。

裸藻中含有20％以上的蛋白质、必需维生素、矿物质、氨基酸、不饱和脂肪酸等，是天然全面的营养物质，富含β(1，3)葡聚糖，可以激发人体的非特异性免疫。

本发明保健食品中将各活性成分按特定比例进行复配，其中：蛹虫草中的虫草素、虫草多糖、腺苷，具有抗肿瘤作用；硒是强抗氧化剂，能协助清除体内自由基，防止细胞遗传变异；裸藻和松花粉复配，补充天然全面的营养物质，可以激发人体自身免疫系统。

本发明的有益效果在于：本发明甄选优质原料，组成一种抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品，各组分相互配合，协同增效，对癌细胞的抑制作用显著高于单一组分。实验结果表明，该保健食品对人肺癌细胞a549、人乳腺癌细胞mcf-7和人慢性髓原白血病细胞k562具有抑制功效，其功效可靠、安全、口感好。

附图说明

图1为样品1和对照组对a549细胞处理48h后的形态照片。

图2为样品1和对照组对mcf-7细胞处理48h后的形态照片。

图3为样品1和对照组对k562细胞处理48h后的形态照片。

具体实施方式

以下实施例中部分原料的来源：

蛹虫草粉购自上海国宝企业发展中心，虫草素含量1％，产品采用以下方法制备：人工培养的蛹虫草子实体鲜品，经干燥、粉碎、过筛工艺制得。

松花粉采用以下方法制备：人工采集的松花粉过120目筛，气流粉碎破壁，破壁机频率为55hz～60hz，气源压力0.7～1.0mpa，粗多糖含量1.5％。

富硒麦芽粉购自天津天马康必硒科技有限公司，硒含量30mg/kg，产品采用以下方法制备：富硒麦芽苗为原料，经清洗、干燥、粉碎工艺制得。

裸藻粉购自美国建明公司(kemin)，β-葡聚糖含量50％，产品采用以下方法制备：裸藻的种子经过培养浓缩干燥过筛制得。

实施例1抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品(一)

1.配方

蛹虫草粉15份、松花粉13份、富硒麦芽粉13份、裸藻粉8份、南瓜粉12份、胡萝卜粉12份、橙粉12份、麦芽粉12份、甜菊糖苷1份。

2.制备方法

将上述原料混合均匀，灌装获得样品1。

实施例2抑制肿瘤、提高免疫力的保健食品(二)

1.配方

蛹虫草粉20份、松花粉13份、富硒麦芽粉13份、裸藻粉8份、南瓜粉12份、胡萝卜粉12份、橙粉12份、麦芽粉12份、甜菊糖苷1份。

2.制备方法

将上述原料混合均匀，灌装获得样品2。

对比例1

1.配方

蛹虫草粉49份、南瓜粉12份、胡萝卜粉12份、橙粉12份、麦芽粉12份、甜菊糖苷1份。

2.制备方法

将上述原料混合均匀，灌装获得对比样品1。

对比例2

1.配方

松花粉49份、南瓜粉12份、胡萝卜粉12份、橙粉12份、麦芽粉12份、甜菊糖苷1份。

2.制备方法

将上述原料混合均匀，灌装获得对比样品2。

对比例3

1.配方

富硒麦芽粉49份、南瓜粉12份、胡萝卜粉12份、橙粉12份、麦芽粉12份、甜菊糖苷1份。

2.制备方法

将上述原料混合均匀，灌装获得对比样品3。

对比例4

1.配方

裸藻粉49份、南瓜粉12份、胡萝卜粉12份、橙粉12份、麦芽粉12份、甜菊糖苷1份。

2.制备方法

将上述原料混合均匀，灌装获得对比样品4。

实验例1

下面采用实施例和比较例中制备的样品1～2、比较样品1～4作用于人肺癌细胞a549、人乳腺癌细胞mcf-7和人慢性髓原白血病细胞k562，以检验这些样品对三种肿瘤细胞的抑制作用。

1.主要材料与仪器

人肺癌细胞a549、人乳腺癌细胞mcf-7和人慢性髓原白血病细胞k562购自南京科佰生物科技有限公司。

dmem无血清细胞培养基购自gibco公司；胎牛血清(fbs)、100×青链霉素混合液均购自hyclone公司；胰蛋白酶购自roche公司；dmso购自solarbio公司；cck-8购自donjindo公司；pbs(磷酸盐缓冲液)购自bbilifescience公司；二氧化碳培养箱购自panasonic公司；倒置光学显微镜、荧光显微镜均购自日本尼康公司；台式冷冻离心机购自hitachi公司；statfax-2100型酶联免疫检测仪购自bio-rad公司；t25细胞培养瓶购自fisher公司；hh-4型数显恒温水浴锅购自thermo公司；yds-20型液氮生物容器购自成都金凤液氮容器有限公司；超净工作台(sw-cj-2d型)购自nuaire公司。

2.实验方法

2.1肿瘤细胞抑制实验

选取对数生长期的a549、mcf-7和k562细胞，以1×10⁵个/ml接种于96孔板中，每孔100μldmem培养液。待细胞培养12h后，加入样品，100μl(200μg/ml)，样品设置6个平行；阴性对照组为细胞加入等体积的培养液；空白组仅有培养液；置于37℃，5％co2及饱和湿度的培养箱中孵育12h、24h、48h。培养结束后，小心吸出原培养液，每孔加入10μlcck-8溶液，孵育1-4h后使用酶标仪测定450nm波长下的吸光值。按如下公式计算样品对细胞的抑制率：

抑制率(％)＝(实验组od值-阴性组od值)/(阴性组od值-空白组od值)×100％

2.2肿瘤细胞形态观察

选取对数生长期的a549、mcf-7和k562细胞，以1×10⁵个/ml接种于12孔板中，每孔1mldmem培养液。待细胞培养12h后，加入样品1，每孔1ml(200μg/ml)；对照组为细胞加入等体积的培养液；置于37℃，5％co2及饱和湿度的培养箱中孵育48h。培养结束后，小心吸出原培养液，用pbs轻轻的冲洗细胞2次后，加入一定体积的台盼蓝染色后荧光显微镜观察。对于k562悬浮细胞，直接吸取一定体积的培养液，1000rpm，离心5分钟，用pbs冲洗一次，离心后加入一定体积的培养基轻轻吹打混匀，加入等体积的台盼蓝进行染色，荧光显微镜观察。

2.3数据分析

数据采用prism8.0进行统计分析。

3.实验结果

3.1样品对人肺癌细胞a549生长的影响

a549细胞经样品作用12、24、48h后，表现出不同的耐受性。结果如表1所示：

其中，样品1对a549细胞处理12h，样品促进了a549的细胞增殖，达到19.4％。a549细胞经处理24h后，样品1抑制了a549细胞的增殖，抑制率达到22.3％。处理48h后，样品1对a549细胞增殖的抑制率达到了48.6％。

结果可见，样品1和样品2对a549细胞的抑制作用随着时间的不同而表现出不同的效果，处理12h后有一定的促进细胞增殖的作用，可能是虫草多糖对细胞具有一定的保护作用；随着处理时间的增加，虫草素开始发挥作用对细胞生长产生抑制作用。

表1

3.2样品对人乳腺癌细胞mcf-7生长的影响

mcf-7细胞经样品作用12、24、48h后，表现出不同的耐受性和抑制作用。结果如表2所示：

其中，样品1和样品2对mcf-7细胞增殖表现出了先促进后抑制的情况，原因可能与a549细胞相同。48h时样品1的抑制率最高，达到了13.4％。

表2

3.3样品对慢性髓原白血病细胞k562生长的影响

k562细胞株经样品处理12、24、48h后，表现出不同的耐受性且抑制作用呈现出时间依赖效应。结果如表3所示：

其中，样品1的抑制效果最佳，在对k562细胞处理12h后，样品1的抑制率为26.8％。当k562细胞处理24h后，抑制率达到66.0％。当k562细胞处理48h后，样品1处理的细胞抑制率继续提高，达到了80.5％。

表3

3.4样品处理不同细胞后的形态观察

图1为样品1和对照组对a549细胞处理48h后的形态照片，样品对a549细胞处理48h，染色后采用荧光显微镜进行观察。图中可见，样品1组出现一些碎片即为细胞破碎后的残体，样品1处理的细胞大多数都破裂了，对照组细胞完好无损。

图2为样品1和对照组对mcf-7细胞处理48h后的形态照片，样品对mcf-7处理48h，荧光显微镜结果显示，对照组细胞大多数完好无损，样品1处理组细胞膜破裂，内容物流出。

图3为样品1和对照组对k562细胞处理48h后的形态照片，样品1对k562处理48h，处理组细胞大部分均已破裂，且无法辨别出细胞膜的形态。

4.结论

从体外实验结果来看，样品对a549、mcf-7和k562肿瘤细胞的最佳抑制率分别为48.6％、13.4％和80.5％。在一定的浓度范围内，样品1和样品2对肿瘤细胞的生长抑制作用表现出时间依赖效应。样品对肿瘤细胞的生长抑制作用具有特异性，可能的原因是一方面由于细胞形态结构不同所造成，另一方面可能是三种癌细胞的细胞信号通路调控不同所致。