专利名称：治疗心脑血管疾病的复方三七制剂及其制备方法和其应用的制作方法
技术领域：
本发明是一种治疗心脑血管疾病的复方三七制剂及其制备方法和其应用，属于中药的技术领域。
背景技术：
心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、老年性痴呆等均是当今世界上最常见和危害最大的疾病之一，在许多国家里已成为人口死亡的主要原因之一；据调查，近年来的发病率有逐年增高趋势，而且中、青年患者不断增加，心脑缺血性疾病已成为危害我国人民健康的常见病、多发病；为了达到防治目的，许多发明人及药品企业做了大量的研究，也提供了一些治疗的产品；如专利申请号为03141834、名称为“一种调节血脂和血压的胶囊制剂”。在研究中，本申请人发现仅采用黄芪、三七组方产品疗效好，而丹参有效成分主要为水溶性酚酸类物质原儿茶酚醛等邻苯二羟基化合物和脂溶性成分隐丹参酮等，而原儿茶酚醛及一些带酚羟基的酸性成分与鞣质的化学成分相似，理化性质接近，故在注射液生产工艺中欲除去鞣质，保留丹参的水溶性成分较困难，给大生产带来极大不便，鞣质会产生极强的刺激性；而且鞣质为多羟基芳香酸组成的化学性质活泼的物质，其进入机体后可作为半抗原与血浆蛋白的氨基缔合成更大分子的复合物，引起变态反应，导致过敏性休克，尤其在注射剂中这一情况很危险；本申请人也曾递交了一份申请号为200410022503.5、名称为“一种抗肿瘤及增强免疫力的中药制剂及其制备方法”的申请，这份申请使用了人参作为原料之一，产品的补益作用较好，但是治疗心脑血管疾病的疗效差。本申请人在进一步的研究中发现人参与三七的药理作用在补益、活血化瘀等许多方面有相似之处，但又有一定的差异，实验研究发现三七在与人参同等实验条件下，能够起到与人参相近似的抗疲劳、耐缺氧、耐寒冷作用，说明三七有与人参相似的补益作用，而三七有较强改善大鼠急瘀模型血液“浓、粘、凝、聚”状态的能力，能使血瘀大鼠低切全血粘度和血浆粘度、红细胞压积显著降低，并可使红细胞变形性增大，人参小剂量则只能明显降低低切全血粘度，而对其他血液流变指标无明显改善作用，而且三七总皂苷的急毒性显著小于人参总皂苷；为了降低药物服用量，这种产品采用了精制工艺，但是传统的除杂工艺对于有效成分的富集能力很有限。鉴于这些情况，寻找一种治疗心脑血管疾病的有效药物，配伍简单、治疗效果理想，没有毒副作用，制备工艺合理有效的治疗药物制剂成了人们急需解决的事情。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗心脑血管疾病的复方三七中药制剂及其制备方法；针对现有技术，本发明根据心脑血管疾病如冠心病、脑血栓、老年性痴呆等均因血管窄缩、血流量减少等原因致使供血不足引发疾病的原理，采用黄芪和三七配伍做成制剂；得到的产品具有活血化瘀、通脉舒络、改善血循环和代谢作用。例如冠心病是冠状动脉粥样硬化导致心肌缺血，缺氧而引起心脏病，两药合用，可起到改善心肌代谢作用、增加冠状动脉血流，改善心肌的血供以缓解心绞痛的作用。本发明不仅对于治疗心脑血管疾病如冠心病、心绞痛、心律失常、脑血栓、老年性痴呆等有较好的疗效，还可以用于增强免疫抗肿瘤、治疗肝肾综合症、心肺病、糖尿病及其并发症等疾病。而且本发明为纯中药制剂，其不良反应小、可供病人长期使用，针对选用黄芪和三七配伍做成制剂，本发明还需要提供一种制备方法，保证生产的产品满足治疗需要，能够解决现有技术存在的问题。
本发明是这样构成的按照重量组份计算，它是由三七20～80份，或者是相应重量份药材经提取分离后得到的三七提取物与黄芪80～20份，或者是相应重量份药材经提取分离后得到的黄芪提取物制作而成的注射剂或口服制剂，其中注射剂包括直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制备的注射用无菌粉末或无菌块状物；口服制剂包括片剂、分散片剂、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸剂、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、口服液体制剂、凝胶剂、煎膏剂、浸膏剂和膜剂。准确的说按照重量组份计算，它是由三七40～60份，或者是相应重量份药材经提取分离后得到的三七提取物与黄芪60～40份，或者是相应重量份药材经提取分离后得到的黄芪提取物制作而成的滴丸、口崩片、分散片、直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液、用冷冻干燥法或喷雾干燥法制备的注射用无菌粉末或无菌块状物。
所述的提取物三七提取物可以是三七醇提取物、三七水提取物、三七水提醇沉提取物、三七半仿生提取物、三七超临界萃取物或者以上提取物的精制品；黄芪提取物可以是黄芪醇提取物、黄芪水提取物、黄芪水提醇沉提取物、黄芪半仿生提取物、黄芪超临界萃取物、黄芪水提醇沉后返溶多糖的提取物、或者以上提取物的精制品。制剂中含有皂苷类成分和多糖类成分，以重量百分比计算，注射剂中皂苷类成分和多糖类成分的含量之和不低于制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的25％。
所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法取黄芪药材，粉碎后加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，浓缩得黄芪粗提物，也可在此基础上采用柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得黄芪精提物；取三七药材，粉碎后加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，浓缩得三七粗提物，也可在此基础上采用柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得三七精提物，再将三七粗提物或精提物与黄芪粗提物或精提物混合均匀，然后制成不同的制剂。优选为黄芪粉碎成粗粉，加6～12倍量水煎煮1～5次，每次0.5～3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入乙醇醇沉1～3次，每次使含醇量为30～80％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，将醇沉后的沉淀合并，加入0.5～4倍水溶解，滤过，滤液浓缩后与上述浓缩液合并，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加6～12倍量水煎煮1～5次，每次0.5～3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入乙醇醇沉1～3次，每次使含醇量为50％～90％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，真空干燥得三七提取物；将黄芪提取物和三七提取物合并，加辅料制成不同制剂。准确的说黄芪粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入乙醇醇沉两次，第一次使含醇量为60％，第二次使含醇量为85％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，将醇沉后的沉淀合并，加入2倍水溶解，滤过，滤液浓缩后与上述浓缩液合并，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入乙醇醇沉两次，第一次使含醇量为50％，第二次使含醇量为80％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得三七提取物；将黄芪提取物和三七提取物合并，加辅料制成不同制剂。在黄芪的提取分离工艺中有针对性地保留了黄芪多糖类成分。
所述制剂中的葡萄糖或氯化钠静脉输液这样制备取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，并加氯化钠或葡萄糖，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，补加注射用水至全量，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，115℃灭菌30分钟，即得。
所述制剂中的注射用无菌块状物这样制备取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，按药液∶支架剂＝2∶3的比例加入右旋糖酐为支架剂，混匀，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，冻干条件-10℃预冻3小时，-45℃预冻6小时后开始抽真空，并升温至-35℃，保持3小时；升温至-30℃，保持6小时；升温至-20℃，保持6小时；升温至-10℃，保持10小时；升温至0℃，保持2小时；升温至10℃，保持2小时；升温至20℃，保持2小时；升温至30℃，保持2小时，压盖，即得。
所述制剂中的注射用无菌粉末这样制备取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，经0.22～0.45μm的微孔滤膜过滤，在进风温度为160℃，出风温度为50℃，气流速度为25m·s-1的条件下喷雾干燥得粉末，分装，即得。
所述制剂中的注射液和注射用浓溶液这样制备取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，补加注射用水至全量，经0.22～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，115℃灭菌30分钟，即得。
所述制剂中的注射用无菌粉末还可以这样制备取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，按药液∶支架剂＝2∶3的比例加入右旋糖酐为支架剂，混匀，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，分装到搪瓷盘中，冷冻干燥，冻干条件-10℃预冻3小时，-45℃预冻6小时后开始抽真空，并升温至-35℃，保持3小时；升温至-30℃，保持6小时；升温至-20℃，保持6小时；升温至-10℃，保持10小时；升温至0℃，保持2小时；升温至10℃，保持2小时；升温至20℃，保持2小时；升温至30℃，保持2小时，在无菌条件下分装到西林瓶中，即得。
所述制剂中的滴丸剂这样制备将与主药比例是1.8∶1的聚乙二醇4000置不锈钢容器内，加入三七提取物、黄芪提取物，混合均匀，加热至80-90℃，待全部熔融后，70-80℃保温，机械高速搅拌10min至均匀，转移至贮液瓶中，70～80℃保温，调节滴液阀门，滴入30～40℃的二甲基硅油中，滴距5～7cm，滴速35～45滴/分，将形成的滴丸沥尽并擦除二甲基硅油，包装，即得。
所述制剂中的口崩片这样制备取三七提取物、黄芪提取物混合均匀，加入7％的交联聚维酮PVPP和3％甘露醇，压制成片，即得。
所述制剂中的分散片这样制备取三七提取物、黄芪提取物混匀，按主药∶辅料＝1∶1的比例加入硫酸钙，按主药∶辅料＝1∶1的比例加入微晶纤维素，以及按主药∶辅料＝5∶1的交联聚维酮，混和均匀，用60％乙醇适量制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量滑石粉、微粉硅胶，混和均匀，压片，即得。
该药物组合物还可以用以制备治疗冠心病心绞痛、缺血性脑中风、中风后遗症、心力衰竭疾病的药物。
与现有技术相比，本申请人选用与人参在补益、活血化瘀等许多方面有相似之处的三七，并通过实验研究发现三七在与人参同等实验条件下，能够起到与人参相近似的抗疲劳、耐缺氧、耐寒冷作用，说明三七有与人参相似的补益作用；而三七有较强改善大鼠急瘀模型血液擎ā(17)场20.14.蹟状态的能力，能使血瘀大鼠低切全血粘度和血浆粘度、红细胞压积显著降低，并可使红细胞变形性增大，改善作用明显优于人参，而且三七总皂苷的急毒性显著小于人参总皂苷。
很多研究者采用了大孔树脂富集有效成分，但是本申请人通过实验筛选发现大孔树脂价格高，有机残留严重，于是本申请人采用了醇沉法富集有效成分，特别收集具有抗心律失常等作用的黄芪多糖；本申请人还通过实验确定注射剂适宜的PH值，保证了三七、黄芪有效成分的稳定。本申请人未采用丹参，而是使用三七、黄芪组方制备产品，不仅疗效理想，而且制备过程中不会有丹参注射剂难以去除的大量鞣质，更加安全稳定，解决了现有技术存在的问题，本发明还提供了多种制剂的详细制作工艺，可以直接用于指导实际生产；达到了发明的目的。
申请人进行了一系列实验，可以证明本发明提供的药物具有有效的效果。
实验例1人参与三七的药效学比较研究1.1补益作用的比较研究1.1.1对小鼠游泳时间的影响小鼠30只，体重22.0±1.4g，雌雄各半，随机分为3组。分别ig给予药物或等体积生理盐水，给药后1h，在各小鼠尾部粘上相当于自身体重10％的胶泥，放入水盆中，令其自由游泳，开始计时，至小鼠头沉入水中10s不能浮出水面，终止计时。记录各组小鼠游泳时间(x±s，min)，结果对照组为5.38±3.02，人参6g/kg为8.71±2.86，三七6g/kg为8.65±2.55。结果表明，人参与三七均能明显延长小鼠的游泳时间。
1.1.2对小鼠常压耐缺氧能力的影响取小鼠30只，体重22.3±1.6g，雌雄各半，分组与给药方法同上。给药后1h，将小鼠分别放入盛有10g钠石灰的250ml广口瓶中，封严瓶口，同时开始计时。以呼吸停止为指标，记录小鼠死亡时间(x±s，min)，结果对照组为31.04±3.12，人参6g/kg为35.27±2.04，三七6g/kg为34.98±2.57。结果表明，人参与三七均能明显延长小鼠在常压缺氧条件下的存活时间。
结果表明，人参、三七补益作用类似。
1.2急性毒性实验昆明种小鼠，每组10只，雌雄各半，腹腔内单次注射给药，药后观察动物反应并记录动物死亡情况，求出LD50。
三七总皂苷和人参总皂苷的LD50分别为826.8(730.5-928.9)mg/kg和624.8(559.7-677.3)mg/kg，大剂量的三七总皂苷和人参总皂苷腹腔注射后，小鼠活动显著减少，呼吸减弱，死亡多发于药后第2-3天，尸检肉眼未见明显脏器病变。提示三七总皂苷的急性毒性明显小于人参总皂苷。
1.3对急性血瘀大鼠血液流变性的影响大鼠60只，雌雄各半，体重270±20g连续给药12天，末次给药后1h，除正常对照组外其余各组均sc注射肾上腺素0.8mg/kg，共两次，两次间隔4h。在两次之间(前后各间隔2小时)，将大鼠浸入冰水中5min，禁食。次日晨股动脉采血，肝素钠抗凝，测定血流变各指标。
结果表明，三七有较强改善大鼠急瘀模型血液状态的能力，能使血瘀大鼠血浆粘度、红细胞压积显著降低，人参小剂量对其他血液流变指标无明显改善作用，并且本发明制剂对急性血瘀大鼠血液流变性的作用优于人参黄芪制剂。
实验例2不同配方的药效学比较研究1.1对急性血瘀大鼠血液流变性的影响大鼠50只，雌雄各半，体重270±20g连续给药12天，末次给药后1h，除正常对照组外其余各组均sc注射肾上腺素0.8mg/kg，共两次，两次间隔4h。在两次之间(前后各间隔2小时)，将大鼠浸入冰水中5min，禁食。次日晨股动脉采血，肝素钠抗凝，测定血流变各指标。
1.2对血瘀模型家兔血液流变性的影响家兔56只，随机分为7组，每组8只，♀♂各半。各组动物先耳缘静脉注射(iv)给药。空白及模型对照组注射生理盐水(NS)1ml/kg，阳性药组iv葛根素注射液30mg/kg(以NS配成30mg/ml)，实验组分别注射0.25mg/ml的药液(以NF配成)，给药量均为1ml/kg，连续给药两周(14d)，于给药的第2、13d，除空白对照组外，各兔分别经耳缘静脉注10％高分子右旋糖酐5ml/kg，每日两次，造成血瘀模型。末次给药后，再次注射10％高分子右旋糖酐5ml/kg，15min后，心脏采取空腹血6ml，进行血液流变学指标检测，其中血小板聚集率用LBY-NJ2型血小板聚集仪，采用比浊法测定其它采用LBY-N6A+旋转式锥板粘度仪测定。
对家兔血小板聚集和纤维蛋白原的影响(x±s，n＝6)
结果表明，黄芪三七配伍具有很好的疗效，特别是三七40～60份，黄芪60～40份的配比。
实验例3工艺研究本申请人进行了不同提取精制方法比较研究，结果表明本发明采用的工艺合理可行，成本低。
工艺1黄芪粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入乙醇醇沉两次，第一次使含醇量为60％，第二次使含醇量为85％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，将醇沉后的沉淀合并，加入0.5～4倍水溶解，滤过，滤液浓缩后与上述浓缩液合并，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入乙醇醇沉两次，第一次使含醇量为50％，第二次使含醇量为80％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得三七提取物。
工艺2黄芪粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入等体积水饱和正丁醇，萃取4次，合并正丁醇层，用1/8倍量正丁醇饱和水冲洗，减压回收正丁醇液，真空干燥得黄芪提取物。三七粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入等体积水饱和正丁醇，萃取4次，合并正丁醇层，用1/8倍量正丁醇饱和水冲洗，减压回收正丁醇液，真空干燥得三七提取物。
工艺3黄芪粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液过ZTC-1型大孔吸附树脂柱，先用6倍树脂体积水和3倍树脂体积10％乙醇洗脱，再用5倍树脂体积60％乙醇解吸，收集解吸液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得黄芪提取物。三七粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液过ZTC-1型大孔吸附树脂柱，先用6倍树脂体积水和5倍树脂体积5％乙醇洗脱，再用6倍树脂体积70％乙醇解吸，收集解吸液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得三七提取物。
工艺4黄芪粉碎成粗粉，加10倍量70％乙醇回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，加入4倍量水溶解，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得黄芪提取物。三七粉碎成粗粉，加10倍量80％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，加入5倍量水溶解，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得三七提取物。
对急性血瘀大鼠血液流变性的影响大鼠60只，雌雄各半，体重270±20g连续给药12天，末次给药后1h，除正常对照组外其余各组均sc注射肾上腺素0.8mg/kg，共两次，两次间隔4h。在两次之间(前后各间隔2小时)，将大鼠浸入冰水中5min，禁食。次日晨股动脉采血，肝素钠抗凝，测定血流变各指标。
结果表明，采用水煮醇沉法并收集了黄芪多糖的工艺路线1得到的提取物改善血液流变性的作用最强。
实验例4成型工艺研究4.1注射剂
4.1.1 pH值对注射液的影响本申请人在研制中发现，本发明产品三七皂苷、黄芪皂苷为主要起效成分之一，因易水解致使药品不稳定，其药效降低，适宜的酸碱度是药品稳定的重要因素，为了提高该注射剂的质量，本申请人对6种不同p H值的注射液40℃放置3个月，分别考察其稳定性。结果表明，5.5-7.5的PH值范围最合理。
4.1.2 pH值对冻干粉针的影响
结果表明，本发明工艺合理可行，产品质量良好。
4.1.3成品可测成分与总固体量的关系
通过对三批样品的检测，可测成分平均占总固体量的＞25％，符合“中药新药研究的技术要求”中有关中药注射液研究技术要求。
4.2分散片由于三七主要成份皂苷引湿性较强，且本品为分散片剂型，故选择无引湿性、防潮性能好的硫酸钙以及具有良好可压性、对药物容纳量大，且兼具粘合、助流、崩解作用的微晶纤维素作为稀释剂组成基础处方，并以崩解时间为指标进行压片试验，考察其用量，结果见下表。
基础处方筛选
结果表明，取三七提取物、黄芪提取混匀，按主药∶辅料＝1∶1的比例加入硫酸钙，按主药∶辅料＝1∶1的比例加入微晶纤维素，以及按主药∶辅料＝5∶1的交聚维酮制得分散片崩解最佳。分散片要求在3min内崩解。
4.3滴丸选择常用聚乙二醇4000和聚乙二醇6000进行比较试验。将不同型号的聚乙二醇置小烧杯内，加热至80-90℃，待全部熔融后，加入三七总皂苷，考察基质与三七总皂苷的融合情况，选择融合情况较好的处方进行滴制(滴制条件滴入30～40℃的二甲基硅油中，滴距5～7cm，滴速35～45滴/分)，结果见下表。
基质与主药的融合情况比较
上述结果表明，处方3溶融药液的流动性好，载药量较大，滴丸成型性好光滑、圆润，丸重差异小，溶散较快，故选3号处方。
4.4口崩片辅料及工艺对口崩片的崩解速度影响极大。常用方法为冷冻干燥法、固态溶液法、喷雾干燥法、直接压片法等。直接压片法工艺简单、成本低、应用广，但是相应对辅料的要求也较高，所用辅料除崩解迅速外，还须有良好的流动性和口感。
结果表明，用7％的交联聚维酮PVPP和3％甘露醇制备的口崩片性能良好。
实验例5制剂药效学研究5.1对血瘀模型家兔血液流变性的影响实验1组三七注射液；实验2组黄芪注射液；实验3组本发明注射液家兔48只，随机分为6组，每组8只，♀♂各半，分别为空白对照组、模型对照组、阳性药对照组及实验1、2、3组。各组动物先耳缘静脉注射(iv)给药。空白及模型对照组注射生理盐水(NS)1ml/kg，阳性药组iv葛根素注射液30mg/kg(以NS配成30mg/ml)，实验组分别注射0.25mg/ml的药液(以NF配成)，给药量均为1ml/kg，连续给药两周(14d)，于给药的第2、13d，除空白对照组外，各兔分别经耳缘静脉注10％高分子右旋糖酐5ml/kg，每日两次，造成血瘀模型。末次给药h后，再次注射10％高分子右旋糖酐5ml/kg，15min后，心脏采取空腹血6ml，进行血液流变学指标检测，其中血小板聚集率用LBY-NJ2型血小板聚集仪，采用比浊法测定其它采用LBY-N6A+旋转式锥板粘度仪测定。
对家兔血小板聚集和纤维蛋白原的影响(x±s，n＝6)
结果表明本发明制剂疗效好，优于单味药，组方有协同增效的作用。
5.2治疗大鼠糖尿病肾病的实验研究选用150～190g的健康雄性Wistar大鼠30只，随机分为正常对照组、糖尿病组和本发明粉针治疗组，每组10只，分笼喂养，随意饮水，将糖尿病组大鼠，禁食10h，用链脲佐菌素溶于0.1mol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(pH4.5)，配成1％的溶液，按50mg/kg单次腹腔注射，5d后取尾静脉血，用血糖仪测定血糖，血糖≥16.7mmol/L为糖尿病大鼠(成模率100％)。正常对照组注射相应体积的柠檬酸-柠檬酸缓冲液。将本发明粉针剂用生理盐水溶解成0.5g/L溶液，治疗组每日上午按70mg·kg-1·d-1剂量灌胃，糖尿病组胃饲等量的生理盐水，继续喂养至12周后采集标本，代谢笼收集24h尿，测24h尿蛋白排泄量(UPE)。称质量后麻醉，右心房取血测内皮素，放免法测定胰岛素，用CX 7自动生化分析仪测血尿素氮(BUN)，并计算内生肌酐清除率(Ccr)，结果用体质量校正。取双肾，右肾部分以4％多聚甲醛固定，常规制片，光镜检查，用图像分析仪测定MGPA和MGV，左肾用于组织E T含量测定。
结果表明，本发明制剂对于MGPA、MGV、BUN、Ccr和24h尿蛋白排泄量均较糖尿病肾病大鼠显著改善。
具体的实施方式本发明的实施例1称取黄芪600g 三七400g黄芪粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入乙醇醇沉两次，第一次使含醇量为60％，第二次使含醇量为85％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，将醇沉后的沉淀合并，加入0.5～4倍水溶解，滤过，滤液浓缩后与上述浓缩液合并，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入乙醇醇沉两次，第一次使含醇量为50％，第二次使含醇量为80％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得三七提取物。
本发明的实施例2称取黄芪400g 三七600g黄芪粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入乙醇醇沉两次，第一次使含醇量为60％，第二次使含醇量为85％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，将醇沉后的沉淀合并，加入0.5～4倍水溶解，滤过，滤液浓缩后与上述浓缩液合并，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入乙醇醇沉两次，第一次使含醇量为50％，第二次使含醇量为80％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得三七提取物。
本发明的实施例3称取黄芪200g 三七800g黄芪粉碎成粗粉，加6倍量水煎煮0.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入乙醇醇沉1次，每次使含醇量为30％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，将醇沉后的沉淀合并，加入0.5倍水溶解，滤过，滤液浓缩后与上述浓缩液合并，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加6倍量水煎煮0.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入乙醇醇沉1次，每次使含醇量为50％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，真空干燥得三七提取物。
本发明的实施例4称取黄芪800g 三七200g黄芪粉碎成粗粉，加12倍量水煎煮5次，每次3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入乙醇醇沉3次，每次使含醇量为80％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，将醇沉后的沉淀合并，加入4倍水溶解，滤过，滤液浓缩后与上述浓缩液合并，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加12倍量水煎煮5次，每次3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入乙醇醇沉3次，每次使含醇量为90％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，真空干燥得三七提取物。
本发明的实施例5称取黄芪200g 三七800g黄芪粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入等体积水饱和正丁醇，萃取4次，合并正丁醇层，用1/8倍量正丁醇饱和水冲洗，减压回收正丁醇液，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入等体积水饱和正丁醇，萃取4次，合并正丁醇层，用1/8倍量正丁醇饱和水冲洗，减压回收正丁醇液，真空干燥得三七提取物。
本发明的实施例6称取黄芪800g 三七200g
黄芪粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液过ZTC-1型大孔吸附树脂柱，先用6倍树脂体积水和3倍树脂体积10％乙醇洗脱，再用5倍树脂体积60％乙醇解吸，收集解吸液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液过ZTC-1型大孔吸附树脂柱，先用6倍树脂体积水和5倍树脂体积5％乙醇洗脱，再用6倍树脂体积70％乙醇解吸，收集解吸液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得三七提取物。
本发明的实施例7称取黄芪400g 三七600g黄芪粉碎成粗粉，加10倍量70％乙醇回流提取3次，每次1小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，加入4倍量水溶解，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加10倍量80％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，加入5倍量水溶解，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得三七提取物。
本发明的实施例8三七提取物20g、黄芪提取物80g取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，并加氯化钠或葡萄糖，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，补加注射用水至全量，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，115℃灭菌30分钟，即得葡萄糖或氯化钠静脉输液。
本发明的实施例9三七提取物60g、黄芪提取物240g取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，按药液∶支架剂＝2∶3的比例加入右旋糖酐为支架剂，混匀，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，冻干条件-10℃预冻3小时，-45℃预冻6小时后开始抽真空，并升温至-35℃，保持3小时；升温至-30℃，保持6小时；升温至-20℃，保持6小时；升温至-10℃，保持10小时；升温至0℃，保持2小时；升温至10℃，保持2小时；升温至20℃，保持2小时；升温至30℃，保持2小时，压盖，即得注射用无菌块状物，一次2支，一日1次，用250ml0.9％生理盐水溶解后使用，制剂中含有皂苷类成分，以重量百分比计算，注射剂中皂苷类成分和多糖类成分的含量之和占制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的26％。
本发明的实施例10三七提取物80g、黄芪提取物20g取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，经0.22～0.45μm的微孔滤膜过滤，在进风温度为160℃，出风温度为50℃，气流速度为25m·s-1的条件下喷雾干燥得粉末，分装，即得注射用无菌粉末。以重量百分比计算，注射剂中皂苷类成分和多糖类成分的含量之和占制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的53％。
本发明的实施例11三七提取物240g、黄芪提取物60g取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，补加注射用水至全量，经0.22～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，115℃灭菌30分钟，即得注射液和注射用浓溶液。
本发明的实施例12三七提取物40g、黄芪提取物60g取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，按药液支架剂＝2∶3的比例加入右旋糖酐为支架剂，混匀，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，分装到搪瓷盘中，冷冻干燥，冻干条件-10℃预冻3小时，-45℃预冻6小时后开始抽真空，并升温至-35℃，保持3小时；升温至-30℃，保持6小时；升温至-20℃，保持6小时；升温至-10℃，保持10小时；升温至0℃，保持2小时；升温至10℃，保持2小时；升温至20℃，保持2小时；升温至30℃，保持2小时，在无菌条件下分装到西林瓶中，即得注射用无菌粉末。以重量百分比计算，注射剂中皂苷类成分和多糖类成分的含量之和占制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的82％。
本发明的实施例13三七提取物120g、黄芪提取物180g将与主药比例是1.8∶1的聚乙二醇4000置不锈钢容器内，加入三七提取物、黄芪提取物，混合均匀，加热至80-90℃，待全部熔融后，70-80℃保温，机械高速搅拌10min至均匀，转移至贮液瓶中，70～80℃保温，调节滴液阀门，滴入30～40℃的二甲基硅油中，滴距5～7cm，滴速35～45滴/分，将形成的滴丸沥尽并擦除二甲基硅油，包装，即得滴丸剂。
本发明的实施例14三七提取物60g、黄芪提取物40g取三七提取物、黄芪提取物混合均匀，加入7％的交联聚维酮PVPP和3％甘露醇，压制成片，即得口崩片。
本发明的实施例15三七提取物180g、黄芪提取物120g取三七提取物、黄芪提取物混匀，按主药∶辅料＝1∶1的比例加入硫酸钙，按主药∶辅料＝1∶1的比例加入微晶纤维素，以及按主药∶辅料＝5∶1的交聚维酮，混和均匀，用60％乙醇适量制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量滑石粉、微粉硅胶，混和均匀，压片，即得分散片。
本发明的实施例16三七提取物180g、黄芪提取物120g取三七提取物、黄芪提取物混匀，加入3倍量淀粉，0.6％的甜菊甙，2％的微晶纤维素，用适量聚乙烯吡咯烷酮k30的醇溶液制软材，制粒，70℃鼓风干燥，制粒，整粒，即得颗粒剂。
本发明的实施例17三七提取物120g、黄芪提取物180g取三七提取物、黄芪提取物混匀，加入等量的淀粉，混合均匀，制粒，装胶囊，即得胶囊剂。
以上三七提取物、黄芪提取物可以是市售的，也可以是按本发明方法提取得到的。
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的复方三七制剂，其特征在于按照重量组份计算，它是由三七20～80份，或者是相应重量份药材经提取分离后得到的三七提取物与黄芪80～20份，或者是相应重量份药材经提取分离后得到的黄芪提取物制作而成的注射剂或口服制剂，其中注射剂包括直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液和用冷冻干燥法或喷雾干燥法制备的注射用无菌粉末或无菌块状物；口服制剂包括片剂、分散片剂、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、丸剂、微丸剂、散剂、滴丸剂、缓释制剂、控释制剂、口服液体制剂、凝胶剂、煎膏剂、浸膏剂和膜剂。
2.按照权利要求1所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂，其特征在于按照重量组份计算，它是由三七40～60份，或者是相应重量份药材经提取分离后得到的三七提取物与黄芪60～40份，或者是相应重量份药材经提取分离后得到的黄芪提取物制作而成的滴丸、口崩片、分散片、直接用于注射给药的注射液、直接供静脉滴注的静脉输液、需稀释后用于静脉滴注的注射用浓溶液、用冷冻干燥法或喷雾干燥法制备的注射用无菌粉末或无菌块状物。
3.按照权利要求1或2所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂，其特征在于所述的提取物三七提取物可以是三七醇提取物、三七水提取物、三七水提醇沉提取物、三七半仿生提取物、三七超临界萃取物或者以上提取物的精制品；黄芪提取物可以是黄芪醇提取物、黄芪水提取物、黄芪水提醇沉提取物、黄芪半仿生提取物、黄芪超临界萃取物、黄芪水提醇沉后返溶多糖的提取物、或者以上提取物的精制品。
4.按照权利要求1或2所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂，其特征在于制剂中含有皂苷类成分和多糖类成分，以重量百分比计算，注射剂中皂苷类成分和多糖类成分的含量之和不低于制剂中扣除辅料量和水分量的总固体量的25％。
5.如权利要求1或2所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于取黄芪药材，粉碎后加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，浓缩得黄芪粗提物，也可在此基础上采用柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得黄芪精提物；取三七药材，粉碎后加入水或乙醇溶液提取，合并提取液，过滤，浓缩得三七粗提物，也可在此基础上采用柱层析法、萃取法、絮凝沉淀法中的一种或几种联合使用进行适当精制，得三七精提物，再将三七粗提物或精提物与黄芪粗提物或精提物混合均匀，然后制成不同的制剂。
6.按照权利要求5所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于黄芪粉碎成粗粉，加6～12倍量水煎煮1～5次，每次0.5～3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入乙醇醇沉1～3次，每次使含醇量为30～80％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，将醇沉后的沉淀合并，加入0.5～4倍水溶解，滤过，滤液浓缩后与上述浓缩液合并，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加6～12倍量水煎煮1～5次，每次0.5～3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩，加入乙醇醇沉1～3次，每次使含醇量为50％～90％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇，真空干燥得三七提取物；将黄芪提取物和三七提取物合并，加辅料制成不同制剂。
7.按照权利要求6所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于黄芪粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入乙醇醇沉两次，第一次使含醇量为60％，第二次使含醇量为85％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，将醇沉后的沉淀合并，加入2倍水溶解，滤过，滤液浓缩后与上述浓缩液合并，真空干燥得黄芪提取物；三七粉碎成粗粉，加10倍量水煎煮3次，每次1.5小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至60℃相对密度为1.05～1.15，加入乙醇醇沉两次，第一次使含醇量为50％，第二次使含醇量为80％，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至60℃相对密度为1.05～1.15，真空干燥得三七提取物；将黄芪提取物和三七提取物合并，加辅料制成不同制剂。
8.按照权利要求5～7中任意一项所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于在黄芪的提取分离工艺中有针对性地保留了黄芪多糖类成分。
9.按照权利要求5、6或7所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的葡萄糖或氯化钠静脉输液这样制备取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，并加氯化钠或葡萄糖，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，补加注射用水至全量，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，115℃灭菌30分钟，即得。
10.按照权利要求5、6或7所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的注射用无菌块状物这样制备取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，按药液∶支架剂＝2∶3的比例加入右旋糖酐为支架剂，混匀，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，冷冻干燥，冻干条件-10℃预冻3小时，-45℃预冻6小时后开始抽真空，并升温至-35℃，保持3小时；升温至-30 ℃，保持6小时；升温至-20℃，保持6小时；升温至-10℃，保持10小时；升温至0℃，保持2小时；升温至10℃，保持2小时；升温至20℃，保持2小时；升温至30℃，保持2小时，压盖，即得。
11.按照权利要求5、6或7所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的注射用无菌粉末这样制备取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，经0.22～0.45μm的微孔滤膜过滤，在进风温度为160℃，出风温度为50℃，气流速度为25m·s-1的条件下喷雾干燥得粉末，分装，即得。
12.按照权利要求5、6或7所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的注射液和注射用浓溶液这样制备取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，补加注射用水至全量，经0.22～0.45μm的微孔滤膜过滤，灌装，115℃灭菌30分钟，即得。
13.按照权利要求5、6或7所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的注射用无菌粉末还可以这样制备取三七提取物、黄芪提取物，加入注射用水，搅匀，冷藏，滤过，滤液加0.2％活性炭，煮沸30分钟，放冷，过滤至澄明，用10％NaOH调pH值5.5～7.5，按药液∶支架剂＝2∶3的比例加入右旋糖酐为支架剂，混匀，经0.25～0.45μm的微孔滤膜过滤，分装到搪瓷盘中，冷冻干燥，冻干条件-10℃预冻3小时，-45℃预冻6小时后开始抽真空，并升温至-35℃，保持3小时；升温至-30℃，保持6小时；升温至-20℃，保持6小时；升温至-10℃，保持10小时；升温至0℃，保持2小时；升温至10℃，保持2小时；升温至20℃，保持2小时；升温至30℃，保持2小时，在无菌条件下分装到西林瓶中，即得。
14.按照权利要求5、6或7所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的滴丸剂这样制备将与主药比例是1.8∶1的聚乙二醇4000置不锈钢容器内，加入三七提取物、黄芪提取物，混合均匀，加热至80-90℃，待全部熔融后，70-80℃保温，机械高速搅拌10min至均匀，转移至贮液瓶中，70～80℃保温，调节滴液阀门，滴入30～40℃的二甲基硅油中，滴距5～7cm，滴速35～45滴/分，将形成的滴丸沥尽并擦除二甲基硅油，包装，即得。
15.按照权利要求5、6或7所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的口崩片这样制备取三七提取物、黄芪提取物混合均匀，加入7％的交联聚维酮PVPP和3％甘露醇，压制成片，即得。
16.按照权利要求5、6或7所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂的制备方法，其特征在于所述制剂中的分散片这样制备取三七提取物、黄芪提取物混匀，按主药∶辅料＝1∶1的比例加入硫酸钙，按主药∶辅料＝1∶1的比例加入微晶纤维素，以及按主药∶辅料＝5∶1的交联聚维酮，混和均匀，用60％乙醇适量制软材，过20目筛制颗粒，60℃干燥，取出，过30目筛整粒，加入适量滑石粉、微粉硅胶，混和均匀，压片，即得。
17.如权利要求1、2或3所述的治疗心脑血管疾病的复方三七制剂用于制备治疗冠心病心绞痛、缺血性脑中风、中风后遗症或心力衰竭疾病的药物。
全文摘要
本发明提供了一种治疗心脑血管疾病的复方三七制剂及其制备方法和它的应用，它是由三七20～80份，或者是相应重量份药材经提取分离后得到的三七提取物与黄芪80～20份，或者是相应重量份药材经提取分离后得到的黄芪提取物制作而成的注射剂或口服制剂；本发明产品不仅疗效理想，而且制备过程中不会有丹参注射剂难以去除的大量鞣质，更加安全稳定，解决了现有技术存在的问题；本发明还提供了多种制剂的详细制作工艺，可以直接用于指导实际生产。
文档编号A61K9/20GK1762401SQ20051020055
公开日2006年4月26日 申请日期2005年9月22日 优先权日2004年9月24日
发明者于文勇 申请人:贵阳云岩西创药物科技开发有限公司