专利名称：一种山羊角提取物的制备方法
技术领域：
本发明属于中药制备技术领域，尤其涉及一种中药有效成分的提取纯化方法，特别涉及一种山羊角提取物的制备方法，尤其涉及一种从山羊角中提取纯化含有高纯度总氨基酸提取物的制备方法。
背景技术：
为了保护珍稀动物羚羊，现在临床往往把山羊角作为羚羊角的代用品越来越广泛地应用于临床。山羊角为脊椎动物牛科雄性山羊的角。性味成，寒。功效平肝，镇惊，解毒。用于肝阳上亢、头目眩晕，及肝火上炎、目赤肿痛等症。还可用于惊风抽搐，具有清热镇惊作用。
山羊角含有角蛋白、游离氨基酸、磷脂、无机盐等多种成分，其中角蛋白水解后生成的多种氨基酸是其主要有效成分。山羊角功能与羚羊角大致相仿，但其作用较弱，所以用药剂量需增大。而目前临床应用多以药材原形入汤剂煎服，或入散剂吞服，角蛋白并未转化为具有生理活性的氨基酸，因此难以保证临床疗效。
所以，按照现有技术，作为有效成分的角蛋白未转化为具有生理活性的氨基酸，其药效未能得到充分发挥；同时又必须加大用药量，在一定程度上造成了药材浪费，增加了病人经济负担。因此，有必要探索一种山羊角有效成分新的提取纯化方法，提高其利用率，使其充分发挥作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从山羊角中提取水解纯化制备含有高含量总氨基酸(混合氨基酸)提取物的方法，以解决山羊角药材利用率低的问题，同时兼顾提取物的得率和纯度。
为了解决上述技术问题，本发明可以通过以下技术方案来实现本发明提供一种从山羊角中提取水解纯化制备高含量总氨基酸(混合氨基酸)的方法，该方法包括以下步骤1、酸水解，即采用一定浓度的酸溶液对山羊角进行水解得水解液；2、除杂水解，即将水解液用碱溶液中和进行初步除杂纯化得初步纯化药液；3、纯化精制初步纯化药液再纯化精制即得含有高含量总氨基酸(混合氨基酸)提取物。
本发明的方法中，在纯化精制步骤中，采用醇沉法或离子交换法纯化进行纯化精制。
本发明的特点为，将山羊角在最佳酸性条件下水解，可把角蛋白水解完全、彻底，得到游离氨基酸，减少中间产物生成；水解液用碱溶液中和、醇沉或通过离子交换树脂以纯化得到总氨基酸。方法简便、易行，无污染，最终总氨基酸的提取率高，纯度也高。
图1为本发明的山羊角提取物(总氨基酸)制备工艺流程图。
具体实施例方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式
，进一步阐述本发明。
参见图1，一种从山羊角中提取水解纯化制备含有高含量总氨基酸(混合氨基酸)提取物的方法，该方法包括以下步骤1、酸水解，取山羊角(整货去塞、饮片或粉末)，加6wt-10wt倍量8mol/L的盐酸或4mol/L的硫酸，加热至100-110℃回流水解12-20小时，至水解完全，无药材颗粒为止，冷却至常温，滤过，沉淀物用适量纯化水洗涤，合并滤液和洗液的水解液；2、除杂水解，用16％的石灰乳调节pH值至4-5，滤过，沉淀用60-90℃热水洗至茚三酮试液反应阴性，合并滤液、洗液，浓缩至相对密度1.04-1.10(60℃)，冷却至常温得初步纯化药液；3、纯化精制可以通过醇沉法或离子交换法纯化进行纯化精制对初步纯化药液再纯化精制即得含有高含量总氨基酸(混合氨基酸)提取物。
其醇沉法是指初步纯化药液在搅拌下缓缓加入95％乙醇溶液，使混合液中含醇量达50％-70％，在0-10℃条件下冷藏12小时以上，取出，滤过，滤液回收乙醇，并浓缩至相对密度1.04-1.10(60℃)，冷却至常温后；再在搅拌下缓缓加入95％乙醇，使混合液中含量达75％-85％，在0-10℃条件下冷藏12小时以上，取出，滤过，滤液回收乙醇，并浓缩至稠膏，80℃以下减压干燥，即得含有高含量总氨基酸(混合氨基酸)提取物。
而离子交换法是指将初步纯化药液过滤后，依次通过弱碱性阴离子交换树脂除酸和强酸性阳离子交换树脂吸附，用水洗至流出液中性，无色，弃去水洗液，再用浓度为1％-2.5％的氨水溶液洗至流出液pH值11以上，收集氨水洗脱液，浓缩至药材的2wt-4wt倍量，再加入药液量10wt％的活性炭，80-90℃保温脱色30min，放凉，滤过，滤液浓缩至稠膏，80℃以下减压干燥，即得含有高含量总氨基酸(混合氨基酸)提取物。
在本发明的方法的酸水解步骤中，山羊角的整货去塞、饮片或粉末的制备方法对于本领域技术人员来说是熟知的，在此不作详细描述。其所使用的酸溶液不一定为盐酸或硫酸，也可以为其它的酸，只要这种酸能够完全水解山羊角，且不对山羊角中的总氨基酸(混合氨基酸)造成损害即可。对于本领域技术人员来说，对这种酸的选择是比较容易的。
而对于盐酸或硫酸来说，其浓度和用量的选择，对于本领域技术人员来说，也是比较容易选择的。水解时间的选择只要满足水解完全即可。
在除杂水解步骤中，碱溶液的选择有很多种，如(氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液、氢氧化钾溶液等)，并不局限于石灰乳，因为碱溶液在这里主要起到调节PH值的作用，而可用作调节PH值的碱溶液有很多种，只要选择不对山羊角中的总氨基酸(混合氨基酸)造成损害的碱溶液都可以。
在上述醇沉法中，其搅拌速度对于本领域技术人员来说，也是熟知的，在此不作详细地描述。其醇溶液的选择也可以有很多种，这对于本领域技术人员来说，也是熟知的。而冷藏时间主要看分层的情况，这对于本领域技术人员来说，也是熟知的。
以下通过实施例进一步说明本发明，但应理解，这些实施例只是示例性的，本发明并不局限此。
实施例1称取山羊角饮片1000g，加入8倍量8mol/L的盐酸8000ml加热回流(105℃)16小时，至水解完全(无药材颗粒)，放凉，滤过，沉淀用纯化水洗涤两次，每次200ml，合并滤液、洗液，用16％的石灰乳约1200ml调节pH值至4.5，充分搅拌，使反应完全，滤过，沉淀用80℃纯化水洗涤三次，每次1500ml，茚三酮试液检验，最后洗液阴性；合并滤液、洗液，浓缩至相对密度1.05(60℃)，放凉，得2200ml，搅拌下缓缓加入95％乙醇使含醇量达60％，冷藏(5℃)24小时，取出，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度1.05(60℃)，得1500ml，加入药液量1.5％的活性炭22.58，搅拌加热煮沸水20min脱色，滤过，得滤液，放凉，搅拌下缓缓加入乙醇，使含醇量达80％，冷藏(5℃)24小时，取出，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至稠膏，60℃真空干燥，得山羊角提取物，收得率28.5％，总氨基酸含量为72.5％。
实施例2同实施例1，只是将水解用8mol/L的盐酸换成4mol/L的硫酸，收得率26.8％，总氨基酸含量为74.5％。
实施例3称取山羊角饮片250g，加入8倍量8mol/L的盐酸2000ml加热回流(105℃)16小时，至水解完全(无药材颗粒)，放凉，滤过，沉淀用纯化水洗涤两次，每次200ml，合并滤液、洗液，通过D301型弱碱性阴离子交换树脂柱(12×120cm)，水洗至中性，收集洗脱液，再通过732型强酸性阳离子交换树脂柱(10×100cm)，水洗至中性，流出液无色，弃去水洗液，改用1.5％氨水洗脱至pH值至12，收集氨水洗脱液减压浓缩至稠膏，60℃真空干燥，得山羊角提取物，收得率70.0％，总氨基酸含量为82.6％。
实施例4同实施例3，只是将水解用8mol/L的盐酸换成4mol/L的硫酸，收得率71.4％，总氨基酸含量为85.0％。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
权利要求
1.一种山羊角提取物的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤1)、酸水解，即采用一定浓度的酸溶液对山羊角进行水解得水解液；2)、除杂水解，即将水解液用碱溶液中和进行初步除杂纯化得初步纯化药液；3)、纯化精制初步纯化药液再纯化精制即得含有高含量总氨基酸提取物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在所述精制步骤中，采用醇沉法或离子交换法纯化进行纯化精制。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酸水解是取山羊角，加6wt-10wt倍量8mol/L的盐酸或4mol/L的硫酸，加热至100-110℃回流水解12-20小时，至水解完全，无药材颗粒为止，冷却至常温，滤过，沉淀物用适量纯化水洗涤，合并滤液和洗液的水解液。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述除杂水解是用16％的石灰乳调节pH值至4-5，滤过，沉淀用60-90℃热水洗至茚三酮试液反应阴性，合并滤液、洗液，浓缩至相对密度1.04-1.10(60℃)，冷却至常温得初步纯化药液。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述醇沉法是指初步纯化药液在搅拌下缓缓加入95％乙醇溶液，使混合液中含醇量达50％-70％，在0-10℃条件下冷藏12小时以上，取出，滤过，滤液回收乙醇，并浓缩至相对密度1.04-1.10(60℃)，加入药液量1wt％-2wt％的活性炭，搅拌加热煮沸15-30min脱色，滤过，滤液冷却至常温后；再在搅拌下缓缓加入95％乙醇，使混合液中含量达75％-85％，在0-10℃条件下冷藏12小时以上，取出，滤过，滤液回收乙醇，并浓缩至稠膏，80℃以下减压干燥，即得含有高含量总氨基酸提取物。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述离子交换法是指将初步纯化药液过滤后，依次通过弱碱性阴离子交换树脂除酸和强酸性阳离子交换树脂吸附，用水洗至流出液中性，无色，弃去水洗液，再用浓度为1％-2.5％的氨水溶液洗至流出液pH值11以上，收集氨水洗脱液，浓缩至稠膏，80℃以下减压干燥，即得含有高含量总氨基酸提取物。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述弱碱性阴离子交换树脂为D301型弱碱性阴离子交换树脂柱。
8.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述强酸性阳离子交换树脂为732型强酸性阳离子交换树脂柱。
全文摘要
本发明提供了一种山羊角提取物的制备方法，该方法首先采用一定浓度的酸溶液对山羊角进行水解得水解液，然后将水解液用碱溶液中和进行初步除杂纯化得初步纯化药液；最后将初步纯化药液再纯化精制即得含有高含量总氨基酸提取物。在纯化精制步骤中，采用醇沉法或离子交换法纯化进行纯化精制。与现有技术相比，本发明可把角蛋白水解完全、彻底，减少中间产物生成；总氨基酸含量较高。本发明方法简便、易行，无污染，最终总氨基酸的提取率高，纯度也高，因而更有利于工业生产。
文档编号A61P43/00GK101084924SQ20061002733
公开日2007年12月12日 申请日期2006年6月6日 优先权日2006年6月6日
发明者薛东升 申请人:上海凯宝药业有限公司