共生培养制备富含虾青素的饲料添加剂的方法_3

文档序号:9849687阅读:来源:国知局
.5X 108个/ml的海洋红酵母种子液,制备步骤如下:
[0120] A、将海洋红酵母接种于活化培养基II中,25°C活化培养36h,制得活化海洋红酵 母;
[0121] B、将步骤A制得的活化海洋红酵母接种于摇瓶培养基II中,在25°C、220r/min条件 下,培养36h,制得海洋红酵母一级种子;
[0122] C、将步骤B制得的海洋红酵母一级种子按7%的体积百分含量接种于种子培养基 II中,调节通气量为0.8vvm,通气搅拌速度为200rpm、温度为28°C培养28h,制得海洋红酵母 的种子液。经检测,菌体浓度为5.5 X 108个/ml。
[0123] 进一步优选的,所述活化培养基II每升组分如下:
[0124] 葡萄糖24g,酵母浸粉7g,磷酸氢二钾2 · 5g,无水硫酸镁0 · 8g,水定容至1L,pH4 · 8。
[0125] 进一步优选的,所述摇瓶培养基II每升组分如下:
[0126] 葡萄糖23g,蛋白胨14g,酵母浸粉8g,海水晶19g,磷酸氢二钾15g,无水硫酸镁 〇.8g,水定容至lL,pH 4.7。
[0127] 进一步优选的,所述种子培养基II每升组分如下:
[0128]葡萄糖23g,蛋白胨14g,酵母浸粉7g,海水晶9g,氯化铵6g,磷酸氢二钾9g,无水硫 酸镁2g,水定容至lL,pH 4.8。
[0129] 所述步骤(1)和步骤(2)中流加碳源溶液的质量浓度为50g/L,流加氮源溶液的质 量浓度为3g/L。
[0130] 所述步骤(1)和步骤(2)中碳源选自蔗糖;氮源选自酵母浸粉。
[0131] 实施例4
[0132] 共生培养制备富含虾青素的饲料添加剂的方法,步骤如下:
[0133] (1)将含有浓度为2.5X108个/ml的红发夫酵母的种子液按体积百分比7%接种于 液体发酵培养基中,在温度26°(:、通气量1.2^ 111、?!14.8的条件下,搅拌发酵,发酵期间流加 碳源溶液和氮源溶液,使发酵罐中的碳源浓度为15g/L,氮源浓度为l.Og/L,发酵35h,得一 次发酵液;
[0134] 所述的液体发酵培养基没升组分如下:
[0135] 蔗糖23g,葡萄糖15g,玉米粉9g,酵母膏12g,大豆柏7g,磷酸氢二钾0.9g,氯化铵 4g,无水硫酸镁3g,水定容至lL,pH 5.2;
[0136] (2)直接向步骤(1)制得的一次发酵液中继续接种含有浓度为6.5 X 108个/ml的海 洋红酵母种子液,接种量为一次发酵液体积的15 %,在温度28 °C、通气量1.8vvm、pH 5.0的 条件下,搅拌发酵,发酵期间流加碳源溶液和氮源溶液,使发酵罐中的碳源浓度为25g/L,氮 源浓度为2. Og/L,发酵26h,制得混合发酵液;
[0137] (3)将步骤(2)制得的混合发酵液经1200转/分离心26min,固液分离,取固体,经_ 25°C真空冷冻干燥,制得富含虾青素的饲料添加剂。
[0138] 所述步骤(1)中,含有浓度为2.5 X108个/ml的红发夫酵母的种子液,制备步骤如 下:
[0139] a、将红发夫酵母接种于活化培养基I中,25 °C活化培养36h,制得活化红发夫酵母;
[0140] b、将步骤a制得的活化红发夫酵母接种于摇瓶培养基I中,在25°C、220r/min条件 下,培养36h,制得红发夫酵母一级种子;
[0141] c、将步骤b制得的红发夫酵母一级种子按7%的体积百分含量接种于种子培养基I 中,调节通气量为0.8vvm,通气搅拌速度为200rpm、温度为28 °C培养28h,制得红发夫酵母的 种子液。经检测,菌体浓度为2.5 X 108个/ml。
[0142] 进一步优选的,所述活化培养基I每升组分如下:
[0143] 葡萄糖25g,蛋白胨7g,海水晶8g,磷酸氢二钾l.Og,水定容至lL,pH 5.1。
[0144] 进一步优选的,所述摇瓶培养基I每升组分如下:
[0?45]葡萄糖25g,蛋白胨8g,酵母浸粉8g,海水晶8g,磷酸氢二钾lg,无水硫酸镁0.75g, 水定容至lL,pH 5.1。
[0146] 进一步优选的,所述种子培养基I每升组分如下:
[0?47]葡萄糖30g,蛋白胨12g,酵母浸粉7g,海水晶5g,氯化铵5g,磷酸氢二钾12g,无水硫 酸镁1.2g,水定容至lL,pH 4.9。
[0148] 所述步骤(2)中,含有浓度为6.5 X 108个/ml的海洋红酵母种子液,制备步骤如下:
[0149] A、将海洋红酵母接种于活化培养基II中,25°C活化培养36h,制得活化海洋红酵 母;
[0150] B、将步骤A制得的活化海洋红酵母接种于摇瓶培养基II中,在25°C、220r/min条件 下,培养36h,制得海洋红酵母一级种子;
[0151] C、将步骤B制得的海洋红酵母一级种子按7%的体积百分含量接种于种子培养基 II中,调节通气量为0.8vvm,通气搅拌速度为200rpm、温度为28°C培养28h,制得海洋红酵母 的种子液。经检测,菌体浓度为6.5 X 108个/ml。
[0152] 进一步优选的,所述活化培养基II每升组分如下:
[0153] 葡萄糖25g,酵母浸粉8g,磷酸氢二钾3g,无水硫酸镁0 · 8g,水定容至1L,pH5 · 0。
[0154] 进一步优选的,所述摇瓶培养基II每升组分如下:
[0155] 葡萄糖25g,蛋白胨15g,酵母浸粉8g,海水晶20g,磷酸氢二钾1.5g,无水硫酸镁lg, 水定容至lL,pH 5.0。
[0156] 进一步优选的,所述种子培养基II每升组分如下:
[0? 5"7]葡萄糖25g,蛋白胨15g,酵母浸粉8g,海水晶12g,氯化铵8g,磷酸氢二钾13g,无水 硫酸镁2g,水定容至1L,pH 5.0。
[0158] 所述步骤(1)和步骤(2)中流加碳源溶液的质量浓度为50g/L,流加氮源溶液的质 量浓度为3g/L。
[0159] 所述步骤(1)和步骤(2)中碳源选自葡萄糖浆;氮源选自玉米浆粉。
[0160] 实施例5
[0161] 共生培养制备富含虾青素的饲料添加剂的方法,步骤如下:
[0162] (1)将含有浓度为2.2X108个/ml的红发夫酵母的种子液按体积百分比10%接种 于液体发酵培养基中,在温度28°(:、通气量1.5^ 111、?!15.5的条件下,搅拌发酵,发酵期间流 加碳源溶液和氮源溶液,使发酵罐中的碳源浓度为20g/L,氮源浓度为1.2g/L,发酵40h,得 一次发酵液;
[0163] 所述的液体发酵培养基没升组分如下:
[0164] 蔗糖30g,葡萄糖15g,玉米粉10g,酵母膏15g,大豆柏10g,磷酸氢二钾1.5g,氯化铵 5g,无水硫酸镁5g,水定容至lL,pH 5.5;
[0165] (2)直接向步骤(1)制得的一次发酵液中继续接种含有浓度为6.0 X 108个/ml的海 洋红酵母种子液,接种量为一次发酵液体积的20%,在温度30°C、通气量2. ΟννπκρΗ 5.5的 条件下,搅拌发酵,发酵期间流加碳源溶液和氮源溶液,使发酵罐中的碳源浓度为30g/L,氮 源浓度为1.5g/L,发酵30h,制得混合发酵液;
[0166] (3)将步骤(2)制得的混合发酵液经1500转/分离心30min,固液分离,取固体,经_ 30°C真空冷冻干燥,制得富含虾青素的饲料添加剂。
[0167] 所述步骤(1)中,含有浓度为2.2 X108个/ml的红发夫酵母的种子液,制备步骤如 下:
[0168] a、将红发夫酵母接种于活化培养基I中,30°C活化培养48h,制得活化红发夫酵母;
[0169] b、将步骤a制得的活化红发夫酵母接种于摇瓶培养基I中,在30 °C、240r/min条件 下,培养48h,制得红发夫酵母一级种子;
[0170] c、将步骤b制得的红发夫酵母一级种子按7%的体积百分含量接种于种子培养基I 中,调节通气量为1. Ovvm,通气搅拌速度为300rpm、温度为30°C培养30h,制得红发夫酵母的 种子液。经检测,菌体浓度为2.2 X 108个/ml。
[0171 ]进一步优选的,所述活化培养基I每升组分如下:
[0172] 葡萄糖30g,蛋白胨10g,海水晶10g,磷酸氢二钾1.5g,水定容至lL,pH 5.5。
[0173] 进一步优选的,所述摇瓶培养基I每升组分如下:
[0174]葡萄糖30g,蛋白胨10g,酵母浸粉10g,海水晶10g,磷酸氢二钾1.5g,无水硫酸镁 lg,水定容至lL,pH 5.5。
[0175] 进一步优选的,所述种子培养基I每升组分如下:
[0176] 葡萄糖35g,蛋白胨15g,酵母浸粉10g,海水晶10g,氯化铵10g,磷酸氢二钾15g,无 水硫酸镁1.5g,水定容至lL,pH 5.5。
[0177] 所述步骤(2)中,含有浓度为6.0 X 108个/ml的海洋红酵母种子液,制备步骤如下:
[0178] A、将海洋红酵母接种于活化培养基II中,30°C活化培养48h,制得活化海洋红酵 母;
[0179] B、将步骤A制得的活化海洋红酵母接种于摇瓶培养基II中,在30°C、240r/min条件 下,培养48h,制得海洋红酵母一级种子;
[0180] C、将步骤B制得的海洋红酵母一级种子按7%的体积百分含量接种于种子培养基 II中,调节通气量为l.Ovvm,通气搅拌速度为300rpm、温度为30°C培养30h,制得海洋红酵母 的种子液。经检测,菌体浓度为6.0 X 108个/ml。
[0181 ]进一步优选的,所述活化培养基II每升组分如下:
[0182] 葡萄糖30g,酵母浸粉10g,磷酸氢二钾5g,无水硫酸镁1.5g,水定容至lL,pH 5.5。
[0183] 进一步优选的,所述摇瓶培养基II每升组分如下:
[0184] 葡萄糖30g,蛋白胨20g,酵母浸粉10g,海水晶25g,磷酸氢二钾2.0g,无水硫酸镁 1.5g,水定容至lL,pH 5.5。
[0185] 进一步优选的,所述种子培养基II每升组分如下:
[0?86]葡萄糖30g,蛋白胨20g
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