0的协同抑制。图中的各对柱中的 第一条柱表示仅用加热的CTC获得的结果，而各对中的第二条柱表示用指定稀释度的加热 的CTC和0. 2yMLycomato的组合获得的结果。示出的结果为三次单独实验的平均值，且 每次实验重复二次。
[0104] 最大的协同效应是通过1:4000的CTC稀释度与0. 2yMLycomato的组合获得的， 其引起28. 1 土 6%抑制。仅加热的CTC(1:4000)引起4. 9 土 2.1%抑制并且0.2yMlycomato 引起可忽略的抑制。由此该组合的效应比各成分的加和效应高5. 7倍。 叶黄素和加热的CTC的组合对N0生产的协同抑制。
[0105] 如在图7中所示的，在1:1000至1:7000稀释度范围内的加热的CTC与1yM和 2yM两者的叶黄素的组合引起对经LPS处理的巨噬细胞生产N0的协同抑制。所示的结果 为三次单独实验的平均值。
[0106] 会注意到，最大的协同效应是通过叶黄素(在检验的两种浓度下）与在1:2000至 1:5000稀释度范围内的加热的CTC一起的组合获得的。
[0107] 胡萝卜素与加热的CTC的组合对N0生产的协同抑制 如图8所示，在1:1000至1:7000稀释度范围内的加热的CTC与0.5yM和1yM两 者的胡萝卜素的组合引起对经LPS处理的巨噬细胞生产N0的协同抑制。示出的结果 为三次单独实验的平均值。
[0108] 会注意到，在0. 5yM0 -胡萝卜素的情况中，最大的协同效应是通过与在1:2000 至1:7000稀释度范围内的加热的CTC的组合获得的。
[0109] 这些结果明确表明，关于它们抑制炎症的能力，在加热的CTC和类胡萝卜素之间 存在协同的相互作用。
[0110] 实施例6 伸用经热处理的CTC和类胡萝卜素的协同组合抑制NO白细朐介素1-3的牛产使用角叉菜-诱发的爪炎症模型以调查经热处理的CTC和番茄油树脂（Lyc-0-Mato; LycoredLtd.，Israel)的组合对促炎细胞因子IL1-0的生产的影响。方法： 通过口服途径向实验室大鼠（单独地或一起)给药Lyc-0-Mato和经热处理的CTC(如上 文所述制备），每天一次，持续7天。双氯芬酸（在激发前两小时腹腔内给药）使用作为阳 性对照物。
[0111] 在第8天，将角叉菜溶液注射在大鼠的左爪内。在该注射后，由产生R0S和促炎细 胞因子的嗜中性粒细胞的流入介导的炎症在经处理的爪子中发展。使用标准ELISA试剂盒 测量促炎细胞因子-白细胞介素-10在发炎的组织内的分泌量。
[0112] 结果： 可从图9看到，3mg/kgLyc-0-Mato(番前油树脂）与5mg/kg加热的CTC一起的组合 引起IL-1P在发炎的组织内的分泌量的显著和统计学上有意义的下降。该下降的幅度与 由二氯芬酸阳性对照物引起的相似。
[0113] 实施例7 加热的CTC和加热的CTC和类胡萝卜素的组合对骨健康的积极作用成骨细胞和破骨细胞两者均参与骨重塑。本发明人已发现加热的CTC通过至少两种互 补机理改善骨健康： 1.减少破骨细胞的分化。
[0114] 2.刺激抗氧化剂应答元件（ARE/Nrf2)在成骨细胞内发信号。
[0115] 体外研究CTC对RANKL-介导的破骨细胞分化和活化的抑制效应。
[0116] 方法： 1.破骨细胞分化 用含有或不含指定稀释度的CTC(非加热的或加热的）的RANKL20ng/ml培养来自小 鼠单核细胞-巨噬细胞系RAW264. 7 -破骨细胞一前体谱系的细胞3天并染色用于TRAP 活性（破骨细胞分化的标记）。从在仅RANKL的存在下获得的活性计算百分比抑制。如在 图9中所表明的添加LycoMato(相当于1剛番茄红素）。数据为3次实验(各重复进行3 次）的代表。
[0117] 2.测量抗氧化剂应答元件（ARE/Nrf2)在成骨细胞内发信号 MC3T3-E1小鼠成骨细胞的培养物用于本研究。仅CTC(加热的和非加热的），或与番茄 红素（6, 14'）氧化产物一起加入细胞内并且测量ARE报道基因转录活性，根据在共同拥有 的TO2007/043046中所描述的方法。
[0118] 本研究的结果总结在图10-12中。
[0119] 如图10中所示，加热和非加热的CTC均引起对RANKL-介导的破骨细胞分化的剂 量相关的抑制，如通过TRAP所测得的。然而，加热CTC试样导致CTC在抑制破骨细胞分化 中的效力显著增加。
[0120] 图11呈现的结果显示由经热处理的CTC和番茄红素的组合引起破骨细胞分化的 抑制。对在图中所示的各种处理结果的比较表明番茄红素和经热处理的CTC之间的协同作 用。 图12呈现的结果显示通过用加热的CTC的处理刺激剂量相关的ARE在培养的MC3T3 成骨细胞内发信号。还可观察到非加热的CTC在这种模型中没有作用。
[0121] 虽然出于说明的目的已描述了本发明的具体实施方案，但应理解，在实践中技术 人员可在许多修改、改变和改编的情况下实施本发明，而不背离本发明的精神或超出权利 要求的范围。
【主权项】
1. 治疗组合物，所述治疗组合物包含经热处理的澄清番茄浓缩物（CTC)。2. 根据权利要求1的治疗组合物，其中总的游离氨基酸的浓度小于2%w/w。3. 根据权利要求1的治疗组合物，其中游离谷氨酰胺浓度小于0.l%w/w。4. 治疗组合物，所述治疗组合物包含经热处理的澄清番茄浓缩物（CTC)和一种或更多 种的类胡萝卜素的协同组合。5. 根据权利要求4的治疗组合物，其中总的游离氨基酸的浓度小于2%w/w。6. 根据权利要求4的治疗组合物，其中游离谷氨酰胺浓度小于0.l%w/w。7. 根据权利要求4-6中任一项的治疗组合物，其中所述一种或更多种的类胡萝卜素选 自番茄红素、八氢番茄红素、六氢番茄红素、(6-胡罗卜素和叶黄素，和/或它们的衍生物。8. 根据权利要求7的治疗组合物，其中所述类胡萝卜素为番茄红素或它的衍生物。9. 根据权利要求4-6中任一项的治疗组合物，其中所述一种或更多种的类胡萝卜素由 番茄油树脂提供。10. 根据权利要求4-9中任一项的治疗组合物，其中在所述组合物中的类胡萝卜素的 总浓度为至少〇. 1% (w/w)。11. 根据权利要求10的治疗组合物，其中番茄红素的浓度为至少〇. 1% (w/w)。12. 抑制或降低受试者中抗炎介质的生产的方法，所述方法包括向所述受试者给药根 据权利要求1至11中任一项的治疗组合物。13. 根据权利要求12的方法，其中所述抗炎介质选自NO、TNF-a和白细胞介素1。14. 治疗病理病症的方法，其中NO、TNF_a和/或白细胞介素1-0充当在有这类治疗 需要的哺乳动物受试者中的所述病症的调节剂或介质，其中所述方法包括向所述受试者给 药根据权利要求1至11中任一项的治疗组合物。15. 根据权利要求14的治疗方法，其中待治疗的病症为炎症。16. 根据权利要求14的治疗方法，其中待治疗的病症选自类风湿性关节炎、成人型呼 吸窘迫综合征（ARDS)、哮喘、鼻炎、特发性肺纤维化、腹膜炎、心血管炎症、心肌缺血、再灌注 损伤、动脉粥样硬化、脓毒症、创伤、II型糖尿病、视网膜病、银肩病、胃肠炎症、肝硬化、腹膜 炎和炎性肠病，以及神经变性疾病，包括阿尔茨海默氏病。17. 改善受试者骨健康的方法，所述方法包括向所述受试者给药根据权利要求1至11 中任一项的治疗组合物。18. 根据权利要求17的方法，其中骨健康的改善包括对骨再吸收的抑制。19. 根据权利要求17的方法，其中所述方法用于治疗选自以下的病症：骨质疏松、关节 炎、牙周病、多发性骨髓瘤和转移性癌。20. 根据权利要求12至19中任一项的方法，其中所述治疗组合物以药物剂型给药。21. 根据权利要求12至19中任一项的方法，其中所述治疗组合物结合在食品或饮料 中。22. 包含CTC的治疗组合物，所述组合物具有小于2%w/w的总的游离氨基酸浓度。23. 包含CTC的治疗组合物，所述组合物具有小于0.l%w/w的游离谷氨酰胺浓度。24. 包含一种或更多种的类胡萝卜素和CTC一起的协同组合的治疗组合物，其中在所 述CTC内的总的游离氨基酸浓度小于2%w/w。25. 包含一种或更多种的类胡萝卜素和CTC一起的协同组合的治疗组合物，其中在所 述CTC内的游离谷氨酰胺的浓度小于0.l%w/w。26. 包含一种或更多种的类胡萝卜素和CTC一起的协同组合的治疗组合物，其中所述 类胡萝卜素的浓度至少为〇.l%w/w。27. 根据权利要求26的治疗组合物，所述组合物包含浓度为至少0.l%w/w的番茄红素。
【专利摘要】本发明提供包含经热处理的澄清番茄浓缩物（CTC）的治疗组合物，已发现所述浓缩物具有抗炎和促进骨健康的效应。本发明还涉及包含与一种或更多种的类胡萝卜素结合的经热处理的CTC的组合物。
【IPC分类】A23L2/08, C12P23/00
【公开号】CN105228467
【申请号】CN201480017192
【发明人】T.阿特拉斯曼, Y.布拉特, R.利维, Y.沙罗尼, J.利维, M.泽克哈
【申请人】利库德有限公司
【公开日】2016年1月6日
【申请日】2014年1月22日
【公告号】CA2898284A1, EP2948005A1, US20150352169, WO2014115140A1