专利名称：一种中药组合物及其制备工艺和应用的制作方法
技术领域：
本发明属于中药制药领域，涉及一种中药组合物及其制备工艺和应用。
背景技术：
肾阳不足，命门火衰导致的病证很多，涉及的范围亦很广，妇女崩漏是其中之一，早在《黄帝内经》便有“崩”的记载，后“金匮要略”又有“漏下”、“崩中下血”的记述，至《诸病源候论》专立“崩中候”、“漏下候”，书云“忽然暴下，谓之崩中”，“非时而下，淋沥不断，谓之漏下也”。现代高等医药院校教材《中医妇科学》载“崩漏是指经血非时暴下不止或淋漓不净，前者称崩中或经崩；后者称漏下或经漏。虽然崩与漏出血情况不同，但二者常交替出现，故概称崩漏”。现代医学称功能性子宫出血。
崩漏常见的病因有血热、肾虚、脾虚、血瘀等，发病机理主要是冲任损伤，不能制约经血，故经血从胞宫非时妄行。本证病因多为先天禀赋不足，肾气稚弱，天葵初至，冲任未盛或因更年期肾气渐虚，因故重虚。或因不当之手术，损伤胞宫冲任以致肾虚。由于肾气不足，肾阳虚弱，封藏不固，冲任失约，故经来无期量多或淋漓。阳虚则真火不足，经血失煦，故色淡质稀。肾阳不足，命门火衰不能温煦，故畏寒肢冷。腰为肾之府，下肢为足少阴经脉所过，肾阳不足，不能温达腰脊、下肢，故腰膝酸软。肾阳虚膀胱失约，则夜尿频繁。精神不振，面色晦暗，舌质淡，苔薄润，脉沉细无力等，均为肾阳虚所致。崩漏肾阳虚证症见突然出血，量多，或淋漓不净，色淡质稀，精神不振，面色晦暗，肢冷畏寒，腰膝酸软，夜尿频繁等。治宜温补肾阳，固冲止血。崩漏是妇科常见病之一，过去多用激素治疗，但消化道反应较重，目前缺乏一种疗效可靠服用方便的中药制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种固中止血的中药组合物。
本发明的另一个目的是提供上述中药组合物的制备工艺。
本发明还有一个目的是提供上述中药组合物在制药中的应用。
本发明根据中医药理论，重用淫羊藿为主药，该药性味辛、甘，温。入肾、肝经。为温补肾阳要药。《医学入门》载其“补肾虚，助阳”。《普济方》云其“治妇女血海久冷，漏下”。肾为先天之本，脾为后天之本，“先天生后天，后天济先天”。方中黄芪甘，温。入脾、肺经。为补气、升阳、摄血之要药。《珍珠囊》云“黄芪补诸虚不足……益元气。”《日华子》曰“黄芪助气，治血崩带下”。张景岳称黄芪“其所以止血崩血淋者，以气固而血自止也。”《中华本草》载“凡气不摄血，吐血、咳血、便血、尿血、崩漏均可选用黄芪，单用或入复方”。党参性味甘，平。入脾、肺经。功能补中益气。二药同用，协助主药温补肾阳，固冲止血。实后天以养先天。故为辅药。肾阴与肾阳相互为用，“阳生于阴”，“阴生于阳”所以张景岳说“善补阳者，必于阴中求阳，则阳得阴助而生化无穷”。方中墨旱莲性味甘、酸，寒。入肝、肾经。功能滋补肝肾。《本草便读》说“旱莲草甘酸而寒，折之中有汁出，其色黑，故入肾”。《分类草药性》载其“止血，补肾。治淋、崩漏”。白芍性味甘、苦、酸，微寒。功能养血敛阴。《中华本草》载“主治崩漏”甘者能补，酸者能收，二药同用，使化源充足，阳有所附，亦为辅药。本方为崩漏肾阳虚证患者而设，其特点温而不燥，固而不涩，滋而不腻。全方配伍，共奏温补肾阳，固冲止血之功。
本发明的目的是通过下列措施实现的 一种中药组合物，该中药组合物的处方含有下列重量份的药材淫羊藿25～70份，黄芪20～45份，党参15～35份，墨旱莲15～35份，白芍10～25份。
所述中药组合物的制备工艺，包括下列步骤 a.按处方取淫羊藿和墨旱莲切丝，与黄芪、党参、白芍饮片装入提取罐内，每次加入8～15倍药材总重量的蒸馏水，回流提取2～3次，每次1.5～3小时，得到提取液； b.提取液过滤，减压浓缩至80℃时相对密度为1.10～1.20，放冷，加入乙醇至含醇量达50～70％，搅拌，冷藏18～36小时，过滤，减压回收乙醇至50℃时相对密度为1.00～1.20，得浓缩液； c.加入辅料，制备成所需剂型。
所述中药组合物的制备工艺，其中步骤c是向浓缩液中加入适量蒸馏水，冷藏18～36小时，过滤，于滤液中加入适量(0.3～3w/v‰)的甜叶菊苷调味，调节pH为6～7，加水定容，过滤，灌装，封口，灭菌。
所述的中药组合物在制备治疗崩漏的药物中的应用。
本发明有益效果 一、本发明药物的药理学实验结果 本发明药物具有温补肾阳，固冲止血的功能，主治崩漏肾阳虚证。根据本处方的功能主治，选择了肾阳虚模型动物或正常动物观察了本发明药物的止血、温阳补肾、增强子宫张力、活血化瘀、抗炎、镇痛和免疫调节作用。以下实验所使用的本发明药物按实施例1制备。
(一)本发明药物的止血作用研究 1.本发明药物对肾阳虚大鼠的止血作用 供试品本发明药物(河南南阳绿洲药业有限公司，批号20010626，含量1.66g生药/g提取物，外观棕色液体，供试品保存条件室温阴凉处保存。按实施例1制备，以下同)。使用时用蒸馏水配制成浓度112.5、225、450mg生药/ml。
阳性对照药宫血宁(云南白药集团股份有限公司，批号20000110，规格0.13g/粒胶囊，外观棕色粉末。以下同)。使用时用蒸馏水配成16mg胶囊粉/ml。
造模药醋酸泼泥松(上海第九制药厂，批号010213，规格125mg/5ml，外观注射乳液。以下同)。使用时用生理盐水配制成10mg/ml。
动物分组大鼠按体重随机分成6组，分别为正常对照组；肾阳虚模型组；阳性对照药宫血宁0.16g胶囊粉/kg；本发明药物2.25g生药/kg；本发明药物4.5g生药/kg；本发明药物9.0g生药/kg。
给药时间本发明药物各剂量组和阳性对照药组每日灌胃给药一次，给药体积为10ml/kg体重，连续给药10天。正常对照组和模型对照组灌胃给予同体积蒸馏水，时间相同。
试验方法 肾阳虚造模型方法除正常对照组外，其它各组大鼠均于试验第1、3、5、7、9日肌肉注射醋酸泼泥松10mg/kg。
本发明药物各剂量组和阳性对照药组在造模的同时开始给药，每日灌胃给药一次，给药体积为10ml/kg体重，连续给药10天。末次给药后24小时，用利剪距鼠尾尖0.3cm处剪断鼠尾，从血液自然流出开始计时，每30秒用滤纸轻轻吸鼠尾断面一次，观察至无血迹止，记录为出血时间；采用毛细玻管法测定凝血时间；大鼠用30mg/kg戊巴比妥钠麻醉，腹主动脉取血，枸橼酸钠抗凝，离心取血浆，测定凝血酶原时间和血浆复钙时间。
统计方法各组试验数据均以均数±标准差表示。本发明药物各剂量组及阳性对照药组分别与肾阳虚模型组进行比较，用t-检验进行统计分析。
结果表明大鼠反复肌肉注射给予醋酸泼泥松后呈现体重降低、体温降低、立毛、倦怠、大便溏软等肾阳虚症状，该模型组动物的出血时间、凝血酶原时间、血浆复钙时间均较对照组明显延长(P＜0.05或P＜0.01)，凝血时间也有延长趋势，表明肾阳虚大鼠存在出血倾向。灌胃给予本发明药物2.25、4.5、9.0g生药/kg可明显对抗醋酸泼泥松引起的出血时间、凝血酶原时间、血浆复钙时间延长(与醋酸泼泥松模型组比较P＜0.05或P＜0.01)。本发明药物9.0g生药/kg还可对抗醋酸泼泥松引起的凝血时间延长，2.25、4.5g生药/kg剂量水平对凝血时间无明显影响。阳性对照药宫血宁也可明显对抗肾阳虚大鼠的出血时间和血浆复钙时间延长，对凝血时间和凝血酶原时间无明显影响。结果表明，本发明药物对肾阳虚大鼠具有明显的止血作用。结果见表1。
结论采用醋酸泼泥松诱导的大鼠肾阳虚模型观察了本发明药物的止血作用。结果显示，模型组动物的出血时间、凝血时间、凝血酶原时间、血浆复钙时间均较正常对照组明显延长(P＜0.05或P＜0.01)，表明肾阳虚大鼠存在出血倾向。给予本发明药物2.25、4.5、9.0g生药/kg可明显对抗醋酸泼泥松引起的出血时间、凝血酶原时间和血浆复钙时间延长(与醋酸泼泥松模型组比较P＜0.05或P＜0.01)。本发明药物9.0g生药/kg可明显对抗醋酸泼泥松引起的凝血时间延长。结果表明，本发明药物对肾阳虚大鼠具有明显的止血作用。为本发明药物治疗临床上因为肾阳不足而导致的子宫功能性出血提供了实验依据。
表1本发明药物对肾阳虚大鼠出、凝血指标的影响(n＝10，Mean±SD) 注与正常对照组比较#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01 2.本发明药物对正常小鼠出、凝血时间的影响 试验材料 供试品本发明药物，使用时用蒸馏水配制成浓度112.5、225、450mg生药/ml。
阳性对照药止血宝颗粒(西安威信制药有限公司，批号20000201，规格25mg/粒胶囊，外观棕黑色颗粒剂。以下同)。使用时用蒸馏水配制成78mg/ml。
阴性对照品蒸馏水。
实验动物及饲养ICR小鼠，雌性，50只，体重20±2g，中国医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号SCKX 11-00-0006。北京九江口饲料厂提供的大鼠颗粒饲料饲养，动物饲养于洁净动物房不锈钢笼内，自然光照，自由进食与饮水。
动物分组小鼠按体重随机分成5组，每组10只，分别为对照组；阳性对照药止血宝颗粒1.56g/kg；本发明药物2.25g生药/kg；本发明药物4.5g生药/kg；本发明药物9.0g生药/kg。
给药频率和时间本发明药物各剂量组和止血宝颗粒组均每日灌胃给药一次，给药体积为0.2ml/10g体重，连续给药3天。对照组灌胃给予同体积蒸馏水。
试验方法末次给药后1小时，用利剪距鼠尾尖0.5cm处剪断鼠尾，从血液自然流出开始计时，每30秒用滤纸轻轻吸鼠尾断面一次，观察至无血迹止，记录为出血时间；采用毛细玻管法从眼眶静脉丛取血测定凝血时间。
统计方法各组试验数据均以均数±标准差表示。本发明药物各剂量组及阳性对照药组分别与对照组进行比较，用t-检验进行统计分析。
试验结果结果见表2。本发明药物9.0、4.5、2.25g生药/kg均可明显缩短小鼠的出血时间，4.5、2.25g生药/kg可使小鼠凝血时间缩短。结果表明本发明药物可明显缩短小鼠的出、凝血时间，表明有明显的止血作用。
表2本发明药物对正常小鼠出血时间和凝血时间的影响(n＝10) 注与对照组比较*P＜0.05，**P＜0.01 结论采用正常小鼠观察了本发明药物对出、凝血时间的影响。结果显示，本发明药物9.0、4.5、2.25g生药/kg可明显缩短小鼠切口的出血时间，4.5、2.25g生药/kg可使小鼠凝血时间缩短。结果表明本发明药物可明显缩短小鼠的出、凝血时间，表明有明显的止血作用。
(二)本发明药物的温阳补肾作用 试验材料 供试品本发明药物，使用时用蒸馏水配制成浓度0.225、0.45、0.9、1.8g生药/ml。
阳性对照药宫血宁，使用时用蒸馏水配成16mg胶囊粉/ml。
阴性对照品蒸馏水。
造模药醋酸泼泥松，使用时用生理盐水配制成10mg/ml。
实验动物及饲养SD大鼠，雌性70只，动物体重180～200g，中国医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号SCKX 11-00-0006。北京九江口饲料厂提供的大鼠颗粒饲料饲养，动物饲养于洁净动物房不锈钢笼内，自然光照，自由进食与饮水。
动物分组大鼠按体重随机分成7组，分别为正常对照组；肾阳虚模型组；阳性对照药宫血宁0.16g胶囊粉/kg；本发明药物2.25g生药/kg；本发明药物4.5g生药/kg；本发明药物9.0g生药/kg；本发明药物18.0g生药/kg。
给药时间本发明药物各剂量组和阳性对照药组每日灌胃给药一次，给药体积为10ml/kg体重，连续给药10天。正常对照组和模型对照组灌胃给予同体积蒸馏水，时间相同。
试验方法 肾阳虚造模型方法除正常对照组外，其它各组大鼠均于试验第1、3、5、7、9日肌肉注射醋酸泼泥松10mg/kg。
给药本发明药物各剂量组和阳性对照药组在造模的同时开始给药，每日灌胃给药一次，给药体积为10ml/kg体重，连续给药10天。
检测指标 1、试验前和末次给药结束后24小时，分别测定动物体温。
2、末次给药后24小时，用戊巴比妥钠麻醉动物，经腹主动脉取血，分离血清，用放免法测定黄体生成素(LH4)、雌二醇(E2)、孕酮(P)含量。
3、末次给药后24小时，取出动物子宫、卵巢、肝脏、脾脏、胸腺称重，折算脏器系数(g脏器重/100g体重)。
4、用10％福尔马林固定子宫和卵巢，分别从每只动物子宫分角以上和卵巢端向下0.5-1cm处横切取材各2块，厚约0.5cm，石蜡包埋，制备0.3μm的切片，每只子宫共取4张切片，HE染色，用Olympus显微镜观察子宫组织形态，每张切片选取4个部位，以显微镜目镜微格测定子宫内膜厚度和平滑肌层厚度，取每只子宫的近分角处和近卵巢端的子宫内膜厚度和平滑肌层厚度平均值。
统计方法各组试验数据均以均数±标准差表示。本发明药物各剂量组及阳性对照药组分别与肾阳虚模型组进行比较，用t-检验进行统计分析。
试验结果 1、本发明药物对肾阳虚动物体重和体温的影响模型组大鼠反复注射醋酸泼泥松造模结束后，模型组大鼠体重较正常对照组明显减轻(与正常对照组比较P＜0.01)，体温明显下降(造模前后比较P＜0.05)；本发明药物2.25、4.5、9.0、18.0g生药/kg灌胃给药10天对肾阳虚大鼠体重无明显影响；9.0、18.0g生药/kg灌胃给药10天可使肾阳虚大鼠体温明显回升(与模型组比较P＜0.05)，结果表明本发明药物可使肾阳虚大鼠的体温明显回升，具有温阳作用，结果见表3。
2、本发明药物对肾阳虚大鼠性腺器官重量及系数的影响肾阳虚模型动物的子宫、卵巢重量及其系数均明显减轻(与对照组比较P＜0.01)。4.5、9.0、18.0g生药/kg灌胃给药10天后，各组子宫、卵巢重量及其系数均较模型组明显增高(与模型组比较P＜0.05或P＜0.01)，2.25g生药/kg剂量组的子宫、卵巢重量及其系数与模型组比较无明显差异。阳性对照药宫血宁也可明显增加肾阳虚大鼠的子宫、卵巢重量及其系数(与模型组比较P＜0.001)。结果表明本发明药物可明显拮抗肾阳虚大鼠的子宫和卵巢萎缩，对子宫和卵巢具有保护作用。结果见表4。
3、本发明药物对肾阳虚大鼠免疫器官重量及脏器系数的影响肾阳虚模型大鼠胸腺及脾脏的重量及其脏器系数均较正常对照组明显减轻(P＜0.01)，虽然模型组肝脏重量无明显变化，由于其体重减轻，折算的肝脏系数较对照组明显增大(P＜0.01)。本发明药物4.5、9.0、18.0g生药/kg灌胃给药10天后，各组胸腺重量及其系数均较模型组明显增高(与模型组比较P＜0.05或P＜0.01)，但对肝、脾脏重量及其系数无明显影响。阳性对照药宫血宁也可明显增加肾阳虚大鼠的胸腺重量及其系数(与模型组比较P＜0.001)，但对肝、脾脏重量和系数无明显影响。结果表明，本发明药物对醋酸泼泥松诱导的肾阳虚大鼠的胸腺重量及其系数减轻具有明显的拮抗作用。结果见表4。
4、本发明药物对肾阳虚雌性大鼠性腺激素的影响从表5可见，本发明药物各剂量组和阳性对照药宫血宁对大鼠血清黄体生成素(LH4)、雌二醇(E2)、孕酮(P)含量均无显著影响，表明本发明药物对大鼠血液性腺激素水平无明显影响。
5、本发明药物对肾阳虚雌性大鼠子宫内膜和平滑肌层厚度以及组织形态学的影响 5.1对子宫内膜和平滑肌层厚度的影响 肾阳虚模型组大鼠子宫内膜和平滑肌层明显变薄(与正常对照组比较P＜0.01)，表明肾阳虚大鼠的子宫内膜和平滑肌层呈现萎缩性病变。本发明药物4.5、9.0、18.0g生药/kg剂量水平可明显拮抗肾阳虚大鼠的子宫退行性变，使子宫内膜和平滑肌厚度均较模型组明显增加(与模型组比较P＜0.05或P＜0.01)，结果见表6。
5.2子宫、卵巢肉眼观察结果 正常对照组大鼠子宫管腔粗细较均匀，浆膜面、粘膜面及管腔内均未见明显的充血、水肿及肿物等。模型组大鼠子宫直径比正常对照组细，子宫无明显充血、水肿和硬化或结节形成，未见明显的瘀血，卵巢未见有明显病变。本发明药物各剂量组和阳性对照药宫血宁组的部分动物子宫较正常对照组偏细，但比模型组粗，未见明显的充血、水肿及瘀血，管腔内未见明显肿物等异常变化。
5.3子宫、卵巢组织形态学检查结果 显微镜下观察可见，正常对照组子宫内膜腺体较多，腺上皮细胞呈柱状，核分裂相多见；间质细胞呈梭形，细胞核增大，呈纺锤状，有较多的核分裂相。平滑肌纤维走向规则，子宫壁各层结构清晰，血管丰富；卵巢组织结构显示正常。
模型组子宫内膜薄，腺体稀少、分散，腺上皮细胞为立方型或低柱状，间质细胞呈梭形，排列紧密伴有纤维增生，上皮细胞和间质细胞生长不活跃，核分裂相较少。平滑肌层走向尚规则，肌层厚度较对照组薄，未见炎症细胞浸润，有部分肌纤维侵入内膜层。部分卵巢有不同程度的出血，但卵泡和黄体未见有明显的改变。
本发明药物4.5、9.0、18.0g生药/kg剂量组和阳性对照药宫血宁组子宫腺体较模型组增加，腺上皮细胞增多，呈柱状，细胞核增大，可见核仁，分裂相增加。平滑肌层排列规则，平滑肌层厚度较模型组增加，子宫粘膜层很少有平滑肌组织，肌纤维间质血管丰富，卵巢未见明显的病理形态学改变。结果见病理照片。
结论本发明药物可使肾阳虚大鼠体温明显回升，具有明显的温阳作用；可显著对抗肾阳虚大鼠的子宫、卵巢、胸腺的退行性病变，使这些脏器的重量及其系数增加。肾阳虚动物给予本发明药物后，其子宫内膜腺体稀少和平滑肌层变薄的退行性组织形态学改变得到明显改善，给药后的动物子宫腺体数增加，子宫内膜和平滑肌层增厚，表明本发明药物可在一定程度上阻止肾阳虚大鼠的性腺器官和免疫器官的退行性病变；本发明药物对大鼠的黄体生成素(LH4)、雌二醇(E2)、孕酮(P)含量均无显著影响，表明对雌性大鼠血液性腺激素水平无明显影响。
表3本发明药物对肾阳虚大鼠体重、体温的影响(Mean±SD，n＝10) 注①自身前后比较#P＜0.05，##P＜0.01； ②与对照组比较△P＜0.05，△△P＜0.01； ③与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
表4本发明药物对肾阳虚大鼠免疫和性腺器官重量的影响(Mcan±SD，n＝10) 注①与对照组比较#P＜0.05，##P＜0.01； ②与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01 表5本发明药物对肾阳虚大鼠雌、孕激素的影响(Mean±SD，n＝10) 表6本发明药物对肾阳虚大鼠子宫内膜和平滑肌层厚度的影响 注①与对照组比较##P＜0.001； ②与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01 (三)本发明药物对家兔在位子宫收缩的影响 试验材料 供试品本发明药物，使用时用蒸馏水配制成浓度0.625、1.25、2.5g生药/ml。
阳性对照药宫血宁，使用时用蒸馏水配成25mg胶囊粉/ml 阴性对照品生理盐水 实验动物及饲养大耳白家兔，雌性未孕、未产家兔40只，体重2-2.5kg，北京通力实验动物养殖场提供，，动物合格证号京动许字(2000)第024号，九江口饲料厂提供的家兔颗粒饲料饲养，动物饲养于洁净动物房内，温度20-25℃，自然光照。
动物分组家兔随机分成5组，每组8只，分别为正常对照组、阳性对照药宫血宁0.1g胶囊粉/kg、本发明药物2.5g生药/kg、本发明药物5.0g生药/kg、本发明药物10.0g生药/kg。
给药途径由于动物试验时处于麻醉状态，故本发明药物和阳性对照药均采用十二指肠给药。对照组经十二指肠给予同体积生理盐水。
给药次数本发明药物各剂量组、阳性对照药组及对照组均于试验当天给药1次，给药体积为4ml/kg体重。
试验方法 各组家兔均于试验前每日注射苯甲酸雌二醇0.2mg/kg(上海第九制药厂生产，批号991102，规格为1mg/ml)，连续给药2天。各组家兔于末次注射苯甲酸雌二醇后24h进行试验。家兔经耳缘静脉注射给予戊巴比妥钠30mg/kg麻醉，仰位固定，下腹部剪毛，于下腹部作一正中切口，长度约4～5cm。打开腹腔，找到子宫。从子宫颈与阴道交界处向一侧子宫角放入一气囊，气囊与一硅胶管连接，排尽气囊内的空气，并让气囊中充满水，硅胶管与压力换能器相连，用BIOPAC SYSTEM多道生理记录仪监测子宫活动。
术后，待所描记的子宫活动恒定时(约为手术后30分钟)，记录一段正常收缩曲线，然后经十二指肠给予受试药，记录给药后30、60、90、120分钟子宫活动曲线，每个时间点记录12min。计数每个时间点曲线12分钟内的收缩次数，用BIOPAC SystemAcqknowledge 3.5计算软件计算平均子宫收缩幅度和收缩曲线下面积。并按下式计算相对收缩幅度。
相对收缩幅度(％)＝给药后收缩幅度·给药前收缩幅度-1·100 计算和统计方法各组每个时间点的子宫收缩幅度、收缩频率及收缩曲线下面积以均数±标准差表示，用t-检验比较各给药组与对照组之间的差异。
试验结果 本试验中，子宫收缩幅度和曲线下面积可反应子宫张力情况。表7结果显示，经十二指肠给予本发明药物10g生药/kg后90min和120min时的子宫收缩幅度均较对照组明显增高(P＜0.05)，但该剂量水平对子宫收缩次数未见明显影响。本发明药物5g生药/kg和2.5g生药/kg剂量下对子宫收缩幅度、收缩次数无明显影响。阳性对照药宫血宁给药后120min对子宫相对收缩幅度有明显的增强作用(与对照组比较P＜0.05)。结果表明，本发明药物经十二指肠给药10g生药/kg，对子宫收缩有一定的增强作用，主要表现为对子宫张力的增强，而对收缩频率无明显影响。
结论经十二指肠给予本发明药物10g生药/kg后，可明显维持子宫张力，给药后90min和120min的子宫收缩幅度和相对收缩幅度均较对照组明显增高(与对照组比较P＜0.05)，该剂量下各时间点对子宫收缩次数未见明显影响。结果表明，本发明药物经十二指肠给药10g生药/kg，对子宫收缩有一定的增强作用，主要表现为对收缩幅度的增强和对子宫张力的增加，而对收缩频率无明显影响。
表7本发明药物对家兔子宫收缩幅度(mmHg)和相对收缩幅度(％)的影响(n＝8) 注与对照组比较*P＜0.05 (四)本发明药物对肾阳虚大鼠血液流变学的影响 试验材料 供试品本发明药物，使用时用蒸馏水配制成浓度0.225、0.45、0.9、1.8g生药/ml。
阳性对照药宫血宁，使用时用蒸馏水配成16mg胶囊粉/ml。
阴性对照品蒸馏水。
造模药醋酸泼泥松，使用时用生理盐水配制成10mg/ml。
实验动物及饲养SD大鼠，雌性70只，体重180～200g，中国医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号SCKX 11-00-0006，北京九江口饲料厂提供的大鼠颗粒饲料饲养，动物饲养于洁净动物房不锈钢笼内，自然光照，自由进食与饮水。
试验方法 动物分组大鼠按体重随机分成7组，分别为正常对照组；肾阳虚模型组；阳性对照药宫血宁0.16g胶囊粉/kg；本发明药物2.25g生药/kg；本发明药物4.5g生药/kg；本发明药物9.0g生药/kg；本发明药物18.0g生药/kg。
给药时间本发明药物各剂量组和阳性对照药组每日灌胃给药一次，给药体积为10ml/kg体重，连续给药10天。正常对照组和模型对照组灌胃给予同体积蒸馏水。
试验方法 肾阳虚造模型方法除正常对照组外，其它各组大鼠均于试验第1、3、5、7、9日肌肉注射醋酸泼泥松10mg/kg。
给药本发明药物各剂量组和阳性对照药组在造模的同时开始给药，每日灌胃给药一次，给药体积为10ml/kg体重，连续给药10天。末次给药后24小时，用戊巴比妥钠麻醉动物，经腹主动脉取血，分别测定血小板、血球压积、全血粘度、血浆粘度、血小板聚集等指标。
统计方法各组试验数据均以均数±标准差表示。本发明药物各剂量组及阳性对照药组分别与肾阳虚模型组进行比较，用t-检验进行统计分析。
试验结果本发明药物对肾阳虚大鼠血液流变学指标的影响结果见表8。结果显示，肾阳虚大鼠血小板数量和血小板聚集率均较正常对照组显著降低，血球压积明显增高(与正常对照组比较P＜0.05)，全血粘度较正常对照组有增高趋势，但统计学上未见显著性差异。模型组动物的血球压积显著增高和全血粘度有增高趋势说明动物有血瘀征象，而血小板数量和血小板聚集率降低可能与血瘀过程中血小板的消耗有关。本发明药物9.0、18.0g生药/kg剂量水平可使肾阳虚大鼠增高的血球压积和全血粘度恢复正常(与肾阳虚模型组比较P＜0.05)，血小板聚集率与模型组比较也有恢复正常的趋势，但统计学上与模型组无显著差异。结果表明，本发明药物对肾阳虚模型大鼠的血液流变学指标具有改善作用。
结论本发明药物9.0、18.0g生药/kg剂量水平可使肾阳虚大鼠增高的血球压积和全血粘度恢复正常(与肾阳虚模型组比较P＜0.05)，使降低的血小板聚集率恢复正常，结果表明，本发明药物对肾阳虚模型大鼠的血液流变学具有改善作用，因此对微循环具有改善作用。
表8本发明药物对肾阳虚大鼠血液流变学指标的影响(n＝10) 注与对照组比较#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.001 (五)本发明药物抗炎作用对异物植入子宫引起的大鼠子宫炎症的影响 试验材料 供试品本发明药物，使用时用蒸馏水配制成浓度0.225、0.45、0.9g生药/ml。
阳性对照药宫血宁，使用时用蒸馏水配成25mg胶囊粉/ml 阴性对照品蒸馏水 实验动物及饲养SD大鼠，雌性50只，体重180～200g，中国医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号SCKX 11-00-0006，北京九江口饲料厂提供的大鼠颗粒饲料饲养，动物饲养于洁净动物房不锈钢笼内，自然光照，自由进食与饮水。
试验方法 大鼠按体重随机分成5组，每组10只，分别为模型组；阳性对照药宫血宁组0.25g胶囊粉/kg；本发明药物2.25g生药/kg；本发明药物4.5g生药/kg；本发明药物9.0g生药/kg。
给药时间本发明药物各剂量组和阳性对照药组每日灌胃给药一次，给药体积为10ml/kg体重，共给药10天。模型组灌胃给予同体积蒸馏水。
试验方法 将大鼠用乙醚麻醉，于下腹部正中行2cm切口，暴露子宫，沿右侧子宫角上1cm处作一横切口，将一高压灭菌的塑料管(管径2mm，长0.5cm，重10mg)植入右侧子宫腔内，与子宫切口缝合固定。术后，大鼠肌肉注射青霉素2万u/只，共1次。取术后大鼠50只，随机分为5组，每组10只，术后2小时开始灌胃给药，共给药10天，末次给药后1小时，股动脉放血处死动物，取出两侧子宫、用组织天平称重，求左右两侧子宫重量之差，作为子宫肿胀度。
统计方法每组试验数据均以均数±标准差表示。本发明药物各剂量组及阳性对照药组分别与模型组进行比较，用t-检验进行统计分析。
试验结果 结果显示，本发明药物4.5和9.0g生药/kg可明显抑制异物植入子宫引起的炎性肿胀，其子宫肿胀度比模型组明显减低(与模型组比较P＜0.01)，抑制率分别为49.6％和63.4％。本发明药物2.25g生药/kg剂量组对子宫肿胀也有一定的抑制，但与模型组比较无显著差异(P＞0.05)。阳性对照药宫血宁也可明显抑制子宫肿胀，抑制率为44.7％。结果表明，本发明药物4.5和9.0g生药/kg对异物植入子宫引起的子宫炎症具有明显的抑制作用，其作用有一定的量-效关系。结果见表9。
表9本发明药物对子宫炎症的影响(n＝12，Mean±SD) 注与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01 结论采用子宫植入异物引起炎性肿胀的方法，观察了本发明药物对子宫炎症的抑制作用。结果显示，本发明药物4.5和9.0g生药/kg可明显抑制异物植入子宫引起的炎性肿胀，其子宫肿胀度比模型组明显减低(与模型组比较P＜0.01)，抑制率分别为49.6％和63.4％。结果表明，本发明药物对异物植入子宫引起的子宫炎症具有明显的抑制作用，其作用有一定的量-效关系。
(六)本发明药物的镇痛作用对冰醋酸诱导的化学刺激性疼痛的镇痛作用 试验材料 供试品本发明药物，使用时用蒸馏水配制成浓度225、450、900mg生药/ml。
阳性对照药消炎痛(山西汾河制药厂，批号0102007，规格25mg/粒胶囊，外观白色粉末。以下同)。使用时用蒸馏水配制成1mg/ml。
阴性对照品蒸馏水 实验动物及饲养ICR小鼠，雌性60只，体重20-24g，中国医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号SCKX 11-00-0006，北京九江口饲料厂提供的大鼠颗粒饲料饲养，动物饲养于洁净动物房不锈钢笼内，自然光照，自由进食与饮水。
试验方法 动物分组小鼠按体重随机分成5组，每组12只，分别为对照组；阳性对照药消炎痛20mg/kg；本发明药物4.5g生药/kg；本发明药物9.0g生药/kg；本发明药物18.0g生药/kg。
给药时间本发明药物各剂量组和阳性对照药组灌胃给药一次，给药体积为20ml/kg体重。模型组灌胃给予同体积蒸馏水。
试验方法各组动物给药后30分钟，给每只小鼠腹腔注射0.6％冰醋酸0.2ml，随后立即观察每只小鼠出现扭体的潜伏期和20分钟内的扭体次数。
统计方法各组试验数据均以均数±标准差表示。各剂量组及阳性对照药组分别与模型组进行比较，用t-检验进行统计分析。
试验结果 结果显示，本发明药物9.0、18.0g生药/kg可明显减少由冰醋酸诱导的小鼠腹膜刺激性扭体反应次数，延长出现扭体反应的潜伏期(P＜0.05)，表明对化学刺激性疼痛具有明显的镇痛作用。4.5g生药/kg剂量下也在一定程度上减少扭体次数，延长扭体反应潜伏期，但在统计学上与模型组比较无显著差异。阳性对照药消炎痛也对化学刺激性疼痛具有明显的镇痛作用。结果见表10。
表10本发明药物对冰醋酸诱导的小鼠扭体反应的影响(n＝12) 注与模型组比较*P＜0.05 结论本发明药物9.0、18.0g生药/kg可明显减少由冰醋酸诱导的小鼠腹膜刺激性扭体反应次数，延长出现扭体反应的潜伏期(P＜0.05)，表明对化学刺激性疼痛具有明显的镇痛作用。
(七)本发明药物的免疫调节作用对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 试验材料 供试品本发明药物，使用时用蒸馏水配制成浓度113、225、450mg生药/ml。
阳性对照药龟蛇粉胶囊(江苏隆力奇集团，批号010612，规格0.4g/粒，每日剂量为8粒，外观胶囊。以下同)。使用时用蒸馏水配制成含胶囊提取物21mg/ml。
阴性对照品蒸馏水 造模型用药醋酸泼泥松，使用时用生理盐水配制成1mg/ml。
实验动物及饲养ICR小鼠，雌性60只，体重22±2g，中国医学科学院实验动物研究所提供，动物合格证号SCKX 11-00-0006，北京九江口饲料厂提供的大鼠颗粒饲料饲养，动物饲养于洁净动物房不锈钢笼内，自然光照，自由进食与饮水。
试验方法 动物分组小鼠按体重随机分成6组，每组10只，分别为正常对照组；免疫低下模型组；阳性对照药龟蛇粉胶囊0.42g胶囊粉/kg；本发明药物2.25g生药/kg；本发明药物4.5g生药/kg；本发明药物9.0g生药/kg。
给药时间本发明药物各剂量组和阳性对照药组每日灌胃给药一次，给药体积为20ml/kg体重，连续给药10天。正常对照组和模型对照组灌胃给予同体积蒸馏水。
试验方法 小鼠按体重随机分组，本发明药物各剂量组和阳性对照药组每日灌胃给药一次，给药体积为20ml/kg体重，连续给药10天。给药的第8、9两天，除正常对照组外，其余各组小鼠均肌肉注射醋酸泼尼松10mg/kg每日各一次。给药第8天，所有组的小鼠均腹腔注射2％肝糖原2ml/只。第11天，处死小鼠，腹腔注入RPMI 1640培养液2ml，收集腹腔巨噬细胞，于巨噬细胞悬液中加入2％鸡红血球，并加入一玻片条。37℃孵育30分钟后，用生理盐水轻轻冲洗玻片条。室温干燥后，用甲醇固定，姬母萨染色。封片后于普通显微镜下计数200个巨噬细胞，计算巨噬细胞吞噬百分率。
巨噬细胞吞噬百分率(％)＝吞噬鸡血球的MΦ·MΦ总数-1·100 吞噬指数＝吞噬的鸡血球总数·MΦ总数-1 统计方法各组试验数据均以均数±标准差表示。本发明药物各剂量组和阳性对照药组的数据分别与模型对照组进行比较，用t-检验进行统计分析。
试验结果 巨噬细胞吞噬功能代表机体的非特异性免疫功能。醋酸泼泥松10mg/kg im，1次/d×2d，可造成小鼠非特异性免疫功能显著低下，巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数均明显低于正常小鼠(P＜0.01)；本发明药物2.25、4.5、9.0g生药/kg灌胃给药10天，可明显提高免疫低下小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能，吞噬百分率和吞噬指数均明显高于模型组(P＜0.05，P＜0.01)。阳性对照药龟蛇粉胶囊也可明显提高免疫受抑小鼠的巨噬细胞吞噬功能(P＜0.01)。结果见表11。结果表明本发明药物对非特异性免疫功能具有显著的促进作用。
表11本发明药物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 注与正常对照组比较##P＜0.01； 与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01。
结论本发明药物2.25、4.5、9.0g生药/kg灌胃给药10天，可明显提高免疫低下小鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能，使吞噬百分率和吞噬指数均显著高于模型组(P＜0.05，P＜0.01)，表明对非特异性免疫具有明显的增强作用。
上述结果表明，本发明药物具有明显的温阳补肾和止血作用，对子宫炎症具有明显的抗炎作用，对化学刺激性疼痛具有明显的止痛作用；同时，本发明药物还在一定程度上增强子宫收缩，改善血液流变学，具有改善微循环，减少子宫出血的作用；此外本发明药物还可提高免疫功能，具有扶正固本，补气升阳摄血作用。本研究为本发明药物治疗崩漏肾阳虚证提供了实验依据。
二、本发明药物的毒理学实验结果 (一)急性毒性试验 本发明药物给小鼠灌胃给药，按最大给药浓度和最大灌胃体积一日内给药2次，总剂量达200g生药/kg(相当于推荐的临床60kg人日用剂量的266倍)，动物未出现毒性症状，未出现呼吸抑制、惊厥、抽搐等反应；动物的一般情况、活动、排泄物、皮毛均未见异常。因此本发明药物对小鼠灌胃给药的最大耐受量为200g生药/kg，相当于推荐的临床人日用剂量的266倍，在此剂量下未见毒性反应。
(二)长期毒性试验 本发明药物按20、40、80g生药/kg/天(各约相当于人(60kg)日用剂量的26.5、53、106倍)的剂量，给大鼠连续灌胃给药6个月，并于给药后3个月和6个月及停药1个月时分批处死动物，观察本发明药物对动物的慢性毒性作用。结果显示，本发明药物80、40、20g生药/kg体重给大鼠连续灌胃给药6个月和停药1个月，3个剂量水平均未引起动物死亡，对动物的平均体重、饲料消耗量、行为活动、粪便等一般情况无明显影响。
本发明药物高、中、低三个剂量水平给药3、6个月和停药1个月后，大鼠的各项血液学指标(RBC、WBC及其分类Gr、Ly、MO、HGB、HCT、PLT、凝血时间)和血液生化学指标(BUN、Crea、TBIL、TP、ALB、GLU、ALT、ALP、AST、CHOL)及心电图等指标均在正常值范围内波动，尿液定性检查未见明显异常。
本发明药物高、中、低三个剂量水平给大鼠连续灌胃给药6个月对动物重要脏器系数均无明显影响。停药1个月后未见迟发性影响。给药3、6个月和停药1个月后，3个剂量组动物的心、肝、脾、肺、肾、脑、垂体、视神经、肾上腺、甲状腺、胸腺、肠系膜淋巴结、胃、十二指肠、结肠、胰腺、卵巢、子宫等脏器的大体解剖和组织形态学观察均未见明显的病理改变 结果提示，本发明药物80、40、20g生药/kg/天连续灌胃给药6个月，对大鼠无明显的毒性作用。
具体实施例方式 以下通过实施例对本发明作进一步的阐述。
实施例1 处方 淫羊藿 550g 黄芪333.3g 党参250g 墨旱莲 250g 白芍180g 甜叶菊苷3g 制成1000支 制备工艺淫羊藿和墨旱莲切成约1cm左右的丝，黄芪、党参、白芍饮片装入提取罐内，每次加入12倍药材总重量的蒸馏水，回流提取2次，每次2小时，得到提取液，滤布过滤，减压浓缩至密度为1.20(80℃)，放冷后，在强烈搅拌下加入乙醇至含醇量达60％，冷藏24小时后，板框过滤，减压回收乙醇至密度为1.06(50℃)，加入约600ml的蒸馏水，冷藏24小时，板框过滤，于滤液中加入甜叶菊苷调味，用1N的NaOH调pH为6.5，加入水至1000ml，板框过滤。灌装(10ml/支)，封口，105℃流动蒸汽灭菌，灯检，包装，检验，入库。
实施例2 处方 淫羊藿 450g 黄芪300g 党参200g 墨旱莲 230g 白芍200g 甜叶菊苷3g 制成500支 制备工艺淫羊藿和墨旱莲切成约1cm左右的丝，黄芪、党参、白芍饮片装入提取罐内，每次加入12倍药材总重量的蒸馏水，回流提取2次，每次2小时，得到提取液，滤布过滤，减压浓缩至密度为1.2(80℃)，放冷后，在强烈搅拌下加入乙醇至含醇量达60％，冷藏24小时后，板框过滤，减压回收乙醇至密度为1.10(50℃)，加入约600ml的蒸馏水，冷藏24小时，板框过滤，于滤液中加甜叶菊苷调味，用1N的NaOH调pH为6.3，加入水至1000ml，板框过滤。灌装(20ml/支)，封口，105℃流动蒸汽灭菌，灯检，包装，检验，即得。
实施例3 处方 淫羊藿 300g 黄芪333g 党参250g 墨旱莲 250g 白芍180g 微晶纤维素 1500g 乳糖1000g 制成3000片 制备工艺淫羊藿和墨旱莲切成约1cm左右的丝，黄芪、党参、白芍饮片装入提取罐内，每次加入15倍药材总重量的蒸馏水，回流提取2次，每次2小时，得到提取液，滤布过滤，减压浓缩至密度为1.2(80℃)，放冷后，在强烈搅拌下加入乙醇至含醇量达60％，冷藏24小时后，板框过滤，减压回收乙醇至密度为1.15(50℃)，加入乳糖和微晶纤维素，制粒，干燥，压片，即得。
实施例4 处方 淫羊藿 500g 黄芪333.3g 党参250g 墨旱莲 250g 白芍166.7g 微晶纤维素 1000g 乳糖1500g 制成3000粒 制备工艺淫羊藿和墨旱莲切成约1cm左右的丝，黄芪、党参、白芍饮片装入提取罐内，每次加入8倍药材总重量的蒸馏水，回流提取3次，每次3小时，得到提取液，滤布过滤，减压浓缩至密度为1.2(80℃)，放冷后，在强烈搅拌下加入乙醇至含醇量达60％，冷藏24小时后，板框过滤，减压回收乙醇至密度为1.18(50℃)，加入乳糖和微晶纤维素，制粒，干燥，装胶囊，即得。
权利要求
1.一种中药组合物，其特征在于该中药组合物的处方含有下列重量份的药材淫羊藿25～70份，黄芪20～45份，党参15～35份，墨旱莲15～35份，白芍10～25份。
2.权利要求1所述中药组合物的制备工艺，其特征在于包括下列步骤
a.按处方取淫羊藿和墨旱莲切丝，与黄芪、党参、白芍饮片装入提取罐内，每次加入8～15倍药材总重量的蒸馏水，回流提取2～3次，每次1.5～3小时，得到提取液；
b.提取液过滤，减压浓缩至80℃时相对密度为1.10～1.20，放冷，加入乙醇至含醇量达50～70％，搅拌，冷藏18～36小时，过滤，减压回收乙醇至50℃时相对密度为1.00～1.20，得浓缩液；
c.加入辅料，制备成所需剂型。
3.根据权利要求2所述中药组合物的制备工艺，其特征在于步骤c是向浓缩液中加入适量蒸馏水，冷藏18～36小时，过滤，于滤液中加入适量的甜叶菊苷调味，调节pH为6～7，加水定容，过滤，灌装，封口，灭菌。
4.权利要求1所述的中药组合物在制备治疗崩漏的药物中的应用。
全文摘要
本发明属于中药制药领域，公开了一种中药组合物及其制备工艺和应用。该组合物的处方含有下列重量份的药材淫羊藿25～70份，黄芪20～45份，党参15～35份，墨旱莲15～35份，白芍10～25份。该组合物有止血、温阳补肾、增强子宫张力、活血化瘀、抗炎、镇痛和免疫调节作用，具有温补肾阳，固冲止血的功能，可用于制备治疗崩漏的药物。
文档编号A61K36/71GK101181374SQ20071019118
公开日2008年5月21日 申请日期2007年12月11日 优先权日2007年12月11日
发明者徐向阳, 孟先彬, 俊 谢, 晔 孙, 黄春玉, 俊 杨, 莹 蔡, 范廷校 申请人:金陵药业股份有限公司