专利名称：：雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备方法
技术领域：
：本发明涉及中药制剂领域，具体是将中药雷公藤的有效部位雷公藤多苷制成固体脂质纳米粒的方法。
背景技术：
：雷公藤系卫矛科雷公藤属植物，具有抗炎、抗肿瘤、免疫抑制等多种活性，临床广泛用于治疗类风湿性关节炎，慢性肾炎、红斑狼疮和各种皮肤病，但其口服吸收不好，胃肠刺激大，不良反应较多，限制了其应用，剂型改造是其增效减毒的有效方法。其中，雷公藤多苷的应用最广，也认为雷公藤多苷是主要药理活性成分，主要包括二萜内酯、生物碱、三萜等一组有效成分，具有抗炎、抗肿瘤、免疫抑制、抗HIV病毒的药理活性。纳米中药是指运用纳米技术制造的、粒径小于200nm的有效成分、有效部位、原药及其复方制剂。纳米中药改变了药物的物理状态，药物的活性和生物利用度得到大幅度提高,并可能产生新的药效。雷公藤已有报道的纳米化剂型有CN01133514.9A纳米中药雷公藤昆明山海棠剂型及其制备方法，CN02133332.7A公开了一种雷公藤纳米微粒的制备方法，CN200610104979.2A公开了一种雷公藤多甙纳米乳药物及其制备方法。前两者主要是针对雷公藤醇提取液和雷公藤浸膏，而不是有效部位，针对性不强且方法简单，后者给药方式仅局限于外用，应用上受到限制，本发明公开了一种雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备工艺，经文献检索，将其制成固体脂质纳米粒这一剂型尚属首次，固体脂质纳米粒(Solidlipidnanoparticles,SLN)是上世纪90年代初引入的一种新型的纳米给药系统。SLN具有下述优点(Muhlen，1998):①颗粒尺寸小，平均粒径在纳米尺度，可用于注射给药；②生物相容性好，在制备过程中不会引入有毒聚合物单体等有毒残留物；③对亲脂性药物有足够的载药能力，通过工艺调整，还可以包封亲水性药物；④具有缓释特性，可延长药物释放达数天至数周；⑤其水分散体系可长期稳定保存，通过冷冻干燥或喷雾干燥还可制成固体粉末，稳定性好；⑥通过对其表面进行特征修饰，可将药物传递至特定组织，具有靶向性；⑦有足以供应市场的大规模工业化生产方式；(D价格相对较为低廉。目前，应用于临床的主要有雷公藤多苷片，雷公藤内酯软膏，雷公藤片等，雷公藤多苷是雷公藤的有效部位，临床药物多以茈为原料，、将其制成固体脂质纳米粒这一新的剂型后可改善其吸收，提高生物利用度，增强药效，降低毒性，并可适用于多种给药途径。
发明内容本发明是研究雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备方法，目的在于克服现有剂型的不足，提出一种新的雷公藤多苷固体脂质纳米粒药物，方法简单，生产成本低。雷公藤多苷固体脂质纳米粒，其特征在于含下列组分及重量份数比雷公藤多苷1混合脂质5~15其中混合脂质由类脂和脂质载体按1:1~1:5重量比组成表面活性剂0.5~1.5本发明雷公藤多苷固体脂质纳米粒，可通过高温乳化-低温固化、薄膜-超声分散法、高压乳匀法来制备，经过反复实验确定现有制备方法，因为其稳定性、重现性均较好，同时考察了不同的脂质材料、不同的药脂比、脂质载体与类脂的不同比例，和不同的表面活性剂对其质量的影响，以下是一些研究数据表1不同的脂质材料对TWP-SLN质量的影响脂质材料脂质用量(mg)泊洛沙姆(mg)外观粒径(nm)单硬脂酸甘油酯30030较澄清181.1三硬脂酸甘油酯30030较澄清201.5月桂酸甘油酯30030浑浊，有沉淀780.5甘油硬脂酸30030澄清127.3硬脂酸30030略浑浊346,8豆蔻酸甘油酯30030澄清105.9所述纳米粒的基质为生理相容性的可生物降解的天然或合成类脂的脂质材料，即脂质载体和类脂，脂质载体可以是磷脂、单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、肉豆蔻酸甘油酯、辛酸/癸酸三甘油酯或其中任意两种或两种以上的混合物。实验后优选单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、肉豆蔻酸甘油酯。同时研究发现，加入少量液态脂质辛酸/癸酸甘油酯，可提高纳米粒稳定性，因为引入液态脂质能够延缓固态脂质由a晶形向e晶形的转化，可以延缓药物的泄露。所述纳米粒中加入乳化剂，可起'到稳定粒子TW作用，'芏要是憐脂，可以是卵磷脂，包括大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂；或氢化大豆卵磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、双肉豆蔻磷脂酰胆碱或二硬脂酰磷脂胆碱。实验后优选大豆卵磷脂和卵磷脂。本发明采用表面活性剂修饰或吸附于脂质纳米粒表面，以使脂质纳米粒达到缓释的目的。表2不同的药脂比对TWP-SLN质量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表3不同的脂质载体与类脂比例对TWP-SLN质量的影响<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>实验考察了不同脂质及脂质载体与类脂的比例，确定脂质材料采用固体和液体混合脂质，即加入微量液态脂质，且雷公藤多苷脂质材料的比例为l:5~15,低于l:5时，药物包裹不完全，造成浑浊，高于l:15时，粒径增长，脂质易析出，出现分层现象，脂质的用量越大包封率越好，综合考虑，药脂比为l:IO时最为适宜。类脂与脂质载体的比例为1~5时，粒径、包封率均较好。另外对所述表面活性剂进行了筛选，包括泊洛沙姆(Poloxamer，Pluronic)、聚氧乙烯脂肪酸酯(卖泽、Myrj)、聚氧乙烯脂肪醇醚(卞泽、Brij)、聚山梨酯(Polysorbate、吐温、Tweens)、脂肪酸山梨坦(司盘、Spa&)，'去氢胆酸盐'、卩，伯树胶粉。优选泊洛沙姆、吐温及去氢胆酸盐。雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备方法，其特征在于将雷公藤多苷溶解于混合脂质溶液中作为油相，在搅拌条件下将油相缓慢加入到同等温度含表面活性剂0.5~1.5的水相中，保温搅拌，超声，自然冷却后即得初分散体，经冷冻干燥，即可得雷公藤多苷固体脂质纳米粒。雷公藤多苷固体脂质纳米粒，其特征在于其搅拌后，使用探头超声措施，减小纳米粒粒径。本发明制得的雷公藤多苷固体脂质纳米粒初分散体外观呈透明淡黄色液体，粒径在10200nm之间，电位值反映了粒子之间的相互排斥力，-20-50mv较好(详见附图3、4)，冷冻干燥后复溶，粒径、电位几无变化，冻干后可长期保存。电镜观察空白纳米粒及载药钠米粒呈圆形，形态归整(详见附图1、2)，包封率67%，载药量0.2%，经X衍射检査，空白SLN样品与TWP-SLN样品峰基本一致，说明纳米粒晶形未发生变化，较稳定，样品峰值均大于对照，说明药物已被包裹进脂质(详见附图5-7)。本发明以上述材料将药物包裹，制成固体脂质纳米粒，可提高药物溶解度改善吸收，提高生物利用度，具有一定的缓释作用，增强药效，降低毒性，适用于多种给药途径。图1为空白固体脂质纳米粒透射电镜照片图2为雷公藤多苷固体脂质纳米粒透射电镜照片图3为雷公藤多苷固体脂质纳米粒电位测定结果图4为雷公藤多苷固体脂质纳米粒粒径测定结果图5为雷公藤多苷原料X衍射图图6为空白SLN样品X衍射图图7为TWP-SLN样品X衍射图具体实施例方式雷公藤多苷可用文献方法从中药雷公藤中提取，也可购买。将TWP-SLN通过下列实施例进一步说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围，不局限于此。粒径、电位测定采用Zetasizer3000HS粒径测定仪测定。雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(l个处方量)60mg360mg360mg60mg制备工艺取雷公藤多苷、单硬脂酸甘油酯加入丙酮8ml，于80。C加热溶解；大豆磷脂加入乙醇lml，超声10min溶解；将上述两种溶液混匀作为有机相；另取泊洛沙姆溶于20ml水中作为水相，搅拌条件下将有机相用针头注入8(TC水相中，保温搅拌4h，挥尽有机溶剂，将该混悬液快速分散至02'C30ml水中，低温固化2h，0.45um微孔滤膜过滤，即得。所得纳米粒平均粒径为204.5nm,电位-6.8mv实施例2雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(1个处方量)雷公藤多苷60mg硬脂酸300mg大豆磷脂300mg泊洛沙姆60mg制备工艺将雷公藤多苷、硬脂酸、大豆磷脂溶于无水乙醇中；减压旋转蒸发去除有机溶剂，形成实施例1雷公藤多苷单硬脂酸甘油蹈大豆磷脂泊洛沙姆7一层脂质薄膜，减压干燥，过夜，然后把泊洛'莎姆水溶液缓tf住Xi述脂质薄膜中，超声lh，0.45um微孔滤膜过滤，即得。所得纳米粒平均粒径为73.8nm电位-14.7mv实施例3雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(l个处方量)雷公藤多苷60mg单硬脂酸甘油酯300mg辛酸甘油酯200ul大豆磷脂60mg泊洛沙姆60mg制备工艺将雷公藤多苷加入到80'C单硬脂酸甘油酯、大豆磷脂、辛酸甘油酯混合脂质液中；再把热脂相分散到泊洛沙姆水溶液中得到初分散体，高压匀质56个循环，04'C冷却结晶，即得。所得纳米粒平均粒径为182.7nm电位-27.6mv实施例4雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(1个处方量)雷公藤多苷60mg单硬脂酸甘油酯300mg大豆磷脂60mg去氢胆酸钠20mg制备工艺将雷公藤多苷、单硬脂酸甘油酯加入丙酮8ml，于8(TC加热溶解；大豆磷脂加入乙醇lml，超声10min溶解；将上述两种溶液混匀作为有机相；另取去氢胆酸钠溶于20ml水中作为水相，搅拌条件下将有机相用针头注入8(TC水相中，保温搅拌4h，挥尽有机溶剂，将该混悬液快速分散至02。C30ml水中，低温固化2h，0.45um微孔滤膜过滤，即得。所得纳米粒平均粒径为198.9nm电位-19.4mv8实施例5雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(1个处方量)雷公藤多苷60mg三硬脂酸甘油酯360mg吐温80200ul泊洛沙姆30mg制备工艺将雷公藤多苷加入到80'C三硬脂酸甘油酯、吐温80混合脂质液中；再把热脂相分散到泊洛沙姆水溶液中得到初分散体，高压匀质56个循环，04'C冷却结晶，即得。所得纳米粒平均粒径为201nm电位-2L9mv实施例6雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(l个处方量)雷公藤多苷60mg肉豆蔻酸甘油酯360mg吐温80200ul泊洛沙姆30mg制备工艺将雷公藤多苷加入到8(TC月桂酸甘油酯、吐温80混合脂质液中；再把热脂相分散到泊洛沙姆水溶液中得到初分散体，高压匀质56个循环，04。C冷却结晶，即得。所得纳米粒平均粒径为145.Onm电位-25.Omv实施例7雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(1个处方量)雷公藤多苷60mg甘油硬脂酸360mg吐温80200ul泊洛沙姆30mg制备工艺将雷公藤多苷加入到8CTC甘油硬脂酸、吐温80混合脂质液中；再把热脂相分散到泊洛沙姆水溶液中得到初分散体，高压匀质56个循环，04t:冷却结晶，即得。所得纳米粒平均粒径为127.3nm电位-23.4mv实施例8雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(l个处方量)雷公藤多苷60mg单硬脂酸甘油酯300mg卵磷脂120mg辛酸甘油酯200ul泊洛沙姆30mg制备工艺将雷公藤多苷加入到8(TC甘油硬脂酸、吐温80混合脂质液中；再把热脂相分散到泊洛沙姆水溶液中得到初分散体，高压匀质56个循环，04'C冷却结晶，即得。所得纳米粒平均粒径为181.1nm电位-28.2mv实施例9雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(1个处方量)雷公藤多苷60mg单硬脂酸甘油酯300mg大豆磷脂300mg吐温80200ul泊洛沙姆60mg制备工艺将雷公藤多苷、单硬脂酸甘油酯、大豆磷脂、吐温80溶于无水乙醇中，8(TC水浴溶解作为油相；泊洛沙姆溶于100ml水中，8(TC搅拌条件下，将油相缓缓注入到水相中，保温搅拌lh，55。C减压旋蒸30min，以除尽有机溶剂，超声40min,自然冷却，0.45um微孔滤膜过滤，即得。所得纳米粒平均粒径为129.5nm电位-17.8mv10实施例IO雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(l个处方量)雷公藤多苷60mg单硬脂酸甘油酯300mg大豆磷脂300mg吐温80200ul柠檬酸三乙酯200ul泊洛沙姆60mg制备工艺将雷公藤多苷、单硬脂酸甘油酯、大豆磷脂、吐温80溶于无水乙醇中，8(TC水浴溶解作为油相；泊洛沙姆溶于100ml水中，8(TC搅拌条件下，将油相缓缓注入到水相中，保温搅拌lh,55。C减压旋蒸30min，以除尽有机溶剂，超声40min，自然冷却，0.45um微孔滤膜过滤，即得。所得纳米粒平均粒径为165.8nm电位-23.9mv实施例11雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(1个处方量)雷公藤多苷60mg单硬脂酸甘油酯300mg大豆磷脂300mg吐温80200ul辛酸甘油酯200ul泊洛沙姆60mg制备工艺将雷公藤多苷、单硬脂酸甘油酯、大豆磷脂、辛酸甘油酯、吐温80溶于无水乙醇中，8(TC水浴溶解作为油相；泊洛沙姆溶于100ml水中，80'C搅拌条件下，将油相缓缓注入到水相中，保温搅拌lh，55。C减压旋蒸30min,以除尽有机溶剂，超声40min，自然冷却，0.45um微孔滤膜过滤，即得。所得纳米粒平均粒径为133.4nm电位-19.8mv11实施例12雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备(1个处方量)雷公藤多苷60mg单硬脂酸甘油酯300mg大豆磷脂300mg吐温80200ul辛酸甘油酯200ul泊洛沙姆60mg制备工艺将雷公藤多苷、单硬脂酸甘油酯、大豆磷脂、辛酸甘油酯、吐温80溶于无水乙醇中，8(TC水浴溶解作为油相；泊洛沙姆溶于100ml水中，8(TC搅拌条件下，将油相缓缓注入到水相中，保温搅拌lh，55'C减压旋蒸30min，以除尽有机溶剂，探头超声(300W，180次)，自然冷却，0.45um微孔滤膜过滤，即得。所得纳米粒平均粒径为95.5nm电位-24.Omv权利要求1、一种雷公藤多苷固体脂质纳米粒，其特征在于含下列组分及重量份数比雷公藤多苷1混合脂质5～15其中混合脂质由类脂和脂质载体按1∶1～1∶5重量比组成表面活性剂0.5～1.5。2、权利要求1的雷公藤多苷固体脂质纳米粒，其特征在于所述脂质载体是单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、肉豆蔻酸甘油酯、辛酸/癸酸甘油酯或其中任意两种或两种以上的混合物；类脂是是大豆磷脂和卵磷脂；表面活性剂是泊洛沙姆、吐温80或去氢胆酸盐。3、权利要求l的雷公藤多苷固体脂质纳米粒，其特征在于粒径分布在10200nm。4、雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备方法，其特征在于将雷公藤多苷溶解于混合脂质溶液中作为油相，在搅拌条件下将油相缓慢加入到同等温度含表面活性剂0.51.5的水相中，保温搅拌，超声，自然冷却后即得初分散体，经冷冻干燥，即可得雷公藤多苷固体脂质纳米粒。5、权利要求1的雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备方法，其特征在于搅拌后，使用探头超声措施，有效减小纳米粒粒径。全文摘要本发明是一种雷公藤多苷固体脂质纳米粒的制备方法。将雷公藤多苷1份溶解于5～15份混合脂质溶液中(其中类脂脂质载体为1～5)作为油相，将油相缓慢加入到同等温度含表面活性剂0.5～1.5的水相中，保温搅拌，探头超声，自然冷却后即得初分散体，经冷冻干燥，即可得雷公藤多苷固体脂质纳米粒。该纳米粒呈淡黄色，粒径在10～200nm之间，质量稳定，可用于口服、静脉注射等多种给药途径。本发明方法可靠，操作简便，耗能低，适于工业化生产，制得的雷公藤多苷固体脂质纳米粒较雷公藤多苷原料有较高的溶解性改善其吸收，提高了生物利用度，增强药效，降低毒性。文档编号A61K36/37GK101658545SQ200910034968公开日2010年3月3日申请日期2009年9月16日优先权日2009年9月16日发明者张陆勇,江振洲,梅薛申请人:中国药科大学