专利名称：含有胃促胰酶抑制剂作为有效成分的预防或治疗纤维变性的药物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种预防或治疗与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性的药物，预防或治疗与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性的药物组合物，和缓解细胞外基质代谢障碍的药物。
背景技术：
纤维变性是一种以与细胞外基质代谢障碍有关的结缔组织蛋白在皮肤和其它器官，如肺、心、肝和肾中过度沉积为特征的疾病。例如，肝纤维变性是一种以胶原和其它结缔组织蛋白在肝脏中过程沉积为特征的疾病。导致肝纤维变性的疾病包括各种肝炎、酒精性肝疾病、血吸虫病等。在这些疾病中，结缔组织蛋白逐渐沉积在肝组织中。结果，发生肝功能障碍，最终导致肝硬变(肝病杂志(J.Hepatol.)8，115，1989)。另一方面，硬皮病和其它皮肤纤维变性是以胶原和其它结缔组织蛋白在皮肤的表皮过度沉积为特征的病症。皮肤纤维变性的起因包括各种皮肤病，如慢性炎症和慢性自身免疫反应，以及各种皮肤损伤，如机械性损伤和烧伤(风湿病学杂志(J.Rheumatol.)15，202，1988)。再者，肺纤维变性是一种以胶原或其它结缔组织蛋白在肺部过度沉积为特征的病症，由化疗药物，如抗肿瘤药物和抗生素导致的药物性肺炎(pneumoniamediamentosa)引发(美国病理学杂志(Am.J.Pathol.)259，L159，1990)。
目前对纤维变性的发病机理尚不十分清楚。在正常条件下，成纤维细胞的增殖和功能受到严格限制。然而，在严重的或持续的炎症或组织损伤的病理性条件下，组织修复机制过度运转，而控制机制失效(国际生物化学细胞生物学杂志(Int.J.Biochem.Cell Biol.)29，79，1997)。或许是由于成纤维细胞的异常增殖和细胞外基质的代谢障碍导致结缔组织蛋白过度产生，由此引发过度组织修复。引发这种现象的细胞因子包括成纤维细胞生长因子(FGF族)、转化生长因子(TFG-β)、血小板衍生生长因子(PDGF)等(FASEB J.8，854，1994)。近些年，为寻找抑制这些细胞因子的产生或其活性的物质进行了大量研究，但尚未获得应用于人的抑制剂。此外，为抑制慢性炎症，也曾用抗炎药，如甾类物质治疗纤维变性，但据说它们在疗效和副作用方面不令人十分满意。因此，仍需要治疗纤维生成的优良药物。
另一方面，胃促胰酶是一种贮藏在肥大细胞颗粒中的丝氨酸蛋白酶，并广泛地存在于各自组织，如皮肤、心脏、血管壁、小肠等中(免疫学和生物学中的肥大细胞蛋白酶(Mast cell protease in Immunolgy andBiology；Caughey，G.H.，Ed；Marcel Dekker，Inc.；New York，1995)。已有许多表明胃促胰酶与各种类型的纤维变性有关的发现的报道。例如，据报道，施用色甘酸盐(一种肥大细胞脱粒抑制剂)抑制Tsk(紧皮)小鼠(抑制硬皮病的动物模型)的皮肤纤维变性(风湿病学杂志(J.Rheumatol.)14，299，1987)。另外，据报道，Tsk小鼠中的胃促胰酶活性增高(日本药理学杂志(Jp.J.Pharmacol.)97(sup.I)60P，1998)，并且在博来霉素引发的小鼠硬皮病模型中，皮肤纤维变性的严重程度与皮肤肥大细胞数量有关(临床免疫学(Clin.Immunol.)92，6，1999)。关于肺纤维变性，已知在肥大细胞缺乏的小鼠中，施用博来霉素不引发肺纤维变性，由此认为肺纤维变性与产生胃促胰酶的肥大细胞有关(药物作用(Agents Actions)39，20，1993)。关于肝纤维变性，人肝脏中的肥大细胞数量随肝脏的纤维生成而增多(J.Hepatol.26，1042，1997)。甚至在各类肝纤维变性模型中也观察到了类似的肥大细胞增多(肝病学(Hepatology)23，888，1996；J.Hepatol.29，112，1998)。在大鼠胆汁性肝硬变模型中，在肝脏中观察到了肥大细胞脱粒，表明肥大细胞颗粒成分，如胃促胰酶与纤维变性的致病机理有关(Hepatology 23，888，1996)。关于胃促胰酶与心脏纤维生成的关系，据报道在压力超载的仓鼠心脏中胃促胰酶活性是5倍并观察到了其中的纤维变性和细胞凋亡(FEBS lett.406，301，1997)。最近，据显示大鼠肥大细胞的胃促胰酶(RMCP-1)引起来源于新生大鼠的心肌细胞凋亡，表明在心衰的发展过程中，胃促胰酶在心肌细胞的细胞死亡和纤维生成中起着重要作用(循环(Circulation)100，1443，1999)。另外还报道，在由快速右心室调步引发的心衰中，在纤维生成成为显著的犬牙后期，胃促胰酶mRNA的表达增强(Matsumoto等，美国心脏协会第73届科学大学(73rdScientific Sessions of American Heart Association)，2000年11月，新奥尔良，Abs.2191)。PTCA后再狭窄是一种与纤维变性有关的心血管疾病。据报道，在气球损伤动脉的狗中观察到肥大细胞数量的增加增强胃促胰酶的表达，并且在该模型中，抑制肥大细胞脱粒的曲尼司特抑制neointima形成(Circulation 99，1084，1999)。也有报道，以与在正常小鼠中相同的方式，在肥大细胞缺乏的小鼠中，博来霉素也引发了肺纤维变性(实验研究(Lab.Invest.)78，1431，1998)。肥大细胞或胃促胰酶在各类纤维变性中的作用仍有许多不清楚之处。
已有表明胃促胰酶在纤维变性中作用机制的发现。例如，据报道，在培养基中，胃促胰酶促进TGF-β的产生，TGF-β是纤维生成的主要细胞因子(生物化学杂志(J.Biol.Chem.)270，4689，1995)。另外，还报道胃促胰酶在体外作用于胶原前体-前胶原，促进胶原纤维形成(J.Biol.Chem.272，7127，1997)以及胃促胰酶激活前胶原酶(Biochem.J.305，301，1995)。
目前，对可抑制动物模型中胃促胰酶活性的物质进行了广泛的研究，旨在阐明胃促胰酶在机体中的作用。
已经报道了一些胃促胰酶抑制剂，例如低分子量胃促胰酶抑制剂，如教科书中给出的(蛋白酶抑制剂(Protease Inhibitors)；Barrett等编著，Eds；Elssevier Science B.V.；Amsterdam，1996)；报道为肽类抑制剂的α-酮酸衍生物(WO 93-25574，美国国家科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，1995，92，6738)；α，α-二氟-β-酮酸衍生物(日本未审专利申请(公开)9-124691)；三肽抑制剂(WO 93-03625)；磷酸衍生物(Oleksyszyn等，生物化学(Biochemistry)30，485，1991)；肽类抑制剂，如三氟甲基酮衍生物(WO 96-33974，日本未审专利申请(公开)10-53579)和乙酰胺衍生物(日本未审专利申请(公开)10-7661，日本未审专利申请(公开)10-53579，日本未审专利申请(公开)11-246437，WO 99-41277，WO98-18794，WO96-39373)；非肽类抑制剂，如三嗪衍生物(日本未审专利申请(公开)8-208654和日本未审专利申请(公开)10-245384)；苯酚酯衍生物(日本未审专利申请(公开)10-87567)；头孢烯衍生物(日本未审专利申请(公开)10-87493)；异噁唑衍生物(日本未审专利申请(公开)11-1479)；咪唑烷衍生物(WO96-04248)；乙内酰脲衍生物(日本未审专利申请(公开)9-31061)；喹唑啉衍生物(WO97-11941)等，但仍没有确立用抑制胃促胰酶活性为治疗策略的令人满意的药物或治疗方法。
发明公开本发明的目的是提供一种预防或治疗皮肤或各种器官的纤维变性的无副作用的安全性药物，所述药物抑制该疾病的发展，预防并发症的发展并改善患者生活质量。
为达到发明目的，本发明者通过深入研究，注意到皮下纤维层肥大与结缔组织蛋白的代谢障碍有关，结果发现胃促胰酶抑制剂缓解胶原代谢障碍并抑制皮下纤维层的增厚，从而完成了本发明。
本发明提供一种预防或治疗与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性的药物，它含有胃促胰酶抑制剂作为有效成分。
本发明提供一种预防或治疗与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性的药物组合物，它含有缓解细胞外基质代谢障碍量的胃促胰酶抑制剂和可药用赋形剂。
本发明还提供一种缓解细胞外基质代谢障碍的药物，它含有胃促胰酶抑制剂作为有效成分。
附图的简要说明附
图1显示实施例2中胃促胰酶抑制剂(化合物18)对小鼠各种组织中的胃促胰酶活性的作用图。
附图2显示实施例3中对Tsk小鼠皮肤胶原含量(羟基脯氨酸含量)的测定结果。
附图3显示实施例3中对Tsk小鼠皮下纤维层厚度的测定结果。
附图4显示实施例3中对Tsk小鼠皮肤中肥大细胞密度的测定结果。
附图5显示实施例3中对Tsk小鼠皮肤中胃促胰酶活性的测定结果。
附图6显示实施例3中对Tsk小鼠皮肤中胃促胰酶mRNA的测定结果。
附图7显示实施例4中对Tsk小鼠皮下纤维层厚度的测定结果。
附图8显示实施例4中对Tsk小鼠皮肤中胃促胰酶活性的测定结果。
附图9显示在博来霉素诱发的小鼠肺纤维变性模型的肺部中皮肤胶原含量(羟基脯氨酸含量)的变化图。*和**表示当与对照组(施用博来霉素的量为0)比较时，确定显著性差异的P值(Dunnett检验)分别小于0.05和0.01。
附图10显示博来霉素诱发的小鼠肺中胃促胰酶活性的测定结果。*表示当与正常小鼠比较时，确定显著性差异的P值(学生t检验)小于0.05。
附图11显示胃促胰酶抑制剂对博来霉素诱发的小鼠肺纤维变性模型的肺中皮肤胶原含量(羟基脯氨酸含量)的影响。#表示当与盐水施用组相比时，确定显著性差异的P值(学生t检验)小于0.01；*表示当与HPC/盐水施用组比较时，确定显著性差异的P值(Dunnett检验)小于0.05。
实施本发明的最佳方式在本说明书中，与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性包括由于细胞外基质代谢障碍的发生而引发的疾病，其症状因细胞外基质代谢障碍的发生而加剧的疾病，和其治愈因细胞外基质代谢障碍的发生而延迟的疾病。例如，这些疾病包括硬皮病、肺纤维变性、良性前列腺肥大、心肌梗塞后心肌纤维生成、心肌纤维变性、骨骼肌纤维变性、术后粘连、肥大性瘢痕和瘢痕疙瘩、硬变、肝纤维变性、肾纤维变性、纤维性血管病及糖尿病并发症，如由于纤维性微脉管炎导致的视网膜炎、神经官能症、肾病和外周动脉炎或者与这些有关的病症。
通过本领域普通专业人员可使用的方法，选择能够表现出抑制胃促胰酶活性作用的物质作为本发明的胃促胰酶抑制剂。作为选择方法，可提及例如后面描述的实施例1的方法。以此方式获得的化合物包括以前已经报道作为胃促胰酶抑制剂的已知化合物，例如低分子量胃促胰酶抑制剂，如教科书中给出的(Protease Inhibitors；Barrett等编著；Elssevier Science B.V.；Amsterdam，1996)；报道为肤类抑制剂的α-酮酸衍生物(WO 93-25574，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1995，92，6738)；α，α-二氟-β-酮酸衍生物(日本未审专利申请(公开)9-124691)；三肽抑制剂(WO 93-03625)；磷酸衍生物(Oleksyszyn等，生物化学(Biochemistry)30，485，1991)；肽样抑制剂，如三氟甲基酮衍生物(WO 96-33974，日本未审专利申请(公开)10-53579)和乙酰胺衍生物(日本未审专利申请(公开)10-7661，日本未审专利申请(公开)10-53579，日本未审专利申请(公开)11-246437，WO 99-41277，WO98-18794，WO96-39373)；非肽类抑制剂，如三嗪衍生物(日本未审专利申请(公开)8-208654和日本未审专利申请(公开)10-245384)；苯酚酯衍生物(日本未审专利申请(公开)10-87567)；头孢烯衍生物(日本未审专利申请(公开)10-87493)；异噁唑衍生物(日本未审专利申请(公开)11-1479)；咪唑烷衍生物(WO96-04248)；乙内酰脲衍生物(日本未审专利申请(公开)9-31061)；喹唑啉衍生物(WO97-11941)等，但是作为优选胃促胰酶抑制剂的代表性实例，可提及下式I化合物及其可药用盐。 其中，A环表示芳基；R1表示羟基、氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级烷基氨基、可被羧酸基取代的C7-C10低级芳烷基氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级烷基或者可被羧酸基取代的C2-C4链烯基；R2和R3可以相同或不同，并且表示氢原子、未取代的或取代的C1-C4低级烷基、卤原子、羟基、C1-C4低级烷氧基、氨基、未取代的或取代的C1-C4低级烷基氨基、未取代的或取代的C7-C10芳烷基氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基，或者羧酸基，或者当A环是苯环时，R1和R2可与该取代的苯环一起形成可被羧基取代的稠合杂环，其中环中的碳原子可形成羰基并且R3定义如上；并且X表示氢原子、C1-C4低级烷基、C1-C4低级烷氧基、卤原子、羟基、氨基或硝基。
在通式(I)中，A环表示的芳基的优选实例是苯环和萘环。
R1表示的可被羧酸基取代的C1-C4低级烷基氨基和可被羧酸基取代的C7-C12低级芳烷基氨基的优选实例是甲氨基、乙氨基、丙氨基、丁氨基、羧甲基氨基、羧乙基氨基、羧丙基氨基、羧丁基氨基、苄氨基、苯乙氨基、苯丙基氨基、苯丁基氨基、羧基苄氨基、羧基苯乙氨基、羧基苯丙基氨基、羧基苯丁基氨基等。
R1表示的可被羧酸基取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环羧酸酰化的氨基和可被羧酸基取代的杂芳环羧酸酰化的氨基的优选实例是甲酰氨基、乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、苯甲酰氨基、萘甲酰氨基、吡啶甲酰氨基、吡咯甲酰氨基、羧基乙酰氨基、羧基丙酰氨基、羧基丁酰氨基、羧基苯甲酰氨基、羧基萘甲酰氨基、羧基吡啶甲酰氨基、羧基吡咯甲酰氨基等。
R1表示的可被羧酸基取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环磺酸磺酰化的氨基和可被羧酸基取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基的优选实例是甲磺酰氨基、乙磺酰氨基、丙磺酰氨基、丁磺酰氨基、苯磺酰氨基、萘磺酰氨基、吡啶磺酰氨基、吡咯磺酰氨基、羧基甲磺酰氨基、羧基乙磺酰氨基、羧基丙磺酰氨基、羧基丁磺酰氨基、羧基苯磺酰氨基、羧基萘磺酰氨基、羧基吡啶磺酰氨基、羧基吡咯磺酰氨基等。
R1表示的可被羧酸基取代的C1-C4低级烷基的优选实例是乙酸基、丙酸基、丁酸基、戊酸基等。
R1表示的可被羧酸基取代的C2-C4链烯基的优选实例是丙烯酸基、巴豆酸基等。
R2或R3表示的未取代的或取代的C1-C4低级烷基的优选实例是直链烷基，如甲基、乙基、正丙基和正丁基；以及支链烷基，如异丙基、仲丁基和叔丁基。
C1-C4低级烷基的取代基的优选实例是羧酸基；卤原子，如氟原子和氯原子；C1-C4低级烷氧基；氨基；甲氨基；二甲氨基、羧甲基氨基、羧乙基氨基等。
R2或R3表示的卤原子的优选实例是氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。
R2或R3表示的C1-C4低级烷氧基的优选实例是直链烷氧基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基和正丁氧基；以及支链烷氧基，如异丙氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
R2或R3表示的未取代的或取代的C1-C4低级烷基氨基的优选实例是甲氨基、乙氨基、丙氨基、丁氨基等。
C1-C4低级烷基氨基的取代基的优选实例是羧酸基；卤原子，如氟原子和氯原子；C1-C4低级烷氧基等。
R2或R3表示的未取代的或取代的C7-C12低级芳烷基氨基的优选实例是苄氨基、苯乙氨基、苯丙基氨基、苯丁基氨基等。
芳烷基氨基的取代基的优选实例是羧酸基；卤原子，如氟原子和氯原子；C1-C4低级烷氧基等。
R2或R3表示的可被羧酸基取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环羧酸酰化的氨基和可被羧酸基取代的杂芳环羧酸酰化的氨基的优选实例是甲酰氨基、乙酰氨基、丙酰氨基、丁酰氨基、苯甲酰氨基、萘甲酰氨基、吡啶甲酰氨基、吡咯甲酰氨基、羧基乙酰氨基、羧基丙酰氨基、羧基丁酰氨基、羧基苯甲酰氨基、羧基萘甲酰氨基、羧基吡啶甲酰氨基、羧基吡咯甲酰氨基等。
R2或R3表示的可被羧酸基取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环磺酸磺酰化的氨基和可被羧酸基取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基的优选实例是甲磺酰氨基、乙磺酰氨基、丙磺酰氨基、苯磺酰氨基、萘磺酰氨基、吡啶磺酰氨基、吡咯磺酰氨基、羧基甲磺酰氨基、羧基乙磺酰氨基、羧基丙磺酰氨基、羧基苯磺酰氨基、羧基萘磺酰氨基、羧基吡啶磺酰氨基、羧基吡咯磺酰氨基等。
当A环是苯环时，R1和R2与该取代的苯环一起形成的可被羧酸基取代的稠合杂环(其中环中的碳原子可形成羰基)的优选实例是四氢喹啉环和苯并噁嗪环，如四氢喹啉、苯并噁嗪、喹喔啉、苯并二噁烷、羧基四氢喹啉、羧基苯并噁嗪、羧基喹喔啉、羧基苯并二噁烷等。
X表示的C1-C4低级烷基的优选实例是直链烷基，如甲基、乙基、正丙基和正丁基；以及支链烷基，如异丙基、仲丁基和叔丁基。
X表示的C1-C4低级烷氧基的优选实例是直链烷基，如甲氧基、乙氧基、正丙氧基和正丁氧基；以及支链烷基，如异丙氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
X表示的卤原子的优选实例是氟原子、氯原子、溴原子和碘原子。
此外，可药用的实例是酸盐，如盐酸盐、甲磺酸盐和三氟乙酸盐；及碱金属盐，如钠盐和钾盐。
本发明的式(I)的喹唑啉衍生物可，例如通过下列(A)和(B)的合成方法合成。
合成方法(A)采用，例如JP-A-6-199839中描述的方法，使式(I-1)的化合物 其中A环定义如上并且R1’、R2’和R3’分别表示R1、R2和R3，它们可被保护基保护，并且R1、R2和R3定义如上与式(I-2)的邻氨基苯甲酸衍生物反应 其中X’表示X，该基团可被保护基保护，并且X定义如上获得式(I-3)的磺酰脲衍生物 其中A、R1’、R2’、R3’和X’定义如上，然后使用缩合试剂，例如1，1’-羰基二咪唑(下文称之为CDI)，获得喹唑啉环，如果需要，脱去R1、R2、R3和X的保护基。
在该反应中，当R1、R2或R3表示含羟基、氨基或羧基的基团时，R1、R2或R3可任选地用保护基保护，所述保护基是，例如苄氧羰基、叔丁氧羰基、苄基、烯丙基、叔丁基等。当X表示羟基或氨基时，X可任选地用保护基保护，所述保护基是，例如苄氧羰基、叔丁氧羰基、苄基、烯丙基、叔丁基等。
用于该反应的式(I-1)化合物包括市售的或已知化合物或者可采用已知方法合成的化合物。例如，可使用按照欧洲专利说明书0269141中描述的合成方法，用氯磺酰异氰酸酯，由相应的磺酰胺衍生物合成的化合物。例如，可使用3-烯丙氧羰基-甲基苯磺酰基异氰酸酯、4-烯丙氧羰基-甲基苯磺酰基异氰酸酯和4-烯丙氧基苯磺酰基异氰酸酯等。
用于该反应的式(I-2)的邻苯甲酸衍生物可使用市售的或已知化合物或者通过已知方法合成的化合物。例如，可使用4-氯邻氨基苯甲酸、4-甲氧基邻氨基苯甲酸、5-氯邻氨基苯甲酸、4-羟基邻氨基苯甲酸等。
由式(I-3)的磺酰脲衍生物获得喹唑啉环的反应可在质子惰性的溶剂中于-50-50℃，优选在-20℃-室温下进行，溶剂是，例如醚类溶剂，如四氢呋喃和二噁烷；含卤原子的溶剂，如二氯甲烷；或者二甲基甲酰胺等。此外，对于该环合反应，可使用常规的缩合试剂，包括，例如CDI、二环己基碳二亚胺(DCC)及类似的碳二亚胺化合物；混合酸酐等。脱保护反应可用常规方法进行，如用酸或碱水解，还原或氧化等。
合成方法(B)使其中A环、R1’、R2’和R3’定义如上的式(I-4)化合物 与式(I-5)的邻氨基苯甲酸衍生物缩合 其中X’定义如上，Ph表示苯基，并且R4表示羧基的保护基，羧基是可通过水解或氢解被释放出的特定基团，例如甲基、乙基或苄基，使用，例如1，8-二氮杂双环[5，4，0]-7-十一碳烯(下文称之为DBU)形成式(I-6)的磺酰脲衍生物 其中A环、R1’、R2’、R3’、R4’和X’定义如上，然后用碱水解或氢解得到式(I-3)的相应羧酸，再得到喹唑啉环并任选地以与合成方法(A)中相同的方法，脱去R1、R2、R3和X的保护基。在该反应中，当R1、R2、R3表示含羟基、氨基或羧基的基团时，R1、R2或R3可任选地用保护基，例如苄氧羰基、叔丁氧羰基、苄基、烯丙基、叔丁基等保护。当X表示羟基或氨基时，X可任选地用保护基，例如苄氧羰基、叔丁氧羰基、苄基、烯丙基、叔丁基等保护。
作为用于该反应的式(I-4)化合物，可使用市售的或已知化合物或者通过已知方法合成的化合物。例如，可使用3-羟基苯磺酰胺，2-氨基苯磺酰胺，3-氨基苯磺酰胺，4-氨基苯磺酰胺，(±)-2-(4-氨基磺酰基苯基)丁酸，3-苄氧羰基氨基-4-氯苯磺酰胺，4-苄氧羰基氨基-3-氯苯磺酰胺，4-氨基-3，5-二氯苯磺酰胺，3-苄氧羰基氨基-4-甲基苯磺酰胺，4-叔丁氧羰基-3-羟基苯磺酰胺，3-苄氧羰基氨基-4-叔丁氧羰基苯磺酰胺，4-叔丁氧羰基-3-羟基苯磺酰胺，3-叔丁氧羰基-4-羟基苯磺酰胺，3-乙酰胺-4-甲氧基苯磺酰胺，3-(3-氨基磺酰基)苯基丙烯酸叔丁基酯，3-氨基-4-甲氧基苯磺酰胺，4-甲氧基-3-甲基磺酰氨基苯磺酰胺，3-羧基-4-羟基-2-萘磺酰胺，4-苄氧羰基氨基-3-叔丁氧羰基苯磺酰胺，(±)-3-叔丁氧羰基-2-氧代-1H，3H-喹啉-7-磺酰胺，(±)-2-叔丁氧羰基-3-氧代-1，4-苯并噁嗪-6-磺酰胺等。
作为用于该反应的式(I-5)邻氨基苯甲酸，可使用市售的或已知化合物或者通过已知方法合成的化合物。例如，可使用4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸乙酯，4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，5-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸乙酯，5-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，4-甲氧基-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，4-甲氧基-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸乙酯，4-甲氧基-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，4-羟基-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，4-羟基-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸乙酯，4-羟基-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯等。
获得式(I-4)化合物和式(I-5)的邻氨基苯甲酸衍生物缩合得到式(I-6)的磺酰脲衍生物的反应可用质子惰性溶剂在-50-50℃，优选-20-室温下进行，所述溶剂是，例如醚类溶剂，如四氢呋喃或二噁烷；含卤溶剂，如二氯甲烷；或者二甲基甲酰胺等。此外，作为该缩合反应可使用的有机强碱，可使用例如DBU；无机碱是，例如碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钾和氢氧化钠；或者金属碱，如氢化钠。
对于在碱水解或氢解由此得到的式(I-6)的磺酰脲衍生物获得式(I-3)磺酰脲衍生物的反应，可采用用于酯的常规水解条件和氢化条件。
注意到上述反应可在被保护的官能团不参与反应的情况下进行。依据保护基的类型，可通过化学还原或者其它常规脱保护反应脱除保护。例如，当保护基是叔丁基时或者叔丁氧羰基时，可使用三氟乙酸；当保护基是烯丙基时，可使用钯催化剂，如四(三苯基膦)钯(O)。
其中R1表示被可被羧酸取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基，被可被羧酸取代的芳环羧酸酰化的氨基，和被可被羧酸取代的杂芳环羧酸酰化的氨基的式(I)化合物可使用常规方法，由其中R1表示氨基的式(I)化合物通过用羧酸、酰氯、酸酐酰化得到。
其中R1表示被可被羧酸取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基，被可被羧酸取代的芳环磺酸磺酰化的氨基和可被羧酸取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基的式(I)化合物可采用常规方法，由其中R1表示氨基的式(I)化合物通过用磺酸或磺酰氯磺酰化得到。
按照上述方法获得的产物可通过例如重结晶或柱色谱方法纯化。
如果需要，通过上述方法获得的式(I)化合物可通过使其与各种类型的酸或碱反应转化为盐。可用于将式(I)化合物转化为盐的酸可提及，例如无机酸，如氢氯酸、氢溴酸、硝酸、硫酸或磷酸；以及有机酸，如甲磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、三氟乙酸、柠檬酸、乳酸、马来酸、富马酸、酒石酸、乙酸、己二酸、棕榈酸和鞣酸。可用于将式(I)化合物转化为盐的碱可提及，例如氢氧化钠、氢氧化锂和氢氧化钾。
此外，本发明的式(I)化合物包括含不对称中心的那些化合物。外消旋混合物可通过一种或多种方法分离，由此获得旋光活性单体。可使用的方法包括，例如(1)使用旋光活性柱的分离方法。
(2)通过旋光活性酸或碱转化为盐，然后重结晶的分离方法。
(3)(1)和(2)的结合分离方法。
可按照下面实施例4或7的方法评价这些化合物改善(疾病)异常加重的作用。
为使用本发明的有效成分作为预防或治疗与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性的药物，作为预防或治疗与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性的药物组合物，和缓解细胞外基质代谢障碍的药物，可将一种或多种本发明化合物混合形成适于按照常规方法给药的形式。口服制剂形式的实例包括胶囊、片剂、颗粒、细颗粒、糖浆、干糖浆和其它制剂；非口服给药制剂的实例包括注射剂和栓剂，如直肠栓剂和阴道栓剂；经鼻制剂，例如喷雾剂和软膏；及透皮制剂，如透皮吸收带剂。
本发明化合物的临床剂量可根据疾病症状、严重程度、年龄、存在的并发症等变化，以及根据制剂形式变化。在口服给药的情况下，有效成分的成人剂量一般为1-1000mg天。在非口服给药的情况下，施用1/10-1/2口服剂量的量足以。这些剂量范围可根据患者的年龄、症状等进行适宜调整。
在本发明中，胃促胰酶抑制剂可不与其它有效成分混合而单独给药，但考虑到有关疾病、症状、并发症等，也可施用含有其它有效成分的药物制剂。此外，也可与其它有效成分联合。对其它有效成分的用量没有特别限制，但应考虑其单独产生作用的最低量、产生的副作用等来确定。
在治疗中，包括仅含胃促胰酶抑制剂作为活性成分的制剂以及还含有其它有效成分的制剂联合治疗的制剂形式和方法宜由医师按照患者的年龄、症状等选择。
本发明化合物的毒性较低。给5周龄雄性小鼠口服给药后24小时时的急性毒性值LD50为1g/kg或更高。
实施例通过下列非限制性实施例进一步描述本发明，但无需赘述，本发明的范围不限于这些实施例。
为证明胃促胰酶抑制剂对纤维变性的有用性，下面提供了用Tsk小鼠作为硬皮病小鼠模型，以及用博来霉素诱发的小鼠肺纤维变性作为纤维变性模型得到的试验结果。
制备实施例17-氯-3-(3-羟基苯磺酰基)-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物1)的合成按照合成方法(B)，将938mg(5.42mmol)3-羟基苯磺酰胺溶于40ml四氢呋喃中，然后滴加892μl(5.96mmol)1，8-氮杂双环[5.4.0]-7-十一碳烯(下文称之为DBU)。将该反应溶液在室温搅拌15分钟，然后加入1.66g(5.42mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯并将该混合物在室温搅拌过夜。将过量水到入该反应溶液中，然后用盐酸使该混合物呈酸性并用乙酸乙酯萃取。有机层用水和饱和盐水洗涤，经无水硫酸镁干燥并浓缩。如此获得的粗产物经硅胶柱色谱(0-5％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到1.32g(产率59％)的4-氯-2-{[(3-羟基苯磺酰氨基)羰基]氨基}苯甲酸甲酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)3.91(3H，s)，7.02(1H，m)，7.09(1H，m)，7.34(1H，t)，7.57(2H，m)，7.89(1H，d)，8.38(1H，d)，10.94(1H，s).接下来，将如此获得的1.23g(3.2mmol)该化合物溶于20ml甲醇，然后滴加10ml 2N氢氧化钠水溶液。将该反应溶液在室温下搅拌15分钟，然后加入过量的水并用盐酸使该混合物呈酸性。然后搅拌，产生结晶沉淀，然后过滤并干燥得到羧酸。将如此获得的产物溶于50ml四氢呋喃中，在冰冷却下加入434mg(2.68mmol)CDI并将该混合物搅拌30分钟。该反应溶液用乙酸乙酯稀释，用水和饱和盐水洗涤，经无色硫酸镁干燥，然后浓缩得到粗产物。该粗产物经硅胶柱色谱(乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2)，得到230mg(2步产率为20％)标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)7.12(2H，s)，7.24(1H，d)，7.48(1H，t)，7.58(2H，s)，7.85(1H，d)，10.28(1H，s)，11.63(1H，s).
制备实施例23-(2-氨基苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物2)的合成以与制备实施例1相同的方式处理2.7g(15.7mmol)2-氨基苯磺酰胺和4.8g(15.7mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，得到3.2g(3步产率为58％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)6.46(2H，s)，6.65(1H，t)，6.81(1H，d)，7.12(1H，s)，7.23(1H，d)，7.34(1H，t)，7.76(1H，d)，7.86(1H，d).
制备实施例37-氯-3-(2-甲磺酰氨基苯磺酰基)-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物3)的合成将22mg(0.06mmol)化合物2溶于200μl1吡啶，滴加1.6μl(0.15mmol)甲磺酰氯，然后将所得混合物在室温搅拌过夜。往该反应溶液中加入过量水，该混合物用乙酸乙酯萃取。有机层用1N盐酸水溶液和饱和盐水洗涤，然后经无水硫酸镁干燥并浓缩，得到粗产物。该粗产物经乙醚结晶，得到16mg(0.04mmol)标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)3.61(3H，s)，7.10(1H，d)，7.20(1H，d)，7.74(1H，d)，7.82-7.90(4H，m)，8.34(1H，d)，11.70(1H，s).
制备实施例43-(4-氨基苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物4)的合成以与制备实施例1相同的方式处理2.7g(15.7mmol)4-氨基苯磺酰胺和4.8g(15.7mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，得到7.9g(产率94％)2-{[(4-氨基苯磺酰氨基)羰基]氨基}-4-氯苯甲酸甲酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)3.59(3H，s)，5.37(2H，s)，6.45(2H，d)，6.83(1H，dd)，7.41(2H，d)，7.81(1H，d)，8.66(1H，d)，9.64(1H，s).
然后，以相同方式，由所得的7.9g(14.8mmol)磺酰脲产物，获得4.3g(2步产率83％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)6.39(2H，s)，6.63(2H，d)，7.09(1H，s)，7.22(1H，d)，7.76(2H，d)，7.83(1H，d)，11.51(1H，s).
制备实施例53-(3-羧甲基-苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物5)的合成按照合成方法(A)，将3.27g(11.6mmol)3-烯丙氧羰基甲基苯磺酰基异氰酸酯溶于100ml无水THF中，然后加入1.98g(11.5mmol)4-氯邻氨基苯甲酸并将该混合物在室温搅拌2小时。该反应溶液用冰水冷却后，加入1.87g(11.5mmol)CDI并将所得混合物在并冷却下搅拌30分钟。将过量水加到反应溶液中，然后用乙酸乙酯萃取该混合物。将有机层洗涤，干燥并用少量乙酸乙酯使其结晶，得到2.0g(产率40％)3-(3-烯丙基氧羰基-苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮。如此获得的烯丙基产物溶于100ml甲酸-THF(1∶9)混合物中，加入700mg三苯基膦。使反应器避光并保持在氮气氛下，然加入700mg四(三苯基膦)钯(O)并将所得混合物在室温避光条件下搅拌过夜。将反应溶液真空浓缩，所得固体用二氯甲烷洗涤，得到1.47g(产率81％)标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)3.76(2H，s)，7.13(1H，s)，7.24(1H，d)，7.61-7.69(2H，m)，7.86(1H，d)，8.05(2H，s)，12.50(1H，br).
制备实施例63-(4-羧甲基-苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物6)的合成以与实施例5相同的方式处理1.10g(3.95mmol)4-烯丙氧羰基甲基-苯磺酰基异氰酸酯和678mg(3.95mmol)4-氯邻氨基苯甲酸，获得657mg(产率38％)3-(4-烯丙氧羰基苯磺酰基)-7-氯-2，4-(1H，3H)-喹唑啉二酮。以相同方式处理538mg(1.24mmol)该化合物，得到342mg(产率70％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)3.75(2H，s)，7.13(1H，s)，7.23(1H，d)，7.61-7.69(2H，m)，7.86(1H，d)，8.05(2H，s)，12.07(2H，br).
制备实施例7(±)-2-{4-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉-3-基)磺酰基]苯基}丁酸(化合物7)的合成以与制备实施例1相同的方式处理1.02g(3.41mmol)(±)-2-4-氨基磺酰基苯基)丁酸叔丁基酯和1.04g(3.41mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，得到1.46g(产率84％)1-[({4-[1-(叔丁氧羰基)丙基]苯磺酰氨基}羰基)氨基]-4-氯苯甲酸甲酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，CDCl3)0.89(3H，t)，1.38(9H，s)，1.69-1.76(1H，m)，2.03-2.10(1H，m)，3.42(1H，t)，3.94(3H，s)，7.04(1H，d)，7.47(2H，d)，7.93(1H，d)，8.01(2H，d)，8.45(1H，br)，11.04(1H，br).
接下来，用4.3ml(8.6mmol)2N氢氧化钠水溶液类似地形成1.43g羧酸，再用463mg(2.86mmol)CDI得到970mg(2步产率71％)(±)-2-{4-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉-3-基)磺酰基]苯}丁酸叔丁基酯。
将如此获得的叔丁基酯溶于5ml二氯甲烷中，然后加入5ml三氟乙酸并将所得混合物在室温搅拌40分钟。将该反应溶液真空浓缩并将所得粗产物用少量乙醚洗涤，得到820mg(产率96％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)0.84(3H，t)，1.67-1.75(1H，m)，1.98-2.05(1H，m)，3.62(1H，t)，7.11(1H，s)，7.24(1H，d)，7.61(2H，d)，7.86(1H，d)，8.13(2H，d)，11.62(1H，s).
制备实施例83-(3-氨基-4-氯苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物8)的合成以与制备实施例1相同的方式处理1.0g(2.93mmol)3-苄氧羰基氨基-4-氯苯磺酰胺和1.18g(2.93mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到1.43g(产率78％)2-{[(3-苄氧羰基氨基-4-氯苯磺酰氨基)羰基]氨基}-4-氯苯甲酸苄基酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)5.19(2H，s)，5.36(2H，s)，7.21(1H，dd)，7.34-7.48(10H，m)，7.72-7.76(2H，m)，7.97(1H，d)，8.25(1H，d)，8.30(1H，d)，9.53(1H，s)，10.30(1H，s).
将1.38g(2.20mmol)该化合物溶于50ml THF中，然后加入200mg钯-碳(10％)并将该混合物在氢气流下搅拌2小时。将反应混合物滤过硅藻土以除去钯-碳，然后真空浓缩滤液，得到羧酸。将如此获得的产物悬浮于50ml THF中，然后在冰冷却下加入356mg(2.20mmol)CDI并以与制备实施例1相同的方式处理该所得混合物，获得560mg(2步产率66％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)6.00(2H，s)，7.12(1H，s)，7.26(2H，t)，7.48(1H，d)，7.66(1H，s)，7.86(1H，d)，11.76(1H，br).
制备实施例93-(4-氨基-3，5-二氯苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物9)的合成以与制备实施例1相同的方式处理1.06g(4.40mmol)4-氨基-3，5-二氯苯磺酰胺和1.34g(4.40mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，得到905mg(产率44％)2-{[(4-氨基-3，5-二氯苯磺酰氨基)羰基]氨基}-4-氯苯甲酸甲酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)3.87(3H，s)，6.59(2H，br)，7.22(1H，dd)，7.72(2H，s)，7.93(1H，d)，8.24(1H，d)，10.17(1H，s).
然后，以相同方式处理905mg(2.0mmol)所得磺酰脲产物，得到660mg(2步产率82％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)6.80(2H，s)，7.12(1H，s)，7.24(1H，d)，7.86(1H，d)，7.92(2H，s)，11.63(1H，br).
制备实施例103-(3-氨基-4-甲基苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物10)的合成以与制备实施例8相同的方式处理960mg(3.00mmol)3-苄氧羰基氨基-4-甲基苯磺酰胺和1.14g(3.00mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到1.14g(产率62％)2-{[(3-苄氧羰基氨基-4-甲基苯磺酰氨基)羰基]氨基}-4-氯苯甲酸苄基酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)2.30(3H，s)，5.17(2H，s)，5.36(2H，s)，7.20(1H，dd)，7.33-7.48(11H，m)，7.63(1H，d)，7.97(1H，d)，8.11(1H，s)，8.25(1H，s)，9.27(1H，s)，10.30(1H，s)，12.20(1H，br).
然后，以相同方式处理1.14g(1.87mmol)所得磺酰脲产物，得到190mg(2步产率27％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)， PMR(δppm，DMSO-d6)2.12(3H，s)，5.47(2H，s)，7.12(1H，s)，7.16-7.25(3H，m)，7.38(1H，s)，7.85(1H，d)，11.58(1H，s).
制备实施例113-[(3-羧甲基氨基苯基)磺酰基]-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物11)的合成以与制备实施例7相同的方式处理1.62g(5.65mmol)3-叔丁氧羰基甲氨基苯磺酰胺和1.73g(5.65mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，得到209mg(4步产率9％)标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)， PMR(δppm，DMSO-d6)3.86(2H，s)，6.88(1H，s)，7.12(1H，s)，7.24(1H，d)，7.30-7.38(3H，m)，7.86(1H，d)，11.61(1H，br).
制备实施例123-(3-氨基苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物12)的合成以与制备实施例7相同的方式处理3.5g(12.9mmol)3-叔丁氧羰基氨基苯磺酰胺和3.9g(12.8mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，得到2.2g(4步产率49％)标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)5.72(2H，s)，6.87(1H，d)，7.12(1H，s)，7.23-7.27(2H，m)，7.33(1H，s)，7.86(1H，d)，11.61(1H，s).
制备实施例132-{3-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]苯氨基羰基}丙酸(化合物13)的合成将100mg(0.28mmol)化合物12溶于5ml THF中，加入100mg(1.0mmol)琥珀酸酐并将所得混合物加热回流3小时。将反应溶液真空浓缩，如此获得的粗产物用乙酸乙酯-乙醚结晶，得到120mg(产率96％)标题化合物。性质无色结晶，熔点187-188℃，PMR(δppm，DMSO-d6)2.54(2H，d)，2.59(2H，d)，7.12(1H，s)，7.24(1H，d)，7.59(1H，t)，7.80(1H，d)，7.86(1H，d)，7.96(1H，d)，8.41(1H，s)，10.40(1H，s)，11.63(1H，br)，12.10(1H，br).
制备实施例143-{3-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]苯基}丙烯酸(化合物14)的合成以与制备实施例7相同的方式处理1.54g(5.44mmol)3-(3-氨基磺酰基)苯基丙烯酸叔丁基酯和1.66g(5.44mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，得到2.18g(产率81％)2-({[3-(3-叔丁氧基-3-氧代-1-丙烯基)苯磺酰氨基]羰基}氨基)-4-氯苯甲酸甲酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，CDCl3)1.53(9H，s)，3.95(3H，s)，6.46(1H，d)，7.05(1H，d)，7.55(1H，m)，7.57(1H，d)，7.72(1H，m)，7.93(1H，m)，8.04(1H，m)，8.27(1H，s)，8.46(1H，d)，11.05(1H，br).
然后，以相同方式处理2.18g(4.4mmol)所得磺酰脲产物，得到698mg(3步产率37％)标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)， PMR(δppm，DMSO-d6)6.65(1H，d)，7.12(1H，s)，7.25(1H，d)，7.69(1H，d)，7.72(1H，t)，7.87(1H，d)，8.12(2H，q)，8.37(1H，s)，11.64(1H，s).
制备实施例154-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]水杨酸(化合物15)的合成以与制备实施例7相同的方式处理1.0g(3.66mmol)4-叔丁氧羰基-3-羟基苯磺酰胺和1.12g(3.66mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，得到1.79g(产率100％)2-([(4-叔丁氧羰基-3-羟基苯磺酰氨基)羰基]氨基}-4-氯苯甲酸甲酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)1.57(9H，s)，3.87(3H，s)，7.14(1H，d)，7.40-7.45(2H，m)，7.85(1H，d)，7.92(1H，d)，8.32(1H，d)，10.13(1H，s)，10.82(1H，s).
然后，以相同方式处理1.78g(3.66mmol)所得磺酰脲产物，得到370mg(3步产率25％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)7.13(1H，s)，7.26(1H，d)，7.69(1H，d)，7.87(1H，d)，8.01(1H，d)，11.67(1H，s).
制备实施例164-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]水杨酸一钠盐(化合物16)的合成将50mg(0.13mmol)化合物15悬浮于约1ml THF中，然后滴加126μl 1N氢氧化钠水溶液。证实该溶液达到均匀后，加入30ml水并将该混合物冻干，定量地得到52mg非晶形标题化合物。性质无色非晶形物，PMR(δppm，CD3OD)7.11(1H，s)，7.19(1H，d)，7.58(1H，d)，7.63(1H，s)，7.92(1H，d)，8.03(1H，d).
制备实施例174-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]邻氨基苯甲酸(化合物17)的合成以与制备实施例8相同的方式处理2.84g(6.9mmol)3-苯氧羰基氨基-4-叔丁氧羰基苯磺酰胺和2.67g(6.99mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到3.74g(产率77％)2-{[(3-苯氧羰基氨基-4-叔丁氧羰基苯磺酰氨基)羰基]氨基}-4-氯苯甲酸苄基酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)1.54(9H，s)，5.19(2H，s)，5.34(2H，s)，7.05(1H，m)，7.34-7.58(10H，m)，7.60(1H，d)，7.90(1H，d)，7.98(1H，d)，8.50(1H，br)，8.62(1H，s)，10.00(1H，br)，10.41(1H，s).
然后，以相同方式处理3.74g(5.39mmol)所得磺酰脲，得到690mg(2步产率30％)的4-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]邻氨基苯甲酸叔丁基酯，然后进行类似的脱丁基反应，得到503mg(产率84％)标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)7.14(1H，s)，7.18(1H，d)，7.25(1H，d)，7.59(1H，s)，7.87(1H，d)，7.89(1H，d)，11.62(1H，s).
制备实施例184-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]邻氨基苯甲酸一钠盐(化合物18)的合成将50mg(0.13mmol)化合物17悬浮于约1ml THF中，然后滴加126μl 1N氢氧化钠水溶液。证实该溶液达到均匀后，加入30ml水并将该混合物冻干，定量地得到52mg非晶形标题化合物。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)7.11-7.22(3H，m)，7.37(1H，s)，7.83(1H，d)，7.91(1H，d).
制备实施例193-(4-羟基苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物19)的合成以与制备实施例5相同的方式处理1.50g(7.03mmol)4-烯丙氧基苯磺酰基异氰酸酯和1.2g(7.03mmol)4-氯邻氨基苯甲酸，得到1.5g(53％)3-(4-烯丙氧基苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮。类似地处理500mg(1.27mmol)该产物，得到405mg(产率90％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)6.98(2H，d)，7.11(1H，s)，7.23(1H，d)，7.85(1H，d)，8.00(2H，d)，11.25(1H，br).
制备实施例204-[(2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]水杨酸(化合物20)的合成以与制备实施例17相同的方式处理618mg(2.26mmol)4-叔丁氧羰基-3-羟基苯磺酰胺和613mg(2.26mmol)2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸甲酯，得到792mg(产率78％)2-{[(4-叔丁氧羰基-3-羟基苯磺酰氨基)羰基]氨基}苯甲酸甲酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，CDCl3)1.60(9H，s)，3.97(3H，s)，7.09(1H，t)，7.49-7.52(2H，m)，7.65(1H，d)，7.90(1H，d)，8.01(1H，dd)，8.33(1H，d)，10.98(1H，s)，11.18(1H，s).
然后，以相同方式处理790mg(1.75mmol)所得磺酰脲产物，得到100mg(3步产率8％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)7.13(1H，d)，7.22(1H，t)，7.63-7.69(3H，m)，7.87(1H，d)，8.01(1H，d)，11.57(1H，s).
制备实施例215-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]水杨酸(化合物21)的合成以与制备实施例17相同的方式处理320mg(1.17mmol)3-叔丁氧羰基-4-羟基苯磺酰胺和447mg(1.17mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到611mg(产率93％)2-{[(3-叔丁氧羰基-4-羟基苯磺酰氨基)羰基]氨基)-4-氯苯甲酸甲酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，CDCl3)1.62(9H，s)，5.35(2H，s)，7.01-7.05(2H，m)，7.37-7.41(5H，m)，7.96(1H，d)，8.10(1H，dd)，8.46-8.48(2H，m)，10.99(1H，s)，11.66(1H，s).
然后，以相同方式处理611mg(1.09mmol)所得磺酰脲产物，得到114mg(3步产率33％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)， PMR(δppm，DMSO-d6)7.11(1H，s)，7.19(1H，d)，7.24(1H，d)，7.86(1H，d)，8.20(1H，d)，8.56(1H，s)，11.57(1H，s).
制备实施例223-(3-乙酰胺基-4-甲氧基苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物22)的合成以与制备实施例8相同的方式处理500mg(2.19mmol)3-乙酰氨基-4-甲氧基苯磺酰胺和836mg(2.19mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到812mg(产率70％)2-{[(3-乙酰氨基-4-甲氧基苯磺酰氨基)羰基]氨基}-4-氯苯甲酸苄基酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)2.12(3H，s)，3.93(3H，s)，5.3 6(2H，s)，7.20(1H，d)，7.24(1H，d)，7.36-7.48(5H，m)，7.69(1H，d)，7.96(1H，d)，8.24(1H，s)，8.67(1H，s)，9.39(1H，s)，10.25(1H，s)，12.11(1H，br).
然后，以相同方式处理611mg(1.09mmol)所得磺酰脲产物，得到250mg(2步产率39％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)， PMR(δppm，DMSO-d6)2.12(3H，s)，3.95(3H，s)，7.12(1H，s)，7.23(1H，d)，7.30(1H，d)，7.85(1H，d)，7.89(1H，d)，8.80(1H，s)，9.42(1H，s)，11.59(1H，br).
制备实施例233-(3-氨基-4-甲氧基苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物23)的合成以与制备实施例17相同的方式处理400mg(1.40mmol)3-叔丁氧羰基氨基-4-甲氧基苯磺酰胺和533mg(1.40mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到86mg(4步产率16％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)3.81(3H，s)，7.26-7.37(5H，m)，7.77(1H，s)，7.90(1H，d)，7.94(1H，d)，11.73(1H，s).
制备实施例247-氯-3-(4-甲氧基-3-甲基磺酰氨基苯磺酰基)-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮(化合物24)的合成以与制备实施例8相同的方式处理500mg(1.89mmol)4-甲氧基-3-甲磺酰氨基苯磺酰胺和722mg(1.89mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到888mg(产率83％)2-({[(4-甲氧基-3-甲磺酰氨基)苯磺酰氨基]羰基}氨基)-4-氯苯甲酸苄基酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)2.12(3H，s)，3.93(3H，s)，5.36(2H，s)，7.20(1H，d)，7.24(1H，d)，7.36-7.48(5H，m)，7.69(1H，d)，7.96(1H，d)，8.24(1H，s)，8.67(1H，s)，9.39(1H，s)，10.25(1H，s)，12.11(1H，br).
然后，以相同方式处理880mg(1.55mmol)所得磺酰脲产物，得到620mg(2步产率85％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)， PMR(δppm，DMSO-d6)3.04(3H，s)，3.94(3H，s)，7.11(1H，s)，7.23(1H，d)，7.34(1H，d)，7.86(1H，d)，7.99(1H，d)，8.10(1H，s).
制备实施例254-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]-1-羟基萘-2-甲酸(化合物25)的合成以与制备实施例17相同的方式处理323mg(1.00mmol)3-叔丁氧羰基-4-羟基-1-萘磺酰胺和381mg(1.00mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到447mg(产率73％)4-({[(2-苯氧羰基-5-氯苯氨基)羰基]氨基}磺酰基)-1-羟基-2-萘甲酸叔丁基酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)1.66(9H，s)，5.34(3H，s)，6.98(1H，d)，7.35-7.48(5H，m)，7.66(1H，m)，7.81(1H，m)，7.89(1H，d)，8.37(2H，m)，8.44(1H，s)，8.71(1H，d)，10.02(1H，br)，12.52(1H，br).
然后，以相同方式处理445mg(0.72mmol)所得磺酰脲产物，得到56mg(3步产率18％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)7.08(1H，s)，7.20(1H，d)，7.63(1H，t)，7.77(1H，t)，7.84(1H，d)，8.42(1H，d)，8.51(1H，d)，8.75(1H，s)，11.57(1H，s).
制备实施例265-[(7-氯-2，4(1 H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]邻氨基苯甲酸(化合物26)的合成以与制备实施例17相同的方式处理834mg(2.05mmol)4-苯氧羰基氨基-3-叔丁氧羰基苯磺酰胺和783mg(2.05mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到1.18g(产率83％)2-{[(4-苄氧羰基-3-叔丁氧羰基苯磺酰氨基)羰基]氨基}-4-氯苯甲酸苄基酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，CDCl3)1.56(9H，s)，5.22(2H，s)，5.37(2H，s)，7.04(1H，dd)，7.33-7.42(10H，m)，7.97(1H，d)，8.14(1H，d)，8.45(1H，d)，8.60(1H，d)，8.65(1H，d)，11.01(1H，s)，11.11(1H，s).
然后，以相同方式处理1.17g(1.69mmol)所得磺酰脲产物，得到404mg(3步产率60％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)， PMR(δppm，DMSO-d6)6.89(1H，d)，7.11(1H，s)，7.23(1H，d)，7.85(1H，d)，7.98(1H，d)，8.51(1H，s)，11.51(1H，s).
制备实施例274-[(7-甲氧基-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]邻氨基苯甲酸(化合物27)的合成以与制备实施例17相同的方式处理500mg(1.23mmol)3-苄氧羰基氨基-4-叔丁氧羰基苯磺酰胺和460mg(1.22mmol)4-甲氧基-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到15mg(4步产率3.1％)标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)， PMR(δppm，DMSO-d6)3.82(3H，s)，6.58(1H，s)，6.80(1H，d)，7.16(1H，d)，7.56(1H，s)，7.80(1H，d)，7.90(1H，d)，11.49(1H，s).
制备实施例28(±)-7-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]-2-氧代-1H，3H-喹啉-3-甲酸(化合物28)的合成以与制备实施例17相同的方式处理400mg(1.23mmol)(±)-3-叔丁氧羰基-2-氧代-1H，3H-喹啉-7-磺酰胺和468mg(1.23mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到649mg(产率86％)8-({[(2-苄氧羰基-5-氯苯氨基)羰基]氨基}磺酰基)-2-氧代-1，2，3，4-四氢-3-喹啉甲酸叔丁基酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，CDCl3)1.32(9H，s)，3.18-3.30(2H，m)，3.54(1H，m)，5.35(2H，s)，6.85(1H，m)，7.00(1H，m)，7.35-7.39(5H，m)，7.87-7.96(3H，m)，8.47(1H，m)，8.78(1H，br)，10.92(1H，br).
然后，以相同方式处理640mg(1.04mmol)所得磺酰脲产物，得到258mg(3步产率55％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)3.23-3.31(2H，m)，3.59(1H，t)，7.07(1H，d)，7.12(1H，s)，7.25(1H，d)，7.86(1H，d)，7.96(1H，d)，7.98(1H，d)，10.84(1H，s)，11.60(1H，s).
制备实施例29(±)-6-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]-3-氧代-1，4-苯并噁嗪-2-甲酸(化合物29)的合成以与制备实施例17相同的方式处理300mg(0.91mmol)(±)-2-叔丁氧羰基-3-氧代-1，4-苯并噁嗪-6-磺酰胺和349mg(0.91mmol)4-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到417mg(产率74％)5-({[(2-苄氧羰基-5-氯苯氨基)羰基]氨基}磺酰基)-3-氧代-3，4-二氢-2H-1，4-苯并噁嗪-2-甲酸叔丁基酯。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)1.29(9H，s)，5.37(2H，s)，5.42(2H，s)，7.19-7.26(2H，m)，7.37-7.57(7H，m)，7.97(1H，d)，8.25(1H，d)，10.27(1H，s)，11.25(1H，s)，12.22(1H，br).
然后，以相同方式处理417mg(0.68mmol)所得磺酰脲产物，得到100mg(3步产率32％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)5.47(1H，s)，7.11(1H，s)，7.24(1H，d)，7.29(1H，d)，7.76(1H，s)，7.78(1H，d)，7.86(1H，d)，11.25(1H，s)，11.62(1H，s).
制备实施例304-[(7-羟基-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]邻氨基苯甲酸(化合物30)的合成以与制备实施例17相同的方式处理620mg(1.53mmol)3-苄氧羰基氨基-4-叔丁氧羰基苯磺酰胺和550mg(1.51mmol)4-羟基-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到25mg(4步产率4％)标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)6.48(1H，s)，6.61(1H，d)，7.14(1H，d)，7.51(1H，s)，7.70(1H，d)，7.90(1H，d)，10.80(1H，s)，11.39(1H，s).
制备实施例314-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]-2-N-丙酰基邻氨基苯甲酸(化合物31)的合成将840mg(1.86mmol)化合物17溶于8ml 1，4-二噁烷中，加入240μl(2.79mmol)丙酰氯，然后将所得混合物在60℃下搅拌过夜。往该反应溶液中加入过量水并用乙酸乙酯萃取该混合物。将如此得到的有机层洗涤，干燥并浓缩，得到粗产物4-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]-2-N-丙酰基邻氨基苯甲酸叔丁基酯。将所得该粗产物在室温下在3ml三氟乙酸中搅拌1小时，然后真空浓缩该反应溶液，得到粗产物。该产物经乙醚洗涤，得到400mg(2步产率48％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)1.10(3H，t)，2.45(2H，dd)，7.11(1H，s)，7.24(1H，d)，7.85(1H，d)，7.88(1H，d)，8.17(1H，d)，9.18(1H，s)，11.07(1H，s)，11.63(1H，s).
制备实施例324-[(6-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]邻氨基苯甲酸(化合物32)的合成以与制备实施例17相同的方式处理300mg(0.74mmol)3-苄氧羰基氨基-4-叔丁氧羰基苯磺酰胺和310mg(0.81mmol)5-氯-2-N-苯氧羰基邻氨基苯甲酸苄基酯，得到75mg(4步产率26％)标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)7.13-7.20(2H，m)，7.56(1H，s)，7.72(1H，d)，7.82(1H，s)，7.90(1H，d)，11.68(1H，s).
制备实施例334-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]-2-N-甲磺酰基邻氨基苯甲酸(化合物33)的合成以与制备实施例3相同的方式处理200mg(0.44mmol)化合物17，得到81mg 4-[(7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮-3-基)磺酰基]-2-N-甲磺酰基邻氨基苯甲酸叔丁基酯。对该产物进行相同的脱丁基反应，得到53mg(2步产率25％)的标题化合物。性质无色结晶，熔点＞200℃(分解)，PMR(δppm，DMSO-d6)3.24(3H，s)，7.11(1H，s)，7.25(1H，d)，7.85-7.91(2H，m)，8.23(1H，d)，8.39(1H，s)，11.05(1H，br)，11.70(1H，s).
制备实施例343-(3-氨基苯磺酰基)-7-氯-2，4(1H，3H)-喹唑啉二酮甲磺酸盐(化合物34)的合成将2.15g(6.10mmol)化合物12溶于65ml THF中并滴加0.4ml甲磺酸。往该溶液中，加入200ml乙醚并将过滤所得沉淀，得到2.59 g(产率95％)的标题化合物。性质无色非晶形物，PMR(δppm，DMSO-d6)2.35(3H，s)，6.98(1H，d)，7.12(1H，m)，7.25(1H，m)，7.34(2H，s)，7.43(1H，m)，7.86(1H，s)，11.64(1H，s).
实施例1胃促胰酶抑制活性的测定按照Urata等的方法(J.Biol.Chem.，1990，265，22348)纯化人心脏胃促胰酶。如下测定本发明喹唑啉衍生物对胃促胰酶的抑制活性。将纯化的酶用0.01M Tris-盐酸缓冲液(pH＝7.5)、1M氯化钠和0.01％Triton X-100稀释到适宜浓度得到酶溶液。将Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-MCA(Peptide Institute Inc.)溶于10mM二甲亚砜(下文称DMSO)中并用含1M氯化钠和0.01％Triton X-100的0.1M Tris-盐酸缓冲液(pH＝7.5)稀释20倍，得到底物溶液。
将5μl试验样品的DMSO溶液加到75μl酶溶液中并在30℃预先保温10分钟。然后，将20μl底物溶液加到该试验样品-酶混合物中并于30℃保温。10分钟后，加入50μl 30％的乙酸以使酶反应停止。用荧光光度计定量测定产生的AMC的量。同时，用5μl DMSO代替试验样品溶液并同时进行反应，作为对照。根据对照值计算对人胃促胰酶的抑制活性，然后确定抑制百分数和50％抑制浓度(IC50)表示。
表I显示了代表性化合物的IC50值。
表1
实施例2胃促胰酶抑制剂对小鼠中胃促胰酶活性的影响将胃促胰酶抑制剂(化合物18)腹膜内使用于ICR小鼠(8周龄，n＝3)。12小时和24小时后，从小鼠的小肠、舌、背部皮肤、前腿和后腿提取胃促胰酶并测定其酶活性。用含2M KCl和0.1％聚亚乙基辛基苯基醚(TritonX-100)的10mM从组织提取胃促胰酶。通过测量合成底物Suc-Phe-Pro-Phe-对硝基苯胺的水解率测定胃促胰酶活性。对照组中，在24小时中施用盐水。
结果与施用盐水组相比，施用化合物18对小肠中胃促胰酶活性的抑制率约为80％，而化合物18对舌、背部皮肤和腿中的抑制率为约50％(见附图1)。这些结果表明即使在体内，化合物18也具有抑制胃促胰酶的作用。
实施例3测定Tsk小鼠-硬皮病模型中胃促胰酶的活性测定5、10和20周龄的Tsk小鼠皮肤中的胶原含量、皮下纤维层厚度、肥大细胞数量、胃促胰酶活性和胃促胰酶mRNA，并将它们与对照小鼠(pallid小鼠)进行比较(n＝6)(北美风湿病临床(Rheum.Dis.Clin.North Am.)16，153，1990)。用HPLC测量羟基脯氨酸-胶原指示剂，测定胶原含量；用成像分析系统测量纤维层的面积，然后以偶氮卡红染色进行学组织分析来测定纤维层厚度。通过计数用甲苯胺蓝染色的颗粒的细胞数量计算肥大细胞的密度。按照先前已知的方法(Arch.Dermatol.Res.290，553，1998)，从皮肤中提取胃促胰酶，并如实施例2所述测定活性。用竞争性RT-PCR方法(生物技术(Biotechniques)21，268，1996)，仅测定10周龄组皮肤胃促胰酶(MMCP-4)的mRNA。
结果5周龄Tsk小鼠中皮肤羟基脯氨酸的量与对照pallid小鼠大致相同，但在10周和20周龄组，该含量显著高于对照小鼠(附图2)(学生t检验)。组织学分析揭示，将5周龄组与对照组相比，Tsk小鼠的纤维层明显肥厚，并且这种差异随着年龄的增加而增大(附图3)。在5-20周龄，Tsk小鼠皮肤中肥大细胞的密度以及皮肤胃促胰酶活性均高于对照小鼠(附图4和5)。此外，测定10周龄小鼠胃促胰酶MMCP-4的mRNA。结果，MMCP-4的mRNA量明显高于对照小鼠(附图6)。
实施例4胃促胰酶抑制剂对Tsk小鼠-硬皮病模型的作用给13周龄Tsk小鼠(n＝5)以50mg/kg/天的剂量腹膜内施用胃促胰酶抑制剂(化合物18)，每日一次，施用2周。最后一次施用后5小时，测定皮下纤维层肥厚的程度和皮肤胃促胰酶活性并将其与施用盐水的组相比。以与实施例3相同的方式测量这些参数。
结果病理组织学分析揭示，施用化合物18的Tsk小鼠皮下纤维层厚度约为施用盐水组的60％(附图7)。另一方面，施用化合物18的组的胃促胰酶活性为施用盐水组的57％(附图8)。这些结果表明胃促胰酶抑制剂使各种纤维化疾病中结缔组织的异常累积正常化，因此可用于预防或治疗纤维生成。
实施例5博来霉素诱发的肺纤维变性模型中肺部羟基脯氨酸含量的变化通过在麻醉下，对10周龄雄性ICR小鼠(Charles River Japan)气管内施用博来霉素(Nippon Kayaku)诱发肺纤维变性(n＝10)。即，将博来霉素(0.04mg或0.08mg)悬浮于50μl盐水中并用100μl注射器(Hamilton Co.制造)施用于呼吸道中。施用博来霉素两周后，切取肺部并按照先前描述的方法(Anal.Biochem.19，249，1967)分析羟基脯氨酸-组织胶原的指示剂。此外，羟基脯氨酸的量以每个肺中的量表示。另外，以类似方式施用盐水代替博来霉素的小鼠作为对照组(n＝10)。
结果博来霉素的施用以剂量依赖方式增加肺部中羟基脯氨酸的含量(附图9)。在0.04mg/小鼠和0.08mg/小鼠的剂量下，与盐水组相比的羟基脯氨酸含量分别为1.15倍和1.25倍(p分别＜0.05和＜0.01，Dunnett检验)。该结果表明气管内施用博来霉素诱发肺纤维变性。在下列试验中，博来霉素的剂量为0.08mg。
实施例6博来霉素诱发的肺纤维变性中肺部胃促胰酶活性的变化按照实施例5中描述的方法，向小鼠呼吸道施用0.08mg博来霉素诱发肺纤维变性(n＝3)。施用后2周切取肺，并如实施例3中描述的方法测定胃促胰酶活性。注意，以类似施用盐水代替博来霉素的小鼠作为对照组(n＝3)。
结果施用博来霉素小鼠的肺胃促胰酶活性显著地高于施用盐水的小鼠(附图10)。施用博来霉素组的活性是施用盐水组的约4.5倍(p＜0.05，学生t检验)。在肺纤维变性模型中胃促胰酶活性增高的上述发现表明胃促胰酶与肺纤维变性的发病机理有关。
实施例7胃促胰酶抑制剂在博来霉素诱发的肺纤维变性模型中的作用按照实施例5中描述的方法诱发肺纤维变性(n＝10)，为研究胃促胰酶(化合物34)对肺纤维变性的作用，采用与实施例5相同的方法分析肺组织中羟基脯氨酸的量。另外，将胃促胰酶抑制剂悬浮于含0.5％羟丙基纤维素的盐水(HPC/盐水)中并在施用博来霉素后立即开始以10mg/kg或50mg/kg剂量腹膜内施用，每天一次，每周施用五天，共施用2周。此外，同样施用博来霉素，但用HPC/盐水代替化合物34的组作为对照组。
结果50mg/kg剂量的胃促胰酶抑制剂(化合物34)明显抑制由于施用博来霉素引发的肺中羟基脯氨酸量的增高(p＜0.05，Dunnett检验)。该抑制率为约46％(附图11)。化合物34在10mg/kg剂量下对该模型几乎没有作用。
总之，为阐明胃促胰酶抑制剂对各类纤维变性的作用，用硬皮病(皮肤纤维变性)和肺纤维变性模型进行研究。结果表明与对照小鼠相比，Tsk小鼠中的肥大细胞数量和胃促胰酶活性及其mRNA随着皮肤纤维层增厚而增高(实施例3)。施用胃促胰酶抑制剂化合物18抑制胃促胰酶活性并且显著抑制皮肤纤维层的增厚(实施例4)。此外，在博来霉素性肺纤维变性模型中，作为肺纤维变性标志的肺中羟基脯氨酸量(实施例5)和肺中胃促胰酶活性(实施例6)都增高了。施用胃促胰酶抑制剂化合物34抑制羟基脯氨酸量的增高(实施例7)。这些结果表明胃促胰酶抑制剂缓解细胞外基质代谢障碍，可用于预防或治疗各类纤维变性，包括硬皮病和肺纤维变性。
制剂实施例1片剂的制备将100.0g化合物1与22.5g微晶纤维素和2.5g硬脂酸镁混合，然后用直接压片机压片，制备直径为9mm的含200mg化合物1的片剂，每片重250mg。
制剂实施例2颗粒剂的制备将30g化合物1与265g乳糖和5g硬脂酸镁混合。将该混合物压模后粉碎，制粒并过筛得到10％的20-50目颗粒。
制剂实施例3栓剂的制备将Vitepsol H-15(Dynamite Nobel Co.)温热融化。往其中加入化合物1使其达到12.5mg/ml的浓度。将其均匀混合后，加到2ml直肠栓剂模型中并使其冷却，得到含25mg化合物1的直肠栓剂。
工业实用性依据本发明，胃促胰酶抑制剂通过其缓解细胞外基质代谢障碍的作用可有效预防和/或治疗皮肤和其它器官的纤维变性。
权利要求
1.一种预防或治疗与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性的药物，该药物含有胃促胰酶抑制剂作为有效成分。
2.权利要求1的预防或治疗性药物，其中与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性是至少一种选自下列的疾病硬皮病、肺纤维变性、良性前列腺肥大、心肌梗塞后心肌纤维生成、心肌纤维变性、骨骼肌纤维变性、术后粘连、肥大性瘢痕和瘢痕疙瘩、硬变、肝纤维变性、肾纤维变性、纤维性血管病及糖尿病并发症，如由纤维性微血管炎导致的视网膜炎、神经官能症、肾病和外周动脉炎或者与这些有关的病症。
3.一种预防或治疗与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性的药物组合物，含有缓解细胞外基质代谢障碍量的胃促胰酶抑制剂和可药用赋形剂。
4.权利要求3的药物组合物，其中与细胞外基质代谢障碍有关的纤维变性是至少一种选自下列的疾病硬皮病、肺纤维变性、良性前列腺肥大、心肌梗塞后心肌纤维生成、心肌纤维变性、骨骼肌纤维变性、术后粘连、肥大性瘢痕和瘢痕疙瘩、硬变、肝纤维变性、肾纤维变性、纤维性血管病及糖尿病并发症，如由纤维性微血管炎导致的视网膜炎、神经官能症、肾病和外周动脉炎或者与这些有关的病症。
5.一种缓解细胞外基质代谢障碍的药物，含有胃促胰酶抑制剂作为有效成分。
6.权利要求1或2的预防或治疗性药物，其中所述胃促胰酶抑制剂是下式(I)的喹唑啉衍生物及其可药用盐 其中，A环表示芳基；R1表示羟基、氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级烷基氨基、可被羧酸基取代的C7-C10低级芳烷基氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环羧酸酰化的氨基、可被酸羧基取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级烷基或者可被羧酸基取代的C2-C4链烯基；R2和R3可以相同或不同，并且表示氢原子、未取代的或取代的C1-C4低级烷基、卤原子、羟基、C1-C4低级烷氧基、氨基、未取代的或取代的C1-C4低级烷基氨基、未取代的或取代的C7-C10芳烷基氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基，或者羧酸基，或者当A环是苯环时，R1和R2可与该取代的苯环一起形成可被羧基取代的稠合杂环，其中环中的碳原子可形成羰基并且R3定义如上；并且X表示氢原子、C1-C4低级烷基、C1-C4低级烷氧基、卤原子、羟基、氨基或硝基。
7.权利要求3或4的药物组合物，其中所述胃促胰酶抑制剂是下式I的喹唑啉衍生物及其可药用盐 其中，A环表示芳基；R1表示羟基、氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级烷基氨基、可被羧酸基取代的C7-C10低级芳烷基氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级烷基或者可被羧酸基取代的C2-C4链烯基；R2和R3可以相同或不同，并且表示氢原子、未取代的或取代的C1-C4低级烷基、卤原子、羟基、C1-C4低级烷氧基、氨基、未取代的或取代的C1-C4低级烷基氨基、未取代的或取代的C7-C10芳烷基氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基，或者羧酸基，或者当A环是苯环时，R1和R2可与该取代的苯环一起形成可被羧基取代的稠合杂环，其中环中的碳原子可形成羰基并且R3定义如上；并且X表示氢原子、C1-C4低级烷基、C1-C4低级烷氧基、卤原子、羟基、氨基或硝基。
8.权利要求5的缓解细胞外基质代谢障碍的药物，其中所述胃促胰酶抑制剂是下式I的喹唑啉衍生物及其可药用盐 其中，A环表示芳基；R1表示羟基、氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级烷基氨基、可被羧酸基取代的C7-C10低级芳烷基氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级烷基或者可被羧酸基取代的C2-C4链烯基；R2和R3可以相同或不同，并且表示氢原子、未取代的或取代的C1-C4低级烷基、卤原子、羟基、C1-C4低级烷氧基、氨基、未取代的或取代的C1-C4低级烷基氨基、未取代的或取代的C7-C10芳烷基氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级脂肪酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环羧酸酰化的氨基、可被羧酸基取代的C1-C4低级链烷磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的芳环磺酸磺酰化的氨基、可被羧酸基取代的杂芳环磺酸磺酰化的氨基，或者羧酸基，或者当A环是苯环时，R1和R2可与该取代的苯环一起形成可被羧基取代的稠合杂环，其中环中的碳原子可形成羰基并且R3定义如上；并且X表示氢原子、C1-C4低级烷基、C1-C4低级烷氧基、卤原子、羟基、氨基或硝基。
全文摘要
一种抑制皮肤或其它各种器官的纤维发生的发展同时预防多种并发症的发展的预防性或治疗性药物,并且由于其无副作用而是如此的安全以致于可提高患者的每日生活质量。具体地,含有胃促胰酶抑制剂作为活性成分的纤维变性的预防性或治疗性药物,其中的胃促胰酶抑制剂是通式(I)的喹唑啉衍生物或其药用盐。
文档编号A61P11/00GK1366461SQ01800794
公开日2002年8月28日 申请日期2001年2月22日 优先权日2000年2月22日
发明者深见治一, 奥西秀树, 柿添荣一 申请人:三得利株式会社