专利名称：一种以裸花紫珠和血竭作为活性组合的药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及包含裸花紫珠和血竭的药物组合物，具体地说是通过添加血竭而协同增强裸花紫珠有益效果的药物组合物。
背景技术：
裸花紫珠(Callicarpa Nudiflora)系马鞭草科植物裸花紫珠的叶，含有黄酮甙、缩合鞣酸、中性树脂、酚类、多糖、羟基化合物及镁、钙、铁盐等。裸花紫珠可抑制毛细血管通透性，对早期的炎症渗出、肿胀有明显的抗炎性反应作用；同时可明显缩短出、凝血时间，止血效果显著；还能抑制多种细菌，可预防继发性感染的发生；还具有保肝降酶作用，对HFRS引起的肝脏损害有预防和治疗作用(王振华等，广东药学，1998，55-9；符建等，海南大学学报自然科学版，2002，20(2)154-157)。
裸花紫珠的药用历史悠久，具有很好的开发前景。遗憾的是，目前国内外对裸花紫珠化学成分及其活性的深入研究十分有限(参见任风芝等，天然产物研究与开发，2001，13(1)33-34)。孙书臣在CN1155437A中披露了包含天然胶原蛋白和裸花紫珠提取物组合物，该组合物是有止血、愈伤、抑菌抗感染和解毒疗疮的功效；张林文等在CN1092983A中公开了包含紫珠、益母草和乌药的抗宫炎片。
中，其优势难以得到有效发挥。例如，研究表明，裸花紫珠可有效治疗由细菌感染引起的炎症，但是对非细菌性感染引起的炎症和/或复合型炎症的效力相对不明显。虽然有人曾在细胞水平上探讨了裸花紫珠的药理作用(谢彬等，广东药学院学报，1995，11(3)141-145)，但是迄今为止，没有人对裸花紫珠与其它活性成分的组合效果提供科学的依据。
血竭，活血散瘀，定痛，止血生肌，敛疮，治跌打肿痛，内伤瘀痛；外伤出血不止，瘰疬，臁疮溃久等。另外，《血竭消炎止痛研究》(向金莲，张路晗，程睿，时珍国医国药，2001，12(2)110～111)，作者描述了血竭的消炎止痛作用；《云南血竭的化学成分及其抗真菌活性》(王锦亮，李兴从，江东福，云南植物研究，1995，24(3)171～173)作者描述了血竭的抗真菌的作用；《血竭的化学成分与临床应用研究进展》(吴平，杜青云，海峡药学，2000，12(2)1～2)描述了血竭的抗炎作用，作者提示血竭是一种“多环节作用”的抗炎药物，但并没有暗示或明确教导血竭与任何其它活性成分联用的有益效果。至今尚未见有人阐述血竭与裸花紫珠联合应用在临床上的效应。
因此，本领域技术人员很容易理解、也迫切地希望开发出这样的复配型药物组合物；它能针对性地协同增强裸花紫珠之消炎解毒、收敛止血等主要功效，同时能够对细胞感染引起的炎症、尤其是非细菌性感染引起的炎症或复合型复杂炎症有效，并能缩短病程、降低并发症的发生率，且施用方便，无不良反应，值得推广应用。
发明内容
本发明的目的之一是提供一种以裸花紫珠和血竭作为活性成分，且两者具有协同增效作用的药物组合物。
本发明的另一目的是提供上述药物组合物在制备用于预防或治疗炎症、出血性和/或病毒性肝炎相关疾病的药物中的应用。
本发明的发明人对裸花紫珠及其作用机理进行了深入的研究，特别是通过对具有抗炎作用的特定活性成分的筛选和组方，有效地解决上述问题，在此基础上的进一步研究即完成了本发明。
根据本发明的一方面，本发明提供了一种药物组合物，包括治疗有效量的裸花紫珠和血竭作为活性成分，其中活性成分的含量约为1-85％重量，优选为20-65％重量。在上下文中，所述裸花紫珠包括裸花紫珠的原粉或提取物，其中提取物包括水和/或醇提取物，也可以是其它特定溶剂(石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇)提取有效部位的提取物；所述血竭是指血竭本身及其提取物，包括水和/或醇提取物，也可以是其它特定溶剂(石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇)提取有效部位的提取物；并且可以单独地使用裸花紫珠和血竭的原粉或其用上述溶剂提取的提取物，也可以使用两种组分的原粉与上述溶剂的提取物的混合物。例如，从工业化和经济方面考虑，可采用以下提取工艺(1)裸花紫珠提取取裸花紫珠，干燥后粉碎成裸花紫珠粗粉，用3倍量的纯化水煎煮提取3次，每次三十分钟，合并提取液，趁热滤过，浓缩成稠膏，加入4倍量的95％乙醇，充分搅拌，趁热滤过，减压回收乙醇，真空干燥，粉碎后过80目筛备用。
(2)血竭提取取血竭洗净，用3倍量的95％乙醇浸泡提取3次，合并乙醇提取液，蒸出乙醇，加适量纯化水溶解并过滤。用ADS-17树脂吸附滤液，用适量纯化水洗后以70％乙醇洗脱。浓缩洗脱液，真空干燥，粉碎后过80目筛备用。
经过大量实验筛选，本发明人惊奇地发现，血竭能显著增强裸花紫珠的有益效果，同时包含血竭和裸花紫珠的组合制品比目前市售产品有显著的治疗优点。先导性试验表明，裸花紫珠与血竭的联用表现出协同作用，显著强于单独施用这两种单味药物所产生的效力。同时，本发明人还惊奇地发现，二者不同配比(例如1∶10-10∶1)与效应之间的关系是非线性的。例如，在预期裸花紫珠为主效应的范围内(例如抑菌作用)，药效并不总是随着裸花紫珠含量的增加而表现出更强的态势；同样地，在预期血竭为主效应的范围内(例如对小鼠耳肿胀的抑制作用)，药效也不总是随着血竭含量的增加而增强，推测这可能与二者存在多靶点效应有关。尤其值得注意的是，在所有先导性药理实验中均发现了上述现象，这明显不同于现有技术的教导(例如，陈玉祥等，湖南医科大学学报，1995，20(5)431-433)。经过深入研究，进一步确定了本发明中裸花紫珠与血竭的重量比例为1∶10-10∶1，优选为1∶5-5∶1，更优选为1∶1。
根据本发明的另一方面，本发明提供了裸花紫珠与血竭联用在预防或治疗炎症、出血和/或病毒性肝炎相关疾病中的应用。本发明首次创建性地提出联合给予裸花紫珠与血竭能有效地治疗和/或控制由于许多复杂原因造成的上述疾病，提供了一种新的治疗方案作为现有技术的替代。所述疾病包括但不限于裸花紫珠已知能治疗或预防的疾病种类，例如所述疾病包括感冒发热、咽喉肿痛、咽喉炎、外耳道或皮肤疖肿、结膜炎、上呼吸道感染、急慢性扁桃腺炎、泌尿系感染、出血(例如鼻、呼吸道、消化道或泌尿生殖系统出血)、急慢性鼻炎、痔疮、胃痛、急性黄疸、病毒性肝炎或烧烫伤。所述疾病也包括细菌感染和/或非细菌感染引起的炎症，例如各种妇科炎症乳腺炎、子宫颈炎、阴道炎(包括一般阴道炎、念珠菌阴道炎、滴虫性阴道炎)、肠炎、菌痢、尿路感染、胆囊炎、下肢溃疡、脚癣感染、皮肤湿疹、化脓性皮肤溃疡。所述联合给予包括顺序施用分别包含裸花紫珠、血竭的制剂，还包括施用同时含有裸花紫珠和血竭的药物制剂。
优选地，可将本发明药物组合物制成口服、静脉给药的剂型，例如颗粒剂、片剂、胶囊剂、滴丸、小丸剂或注射剂。有利地，为了适应治疗需求，还可制成供经皮或粘膜给药的剂型，例如栓剂、气雾剂或干粉吸入剂。另外，也可将本发明药物组合物加到绷带或纱布中供直接外用。
适于本发明上述剂型的活性成分可以是固、粉末或颗粒、液体形式。尤为有利的是，可采用微射流制粒机、气流粉碎机等设备，以微晶纤维素、PVP、CMC或PEG等为分散剂，将裸花紫珠、血竭制成微米量级(1-75μm粒径)、亚微米量级(100-500nm粒径)或者更细的超细颗粒，以进一步提高其疗效，减少给药剂量(例如，约为常规粉末用量的20-80％，优选35-60％)。
具体实施例方式
实施例1药效学试验例材料药物本发明裸花紫珠血竭复方片；裸花紫珠片，规格0.38g/片，海南中元药业有限公司；血竭片，规格0.5g/片，海南国瑞堂制药有限公司；阿司匹林片，焦作市化学制药厂。各药于临用前以纯化水溶解稀释。
动物昆明种小鼠和SD大鼠，均由湖北省医学动物中心提供；日本大白兔，由海南省试验动物中心提供。合格证号小鼠19-082，大鼠19-083，家兔30-003。
1.对小鼠毛细血管通透性的影响小鼠90只，雌雄各半，体重18-22g，随机分为8组(1)对照组(给予等容积蒸馏水)；(2)阿司匹林组0.2g/kg；(3)-(9)组分别给予血竭片、裸花紫珠片及不同配比的复方裸花紫珠血竭片2.0g/kg。各组每日PO给药1次，连续3天，末次给药后30min各鼠静脉注射0.1％的伊文思兰生理盐水溶液10mL/kg，随即每只给予0.6％的冰醋酸(HAC)生理盐水0.2mL，15min后脱颈椎处死，每只小鼠用6mL生理盐水数次冲洗腹腔并吸出洗涤液，合并后加生理盐水至10mL，离心上清液于722分光光度计(590nm)测其光密度(OD)值。
表1 药物对HAC所致小鼠腹腔毛细血管通性增加的影响(x±s)
a与对照组相比，p＜0.05；b与裸花紫珠片组相比，p＜0.05；c与血竭片组相比，p＜0.052.对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响小鼠分组及给药同实验1，于末次给药后1h，给小鼠右耳滴以二甲苯0.05mL/只，左耳作对照，15min后处死动物，用直径6mm的打孔器将双耳同部位切下，在感量为1mg的精密分析天平上称重，以左右耳片重之差，计出各组肿胀度，求出肿胀抑制率(％)，并比较组间差异。
表2药物对小鼠耳肿胀的影响(n＝10)(X±S)
a与对照组相比，p＜0.05；b与裸花紫珠片组相比，p＜0.05；c与血竭片组相比，p＜0.053.对蛋清所致大鼠足跖肿的影响体重为150-180g的大鼠80只，雌雄各半，随机分8组(1)对照组(给予等容积蒸馏水)；(2)阿司匹林组0.15g/kg；(3)-(8)组分别给予血竭片、裸花紫珠片及不同配比的复方裸花紫珠血竭片2.0g/kg。各组每日PO给药1次，连续3天，于末次给药后1h各组右后足垫皮下注射100％的新鲜蛋清0.05mL/只以致炎；测量致炎前后不同时间致炎的足跖关节以下的体积变化，以致炎前后体积差值为肿胀度，并进行组间比较。
表3药物对蛋清所致大鼠足跖肿胀的影响(n＝10)(X±S)
a与对照组相比，p＜0.05；b与裸花紫珠片组相比，p＜0.05；c与血竭片组相比，p＜0.05实验1-3的结果表明，裸花紫珠片和血竭片按1∶1配比制成复方后，其抗炎作用得到显著增强，与血竭片及裸花紫珠片相比具有显著性差异。另外四种配比在一定程度可增强其抗炎作用，但与血竭片、裸花紫珠片相比无显著性差异。
4.体外抗菌效果实验所用临床分离菌株共计62株，均为长沙地区各大医院的临床分离菌株。每株细菌在实验前经琼脂平板分纯，37℃过夜新鲜培养，做适当稀释后用于实验。采用琼脂二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC)，结果见表4。
表4不同配比血竭裸花紫珠的体外MIC测定结果
结果表明，对于金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大肠埃希菌，血竭片的抗菌作用较弱，但其与裸花紫珠1∶1配方的抗菌效果最佳，而2∶1、4∶1、1∶2、1∶4配比的复方片与裸花紫珠片的作用相似；对于沙门氏菌，1∶1、2∶1、4∶1配比的裸花紫珠血竭复方片抗菌效果相近，略强于血竭片、裸花紫珠片及1∶2、1∶4配比的复方片，血竭片的作用最弱。
5.解热作用取家兔24只，室温24℃，实验前2d每天测肛温4次，选体温在39.0-39.8℃及每天体温波动不超过0.3℃的动物供实验用。实验日晨测动物的基础体温后，随机分成血竭浸膏-裸花紫珠片1.2g/kg、0.6g/kg和对照组(给予等体积0.5％羧甲基纤维素钠溶液)共3组，每组8只，以伤寒Vi多糖菌苗按0.5ml/kg耳缘静脉注射后分别按10ml/kg灌胃给药1次，然后每隔1h测肛温1次。
表5药物对家兔伤寒Vi多糖菌苗所致家兔体温升高的影响(n＝8)(X±S)
注t检验，与对照组比较，*p＜0.05结果表明，血竭-裸花紫珠片1.2g/kg、0.6g/kg和对照组体温升高均于给予菌苗注射后第3h到达高峰，给药组体温分别为39.2±0.7℃和39.7±0.6℃，对照组体温为41.2±0.7℃，表明血竭-裸花紫珠片对伤寒Vi多糖菌苗所致的家兔体温升高具有一定的解热作用。
6.镇痛作用小鼠分组及给药同实验1，于末次给药后30min予浓度为0.7％HAC生理盐水0.1ml腹腔注射，观察15min内动物扭体次数，与对照组比较组间差异。
表6 血竭-裸花紫珠片对冰醋酸所致的小鼠扭体的影响(n＝10)
注*与对照组比较结果表明，血竭-裸花紫珠片1.2g/kg、0.6g/kg和0.3g/kg三个剂量组均对冰醋酸所致的小鼠扭体有非常显著的抑制作用。
7.对小鼠非特异性免疫功能(吞噬功能)的影响小鼠分组及给药同实验1，各组动物给药7d后，尾静脉按0.1ml/10g注入10％的印度墨汁后，于2min及10min眼眶取血20μl，加到4ml蒸馏水中溶解红细胞，应用722型分光光度计(600nm)测定光密度(OD)值，以OD值与对照组比较组间差异。
结果表明，血竭-裸花紫珠片1.2g/kg、0.6g/kg和0.3g/kg三个剂量组均能明显增强小鼠的非特异性功能。
表7血竭-裸花紫珠片对小鼠网状内皮系统吞噬功能的影响(X±S)
注t检验，与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.018.对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响小鼠分组及给药方法同实验1，连续给药5d，于给药第3d尾静脉注射羊红细胞致敏，给药第5d以羊红细胞注射左侧脚掌，同体积生理盐水注射右侧脚掌作对照。24小时后测量两脚掌厚度，以两者之差值与对照组比较组间差异。
表8血竭-裸花紫珠片对小鼠细胞免疫功能的影响(n＝10)
注*与对照组比较。
结果表明，血竭-裸花紫珠片1.2g/kg、0.6g/kg和0.3g/kg三个剂量组均能明显提高机体的细胞免疫功能。
实施例2片剂
示例工艺取活性成分和乳糖置于V型混合器中混匀，过筛后加适量60％乙醇制粒，60℃干燥，加入硬脂酸镁，充分混匀，压片。所得片剂可进一步包衣。
实施例3注射剂
示例工艺取血竭提取物加到注射用水中，调节PH约为6.8-8.0，搅拌完全溶解。用注射用水溶解裸花紫珠提取物，然后加至血竭提取物溶液中。加入适量活性炭，加热微沸30分钟，除炭、精滤、灌封、灭菌，即得。
实施例4 注射用粉针
示例工艺取血竭提取物10g，加注射用水适量用碳酸钠调节PH至8.0使溶解，取紫珠草提取物10g加注射用水溶解制成溶液，将紫珠草提取物水溶液加入血竭提取物溶液中加注射用水至1000ml，加入0.5％针用活性炭，加热微沸30min，冷却，除菌过滤，分装1000支，即得。
实施例5 喷雾剂
示例工艺取裸花紫珠提取物5.0g，加纯化水适量，调pH值7.5-8.0，使溶解，取血竭提取物5.0g，加纯化水适量使溶解，合并上述两溶液，加纯化水到1000mL，混匀，灌装。规格60ml/瓶。
实施例6栓剂
示例工艺取400g聚乙二醇6000、700g聚乙二醇1500，加热至65℃使熔化，搅匀，作为基质，取裸花紫珠提取物50g，血竭提取物50g，加水适量，研磨成稠膏，搅拌下加入基质中，65℃保温，搅匀，浇模，即得，规格1.2g/粒。
实施例7滴丸剂
工艺示例取PEG6000加热熔融，加入裸花紫珠血竭提取物、泊洛沙姆和硬脂酸，待完全熔融后，搅拌下加入血竭提取物。将混合物滴入液体石蜡冷凝液中成丸。
权利要求
1.一种以裸花紫珠和血竭作为活性组合的药物组合物，其特征在于，所述活性组分的含量为1～85wt％，其中裸花紫珠和与血竭重量比例为1∶10～10∶1。
2根据权利要求1所述的一种以裸花紫珠和血竭作为活性组合的药物组合物，其特征在于，所述活性组分的重量含量为20～65％。
3.根据权利要求1或2所述的一种以裸花紫珠和血竭作为活性组合的药物组合物，其特征在于，裸花紫珠和与血竭重量比例为1∶5～5∶1。
4.根据权利要求1或2所述的一种以裸花紫珠和血竭作为活性组合的药物组合物，其特征在于，裸花紫珠和与血竭重量比例为1∶1。
5.根据权利要求1或2所述的一种以裸花紫珠和血竭作为活性组合的药物组合物，其特征在于，是经口服、静脉给药、经皮或粘膜给药的剂型。
6.根据权利要求1所述所述的一种以裸花紫珠和血竭作为活性组合的药物组合物，其特征在于，制备用于预防或治疗炎症、出血性和/或病毒性肝炎相关疾病的药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的一种以裸花紫珠和血竭作为活性组合的药物组合物，其特征在于，所述疾病包括感冒发热，咽喉肿痛，咽喉炎，外耳道或皮肤疖肿，结膜炎，上呼吸道感染，急、慢性扁桃腺炎，泌尿系感染，鼻、呼吸道、消化道或泌尿生殖系统出血，鼻炎，痔疮，胃痛，急性黄疸，病毒性肝炎或烧、烫伤。
全文摘要
本发明提供了一种包括1～85wt％的裸花紫珠和血竭、其中裸花紫珠和与血竭重量比例为1∶10～10∶1、且两者具有协同增效作用的药物组合物。本发明的药物组合物可以是经口服、静脉给药、经皮或粘膜给药的剂型。本发明还提供了所述药物组合物在制备用于预防或治疗炎症、出血性和/或病毒性肝炎相关疾病的药物中的应用。
文档编号A61P9/14GK1660349SQ20051000198
公开日2005年8月31日 申请日期2005年1月17日 优先权日2005年1月17日
发明者吴磊 申请人:闫彬