专利名称：Ⅱ型胶原蛋白口服薄膜制剂的制作方法
国外研究资料表明服用鸡骨来源的II型胶原蛋白(type IICollagen)用于治疗类风湿关节炎(RA)安全、有效。通过有效的数据测试，包括红肿、触痛关节记数、握紧强度、50步行走时间、晨僵周期、疼痛程度的病理评价，在受试的患者完成3个月的治疗程序后，有80％的患者降低了红肿和触痛关节计数，其下降比率为红肿计数平均下降61％，触痛关节计数平均下降54％，其它有效数据也发生明显改变。在受试期间，没有副作用发生。在严重的RA患者中，采用双盲实验，60位患者服用3个月后，全部病人的关节肿胀和关节疼痛明显减轻，临床观察未发现明显的副作用。经过对270多例的II期临床研究，结果显示其明显的药效作用和安全性。其800例患者III期临床研究也显示了明显的药效作用和安全性结果，有效率为83％。
近年来许多学者通过研究和临床实践，认为RA是一种自身免疫性疾病，其免疫发病机制被普遍承认。由于外来因素的作用，免疫系统的反应导致异常免疫而形成类风湿关节炎这类自身免疫性疾病，造成T细胞对自身组织抗原产生活性并攻击、损伤健康组织和器官。研究发现，在RA病灶区，II型胶原蛋白明显减少，而通过口服与攻击组织相关的某种特异性蛋白(如II型胶原蛋白)，能使体内对II型胶原蛋白的异常反应恢复到认同，从而起到治疗RA的作用。鸡II型胶原蛋白的有效性和安全性已被动物实验和临床研究证实。
本专利中使用的鸡II型胶原蛋白制备工艺为，将清洗后的鸡软骨搅碎匀浆、酶解、透析、层析纯化，得到的鸡II型胶原蛋白纯度达98％。
由于II型胶原蛋白的特性且治疗剂量每次仅需口服60至100多微克，研制其满意的制剂是个难题，以往研制的冻干粉剂、胶囊、片剂均不令人满意。虽然II型胶原蛋白在水中有相当程度的溶解度，但不稳定，故不宜制成水溶液制剂。冻干粉剂虽然保持了原料药的原状，其不足是患者服用不便，且生产成本高。胶囊和片剂虽便于病人服用，但由于辅料量大，且其中须有固体才能制备，而II型胶原蛋白在制剂中仅占千分之一左右甚至更少，因此不但存在生产中与辅料混匀困难的问题，也不利于质量控制中的II型胶原蛋白含量测定。颗粒剂比胶囊和片剂的缺点还严重，如用大量辅料则更难混匀，如按胶囊和片剂的辅料量生产则包装困难。
迄今II型胶原蛋白的制剂大多为胶囊，但有关研制者们忽视了一个重要的问题，那就是该制剂的胶囊外壳本身的药效作用。因为制做空心胶囊的主要原料是明胶，也就是胶原蛋白(Collagen)，其中含大量II型胶原蛋白或类似物。虽然胶囊外壳的质量只占很少部分，但主药在一粒胶囊中只有100微克左右，胶囊外壳的问题就突出了。基于以上原因，II型胶原蛋白胶囊在临床试验所显示的药效作用不仅来自II型胶原蛋白，还来自胶囊外壳，因此，以此来评价II型胶原蛋白的作用是不可靠的。美国的Autoimmune公司在II型胶原蛋白胶囊的临床试验中，安慰剂也显示了治疗作用，造成该项研究相当严重的损失，是很好的教训。因此，胶囊剂型对II型胶原蛋白尤其不适合。
为了解决以上各种不足和缺陷，本发明针对II型胶原蛋白制剂的特殊性研制了口服薄膜制剂。其创新在于，将II型胶原蛋白与辅料制备成溶液，主药与辅料的混合完全处于液体状态，然后制成膜剂。本发明具有以下优点(1)II型胶原蛋白与辅料的混合完全在溶液中进行，均匀度极好，利于生产达到高质量稳定；(2)制剂的辅料少，且全部能溶于水，而制剂中II型胶原蛋白的含量达0.8％，利于质量控制；(3)避免了其胶囊制剂在临床试验和临床使用中胶囊外壳的治疗作用，使临床试验和临床使用对II型胶原蛋白的评价可靠；(4)生产工艺简便、设备较简单，生产成本低；(5)服用和携带方便，有利于患者使用。
药效学研究表明，鸡II型胶原蛋白给药后对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀、大鼠棉球肉芽肿有极显著抑制作用，对大鼠佐剂关节炎有显著的预防和治疗作用。实例说明1.鸡II型胶原蛋白的提取工艺取冷冻鸡软骨解冻，去除软骨上附着的结带组织和肌肉组织，用蒸馏水冲洗后，加入2MgCl2的0.05M Tris-HCl(pH7.5)溶液，捣碎匀浆，于4℃搅拌24小时。离心取沉淀，混匀悬浮在含有2mg/ml胃蛋白酶的0.2M醋酸溶液中，4℃搅拌60小时，离心取上清液，调pH中性，加入固体NaCl至终浓度20％，离心取沉淀，溶于0.2M醋酸溶液，加入固体NaCl至终浓度10％，离心取沉淀，溶于0.2％醋酸溶液。样品在0.02M Na2HPO4溶液(pH8)中透析后，上DEAE纤维层析柱，用0.2M NaCl溶液(Tris，pH7.5)洗脱，将洗脱液透析后，离心取沉淀，继而用蒸馏水在4℃透析后，将样品真空冷冻干燥，得鸡II型胶原蛋白，其纯度达98％。2.鸡II型胶原蛋白薄膜的制备取聚乙烯醇3g、甘油1ml和适量注射用水，混合搅拌膨胀后，于90℃水浴上加热使溶解，趁热过80目筛，得无色透明液体，流通蒸气100℃灭菌30分钟，冷却至适当温度。无菌操作，将洁净的鸡II型胶原蛋白24mg(按纯品计算)在溶液状态下与上液等温混匀，加注射用水至50ml，保温50℃左右，在涂有少量液状石蜡的平板玻璃上制成24000平方毫米的膜，在超净台上吹干，紫外线照射正、反面各10分钟，切割成100平方毫米的小片，每片含II型胶原蛋白100微克。3.鸡II型胶原蛋白对动物模型的药效鸡II型胶原蛋白灌胃给药0.12、0.03、0.01mg/kg/day均能明显抑制大鼠角叉菜引起的足跖肿胀，均能极显著抑制大鼠慢性棉球肉芽肿组织增生，对诱导大鼠佐剂关节炎产生明显的免疫口服耐受。
权利要求
1.将II型胶原蛋白与聚乙烯醇、甘油、水在溶液状态下混匀后，涂膜制成的II型胶原蛋白口服薄膜制剂。
2.权利要求1中的配方为II型胶原蛋白120mg，聚乙烯醇15g，甘油5ml，注射用水加至250ml。
3.权利要求2中的成分比例可改变适用，例如改变II型胶原蛋白、注射用水的用量等。
4.权利要求1中的剂型可改变物理性状适用，例如制成细棒、颗粒或改变其硬度等。
5.权利要求2中的聚乙烯醇用羟丙纤维素、羟丙甲纤维素、羧甲基纤维素等类似性质的辅料混合、代替或混合代替同样适用。
6.权利要求2中的甘油用类似性质的材料混合、代替或混合代替同样适用。
7.权利要求2中的注射用水可用其它纯净水代替，例如蒸馏水等。
8.权利要求1中的II型胶原蛋白主要指鸡软骨来源的II型胶原蛋白，其它动物来源的II型胶原蛋白同样适用。
9.权利要求1中的剂型具有治疗和预防类风湿关节炎及其相关症状的药物作用和价值。
全文摘要
II型胶原蛋白是治疗类风湿关节炎的安全、有效的药物。由于其特殊性，研制满意的制剂相当困难，其以往剂型均存在缺陷。本发明将II型胶原蛋白制成口服薄膜制剂，解决了该药物其它剂型的不足之处，使该药物的临床治疗效果可靠，生产质量稳定。
文档编号A61P19/00GK1435256SQ0214899
公开日2003年8月13日 申请日期2002年11月18日 优先权日2002年11月18日
发明者徐起初 申请人:徐起初