专利名称：5’-磷酸吡哆醛的静脉制剂以及制备方法
技术领域：
本发明涉及5’-磷酸吡哆醛的药用制剂，并且尤其是适合于静脉给药的制剂。
背景技术：
5’-磷酸吡哆醛(P5P)可用于治疗和预防多种疾病，例如高血压、脑血管疾病、心血管疾病以及糖尿病。参见例如美国专利第6,051,587；6,417,204；6,548,519；6,586,414；6,605,612；6,667,315；6,780,997；6,677,356；6,489,348以及6,043,259号。
5’-磷酸吡哆醛的静脉制剂在现有技术中是已知的。然而，5’-磷酸吡哆醛水溶液的稳定性很差。而且，其在溶液中高度光敏感，并且在粉末形式下程度(degree)更差。因此，现有技术的5’-磷酸吡哆醛静脉制剂需要包含防腐剂，用于改善稳定性并用于增长保存期。然而，这样的防腐剂常常引起不期望的副作用并且未解决5’-磷酸吡哆醛的光敏感性问题。而且，这样的防腐剂常常不适用于药品注册审批(regulatory approval)。
本发明提供了新型5’-磷酸吡哆醛的静脉制剂，其不易于降解并且不需要包含防腐剂。该静脉制剂表现出改善的药物代谢动力学分布(图)。
发明内容
一方面，本发明提供了一种5’-磷酸吡哆醛的冻干制剂，其通过冻干浓度高于添加物浓度的5’-磷酸吡哆醛和氢氧化钠的已冷冻的无菌水溶液而制备。
在本发明的一个具体实施方式
中，该溶液的pH值在7.0和7.3之间。
在本发明的另一个具体实施方式
中，该冻干制剂进一步包含甘露醇。
另一方面，本发明提供了一种包含5’-磷酸吡哆醛的可注射制剂，其利用适合于静脉给药的无菌载体由根据本发明的冻干制剂重组。
在本发明的一个具体实施方式
中，该无菌载体是注射用水。
另一方面，本发明提供了一种用于制备5’-磷酸吡哆醛的冷冻制剂的方法，包括以下步骤(a)制备包含5’-磷酸吡哆醛、氢氧化钠的无菌溶液，所述溶液具有在7.0和7.3之间的pH值；(b)冷冻该溶液；以及(c)冻干该已冷冻的溶液。
在本发明的另-个具体实施方式
中，该无菌溶液进一步包括甘露醇。
在本发明的另一个具体实施方式
中，该无菌溶液包含浓度高于添加物浓度的5’-磷酸吡哆醛。
另一方面，本发明提供了一种试剂盒，可用于制备根据本发明的可注射制剂，该试剂盒包括说明书及分装在容器中的(a)根据本发明的5’-磷酸吡哆醛的冻干制剂；以及(b)适合于静脉给药的无菌载体。
在本发明的一个具体实施方式
中，该试剂盒包括作为无菌载体的注射用水。
在本发明的另一个具体实施方式
中，该试剂盒进一步包括用于所述可注射制剂的容器，确定所述容器的尺寸以有助于制备所选体积和浓度的所述制剂。
另一方面，本发明提供了根据本发明的冻干制剂的用途，用于制备适合于向需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者给药的可注射制剂。
另一方面，本发明提供了一种治疗需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者的方法，包括静脉给予根据本发明的可注射制剂。
另一方面，本发明提供了一种降低与口服5’-磷酸吡哆醛或其药用盐相关的恶心和呕吐发生率的方法，所述方法包括给予有效量的根据本发明的可注射制剂的步骤。
另一方面，本发明提供了根据本发明的可注射制剂的用途，用于降低与口服5’-磷酸吡哆醛或其药用盐相关的恶心和呕吐发生率。
另一方面，本发明提供了一种治疗经受外科手术且需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者的方法，包括静脉给予根据本发明的可注射制剂。
另一方面，本发明提供了根据本发明的冻干制剂的用途，用于制备适合于给予经受外科手术且需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者的可注射制剂。
在发明的一个具体实施方式
中，该外科手术是冠状动脉旁路移植术(CABG)或经皮冠状动脉介入术(PCI)。
图1是对于单次静脉剂量为1、5、10以及20mg/kg的血浆5’-磷酸吡哆醛，对比了所测得的平均血浆5’-磷酸吡哆醛浓度与时间的一个线图。
图2是对于单次静脉剂量为1、5、10以及20mg/kg的血浆5’-磷酸吡哆醛，对比了基线调整的平均血浆5’-磷酸吡哆醛浓度与时间的一个线图。
图3是对于单次静脉剂量为1、5、10以及20mg/kg的血浆5’-磷酸吡哆醛，对比了基线调整的平均血浆5’-磷酸吡哆醛对数浓度与时间的一个线图。
图4是对于单次静脉剂量为1、5、10以及20mg/kg的血浆5’-磷酸吡哆醛，对比了所测得的平均血浆吡哆醛浓度与时间的一个线图。
图5是对于单次静脉剂量为1、5、10以及20mg/kg的血浆5’-磷酸吡哆醛，对比了基线调整的平均血浆吡哆醛浓度与时间的一个线图。
图6是对于单次静脉剂量为1、5、10以及20mg/kg的血浆5’-磷酸吡哆醛，对比了基线调整的平均血浆吡哆醛对数浓度与时间的一个线图。
图7是对于单次静脉剂量为1、5、10以及20mg/kg的血浆5’-磷酸吡哆醛，对比了测得的平均血浆4-吡哆酸浓度与时间的一个线图。
图8是对于单次静脉剂量为1、5、10以及20mg/kg的血浆5’-磷酸吡哆醛，对比了基线调整的平均血浆4-吡哆酸浓度与时间的一个线图。
图9是对于单次静脉剂量为1、5、10以及20mg/kg的血浆5’-磷酸吡哆醛，对比了基线调整的平均血浆4-吡哆酸对数浓度与时间的一个线图。
图10是对比第1天和第4天测得的基线校正的血浆5’-磷酸吡哆醛平均浓度与时间的一个线图。
图11是对比第1天和第4天测得的基线校正的血浆5’-磷酸吡哆醛经ln转化的平均浓度与时间的一个线图。
图12是对比第1天和第4天测得的未校正的血浆5’-磷酸吡哆醛平均浓度与时间的一个线图。
图13是对比第1天和第4天测得的未校正的血浆5’-磷酸吡哆醛经ln转化的平均浓度与时间的一个线图。
图14是对比第1天和第4天测得的血浆吡哆醛平均浓度与时间的一个线图。
图15是对比第1天和第4天测得的血浆4吡哆酸经ln转化的平均浓度与时间的一个线图。
图16是对比第1天和第4天测得的血浆4吡哆酸平均浓度与时间的一个线图。
图17是对比第1天和第4天测得的血浆吡哆醛经ln转化的平均浓度与时间的一个线图。
具体实施例方式 本发明提供了新型的5’-磷酸吡哆醛冻干制剂和可注射制剂及其用途。该5’-磷酸吡哆醛的可注射制剂适合于静脉给予需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者。本发明的可注射制剂具有改善的药物动力学而无任何明显的副作用。相比于现有技术的制剂，静脉给予本发明的可注射制剂提供了增高而持久的5’-磷酸吡哆醛血浆水平。
之前用于制备稳定的5’-磷酸吡哆醛静脉制剂的尝试，需要加入潜在有毒或者潜在致癌的防腐剂。在没有防腐剂时，5’-磷酸吡哆醛的水溶液迅速降解，因而不适合于静脉给药。本发明人发现新型5’-磷酸吡哆醛的冻干制剂可重组以制备稳定的可注射制剂，而不需要加入任何常规的防腐剂。令人惊奇的是，在使用适当的载体重组前通过用甘露醇冻干5’-磷酸吡哆醛，显著提高了5’-磷酸吡哆醛静脉制剂的稳定性。而且，如此制备的静脉制剂表现出改善的稳定性而未损害其活性成分的药物动力学性能，且没有任何明显的副作用。
本发明的制剂对于心血管和脑血管并发症的治疗特别有用。冠状动脉旁路移植术(CABG)和经皮冠状动脉介入术(PCI)是北美最经常实施的两种方法。在手术过程中，患者输入抗血小板和抗血栓形成的治疗剂，以降低局部缺血并发症的频率。特别地，所用的治疗剂是肝素、阿昔单抗、依替巴肽。它们可以单独使用或者彼此组合使用。本发明提供的5’-磷酸吡哆醛制剂可以在CABG或PCI过程中经静脉给药，以进一步降低局部缺血并发症。
根据本发明的制剂也适合于对无法吞咽口服形式5’-磷酸吡哆醛例如片剂的中风患者给药。而且，在医院环境下，与口服制剂相反，5’-磷酸吡哆醛的静脉制剂提供的优势在于提供更高的5’-磷酸吡哆醛血浆水平而不引起可能与口服5’-磷酸吡哆醛有关的胃刺激、恶心、呕吐和腹泻。此外，静脉制剂在几分钟内达到较高的血浆水平而口服制剂可能需要几个小时才达到类似水平。这使得静脉制剂对于口服给药不可能或不理想的紧急情况(例如，治疗MI或中风，急诊PCI或分流术(旁路))最为理想。
5’-磷酸吡哆醛的冻干制剂以及制备方法 一方面，本发明提供了一种5’-磷酸吡哆醛的冻干制剂，其通过冻干5’-磷酸吡哆醛、氢氧化钠以及可选的甘露醇的冷冻无菌水溶液而制备。
5’-磷酸吡哆醛的冻干制剂包括浓度高于添加物浓度的5’-磷酸吡哆醛的冻干无菌水溶液。
如在本文中使用的“添加物浓度”定义为将患维生素或代谢物缺乏的患者的维生素或代谢物水平恢复到正常水平的浓度平均化，且排除适合于将维生素或代谢物水平增加到高于正常代谢水平的浓度。
该冻干制剂可以使用5’-磷酸吡哆醛或其药用盐来制备。5’-磷酸吡哆醛的一水化物以及无水形式都适合于制备本发明的药用组合物。该5’-磷酸吡哆醛可以以盐的形式提供，且具有药物可配伍的抗衡离子(相反离子，counterion)，例如但不限于柠檬酸盐、酒石酸盐、重硫酸盐等。该药物可配伍盐可以用多种酸来形成，包括但不限于盐酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、琥珀酸等。该盐形式在含水溶剂或其它质子溶剂中比相应的游离碱形式更易溶。
制备5’-磷酸吡哆醛冻干制剂的第一步是制备包含5’-磷酸吡哆醛和氢氧化钠的无菌溶液。
在优选的具体实施方式
中，该无菌溶液具有的pH在约7.0和7.3之间。该溶液通过首先在适宜量的水中溶解5’-磷酸吡哆醛和氢氧化钠并调节pH来制备。
如在本文中使用的术语“重量/重量百分比(％w/w)”指的是特定化合物或载体相对于组合物总重量的重量百分比，而该化合物或载体是所述组合物的组分。
在一个具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约1至25％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
在一个优选的具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约1至15％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
在另一个优选的具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约1至10％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
在又一个优选的具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约5％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
在另一个具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约0.1至10％w/w的氢氧化钠。
在一个优选的具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约0.5至5％w/w的氢氧化钠。
在另一个优选的具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约0.5至3％w/w的氢氧化钠。
在又一个优选的具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约1.5％w/w的氢氧化钠。
在另一个具体实施方式
中，该无菌溶液可以进一步包括甘露醇。在无菌溶液包括甘露醇的具体实施方式
中，该无菌溶液通过首先在适宜量的水中溶解该5’-磷酸吡哆醛和氢氧化钠并调节pH，随后在该5’-磷酸吡哆醛/氢氧化钠溶液中溶解甘露醇来制备。然后将得到的溶液灭菌，例如通过过滤灭菌。
在一个具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约0.2至10％w/w的甘露醇。
在一个具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约0.5至5％w/w的甘露醇。
在一个优选的具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约3％w/w的甘露醇。
在一个更优选的具体实施方式
中，该无菌溶液将包含约5％w/w的5’-磷酸吡哆醛、约1.5％w/w的氢氧化钠以及约2.8％w/w的甘露醇。
然后该无菌溶液可以以合适的体积分装入无菌的塑料容器或玻璃容器例如安瓿或小瓶中。
装入单个小瓶中的5’-磷酸吡哆醛的量可以在25mg和1000mg之间，50和1000mg之间以及更优选地在100和750mg之间变化。氢氧化钠和甘露醇的量将取决于5’-磷酸吡哆醛的量。在本发明的一个具体实施方式
中，该冻干制剂的单一单位剂型包括约250mg的5’-磷酸吡哆醛、80.5mg的氢氧化钠、150mg的甘露醇以及5.0mlWFI(注射用水)。
一旦该无菌溶液已经等份装入容器中，则该溶液在-20和-45℃之间的温度下冷冻。可以在该温度下维持基本上已经冷冻的水溶液直至开始冻干。
可以实施该基本上已冷冻的水溶液的冻干，包括例如初级干燥和次级干燥(secondary drying)。初级干燥可通过使用可控的施加真空和加热经由升华而完成，例如在约0.1至0.5托实际真空条件下进行足够时间以达到除去基本上所有的冷冻水和/或其它溶剂。随后优选在基本类似的真空下完成次级干燥，以尽可能多的除去最后的痕量的吸附水(adsorbed water)或其它溶剂，由此提供了干燥的块状物或粉末。
完成初级干燥的温度在该过程开始时范围在-10至0℃之间，以维持溶液于基本或完全冷冻的形式。随着该过程的进展且该产物温度达到期望的储存温度，初级干燥期完成。完成次级干燥的温度范围在25至35℃之间，以除去任何吸附水和/或其它溶剂。得到的块状物或粉末的含水量优选以重量计低于2.5％。一旦冻干完成，随后可将含有该冻干制剂的无菌塑料或玻璃容器塞住或密封。
当储存于低光条件下且温度为2至8℃之间时，得到的冻干制剂在物理和化学上是稳定的。
5’-磷酸吡哆醛的可注射制剂以及制备方法 另一方面，本发明提供了一种含有浓度高于添加物浓度的5’-磷酸吡哆醛的可注射制剂，其利用适合于静脉给药的无菌载体从根据本发明的冻干制剂重组而成。优选地，根据本发明的冻干制剂在适当体积的WFI(注射用水)中重组，以提供该可注射制剂。得到的可注射制剂特别适合于推注给药。优选地，该可注射制剂中5’-磷酸吡哆醛的浓度在1至100mg/ml、5至75mg/ml，并且更优选在10和50mg/ml之间的范围。
用于制备5’-磷酸吡哆醛的可注射制剂的试型盒 另一方面，本发明提供了一种可用于制备根据本发明的可注射制剂的试剂盒，包括用于制备可注射制剂的说明书(instruction)以及分装在容器中的(a)根据本发明的5’-磷酸吡哆醛的冻干制剂；以及(b)一种适合于静脉给药的无菌载体。在一个优选的具体实施方式
中，该无菌载体是WFI。在另一个优选的具体实施方式
中，该试剂盒进一步包括用于该可注射制剂的容器，确定所述容器的尺寸以有助于制备所选体积和浓度的可注射制剂。
该冻干制剂和无菌载体可以等分成适合于单次推注的体积。该冻干制剂和无菌载体可以等分成适合于加量给药(或长期给药，extended administration)的体积。该试剂盒可以包括容器，确定该容器的尺寸以有助于制备用于注射无需另外的测量的指定浓度和体积的制剂。该容器可以是注射器本体或者适用于注射器。
5’-磷酸吡哆醛的可注射制剂的用途 对高剂量5’-磷酸吡哆醛耐受性的限制因素是胃肠道不适，主要表现在恶心和呕吐。本发明提供了新型的可注射制剂，适合于静脉给予高剂量的5’-磷酸吡哆醛，并且与口服给药相关的胃肠道副作用最低。根据本发明的可注射制剂克服了现有技术中5’-磷酸吡哆醛静脉制剂的稳定性问题。包含在本发明可注射制剂中的5’-磷酸吡哆醛的水溶液的稳定性相对于现有技术的在溶液中高度光敏感且粉末形式程度更差的5’-磷酸吡哆醛制剂有所改善。相对于现有技术的制剂，根据本发明的静脉制剂不需要或较低程度地需要含有用于改善稳定性和用于增加储存时间的防腐剂。
因此，本发明提供了一种治疗需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者的方法，包括静脉给予根据本发明的可注射制剂。
另一方面，本发明提供了一种降低与口服5’-磷酸吡哆醛或其药用盐相关的恶心和呕吐的发生率的方法，所述方法包括给予有效量的根据本发明的可注射制剂的步骤。
5’-磷酸吡哆醛的静脉给药对于经受外科手术且需要抗血小板和抗血栓形成治疗剂以减少局部缺血并发症频率的患者的治疗特别有用。另一方面，本发明提供了一种治疗经受外科手术且需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者的方法，包括静脉给予根据本发明的可注射制剂。该外科手术可以是心血管相关手术例如冠状动脉旁路移植术(CABG)或经皮冠状动脉介入术(PCI)。
单一剂量的可注射制剂可含有10和1000mg之间的5’-磷酸吡哆醛，优选含有50mg和100mg之间，100和1000mg之间的5’-磷酸吡哆醛，并且更优选地含有250和1000mg之间的5’-磷酸吡哆醛。根据本发明的可注射制剂适合于每天给药一次或两次，例如单次推注。该可注射制剂还可以用于长期(extended)或持续给药。
该可注射制剂通常以用于治疗或预防一种或多种特定指征(specific indication)的有效量给予。应该理解，最佳剂量将通过用于每种处理药征和指征的标准方法来确定，考虑该指征、其严重性、并发条件等。治疗有效剂量还指足够引起与这样的疾病相关的症状的改善的化合物量。用于配制和给予该即时施用化合物的技术可以在最新版的“Remington’s Pharmaceutical Sciences，”MackPublishing Co.，Easton，Pa.，中查到。为了对哺乳动物尤其是人类给药，期望活性剂的每日剂量水平为100至1000mg，通常为约200至500mg。在任何情况下，医师可决定最适合于个体的实际剂量，且将随着年龄、体重和特定个体的反应而变化。上述剂量是示例性的一般情况。当然，可能存在某些需要使用较高或较低剂量范围的个别情况，并且这种情况在本发明的范围之内。
尽管已经参照示例的具体实施方式
对本发明进行了描述，但应该理解，本发明并不限于这些明确的具体实施方式
，且可以由本领域的普通技术人员实现其中的多种变化和更改。所有这些变化和更改均包括在所附的权利要求书中。
实施例 实施例1-5’-磷酸吡哆醛(P5P)冻干制剂的制备 表1列出了用于单次剂量的5’-磷酸吡哆醛冻干制剂的配方。每个小瓶提供250mg的P5P。
表1-配方 下列程序(步骤)用于制备5L批量的5’-磷酸吡哆醛冻干制剂。可以通过按比例增加或减少相对量而按比例扩大或缩小批量大小。
玻璃器皿和小瓶的制备-玻璃小瓶在250℃±15℃的温度下洗涤并除去热原。所有用于制备该冻干制剂的玻璃器皿和设备包括磁力搅拌棒、移液管、爱伦美氏(烧)瓶(锥形瓶)、细颈瓶、过滤器、塞子以及封口(密封)，都通过在121℃±3℃的温度下进行45分钟高压灭菌处理(autoclaving)而灭菌。
P5P溶液的制备-计算制备每小瓶250mg的最终浓度所需的P5P量时，使用校正系数1.08，因为该活性药物成分中的含水量是7.71％。
用于每5L批量的4kg的WFI(总需量的80％)在溶液的中心用氮冲洗。通过磁力彻底搅拌，将80.6g的氢氧化钠和270.4g的P5P溶于该4kg的WFI中以提供清澈溶液。用1N NaOH或1N HCl将该溶液的pH相应的调整为7.0至7.3的pH。pH调整后，将150.3mg的甘露醇溶于P5P/NaOH溶液中同时进行持续的磁力搅拌，直至溶液清澈。随后加入另外的WFI，以将溶液的重量调节至5.245kg(密度1.049g/ml)。该溶液随后经过0.2μm Milipack K40伽马金模式过滤器(gamma gold model filter)进行无菌过滤，并检测过滤器的完整。
冻干-将单个小瓶在等级100的清洁室内利用剂量体积设置为5.10-5.30ml(以重量计相当于5.35-5.56g/小瓶)的范围的分配泵进行无菌填充。该小瓶用不含2-巯基苯并噻唑的溴化丁基塞子(bromobutyl stopper)部分堵塞。部分堵塞的小瓶托架放入已预冷至4℃的冻干室中。冻干采用以下参数进行冷却温度-45℃；初级冷却时间-6小时；初级干燥时间(在氮气气氛中)-50小时；次级干燥温度35℃；次级干燥时间-48小时。
冻干后，小瓶用具有连接的塑料扣的铝封条束缚，该小瓶在2-8℃下保存。
实施例2-静脉与口服给予5’-磷酸吡哆醛(P5P)的生物利用度比较 进行了一次临床试验，以比较静脉给予P5P和口服给予P5P的药物动力学。该试验是一个单次剂量递增的研究。
对于静脉给药，P5P是在禁食的条件下通过推注来给予的。研究了P5P的下列剂量1、5、10和20mg/kg。6个受试者被分配到每个剂量组。
对于口服给药，P5P是在禁食的条件下作为单一的无包衣片或者作为单一的肠溶片来给予的。对于无包衣片，研究了P5P的下列剂量5、10、17.5和25mg/kg。对于肠溶片，研究了P5P的下列剂量15、30和60mg/kg。
在静脉或口服给药后经过24小时的时间间隔评价血浆和尿中的P5P、吡哆醛和4-吡哆酸。结果列于下面的表2和表3中。
表2-P5P单次静脉剂量的药物动力学参数 表3-P5P单次口服剂量的药物动力学参数 结果表明，P5P的生物利用度在静脉给药时比口服给药高。
实施例3-比较5’-磷酸吡哆醛(P5P)的单次静脉剂量1，5，10和20mg/kg时的药物动力学和不良事件的发生率 方法学-这是一个单盲法、单次剂量递增、非随机的4-阶段(phase)非交换型研究，其设计为在禁食条件下给予四组健康的男性和女性受试者，评估在剂量为1，5，10，20mg/kg时的P5P可静脉注射溶液的安全性和耐受性，并估计P5P的药物动力学参数。
在禁食条件下，将受试者分配到四个组(每组6个受试者)之一。
在每一阶段给药(dosing)后测量经过24小时时间间隔收集的血浆样品中的5’-磷酸吡哆醛(P5P)浓度。
基于最终数据集(data set)中的每一个受试者的5’-磷酸吡哆醛(P5P)的血浆水平，估计药物动力学参数AUCt、AUCinf、Cmax、Tmax、Kel、Thalf、Vd、CL、MRT和F。
在整个研究中，通过记录生命体征、ECG和已报道过的不良事件，收集对于每个受试者的安全数据。
受试者个数(计划的和分析的) 给第1组中6个受试者服药(1mg/kg)。6个受试者完成了该研究的阶段1并作了分析。
给第2组中6个受试者服药(5mg/kg)。6个受试者完成了该研究的阶段2并作了分析。
给第3组中6个受试者服药(10mg/kg)。6个受试者完成了该研究的阶段3并作了分析。
给第4组中6个受试者服药(20mg/kg)。5个受试者完成了该研究的阶段4并作了分析。
诊断和入选的主要标准 在给药前的21天内，受试者符合下列所有包括的标准。
1)健康不吸烟的男性和女性受试者，年龄在18到55岁(包括18岁和55岁)。
2)体重在对于受试者的身高和体型为适当体重±10％之内(如统计局1983年公布的都市人寿保险公司标准(Metropolitan LifeInsurance Company Scale，Statistical Bureau))。
3)对于以下为阴性HIV；乙肝表面抗原和丙肝抗体；滥用药物的尿检测(大麻、安非他命、巴比妥酸盐、可卡因、阿片剂、苯并二氮类(benzodiazepine)和美沙酮)；可替宁(尿检)；血清HCG(仅女性)。
4)体格检查中无明显的疾病或者临床上的明显发现。
5)无明显异常的临床实验室值。
6)在生命体征测定和12导联心电图(ECG)中，无临床明显发现。
7)在接受任何研究步骤前，均被告知该研究的性质，并给出书面许可。
8)参加本研究的女性不能生孩子(例如绝经后、输卵管结扎、子宫切除术)或者愿意保持禁欲(不进行性交)或者愿意采用有效的双重屏障节育方法(伴侣使用避孕套而女性使用阴道隔膜(diaphragm)、避孕海绵、杀精子药或IUD)或者愿意使用激素避孕药(口服、埋入皮下、贴片或注射)。
9)参与本研究的女性处于非哺乳期。
所用的检测产品是P5P静脉可注射溶液，50mg/ml，可以按照实施例1中的方法进行制备(CanAm BioResearch Inc，Canada)；批号LP1459；生产日期12/03。通过静脉注射给予单次1，5，10或20mg/kg的剂量。治疗的持续时间是根据单次的剂量。
评估标准 初级终点-安全参数-在本研究中研究的安全参数是生命体征测量值(血压、脉搏率)、ECG测量值(服药后1，2和12个小时)、血小板功能检测、以及在研究期间和实验室评估(临床化学、血液学、尿分析)过程中受试者经历的不良事件严重度和因果关系。
次级终点-药物动力学(PK)参数-通过有效的分析方法测定5’-磷酸吡哆醛的血浆浓度。基于这些浓度水平，评估AUCt、AUCinf、Cmax、Tmax、Kel、Thalf、Vd、CL、MRT和F。
统计方法-对该评估的药物动力学参数，通过处理进行描述统计学计算。
讨论和结论 总的说来，在该临床研究中建立的P5P可注射溶液的安全曲线(安全分布图，safety profile)表明，当单次剂量给药达到20mg/kg的剂量时，该产品耐受良好，无严重或持久的治疗相关影响。在本研究中观察到的P5P常见副作用包括恶心、呕吐和胃不适。没有不良事件对受试者的安全性或研究结果的完整性产生明显影响。
基于从本研究结果产生的不良事件分布图(profile)，P5P在达到20mg/kg的剂量下是安全且良好耐受的。
P5P的给药前浓度非常低，低于相应Cmax值的1％(范围0.01％到0.44％)。吡哆醛(PAL)的给药前浓度稍大，在Cmax值的0.06％和2.47％之间。
仅一个受试者(第23号受试者)表现出4-吡哆酸(PA)的非零给药前水平，占Cmax参数的0.06％。注意，需要在数据的药物动力学分析之前，在可用的情况下，从测得的分析物水平中减去基线值(给药前水平的平均值)。
在最初的迅速增加后，P5P浓度-时间分布表现出中度的下降，主要由于在分布阶段之后是一个较慢的消除阶段(图1至3)。终末线性阶段(terminal linear phase)仅考虑三个数据点并用于估计表观的消除半衰期。为了捕获P5P的真实消除阶段，可能24小时的取样间隔还不足够长。在5和6小时之间(表4)，全部剂量的估计值均一致。
表4-P5P的血浆药物动力学参数 对于两种代谢产物，吡哆醛(PAL)和4-吡哆酸(PA)，未明显观察到分布支配的阶段。对于PAL，表观消除半衰期为约4小时(表5)，而对于PA为约2到3.5小时(表6)。
表5-PAL的血浆药物动力学参数 表6-PA的血浆药物动力学参数 在静脉输注开始后，PAL在约0.30到0.70小时达到最大血浆水平(图4至图6)，而PA在约0.70到1.0小时达到最大浓度(图7至图9)。这些值与这些代谢物的相继形成一致。
未改变的P5P的尿排泄可以忽略不计，尿液中发现低于给药剂量0.5％的P5P(表10)。类似地，几乎很少剂量的PAL排泄在尿液中，在整个剂量的约2到3％之间(表10)。
尿液中PA占最大量。超过24小时的时间间隔，所给剂量的30％和52％之间在尿液中以4-吡哆酸的形式排泄。
药物动力学参数与剂量之间关联性的分析结果总结于下面的表7中。
表7-尿排泄总结 表8-药物动力学参数与剂量的关联等式的总结 所有分析物的血浆AUCinf和Cmax参数均呈剂量依赖性。线性回归的测定系数(R2)非常高，并且估计的剂量系数(b1)明显不同于零。
可清楚地表示出血浆P5P Cmax参数的剂量正比常数(proportionality)，因为b1的95％置信区间(CI)包含1。在P5P的血浆AUCinf似乎轻微偏离正比常数的情况下，b1的95％CI，085-0.96，不包含值1。然而，偏差似乎非常小，并且可以用实验误差解释。该偏差可能是清除(CL)观察到的剂量依赖性的原因。b1系数明显不同于0，但测定的系数非常低(0.26048)，而且b1的值也非常低(0.10)。
在代谢物PAL和PA的情况下，两个参数AUCinf和Cmax，似乎增加高于基于剂量的预期。b1系数的95％置信区间高于值1。对于PAL分析物，这种偏差更显著。
对于所有三个分析物，表观消除半衰期(Thalf)以及平均滞留时间(MRT)均不依赖于剂量。剂量系数(b1)并非显著不同于0，因此可以推断，消除半衰期和平均滞留时间在1mg/kg到20mg/kg的剂量范围内是恒定的。
实施例4-经过4天时间，单次静脉剂量10mg/kg的5’-磷酸吡哆醛(P5P)的生物利用度和不良事件的发生率 分析的数据集-连续4天经静脉给予6名健康成年不吸烟者每日单一剂量10mg/kg的P5P，并完成了该研究。按照研究的实验记录，所有完成研究的受试者的数据用于药物动力学和统计学分析。
人口统计学-年龄(岁)平均值＝33±10；范围＝19-49；中位数＝32。身高(cm)平均值＝168.7±4.8；范围＝163.0-175.5；中位数＝68.75。体重(kg)平均值＝70.9±10.0；范围＝56.0-83.2；中位数＝68.75。BMI(kg/m2)平均值＝24.9±3.0；范围＝20.6-29.3；中位数＝25。
分析方法-血浆和尿样品用于分析。通过HPLC/FLD测定P5P、PAL和PA水平。对于血浆，定量水平是5ng/ml，而对于尿液，定量水平是100ng/ml。对于血浆，样品分析的校准曲线范围为5ng/ml到5000ng/ml，而对于尿液是100ng/ml到50,000ng/ml。
安全性方法-本研究中研究的安全性参数为不良事件、生命体征测量值、ECG、体格检查和标准实验室评估。
治疗顺应性的测量值 因为受试者在直接观察下给药，所以治疗顺应性的测量值是100％；确认受试者身份，并用预先分配给药法进行交叉检查。此外，从第0天注射安慰剂前至少10小时直到第5天的第4次给药抽血后24小时，受试者被限制在SFBC Anapharm的临床研究机构。
统计方法 每个受试者的P5P、PAL和PA血浆浓度、取样时间以及治疗日，从BRI生物药剂学研究公司(BRI Biopharmaceutical ResearchInc.)电子传送到SFBC An.apbam1的统计部门。并对照复印件进行数据的交叉检查。
取样过程中的时间偏差作如下处理对于所有的取样时间，如果计划和实际取样时间之间的差异低于1分钟，则认为可接受。当差异超过了这个时间限制时，实际取样时间(四舍五入到小数点后三位)可用来计算除给药前样品(无论时间偏差如何，其一直报告为零，即0.000)之外的药物动力学参数。计划取样时间示于本报告统计部分的浓度表和曲线中。
在浓度表中，不存在的样品记录为NS(无样品)。这些样品不进行药物动力学和统计学处理。
在SFBC Anapharm进行药物动力学分析(非分区和分区)。利用Bioequiv(release 3.40)或WinNonLinTM(release 4.0.1)计算药物动力学参数。Bioequiv是SFBC Anapharm的一个专有软件，开发并检测用于生物等效性研究。根据FDA、HPFB和BMEA指导(手册，guide)，该软件实施药物动力学参数的非分区分析和统计学分析(借助于SAS release 6.12)。
对于每个取样时间和处理，均计算P5P(基线校正和未校正)、PAL和PA的血浆浓度的平均值、标准差(SD)、变异系数(CV(％))和范围(最小值和最大值)。
对于非分区药物动力学分析，计算AUC0-t(ng·h/mL)、AUC0-τ(ng·h/mL)、AUC0-inf(ng·h/mL)、Cmax(ng/mL)、Cmin(ng/mL)、Cavg(ng/mL)、Fl(％)、Ae0-t(ng)、AUCt/inf(％)、Tmax(h)、T1/2el(h)、Kel(h-1)、TLIN(h)、LQCT(h)、CLT(L/h)、CLR(L/h)、Vβ(L)、MRT(h)以及累积率的均值、SD、CV(％)、范围(最小值和最大值)、中位数以及四分位数范围(四分位数间距)。这些药物动力学参数的计算在下文加以解释。
最大观测浓度、最小观测浓度、平均浓度以及观测到的峰浓度的时间 对于每个受试者和每个分析物，均确定最大观测浓度Cmax以及达到峰浓度的时间Tmax。对于第四天的数据，需确定对于每个受试者和每个分析物的最小观测浓度Cmin，并根据AUC0-τ/τ计算Cavg。
波动百分比-对于第4天的数据，根据100*([Cmax-Cmin]/Cavg)计算经过一次给药间隔(F1(％))的波动的峰-谷(peak-throuth)百分比。
半衰期和消除速率常数-为了计算消除速率常数(Kel)，对血浆浓度值(y)相对时间(x)的自然对数(Ln)进行回归分析。在对数线性消除阶段开始的时间点(TLIN)与在定量限值以上最后浓度出现的时间(LQCT)之间进行计算。Kel由斜率乘以(-1)得到，而表观半衰期(T1/2el)由(ln2)/Kel得到。
TLIN和LQCT-科学家(根据SFBC Anapharm的标准操作程序)确定每一个受试者和每一次治疗的ln-线性Kel计算开始的时间点TLIN和用来估计该Kel的最后可定量浓度的取样时间LQCT。在终点的消除阶段过程中的至少4个非零观测值用来计算Kel。如果少于4个观测值是可用的，则采用3个观测值中的最小值。
浓度-时间曲线下的区域-从0.000h的时间直到最后非零浓度利用线性梯形法则计算AUC0-t。
从0.000h的时间至24.0h利用线性梯形法则计算AUC0-τ。
AUC0-inf计算如下 AUC0-t+Ct/Kel 其中，Ct＝对于那种治疗的最后观测到的非零浓度，AUC0-t＝从时间零至对于该分析物的最后非零浓度的时间的AUC，以及Kel＝消除速率常数。
AUCt/inf根据AUC0-t(或AUC0-τ)与AUC0-inf的比值来计算。
总清除率和肾脏清除率-估计了P5P的总体清除率，并根据剂量/AUC0-inf进行计算。估计所有分析物的肾脏清除率，并根据Ae0-t/AUC0-inf进行计算，其中Ae0-t是从0.000 h至24.0 h的累积尿排泄。
分布体积-基于终点阶段的分布体积(Vβ)根据P5P的剂量/(Kel*AUC0-inf)以及PAL和PA的Ae0-t/(Kel*AUC0-inf)计算。对于第4天的数据，使用AUC0-τ替换AUC0-inf。
平均滞留时间-平均滞留时间根据AUMC/AUC0-inf进行计算。
累积率-对于第4天的数据，理论累计率(使用研究的给药间隔并且假设剂量-线性动力学)根据1/[1-e(-Kel*τ)]进行计算。
统计分析-对于所有的分析物，均对AUC0-t、AUC0-inf和Cmax的转化数据进行方差分析。所有的ANOVA均完成了SAS(视窗下运行的release 6.12)的常用线性模型程序(GLM)。该模型包括受试者和治疗日。报告平方(I型、II型、III型和IV型)的所有总数。对照剩余均方差(residual mean square error)检验受试者和治疗日效果。概率(P)值衍生自III型的平方和。对于所有的分析物，如果与“F”相关的概率小于0.050，则认为该效果是统计学显著的。基于成对比较ln转化的AUC0-t、AUC0-inf和Cmax数据，测定最小均方(least square mean)(根据公式“e(X-Y)×100”计算)的比例以及ln-转化的AUC0-t、AUC0-inf和Cmax的90％几何置信区间。最后，还确定了受试者体内(intrasubject)的CV。
药物动力学和统计问题分析 非分区药物动力学分析 用于本研究的主要非分区药物动力学参数为AUC0-t、AUC0-inf和Cmax，而次要药物动力学参数为AUCt/inf、Tmax、Kel、Tl/2el、CLT(用于P5P)、CLR、Vβ、MRT以及Ae0-t。对于第4天的数据，还计算下列参数Cmin、Cavg、Fl(％)、AUC0-τ以及累计率。
第1天和第4天的用于药物动力学分析的血样，在每一天给药前和给药后0.083、0.167、0.250、0.500、0.750、1.00、1.50、2.00、3.00、4.00、6.00、8.00、12.0，和24.0小时收集。在8个时间间隔第1天和第4天给药后的0.000-4.00、4.00-8.00、8.00-12.0和12.0-24.0小时收集尿液样品。
按照治疗日，将每个受试者在每次取样时间测得的基线校正P5P的血浆浓度示于表9和表10中，未校正P5P的血浆浓度示于表11和表12中，PAL的血浆浓度示于表13和表14，以及PA的血浆浓度示于表14和表15中。对于基线校正的P5P，图10-11给出了其在取样期间的平均血浆水平曲线(未转化水平以及ln-转化的水平)，图12-13给出了未校正P5P的相应水平，图14-15给出了PAL的相应水平，以及图16-17给出了PA的相应水平。ln-转化的数据图中的线表示用来估计Kel的回归线。
表9-P5P(校正的)药物动力学参数总结 表10-P5P(校正)的非分区药物动力学参数总结 1利用最小均方，根据公式e(P5P(第4天)(B)-P5P(第1天)(A))×100计算。
2利用ln-转化的数据的90％几何置信区间 表11-P5P(未校正)药物动力学参数总结 表12-P5P(未校正)的非分区药物动力学参数总结 1利用最小均方，根据公式e(P5P(第4天)(B)-P5P(第1天)(A))×100计算。
2利用ln-转化的数据的90％几何置信区间 表13-PAL的药物动力学参数总结 表14-PAL的非分区药物动力学参数总结 1利用最小均方，根据公式e(PAL(第4天)(B)-PAL(第1天)(A))×100计算。
2利用ln-转化的数据的90％几何置信区间 表15-PA的药物动力学参数总结 表16-PA的非分区药物动力学参数总结 1利用最小均方，根据公式e(PA(第4天)(B)-PA(第1天)(A))×100计算。
2利用ln-转化的数据的90％几何置信区间 对于每个受试者根据治疗日计算的非分区药物动力学参数示于表10、表12、表14和表16中，用于校正和未校正的P5P、PAL和PA。
主要参数 对于每个受试者和分析物，均计算浓度-时间曲线(0-t小时)下的面积。P5P(基线校正)结果示于表9和表10中。AUC0-t的平均值(％CV)在第1天为277978.56ng·h/mL(19.72％)，而第4天为302742.00ng·h/mL(28.39％)。P5P(未校正)结果示于表11和表12中。AUC0-t的平均值(％CV)在第1天为278624.79ng·h/mL(19.85％)，而第4天为303393.72ng·h/mL(28.51％)。PAL结果示于表13和表14中。AUC0-t的平均值(％CV)在第1天为22292.93ng·h/mL(15.31％)，而第4天为29682.94ng·h/mL(16.92％)。PA结果示于表15和16中。AUC0-t的平均值(％CV)在第1天为20736.28ng·h/mL(17.29％)，而第4天为20704.80ng·h/mL(17.94％)。对ln-转化的AUC0-t数据完成的ANOVA示于分别为P5P(基线校正)、P5P(未校正)、PAL和PA的表10、表12、表14和表16中。ANOVA未检测到第4天和第1天之间P5P(基线校正和未校正)和PA的该参数的任何统计学显著性差异。ANOVA检测到第4天和第1天之间PAL的该参数的统计学显著性差异。还分别测定了P5P(基线校正)、P5P(未校正)、PAL和PA的最小均方比值、90％几何置信区间以及受试者体内CV。这些结果总结于表17中。
表17-AUC0-t的最小均方比值、90％几何置信区间以及受试者体内CV总结 计算了每一个受试者和分析物的浓度-时间曲线(0-无穷大)下的面积。P5P(基线校正)的结果示于表9中，第1天的AUC0-inf平均值(％CV)为283108.04ng·h/mL(20.70％)，而第4天为311764.84ng·h/mL(29.09％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。第1天的AUC0-inf均值(％CV)是284071.57ng·h/mL(20.91％)，而第4天是312753.76ng·h/mL(29.27％)。PAL的结果示于表13中。第1天的AUC0-inf均值(％CV)是22444.06ng·h/mL(15.13％)，而第4天是30077.45ng·h/mL(1 6.66％)。PA的结果示于表15中。第1天的AUC0-inf均值(％CV)是21219.58ng·h/mL(17.37％)，而第4天是21097.95ng·h/mL(17.13％)。
ANOVA未检测到第4天和第1天之间P5P(基线校正和未校正)和PA的该参数的任何统计学显著性差异。ANOVA检测到第4天和第1天之间PAL的该参数的统计学显著性差异。另外，分别测定了P5P(基线校正)、P5P(未校正)、PAL和PA的最小均方比值、90％几何置信区间以及受试者体内CV。这些结果总结于表18中。
表18-AUC0-inf的最小均方比值、90％几何置信区间以及受试者体内CV总结 计算了对于每一个受试者和分析物的峰值或最大血浆浓度。P5P(基线校正)的结果示于表9中，第1天的Cmax均值(％CV)是190536ng/mL(14.69％)，而第4天是213392ng/mL(21.92％)。P5P(未校正)的结果示于表11中，第1天的Cmax均值(％CV)是190564ng/mL(14.69％)，而第4天是213419ng/mL(21.92％)。PAL的结果示于表13中。第1天的Cmax均值(％CV)是7629ng/mL(79.63％)，而第4天是6902ng/mL(42.54％)。PA的结果示于表15中。第1天的Cmax均值(％CV)是4362ng/mL(18.27％)，而第4天是4238ng/mL(18.20％)。ANOVA未检测到对于所有分析物的该参数在治疗之间的任何统计学显著性差异。还分别测定了P5P(基线校正)、P5P(未校正)、PAL和PA的最小均方比值、90％几何置信区间以及受试者体内CV。这些结果总结于表19中。
表19-Cmax的最小均方比值、90％几何置信区间以及受试者体内CV总结 第1天和第4天共有的次要参数 计算了对于每一个受试者和每一个分析物的AUC0-t与AUC0-inf的比率。P5P(基线校正)的结果示于表9中。第1天的AUCt/inf均值(％CV)是98.33％(0.96％)，而第4天是97.23％(1.05％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。第1天的AUCt/inf均值(％CV)是98.24％(1.03％)，而第4天是97.1 4％(1.07％)。PAL的结果示于表13中。第1天的AUCt/inf均值(％CV)是99.31％(0.41％)，而第4天是98.66％(0.89％)。PA的结果示于表15中。第1天的AUCt/inf均值(％CV)是97.73％(1.24％)，而第4天是98.01％(1.45％)。所有分析物在第1天和第4天的平均AUCt/inf均大于80％，表明取样持续时间是充足的。
计算了对于每一个受试者和每一个分析物(除P5P基线校正的数据)的尿液(0-t小时)中排泄总量。P5P(未校正)的结果示于表11中。第1天的Ae0-t均值(％CV)是848625ng(72.13％)，而第4天是558650ng(74.20％)。PAL的结果示于表13中。第1天的Ae0-t均值(％CV)是18583712ng(37.13％)，而第4天是21011635ng(21.38％)。PA的结果示于表15中。第1天的Ae0-t均值(％CV)是172950596ng(38.45％)，而第4天是225885311ng(20.95％)。
测定了对于每一个受试者和分析物达到峰值浓度的时间。P5P(基线校正和未校正)的结果分别总结于表9和表11中。第1天的Tmax平均值(％CV)是0.089h(45.25％)，而第4天是0.081h(41.92％)。PAL的结果总结于表13中。第1天的Tmax平均值(％CV)是0.525h(19.45％)，而第4天是0.691h(27.22％)。PA的结果总结于表15中。第1天的Tmax平均值(％CV)是0.611h(35.24％)，而第4天是0.528h(19.13％)。
计算了对于每一个受试者和分析物的消除速率常数。P5P(基线校正)的结果示于表9中。第1天的Kel均值(％CV)是0.1381h-1(16.38％)，而第4天是0.1183h-1(14.41％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。第1天的Kel均值(％CV)是0.1360h-1(16.60％)，而第4天是0.1170 h-1(14.35％)。PAL的结果示于表13中。第1天的Kel均值(％CV)是0.2064h-1(12.70％)，而第4天是0.1775h-1(13.27％)。PA的结果示于表15中。第1天的Kel均值(％CV)是0.3092h-1(17.01％)，而第4天是0.2547h-1(20.59％)。
计算了对于每一个受试者和治疗日的表观半衰期。P5P(基线校正)的结果示于表9中。第1天的T1/2el均值(％CV)是5.14h(17.65％)，而第4天是5.96h(14.3 3％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。第1天的T1/2el均值(％CV)是5.22h(18.00％)，而第4天是6.02h(14.14％)。PAL的结果示于表13中。第1天的T1/2el均值(％CV)是3.40h(12.11％)，而第4天是3.96h(13.56％)。PA的结果示于表15中。第1天的T1/2el均值(％CV)是2.30h(19.38％)，而第4天是2.83h(23.55％)。
计算了对于每一个受试者的P5P(基线校正和未校正)总的体清除率。P5P(基线校正)的结果示于表9中。第1天的CLT均值(％CV)是2.55L/h(14.75％)，而第4天是2.42L/h(15.82％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。第1天的CLT均值(％CV)是2.55L/h(14.92％)，而第4天是2.42L/h(15.92％)。
计算了对于每一个受试者和分析物(基线校正的P5P除外)的肾清除率。P5P(未校正)的结果示于表11中。第1天的CLR均值(％CV)是0.00279 L/h(65.53％)，而第4天是0.00174L/h(44.71％)。PAL的结果示于表13中。第1天的CLR均值(％CV)是0.85952L/h(43.20％)，而第4天是0.72392L/h(27.23％)。PA的结果示于表15中。第1天的CLR均值(％CV)是8.61246 L/h(49.20％)，而第4天是10.75339 L/h(20.36％)。
计算了对于每一个受试者和分析物基于终点阶段的分布体积。P5P(基线校正)的结果示于表9中。第1天的Vβ均值(％CV)是18.59 L(10.05％)，而第4天是20.75L(19.65％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。第1天的Vβ均值(％CV)是18.82L(10.03％)，而第4天是20.92L(19.36％)。PAL的结果示于表13中。第1天的Vβ均值(％CV)是4.35L(50.05％)，而第4天是4.21L(38.82％)。PA的结果示于表15中。第1天的Vβ均值(％CV)是28.61 L(49.49％)，而第4天是44.45 L(33.63％)。
计算了对于每一个受试者和分析物的平均滞留时间。P5P(基线校正)的结果示于表9中。第1天的MRT均值(％CV)是3.40h(20.68％)，而第4天是3.99h(16.84％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。第1天的MRT均值(％CV)是3.45h(21.20％)，而第4天是4.03h(16.93％)。PAL的结果示于表13中。第1天的MRT均值(％CV)是4.06h(17.24％)，而第4天是4.74h(20.29％)。PA的果示于表15中。第1天的MRT均值(％CV)是3.85h(15.94％)，而第4天是4.24h(21.69％)。
第4天的次要参数特性 第4天时得到每一个受试者和分析物的最低浓度或波谷浓度(通过浓度，through concentration)。P5P(基线校正)的结果示于表9中。Cmin均值(％CV)是946ng/mL(61.50％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。Cmin均值(％CV)是974ng/mL(61.89％)。PAL的结果示于表13中。Cmin均值(％CV)是56.8ng/mL(49.95％)。PA的结果示于表15中。Cmin均值(％CV)是12.9ng/mL(194.30％)。
第4天时得到每一个受试者和分析物的平均浓度。P5P(基线校正)的结果示于表9中。Cavg均值(％CV)是12614.42ng/mL(28.40％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。Cavg均值(％CV)是12641.59ng/mL(28.52％)。PAL的结果示于表13中。Cavg均值(％CV)是1236.81ng/mL(16.92％)。PA的结果示于表15中。Cavg均值(％CV)是885.04ng/mL(16.25％)。
第4天时得到每一个受试者和分析物的波动百分比。P5P(基线校正)的结果示于表9中。Fl(％)均值(％CV)是1734.69％(21.82％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。Fl(％)均值(％CV)是1731.62％(21.88％)。PAL的结果示于表13中。Fl(％)均值(％CV)是537.81％(28.22％)。PA的结果示于表15中。Fl(％)均值(％CV)是482.53％(17.05％)。
第4天时计算了每一个受试者和分析物的浓度-时间曲线(0-t(tau))下的面积。P5P(基线校正)的结果示于表9中。AUC0-τ均值(％CV)是302742.00ng·h/mL(28.39％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。AUC0-τ均值(％CV)是303393.72ng·h/mL(28.51％)。PAL的结果示于表13中。AUC0-τ均值(％CV)是29682.94ng·h/mL(16.92％)。PA的结果示于表15中。AUC0-τ均值(％CV)是21240.85ng·h/mL(16.25％)。
第4天时计算了每一个受试者和分析物的理论累积率。P5P(基线校正)的结果示于表9中。该累积率均值(％CV)是1.07(2.62％)。P5P(未校正)的结果示于表11中。该累积率均值(％CV)是1.07(2.63％)。PAL的结果示于表13中。该累积率均值(％CV)是1.02(0.91％)。PA的结果示于表15中。该累积率均值(％CV)是1.00(0.58％)。
非分区药物动力学和统计学结论 ANOVA未检测到P5P(基线校正和未校正)和PA的ln-转化的AUC0-t、AUC0-inf和Cmax在治疗日之间任何统计学显著性差异。
利用ANOVA，检测到PAL的ln-转化的AUC0-t、AUC0-inf在治疗日之间的统计学显著性差异，但未检测到Cmax的显著性差异。
所有分析物的平均AUCt/inf均大于80％，表明取样持续时间足够良好地表征其动力学。AUC0-t、AUC0-inf和Cmax的受试者体内CV对于P5P(基线校正)分别是7.56％、7.14％和9.84％；对于P5P(未校正)分别是7.54％、7.10％和9.84％；对于PAL分别是3.12％、3.18％和21.10％；而对于PA分别是3.39％、4.20％和2.71％。
本试验的最小均方与ln-转化的AUC0-t、AUC0-inf和Cmax的参照产物的比率的90％几何置信区间的结果，在P5P(基线校正和未校正)和PA而不是PAL的80.00％-125.00％的范围内。对于P5P和PA，这些结果表明根据每天一次的给药方案，可能不会发生累积并且比率(速率，rate)变化以及吸收(对于P5P)或生物转化的程度(对于PA)应该不明显。对于PAL，尽管理论累积率接近1，但观察单个浓度-时间分布，很明显在每天一次给药P5P的四天后，发生了累积。
安全性评估 在本研究的过程中，6名受试者发生了共40次不良事件。3名(50.0％的受试者)受试者报告了注射部位的炎症。然而，经医学助理研究者判断，这些不良事件与程序有关，而与本研究的给药方法不相关。在本研究中报告的可能相关的其余不良事件中，一个以上的受试者报告了以下不良事件恶心、眩晕(感到头晕和眩晕)、感觉异常(感觉像别针或针扎在大拇指(右手)末端以及后颈有刺麻感、以及感觉寒冷(右手))，尿液中出现白细胞。仅有一个受试者报告其它的不良事件低血红蛋白、感觉焦虑、导管部位瘀伤(右手)、尿中出现红细胞、大腿肌肉抽筋、血液中中性粒细胞低、疼痛(双腿)、背部下方疼痛、后颈疼痛、胸两侧丘疹、嘴里唾液多、身体出汗、晕厥、嘴里味道异常以及感觉发热。
恶心、眩晕(感到头晕和眩晕)以及嘴里味觉异常是预测到的不良事件。2名受试者(33.3％受试者)报告了眩晕(感到头晕和眩晕)。3名受试者(50.0％受试者)报告了恶心。1个受试者(16.7％受试者)报告了嘴里味道异常；三名受试者(01到03号受试者)的最高严重度为轻微，一名受试者(04号受试者)为适度。在本研究的过程中，没有人报告腹泻或呕吐。
两名受试者观察到尿液(脓尿)中白细胞(WBC)升高的临床显著的实验室结果。在筛查时以及第1到3天，有一名受试者(#03)的白细胞酯酶为阴性结果(因为白细胞酯酶是阴性，当时未实施显微镜评估)。第4天，该受试者表现出白细胞酯酶+以及WBC为3-5/HPF；第5天，白细胞酯酶保持+，但WBC升到10-20/HPF。约11天后进行的随访实验为正常结果。另一个受试者(#06)在筛查时存在痕量白细胞酯酶和WBC为3-5/HPF，第1天白细胞酯酶为+并且WBC为0-2/HPF；第2天白细胞酯酶为+，并且WBC为阴性；然而，在第1天和第3天，白细胞酯酶的结果为阴性。第4天，该受试者表现出白细胞酯酶为++，而WBC为10-20/HPF；第5天，白细胞酯酶降至+，而WBC降至5-10/HPF。
结论 在本研究过程中，未报告严重、重大或明显的不良事件。根据本研究临床部分的结论，来自研究后实验室检查、体检、生命体征测定以及ECG的结果确认了受试者的健康状态无明显改变。总之，在该临床试验中建立的本制剂的安全模式(分布)表明该产品耐受良好，无严重或持续的治疗相关影响。
本试验的最小均方与ln-转化的AUC0-t、AUC0-inf和Cmax的参照产物的比率的90％几何置信区间的结果，在P5P(基线校正和未校正)和PA而不是PAL的80.00％-125.00％的范围内。对于P5P和PA，这些结果表明每天一次的给药方案，可能不会发生累积并且比率(速率，rate)变化以及吸收(对于P5P)或生物转化的程度(对于PA)应该不显著。对于PAL，尽管理论累积率接近1，但观察单个浓度-时间分布，很明显在每天一次给药P5P的四天后发生了累积。
权利要求
1.一种5’-磷酸吡哆醛的冻干制剂，其通过冻干浓度高于添加物浓度的5’-磷酸吡哆醛和氢氧化钠的冷冻无菌水溶液来制备。
2.根据权利要求1所述的冻干制剂，其中，所述溶液的pH在7.0和7.3之间。
3.根据权利要求1或2所述的冻干制剂，进一步包括甘露醇。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约1至25％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
5.根据权利要求1至3中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约1至15％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
6.根据权利要求1至3中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约1至10％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
7.根据权利要求1至3中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约5％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约0.1至10％w/w的氢氧化钠。
9.根据权利要求1至7中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约0.5至5％w/w的氢氧化钠。
10.根据权利要求1至7中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约0.5至3％w/w的氢氧化钠。
11.根据权利要求1至7中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约1.5％w/w的氢氧化钠。
12.根据权利要求3至11中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约0.1至15％w/w的甘露醇。
13.根据权利要求3至11中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约0.5至10％w/w的甘露醇。
14.根据权利要求3至11中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约0.5至5％w/w的甘露醇。
15.根据权利要求3至11中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约3％w/w的甘露醇。
16.根据权利要求3至15中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约5％w/w的5’-磷酸吡哆醛、约1.5％w/w的所述氢氧化钠以及约2.8％w/w的所述甘露醇。
17.根据权利要求3至16中任一项所述的冻干制剂，其中，所述无菌溶液包含约250mg的5’-磷酸吡哆醛、约80.5mg的氢氧化钠以及约150mg的甘露醇。
18.一种含5，-磷酸吡哆醛的可注射制剂，其利用适合于静脉给药的无菌载体由根据权利要求1至17中任一项所述的冻干制剂重组而成。
19.根据权利要求18所述的可注射制剂，其中，所述无菌载体是注射用水。
20.一种用于制备5’-磷酸吡哆醛冻干制剂的方法，包括以下步骤
(a)制备包含5’-磷酸吡哆醛和氢氧化钠的无菌溶液，所述溶液具有在7.0和7.3之间的pH；
(b)冷冻所述溶液；以及
(c)冻干所述冷冻的溶液。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，步骤(a)进一步包括在所述5’-磷酸吡哆醛和氢氧化钠的无菌溶液中溶入甘露醇。
22.根据权利要求20或21所述的方法，其中，所述无菌溶液包含的5’-磷酸吡哆醛浓度高于添加物浓度。
23.根据权利要求20至22中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约1至25％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
24.根据权利要求20至22中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约1至15％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
25.根据权利要求20至22中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约1至10％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
26.根据权利要求20至22中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约5％w/w的5’-磷酸吡哆醛。
27.根据权利要求20至26中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约0.1至10％w/w的氢氧化钠。
28.根据权利要求20至26中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约0.5至5％w/w的氢氧化钠。
29.根据权利要求20至26中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约0.5至3％w/w的氢氧化钠。
30.根据权利要求20至26中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约1.5％w/w的氢氧化钠。
31.根据权利要求21至30中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约0.1至15％w/w的甘露醇。
32.根据权利要求21至30中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约0.5至10％w/w的甘露醇。
33.根据权利要求21至30中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约0.5至5％w/w的甘露醇。
34.根据权利要求21至30中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约3％w/w的甘露醇。
35.根据权利要求21至30中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约5％w/w的5’-磷酸吡哆醛、约1.5％w/w的所述氢氧化钠以及约2.8％w/w的所述甘露醇。
36.根据权利要求21至30中任一项所述的方法，其中，所述无菌溶液包含约250mg的5’-磷酸吡哆醛、约80.5mg的氢氧化钠以及约150mg的甘露醇。
37.一种试剂盒，用于制备根据权利要求18所述的可注射制剂，包含用于制备所述可注射制剂的说明书以及分装在容器中的
(a)根据权利要求1至17中任一项所述的5’-磷酸吡哆醛的冻干制剂；以及
(b)适合于静脉给药的无菌载体。
38.根据权利要求37所述的试剂盒，其中，所述无菌载体是注射用水。
39.根据权利要求37或38所述的试剂盒，进一步包括用于所述可注射制剂的容器，确定所述容器的尺寸以有助于制备所选体积和浓度的所述制剂。
40.根据权利要求1至17中任一项所述的冻干制剂在用于制备适合于对需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者给药的可注射制剂中的应用。
41.一种治疗需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者的方法，包括静脉给予根据权利要求18或19所述的可注射制剂。
42.一种降低与口服5’-磷酸吡哆醛或其药用盐相关的恶心和呕吐发生率的方法，所述方法包括给予有效量的根据权利要求18或19所述的可注射制剂的步骤。
43.根据权利要求18或19所述的可注射制剂在用于降低与口服5’-磷酸吡哆醛或其药用盐相关的恶心和呕吐发生率中的应用。
44.一种用于治疗经受外科手术且需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者的方法，包括静脉给予根据权利要求18或19所述的可注射制剂。
45.根据权利要求44所述的方法，其中，所述外科手术是冠状动脉旁路移植术(CABG)或经皮冠状动脉介入术(PCI)。
46.根据权利要求1至17中任一项所述的冻干制剂在用于制备适合于对经受外科手术且需要用5’-磷酸吡哆醛治疗的患者给药的可注射制剂中的应用。
47.根据权利要求46所述的应用，其中，所述外科手术是冠状动脉旁路移植术(CABG)或经皮冠状动脉介入术(PCI)。
全文摘要
本发明提供了一种5’-磷酸吡哆醛的冻干制剂及其制备方法。本发明还提供了一种由该冻干制剂重组的5’-磷酸吡哆醛的可注射制剂。本发明进一步提供了冻干制剂以及可注射制剂的应用。
文档编号A61K31/675GK101175498SQ200680017039
公开日2008年5月7日 申请日期2006年3月30日 优先权日2005年3月30日
发明者阿尔伯特·弗里森 申请人:麦迪库瑞国际公司