br>[0020] 实施例1 本实施例所提供的用于改善烟叶感官品质的复合生物制剂微胶囊，按如下步骤制备而 成。
[0021] (1)制备忍材： 枯草芽抱杆菌菌液按如下方法制备而成:取枯草芽抱杆菌菌株，LB液体培养基，3(TC、 200 rpm摇床培养扩增，W无菌培养液为空白对照，记录菌液在600皿处的吸光度值ODsoo， 当ODsoo=S. 0，作为应用菌剂，此时计数表明菌液中菌体数量=70亿个/mU具体为7.02 X 1〇9 cfu/mL)； 銷氨醇单胞菌菌液按如下方法制备而成:取銷氨醇单胞菌菌株，无机盐液体培养基，30 °C、200 rpm摇床培养扩增，W无菌培养液为空白对照，记录菌液的在600 nm处的吸光度值 〇化〇〇，当〇〇6〇〇=2.0，作为应用菌剂，此时计数表明菌液中菌体数量=53亿个/1111^具体为5.31 Xl〇9 cfu/mL); 每升无机盐液体培养基中含有：绿原酸0.2 g;化曲P〇4, 12也0 6.15 g;K也P〇4 1.52 邑；（畑4) 2SO4I.5 邑；MgS〇4.7也0 0.20 g;CaCl2.2也0 0.05 邑； 碱性蛋白酶的酶活为Amresco公司的一种酶活为200U/mg的碱性蛋白酶商业化产品； 枯草芽抱杆菌菌液、銷氨醇单胞菌菌液、碱性蛋白酶分别制备，制备复合生物制剂微胶 囊前再按比例混合均匀。
[0022] (2)制备壁材： 将玉米糖浆、阿拉伯胶和麦芽糊精按比例混合均匀，制备成质量浓度为40%的溶液作为 壁材溶液； W质量比计，玉米糖浆:阿拉伯胶:麦芽糊精=3:5:4。
[0023] (3)制备复合生物制剂微胶囊： 取步骤(2)中壁材溶液，保持60化/min高速揽拌，按比例缓缓加步骤（1)中混合均匀的 忍材，添加完毕后，继续揽拌30min确保混合均匀，作为原料溶液；W质量比计，壁材:忍材= 1:1; 将该原料溶液在60°C、40MPa条件下高压均质化，形成稳定的料液； 将所形成的稳定的料液在喷雾干燥塔内进行喷雾干燥，具体参数为:喷雾进料溫度为 60°C，进料流量为150 mL/min，进风溫度为175°C，出风溫度为60°C ; 最终所得粉末产品即为本申请中的复合生物制剂微胶囊。
[0024] 对所制备的复合生物制剂微胶囊进行显微观察，其结构如图1所示，活菌较为集中 的聚集在微胶囊的内部从而形成忍材A，而外部包裹部分活菌较少，主要为玉米糖浆、阿拉 伯胶和麦芽糊精所形成的壁材B，壁材B-方面对忍材A形成保护作用，一方面提供一定的营 养物质，从而使忍材A内的活菌能够存活较长时间。
[0025] W枯草芽抱杆菌菌液:銷氨醇单胞菌菌液:生物酶=0.7:0.7:0.8的壁材作为对比 例，记为混合生物菌剂町Y-O，检测表明，活菌数=6.01 X 1〇9 C化/血； W枯草芽抱杆菌菌液:銷氨醇单胞菌菌液:生物酶=0.7:0.7:0.8的壁材所制备的复合 生物制剂微胶囊，记为微胶囊HJY-I，检测表明，该胶囊粒径为20~60皿，活菌聚集在胶囊核 屯、部位，活菌数=5.77X 109 cfu/mL; W枯草芽抱杆菌菌液:銷氨醇单胞菌菌液:生物酶=0.8:1.0:1.2的壁材所制备的复合 生物制剂微胶囊，记为微胶囊HJY-2，检测表明，该胶囊粒径为30~60皿，活菌聚集在胶囊核 屯、部位，活菌数=5.17X109 cfu/mL。
[0026] 对上述所制备的HJY-0、HJY-1、町Y-2中的菌体的存活情况进行检测，相关实验简 要介绍如下。
[0027] 将町Y-O、町Y-I、HJY-2分别置于25 °C、相对湿度65%的恒溫恒湿条件下存储，每隔 两个月取样，检测活菌数，与初始值相比计算存活率，考察菌体数量变化情况。具体检测结 果如下表所示：
[00%]从上表中可W看出，混合生物菌剂HJY-O在存放5个月后，菌体数量已经减少为初 始值一半左右，而通过微胶囊化处理后，即使在存放8个月后，菌体数量仍然较高，因而对于 加速烟叶醇化、持续改善烟叶品质均有应用的可能性。
[0029] 实施例2 W实施例1所制备的町Y-0、町Y-1、町Y-2按一定比例分别与烟叶渗兑后，将烟叶仍然置 于烟草仓库中存放，烟叶存放期间，每隔两个月取样，对处理后烟叶进行评价。不同处理情 况下烟叶的品质变化情况介绍如下。
[0030] 不添加菌剂(空白对照)的烟叶质量的变化情况如下表所示：
[0031] 町Y-O处理烟叶时，按烟叶质量的1.0%添加处理，处理后烟叶质量变化情况如下表 所示：
[0032] 町Y-I处理烟叶时，按烟叶质量的2.0%的比例进行添加，处理后烟叶质量变化情况 如下表所示：
[0033] 同时町Y-I处理烟叶时，按烟叶质量的不同比例进行添加处理，处理5个月时，烟叶 质量的感官得分情况如下表所示：
[0034] 从上述对比可W大致看出，直接采用微生物菌剂进行处理时，在处理初期，烟叶品 质改善效果较为明显，但随着时间的延长，烟叶品质改善效果已十分有限。而采用本申请所 提供的复合生物制剂微胶囊处理时，烟叶品质改善则较为平稳，随着时间的延长，烟叶品质 能够得到持续改善，而且改善效果也由于直接采用微生物菌剂处理;进一步就改善效果而 言，在复合生物制剂微胶囊的添加量不超过2.5%时，烟叶品质的改善效果均能得到较为明 显的提升。
[0035] 町Y-2处理烟叶时，按烟叶质量的2.2%的比例进行添加，处理后烟叶质量变化情况 如下表所示：
[0036]从上表可W看出，就不同微生物比例的复合生物制剂微胶囊而言，相同添加量和 相同存放时间时，HJY-I处理后烟叶改善效果优于HJY-2处理效果，因而HJY-I是较佳实施 例。
【主权项】
1. 一种用于改善烟叶感官品质的复合生物制剂微胶囊，其特征在于，该复合生物制剂 微胶囊由混合均匀的芯材和壁材通过喷雾干燥制备而成； 所述芯材为枯草芽孢杆菌菌液、鞘氨醇单胞菌菌液和碱性蛋白酶的混合物，其中枯草 芽孢杆菌菌液中菌体数量为40~60亿个/mL，鞘氨醇单胞菌菌液中菌体数量为10~30亿个/ mL，所述碱性蛋白酶酶活为100-400U/mg;以质量比计，枯草芽孢杆菌菌液:鞘氨醇单胞菌 菌液:生物酶=0 · 8~1 · 0:0 · 8~1 · 0:1 · 0~1 · 2; 所述壁材为玉米糖浆、阿拉伯胶和麦芽糊精混合而成的质量浓度为30~50%的混合液， 以质量比计，混合液中，玉米糖浆:阿拉伯胶:麦芽糊精=3:5:4。2. 如权利要求1所述用于改善烟叶感官品质的复合生物制剂微胶囊，其特征在于，芯材 中以质量比计，枯草芽孢杆菌菌液:鞘氨醇单胞菌菌液:生物酶=1.0: 1.0: 1.2。3. 如权利要求1所述用于改善烟叶感官品质的复合生物制剂微胶囊，其特征在于，以质 量比计，复合生物制剂微胶囊中，芯材:壁材=1:1。4. 权利要求1所述用于改善烟叶感官品质的复合生物制剂微胶囊的制备方法，其特征 在于，具体包括以下步骤： (1) 制备芯材： 枯草芽孢杆菌菌液按如下方法制备而成：取枯草芽孢杆菌菌株，LB液体培养基，30°C、 200 rpm摇床培养扩增，当菌液中菌体数量达到40~60亿个/mL时，作为应用菌剂； 鞘氨醇单胞菌菌液按如下方法制备而成:取鞘氨醇单胞菌菌株，无机盐液体培养基，30 °C、200 rpm摇床培养扩增，当菌液中菌体数量达到10~30亿个/mL时，作为应用菌剂； 所述无机盐液体培养基，具体每升培养基中含有：绿原酸0.2 g;Na2HP〇4?12H20 6.15 g；KH2P〇4 1.52 g；(NH4) 2S041.5 g；MgS04 · 7H20 0.20 g；CaCl2 · 2H20 0.05 g； 枯草芽孢杆菌菌液、鞘氨醇单胞菌菌液、碱性蛋白酶分别制备，制备复合生物制剂微胶 囊前混合均匀； (2) 制备壁材： 将玉米糖浆、阿拉伯胶和麦芽糊精按比例混合均匀，制备成质量浓度为30~50%的溶液 作为壁材溶液； (3 )制备复合生物制剂微胶囊： 取步骤(2)中壁材溶液，搅拌条件下，按比例加入步骤（1)中混合均匀的芯材，混合均匀 后作为原料溶液； 将该原料溶液在40~60 °C、30~40MPa条件下高压均质化，形成稳定的料液； 将所形成的稳定的料液在喷雾干燥塔内进行喷雾干燥，具体参数为：喷雾进料温度为 50°060°C，进料流量为130~150 mL/min，进风温度为170°0180°C，出风温度为50°060°C ; 最终所得粉末产品即为本申请中的复合生物制剂微胶囊。5. 权利要求1所述用于改善烟叶感官品质的复合生物制剂微胶囊在烟叶醇化中的应 用，其特征在于，将复合生物制剂微胶囊按不超过烟叶质量的2.5%的比例进行掺兑。
【专利摘要】本发明属于烟草加工技术领域，具体涉及一种用于改善烟叶感官品质的复合生物制剂微胶囊。该复合生物制剂微胶囊由混合均匀的芯材和壁材通过喷雾干燥制备而成；所述芯材为枯草芽孢杆菌菌液、鞘氨醇单胞菌菌液和碱性蛋白酶的混合物；所述壁材为玉米糖浆、阿拉伯胶和麦芽糊精混合而成的质量浓度为30~50%的混合液。本发明通过微胶囊化技术将微生物制剂和酶制剂进行包裹，形成了利于微生物存活的微环境，从而利于微生物制剂及生物酶在烟叶表面较长时间内发挥作用，从而加速烟叶中大分子物质的降解，缩短烟叶醇化周期。本发明对于烟叶品质改善效果较为明显，能够明显缩短烟叶醇化时间，对于烟草生产企业具有较为重要的应用价值。
【IPC分类】A24B3/12, A24B15/20
【公开号】CN105661626
【申请号】CN201610174838
【发明人】张展, 杨宗灿, 彭玉富, 周浩, 郝辉, 董艳娟, 高明奇, 刘向真, 聂聪, 马宇平
【申请人】河南中烟工业有限责任公司
【公开日】2016年6月15日
【申请日】2016年3月25日