专利名称：一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，属于中药制剂领域。
背景技术：
三七又称田七、人参三七、金不换、山漆，为五加科人参属植物Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen.；是我国特有的药材品种，《本草纲目》收录以来，已有500年的历史，李时珍曰“生广西南丹诸州番峒深山中，采根暴干，黄黑色。团结物，状略似白及；长者如老干地黄，有节。味微甘而苦，颇似人参之味”。《本草纲目拾遗》说“人参补气第一，三七补血第一，为中药之最珍贵者”。
三七具有活血、止痛、止血、祛瘀、消肿等功效。常用于治疗跌打损伤、产后瘀阻、崩漏、经闭及各种出血症。
三七被人们誉为“人参之王”，其总皂苷含量约为12％，是三七主要药理活性成分；现从三七中分离得到20种达玛烷(Dammarane)型皂苷，根据水解后次皂苷元结构的不同，分为人参皂苷(Ginsenoside)Rg、Rb、Ro、三种类型，包括人参皂苷Rg1、Rg2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rh、F2、三七皂苷R1、R2、R3、R6、Fa、Fc、Fe、R4等；并含有三七黄酮A、三七黄酮B、挥发油、生物碱、多糖、氨基酸-β-草酰基-L-a、β-二氨基丙酸(deneichine)等有效成分。
因此，对于三七有效成分的提取方法有很多研究和报道。比如，专利文献200310104043.6，发明名称为一种三七总皂苷注射液的制备方法，该方法的过滤步骤均采用膜分离方法或者微滤方法。其可根据药液的有效成分、微生物、微粒的不同大小，选用截留分子量范围为1500至10,0000的膜材对注射液中的杂质、微生物(无效成分及热原物质)按其分子量大小进行一次或分次截留，实现去除杂质和微生物。
专利文献02131193.5，发明名称三七皂苷的提取方法，利用强极性大孔吸附树脂对三七的有效成分进行分离纯化，产品中三七皂苷中各单体皂苷的含量为人参皂苷Rg1≥30％、Re≥5.0％、Rb1≥5.0％和三七皂苷R1≥20.0％。
专利文献200510049903.X，发明名称为从三七中提取皂苷类有效成分的方法，是将三七药材粉碎粒度为20～80目，各称取10g放入A、B、C、D个提取罐中，向D罐中加入5～10倍体积，35～90％的乙醇溶液，温度升至35～80℃，阶段提取20～60min。依次进行D、C、B、A罐的提取，使A、B、C、D四个罐中提取液的有效成分含量依次递减。随后，当某一阶段提取时间结束时，已经提取四次的药材所在的罐进行排渣与加药，提取液有效成分最高的进行排液，其它提取液按照反向隔一个单元进行迁移。进行四次循环后，合并提取液。
专利文献99106223.X，发明名称精制血塞通注射液的生产工艺，包括1、将三七生药煎煮2次；2.将滤液合并，浓缩，并加入乙醇；3.将溶液过树脂柱后冷藏放置；4.回收乙醇；5.微孔滤膜过滤，调节pH；6.浓缩、干燥得到三七总皂甙粉；7.三七总皂甙粉与注射用水混合，调pH；8.溶液煮沸，加活性炭；9.过滤及精滤。
专利文献200510090732.5，发明名称为一种注射用血塞通冻干粉针制剂(包括专用溶剂)及其工艺和适应症，由该文献获得的制剂在使用前需要加专用溶剂溶解，使用不方便，易造成污染且专用溶剂为含35％-45％乙醇的注射用溶液，不适用于对乙醇过敏的人群。
因此，研究人员在此基础上进行注射用血塞通冻干粉针制剂工艺改进，以适用于乙醇过敏者使用。
发明内容
本发明的目的是提供一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，解决了已有注射用血塞通应用前需加专用溶剂溶解，使用不便，易污染等问题，并且适用于对乙醇过敏者。
为了实现本发明目的，本发明的一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，包括如下步骤1)将三七粉碎，加1～4倍量70～95％乙醇浸泡12～48小时，加热回流提取至少2次，每次1～3小时，过滤；合并滤液回收乙醇，加纯化水稀释至0.20～0.40g(生药)/ml，静置12～48小时后过滤，得滤液；2)然后滤液以1.2～1.4BV/h(BV为树脂装填体积)的流速过大孔吸附树脂柱吸附，用树脂1～3倍量的纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂1～3倍量的60～80％乙醇浸泡树脂30～60分钟后，用树脂4～6倍量的60～80％的乙醇以1.0～1.2BV/h的流速洗脱，再用树脂1～3倍量的纯化水冲洗树脂柱；收集洗脱液与冲洗液，以6.0～6.5BV/h的流速过脱色树脂，再加入树脂1～3倍量的85～95％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入生药重量1～3％的活性炭于30～50℃保温脱色40～60分钟，过滤，回收乙醇至无醇味；再加入注射用水稀释至1～2g(生药)/ml的溶液，灌装，灭菌，冷藏3～9天，室温放置30～60天；3)再将药液经0.45～0.65μm滤膜过滤，于50℃以下调pH值至5.5～6.5，搅拌均匀后加热至75～85℃，加入0.1～0.3％活性炭，煮沸10～25分钟，冷却至室温，调pH值至5.5～6.5，经0.2μm滤膜过滤后灌装，充氮气压盖，灭菌，冷冻至结冰，化冰后于避光阴凉处或室温放置3～5个月；4)将缓化后的药液用注射用水稀释至浓度按三七总皂苷计0.15～0.25g/ml，加热煮沸，过滤，冷冻干燥，或冷冻干燥后粉碎成细粉即得。
其中，步骤4)缓化后的药液中加入赋形剂，先加注射用水使赋形剂溶解后，再加入活性炭脱色，过滤得水溶液；将水溶液加入到缓化后的药液中，用注射用水稀释至每1ml含三七总皂苷0.15～0.25g，赋形剂1.5～12.5mg，加热煮沸，过滤，冷冻干燥，或冷冻干燥后粉碎成细粉即得。
所述的赋形剂为甘露醇、乳糖或葡聚糖等。
步骤1)中回流次数为三次，优选的为，加2倍量90％乙醇浸泡三七12小时，加热回流提取2小时，过滤；再加1.5倍量90％乙醇回流提取1.5小时，过滤；同法再提取1次。
步骤2)中所述的吸附柱为D-101大孔吸附树脂柱，所述的脱色树脂柱为D900脱色树脂柱。
由本发明的方法获得的注射用血塞通冻干粉针制剂，中间过程无需减压干燥成粉，可由提取液直接经冷冻干燥而得，不仅简化了工艺过程，节约了成本，而且可避免带入杂质，提高其溶解性。赋形剂的添加不仅利于冻干成型，也可改善制剂的溶解性，因而无需加专用溶剂，直接用氯化钠或葡萄糖注射液就可使其完全溶解，适用于对乙醇过敏的患者，使用方便安全，减少了污染几率。
具体实施例方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例11.三七提取工艺取三七剪口，粉碎，加2倍量90％乙醇浸泡12小时，加热回流提取2小时，过滤；再加1.5倍量90％乙醇回流提取1.5小时，过滤，同法再提取一次，合并三次滤液回收乙醇，加纯化水稀释至0.25g(生药)/ml，静置12小时后过滤，滤液以1.3±0.1BV/h的流速过D-101大孔吸附树脂柱吸附，用树脂1倍量的纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂1倍量的70％乙醇浸泡树脂30分钟后，用树脂4倍量的70％的乙醇以1.0BV/h的流速洗脱，再用树脂1倍量的纯化水冲洗树脂柱。收集洗脱液与冲洗液，以6.0BV/h的流速过D900脱色树脂，再加入树脂1倍量的85％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入生药重量2％的活性炭于40℃保温脱色40分钟，过滤，回收乙醇至无醇味。再加入注射用水稀释至1g(生药)/ml的溶液，灌装，110℃灭菌30分钟。冷藏7天，室温放置30天。
将药液经0.45μm滤膜过滤，于50℃以下用20％NaOH溶液调pH值至5.7，搅拌均匀后加热至80℃，加入0.15％活性炭，煮沸15分钟，冷却至室温，用20％NaOH调pH值至5.7，经0.2μm滤膜精滤后灌装，充氮气压盖，115℃灭菌30分钟，冷冻至结冰，化冰后静止放置于避光阴凉处三个月。
2.制剂的制备工艺缓化后的药液用注射用水稀释至浓度以三七总皂苷计0.20±0.2g/ml，加热煮沸，0.2μm滤膜过滤，分装，冷冻干燥而成。
实施例21.三七提取工艺取三七剪口，粉碎，加1倍量95％乙醇浸泡36小时，加热回流提取3小时，过滤；再加3倍量80％乙醇回流提取1小时，过滤，合并两次滤液回收乙醇，加纯化水稀释至0.20g(生药)/ml，静置48小时后过滤，滤液以1.2BV/h的流速过D-101大孔吸附树脂柱吸附，用树脂3倍量的纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂2倍量的80％乙醇浸泡树脂40分钟后，用树脂6倍量的60％的乙醇以1.2BV/h的流速洗脱，再用树脂2倍量的纯化水冲洗树脂柱。收集洗脱液与冲洗液，以6.2BV/h的流速过D900脱色树脂，再加入树脂3倍量的90％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入生药重量1％的活性炭于50℃保温脱色50分钟，过滤，回收乙醇至无醇味。再加入注射用水稀释至1g(生药)/ml的溶液，灌装，110℃灭菌30分钟。冷藏3天，室温放置45天。
将药液经0.65μm滤膜过滤，于50℃以下用20％NaOH溶液调pH值至6.5，搅拌均匀后加热至85℃，加入0.3％活性炭，煮沸25分钟，冷却至室温，用20％NaOH调pH值至6.5，经0.2μm滤膜精滤后灌装，充氮气压盖，115℃灭菌30分钟，冷冻至结冰，化冰后室温放置4个月。
2.制剂的制备工艺取适量甘露醇，加注射用水使其溶解后，再加入活性炭搅拌15分钟脱色，过滤得甘露醇水溶液；将其加入到缓化后的药液中，用注射用水稀释至每1ml含三七总皂苷0.18±0.02g，甘露醇6.5mg，加热煮沸，0.2μm滤膜过滤，分装，冷冻干燥而成。
实施例31.三七提取工艺取三七剪口，粉碎，加4倍量70％乙醇浸泡48小时，加热回流提取2.5小时，过滤；再加3倍量85％乙醇回流提取2小时，过滤，同法再提取一次，合并三次滤液回收乙醇，加纯化水稀释至0.40g(生药)/ml，静置24小时后过滤，滤液以1.4BV/h的流速过D-101大孔吸附树脂柱吸附，用树脂2倍量的纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂3倍量的60％乙醇浸泡树脂60分钟后，用树脂5倍量的80％的乙醇以1.0BV/h的流速洗脱，再用树脂3倍量的纯化水冲洗树脂柱。收集洗脱液与冲洗液，以6.5BV/h的流速过D900脱色树脂，再加入树脂2倍量的95％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入生药重量3％的活性炭于30℃保温脱色60分钟，过滤，回收乙醇至无醇味。再加入注射用水稀释至2g(生药)/ml的溶液，灌装，110℃灭菌30分钟。冷藏9天，室温放置60天。
将药液经0.45μm滤膜过滤，于50℃以下用20％NaOH溶液调pH值至5.5，搅拌均匀后加热至75℃，加入0.1％活性炭，煮沸10分钟，冷却至室温，用20％NaOH调pH值至5.5，经0.2μm滤膜精滤后灌装，充氮气压盖，115℃灭菌30分钟，冷冻至结冰，化冰后静止放置于避光阴凉处5个月。
2.制剂的制备工艺取适量乳糖，加注射用水使其溶解后，再加入活性炭搅拌15分钟脱色，过滤得乳糖水溶液；将其加入到缓化后的药液中，用注射用水稀释至每1ml含三七总皂苷0.18±0.02g，乳糖1.5mg，加热煮沸，0.2μm滤膜过滤，分装，冷冻干燥而成。
实施例4基本过程同实施例1，不同的是，制备制剂的过程中，每1ml溶液中添加葡聚糖12.5mg。
实验例本实验例在于研究注射用血塞通冻干粉针制剂的溶解性和稳定性。
1.不溶性微粒检查取采用实施例1-3方法获得的注射用血塞通冻干粉针制剂各1支(200mg)，加微粒检查用净化水制成每1ml中含三七总皂苷为0.8mg的溶液，用相应溶剂作空白，依法检查(中国药典2005年版一部附录IX R)，含10μm以上的微粒不得过6000粒，含25μm以上的微粒不得过600粒。实际结果为见表1表1
2.稳定性考察将三个样品放置30个月，各取1支加入6ml氯化钠或葡萄糖注射液后，样品能完全溶解，放置一段时间(18小时)未见析出，各项检查均符合规定。
结论本发明的注射用血塞通冻干粉针制剂无需专用溶剂溶解，其易于溶解，且稳定性好。
权利要求
1.一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤1)将三七粉碎，加1～4倍量70～95％乙醇浸泡12～48小时，加热回流提取至少2次，每次1～3小时，过滤；合并滤液回收乙醇，加纯化水稀释至0.20～0.40g(生药)/ml，静置12～48小时后过滤，得滤液；2)然后滤液以1.2～1.4BV/h的流速过大孔吸附树脂柱吸附，用树脂1～3倍量的纯化水冲洗树脂柱，然后用树脂1～3倍量的60～80％乙醇浸泡树脂30～60分钟后，用树脂4～6倍量的60～80％的乙醇以1.0～1.2BV/h的流速洗脱，再用树脂1～3倍量的纯化水冲洗树脂柱；收集洗脱液与冲洗液，以6.0～6.5BV/h的流速过脱色树脂，再加入树脂1～3倍量的85～95％的乙醇以相同流速冲洗树脂柱，合并初流液和洗脱液，加入生药重量1～3％的活性炭于30～50℃保温脱色40～60分钟，过滤，回收乙醇至无醇味；再加入注射用水稀释至1～2g(生药)/ml的溶液，灌装，灭菌，冷藏3～9天，室温放置30～60天；3)再将药液经0.45～0.65μm滤膜过滤，于50℃以下调pH值至5.5～6.5，搅拌均匀后加热至75～85℃，加入0.1～0.3％活性炭，煮沸10～25分钟，冷却至室温，调pH值至5.5～6.5，经0.2μm滤膜过滤后灌装，充氮气压盖，灭菌，冷冻至结冰，化冰后于避光阴凉处或室温放置3～5个月；4)将缓化后的药液用注射用水稀释至浓度按三七总皂苷计0.15～0.25g/ml，加热煮沸，过滤，冷冻干燥，或冷冻干燥后粉碎成细粉即得。
2.根据权利要求1所述的注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，步骤4)缓化后的药液中加入赋形剂，先加注射用水使赋形剂溶解后，再加入活性炭脱色，过滤得水溶液；将水溶液加入到缓化后的药液中，用注射用水稀释至每1ml含三七总皂苷0.15～0.25g，赋形剂1.5～12.5mg，加热煮沸，过滤，冷冻干燥，或冷冻干燥后粉碎成细粉即得。
3.根据权利要求2所述的注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，所述的赋形剂为甘露醇、乳糖或葡聚糖中的任意一种。
4.根据权利要求1-3任意一项所述的注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，步骤1)中回流次数为三次，优选的为，加2倍量90％乙醇浸泡三七12小时，加热回流提取2小时，过滤；再加1.5倍量90％乙醇回流提取1.5小时，过滤；同法再提取1次。
5.根据权利要求1-4任意一项所述的注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，其特征在于，步骤2)中所述的吸附柱为D-101大孔吸附树脂柱，所述的脱色树脂柱为D900脱色树脂柱。
全文摘要
本发明提供了一种注射用血塞通冻干粉针制剂的制备方法，其采用乙醇回流提取，大孔吸附树脂柱吸附，过滤，得三七提取液，将其添加赋形剂后再冷冻干燥而成。本发明无需加专用溶剂，直接用氯化钠或葡萄糖注射液就可使其完全溶解，适用于对乙醇过敏的患者，使用方便安全，减少了污染几率。
文档编号A61P9/00GK101049332SQ20071009939
公开日2007年10月10日 申请日期2007年5月18日 优先权日2007年5月18日
发明者方同华, 周雪峰, 项彦华 申请人:黑龙江省珍宝岛制药有限公司