小飞蓬总黄酮提取物及其制备方法和药物用途的制作方法

专利名称：：小飞蓬总黄酮提取物及其制备方法和药物用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于中药领域。
背景技术：
：小飞蓬为菊科飞蓬属植物E.canadensisL.的全草，为一年生草本，生于山坡、草地或田野、路旁。分布与东北地区及山西、内蒙古、浙江、福建、江西、山东、河南、湖北、广西、四川、云南、陕西和台湾。飞蓬属植物含有多种化学成分，迄今从该属植物中获得的天然产物有苯丙素类、黄酮类、萜类、炔类、香豆素类化合物等。研究发现苯丙素和黄酮类化合物是飞蓬属主要的特征成份，也是目前研究较集中的部分。中药大辞典记载，小飞蓬全草含挥发油，其中地上部分含柠檬烯，松油醇，二戊烯，枯牧烯、齐墩果酸等；花中含有倍半萜烯，乙酸亚油醇酯及醛类，母菊酯，去氢母菊酯，还含有香草酸，丁香酸等。药理研究方面尚无关于小飞蓬的药理作用的文献报道。中国植物志记载，小飞蓬具有止血、利尿的功效。国外文献记载，小飞蓬用于治疗腹泻、痢疾、水肿、咳血。中药大辞典记载，小飞蓬地上部分石油醚和乙醇提取物具有抗炎活性，新鲜生药的水提取液具有抗菌活性。小飞蓬全草总黄酮水溶性部分对心血管系统也有明显作用。
发明内容本发明提供一种小飞蓬总黄酮提取物及其制备方法和药物用途。本发明小飞蓬总黄酮提取物是由下述方法得到的-a.取小飞蓬干燥全草，加入4~8倍量的40%95%乙醇或甲醇回流提取2~4次，每次1~3小时；b.合并提取液，浓縮至干，将所得干品加水溶解、过滤，将滤液加于已处理好的大孔树脂柱上；或干品加甲醇或乙醇溶解后用大孔树脂拌样，加于已处理好的大孔树脂柱上，经过大孔吸附树脂柱洗脱，先用水洗脱，至洗脱液无色，再用47个柱装体积的10%90%乙醇洗脱，回收洗脱液、浓縮至干，得小飞蓬总黄酮提取物。一种制备上述小飞蓬总黄酮提取物的方法。大孔吸附树脂柱采用DM301、DlOl、AB8、DM130、HPDIOO、HPD600或DA201。本发明在制备抗肿瘤药物及抗肿瘤辅助药中的应用。本发明还提供用本发明的小飞蓬总黄酮提取物以及药学上可接受的载体或赋形剂制备的药物制剂。这些药物制剂选自以下剂型片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注射剂，注射乳剂、冻干粉针，还可以根据需要制备成缓释或控释制剂。本发明的含有小飞蓬总黄酮提取物的药物制剂，在制备药物制剂时可加入药物可接受的载体，所述药物可接受的载体来自抗氧剂、鏊合剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、溶剂、缓释材料、肠溶材料、pH调节剂、矫味剂、色素等，常用载体如甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、木糖醇、注射用水、注射用乙醇、氯化钠、硅衍生物、纤维素、纤维素衍生物、明胶、聚乙烯吡咯垸酮、甘油、吐温80、琼脂、碳酸钙、聚乙二醇、环糊精、磷脂类材料、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙等。该发明的有益效果填补了制备小飞蓬总黄酮提取物的空白并扩展了其在医药领域的应用范围，从而提高了该类制剂在国际市场的竞争力。用量为每天8001000毫克。具体实施例方式以下通过试验例来进一步阐述发明所述药物的有益效果，这些试验例包括了本发明药物的药效学试验。本发明药物对小鼠多种移植实验性肿瘤的抑制作用本发明药物经药效学实验证明对小鼠多种移植实验性肿瘤有明显的抑制作用，500、250mg/kg受试物对小鼠肉瘤(S18。)、肝癌A22(H印A22)、艾氏腹水癌(ESC)、肺癌(Lewis)均有明显的抑制作用。实验目的检测受试物对小鼠移植性肿瘤生长的影响影响。4实验材料1.药物及试剂受试物，为黄色，由长春中医药大学研发中心提供，含量67%，批号070717。环磷酰胺，为上海华联制药有限公司(批号000705)和上海第十二制药厂(批号071015)产品，PRMI—1640培养基(Gibco)USA，胎牛血清(FCS)中国医学科学院血液研究所购进(批号200004)，曲拉通(Triton-X100)Sigma，还原型辅酶I(CoI,NADH)Sigma，其余试剂均为市售。2.动物及瘤株昆明种小白鼠，购自长春生物制品研究所，C57BL/6纯系小鼠，合格证号10-1025，由白求恩医科大学实验动物室提供，体重18-22g，雌雄兼用。S18。、H印.A22、ESC、Lewis均由中国医学科学院药物研究所引进。3.仪器C02培养箱(SANYO,MCO—175M)Japan，超净工作台(CJ-1)苏州长桥净化设备厂，紫外光度计(TU-1221)北京瑞利分析仪器厂，自动酶标仪(CliniBio)EC，倒置显微镜(OLYPUS)Japan,96/24孔培养板(Costar)USA。实验方法及结果1.受试物对S18。、H印A22、ESC、Lewis实体瘤抑瘤作用取荷瘤传代鼠脱颈椎处死，固定于板上。用碘酊及酒精消毒动物皮肤，切开皮肤，选择肿瘤生长良好、无坏死或液化的瘤组织，加入无菌生理盐水，用组织匀浆器制成含3000万/ml左右的细胞悬液，于小鼠腋窝皮下接种0.2ml/只，接种部位皮肤先用碘酊及酒精消毒。每个瘤株，每次试验接种60只小鼠，接种后次日随机分组，每组12只，试验设高、中、低三个剂量(500，250，125mg/kg)及试验对照组(生理盐水)和阳性药组(环磷酰胺20mg/kg)。小鼠灌胃给药，每天一次，给药10天后处死，称体重，摘瘤称重，计算抑瘤率，实验结果见表1一4。给药组平均瘤重(T)瘤重抑制率=(1--~"-)xioo%对照组平均瘤重(Q上述实验结果表明受试物对小鼠Sw。、fep.A22、ESC及Lewis等实体瘤均有明显的抑制作用。表1受试物对小鼠S,8。的抑制作用三次重复实验结果(X土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注与对照组比较，"PO.001,P〈0.01,表2、3、4同表2受试物对小鼠H印.A22的抑制作用三次重复实验结果(X土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表3受试物对小鼠ESC的抑制作用三次重复实验结果(X士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>本发明药物对小鼠免疫功能的影响受试物对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和体液免疫功能均有明显的增强作用，并可显著提高NK细胞活性，40mg/kg受试物既可促进脾细胞淋转，又可明显提高白细胞介素-2(IL-2)活性。一、受试物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响动物昆明种小白鼠60只，体重20土lg，雌雄各半，由长春生物制品研究所提供。小鼠移植性肝癌(H22)瘤株由中国医科学院药物研究所肿瘤室提供。仪器和试剂显微镜；鸡红细胞；丙酮；甲醇；生理盐水；Gienisa染色液；玻片；注射器。环磷酰胺(CP，上海第十二制药厂生产，批号011015);受试物(Rh2)由长春中医药大学研发中心提供，批号070117。实验分组实验随机分成六组，正常对照组；无菌操作取荷肝癌(H22)小鼠腹水，用0.9y。生理盐水稀释至含lX107ml，每只右腋皮下接种0.2ml(2X107只)随机分成1荷瘤对照组(H22);H22荷瘤阳性对照组(H22CP);仏2荷瘤受试物(H22Rh2)高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组10只。给药方法小鼠接种瘤细胞24小时后开始给药，正常对照组(灌胃等体积的生理盐水)；H22荷瘤对照组(灌胃等体积的生理盐水)；H22阳性对照组(灌胃CP，20mg/kgXl，连续给予);H22受试物高剂量组(0.5g/kg)、中剂量组(0.25g/kg)、低剂量组(0.125g/kg)，每日灌胃给与一次，连续给药10天，免疫动物后继续给药5天，体积均为0.2ml/10g。细胞悬液制备取鸡血置于有玻璃珠的锥形瓶中，朝一个方向充分摇动，以脱纤维，用生理盐水洗涤3次，离心2000转/分钟，10min，弃上清，用生理盐水配成20%(V/V)的鸡红细胞悬液。吞噬功能测定末次给药后，次闩清晨每只鼠腹腔注射20%鸡红细胞悬液化1ml，轻柔腹部，30min后，颈椎脱臼处死动物，立即开腹吸取腹腔液滴在玻片上约0.2ral，玻片置入37'C,孵育30min后，再用生理盐水中漂洗，除去未贴片细胞，晾干，以1:10l丙酮甲醇溶液固定，4%(V/V)Gienisa-磷酸缓冲液染色3min，蒸馏水漂洗晾干。显微镜下结果判定油镜下计数巨噬细胞，每张计数100个，按下列公式计算吞噬百分率和吞噬指数。吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数吞噬％=-X100%计数的巨噬细胞数被吞噬的鸡红细胞数吞噬指数-计数的巨噬细胞数实验结果(见表l)表l、受试物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响("X土s)分组剂量(g/kg)动物数吞噬百分率(％)吞噬指数对照组_1033.2±3.0141.7±3.47H221025.70±4.59A37.7±5.40H22+CP0.021022.3士3.80"31.4±6.60AAJ"b+本品0.51043.1±4.53**67.0±4.67***0.251040.6±2.59**62.2±5.65***0.1251038.7±3.27*58.4±2.68***&2受试物各剂量组与H22组比较有明显差异，*P<0.05，**<0.0I，***P<0.001，&2和H22CP组与正常对照组比较显著降低AP0.05,"P0.01。实验结果表明受试物各剂量组能明显提高荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，而环磷酰胺明显抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能。二、受试物对小鼠体液免疫的影响一血清溶血素测定血凝法动物昆明种小白鼠60只，雌雄各半，体重20士lg，，由长春生物制品研究所提供。H22肝癌瘤株由中国医科学院药物研究所肿瘤室提供。试剂和仪器受试物由长春中医药大学研发中心提供，批号070117;阳性对照药:环磷酰胺(CP，上海第十二制药厂，批号071015);C02培养箱(SANYO,MCO—175M，Japan);超净工作台(CJ-1，苏州长桥净化设备厂)；微量血凝计数板，离心机。实验方法(一)、实验分组同前。(二)、给药方法同前。(三)、SRBC:绵羊颈静脉取血，将羊血放入在玻璃珠的灭菌稚形瓶中，朝一个方向摇动，以脱纤维，放入《C冰箱保存备用，可保存2周。(四)、免疫动物及血清分离取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000转/分，10min，将压积SRBC用生理盐水配成2M(V/V)的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.21111进行免疫，5天后，摘除眼球取血于离心管中内，放置约lh，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000转/分，10min，收集血清。(五)、凝集反应用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释浓度的血清分别置于微量试验板内，每孔100(il，再加入100pl0.5。/。(v/v)的SRBC悬液，混匀，装入湿润的平盘内加盖，于37。C温箱孵育3h，观察血球凝集程度。抗体积数=(Sl+2S2+3S3+….nSn)1、2、3、....n稀释倍数，S代表凝集程度的级别。实验结果(见表2)表2、对荷瘤小鼠体液免疫的影响一血清溶血素测定血凝法Ot土S)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>H22受试物高、中剂量组和低剂量组与H22荷瘤对照组比较显著升高+P〈0.05，**P<0.01，***P<0.001;H22CP組.、H22与正常对照组比较有显著降低作用"Ap〈0.001,AP<0.05。实验结果表明受试物各剂量组抗体数明显高于对照组和CP组，说明受试物组有明显促进荷瘤小鼠体液免疫功能的作用，而环磷酰胺组则明显抑制体液免疫功能的作用。三、受试物对荷瘤小鼠NK细胞毒活性、淋巴细胞转化、白细胞介素的影响动物和细胞株昆明种小白鼠60只，体重20土lg，雌雄各半，由长春生物制品研究所提供。H22肝癌瘤株由中国医科学院药物研究所肿瘤室提供。淋巴细胞(YAC-1，购自武汉大学菌种保藏中心)。试剂和仪器PRMI—1640培养基(Gibco，USA);胎牛血清(FCS，中国医学科学院血液研究所购进，批号200004);曲拉通(Triton-XIOO，Sigma);还原型辅酶I(CoI，NADH，Sig脇);阳性对照药环磷酰胺(CP，上海第十二制药厂，批号011015);受试物由长春中医药大学研发中心提供，批号070717;C02培养箱(SANY0，MC0—175M，Japan);超净工作台(CJ-1，苏州长桥净化设备厂)紫外光度计(TU-1221，北京瑞利分析仪器厂)；自动酶标度仪(CliniBio，EC);倒置显微镜(OLYPUS，Japan);96/24孔培养板(Costar，USA)。实验方法(一)、接种方法和实验分组实验随机分成六组，正常对照组；模型组无菌操作取荷肝癌(H22)小鼠腹水，用0.9%生理盐水稀释至含1X107ml，每只右腋皮下接种0.2ral(2X107只)随机分成荷瘤对照组，阳性对照组(H22CP);受试物(H22Rh2)高剂量组、中剂量组、低剂量组，每组io只。(二)、给药方法小鼠接种瘤细胞24小时后开始给药，正常对照组灌胃等体积的生理盐水)。荷瘤对照组(灌胃等体积的生理盐水)、阳性对照组(灌胃CP，20mg/kg，每天一次)、受试物高剂量组(500mg/kg)、中剂量组(250mg/kg)、低剂量组(125mg/kg)，连续给药10天，每R灌胃一次，体积均为20ml/kg，于停药次日清晨断头处死小鼠，13无菌取脾，检测NK细胞活性、IL-2的能力和淋巴细胞转化能力。(三)、脾细胞悬液制备无菌取脾，放置在无血清的PRMI—1640培养液中，将脾剪成lmm3，用注射器芯研磨至单个细胞，过200目尼龙网，1000转离心10min，按文献制备成细胞悬液，备实验用。(四)、NK细胞毒活性一胞浆乳酸脱氢酶(LDH)释放法各实验组脾细胞为效应细胞O.lml(2Xl(f细胞/管)，加靶细胞(YAC-1)悬液0.ltnl(2.0X105细胞/管)，加小牛血清O.lml，补加培养液至lml，每组设5个平行。自然释放管加YAC-1细胞悬液0.lml，小牛血清0.lml，补加培养液0.8ml。最大释放管每管加YAC-1细胞悬液0.lml，小牛血清0.lml，补加l%Triton-X1000.8ml。上述各试验组置37。C，5%C02的培养箱中，饱和湿度培养18h，1000转/分，离心5min，取全部上清液。加LDH反应液3ml，用分光光度计以340nm，32'C恒温测定吸光度值。(五)、脾淋巴细胞转化反应一MTT比色法按上述方法制备成细胞悬液，调整细胞浓度为1X107L。将此细胞悬液每样品分成品1份至24孔培养板中，每孔加lml，一份ConA10mg/L，另一份作为对照。置C02培养箱68h后，换成不完全培养液，并将细胞移至96孔板，每孔100yl。再加10ylMTT(5g/L溶液)。继续培养4h。后加入100y1酸性异丙醇(O.04mol/L—异丙醇)，自动酶标光度计上570nm处读OD.值。结果以转化指数表示。(六)、IL一2的制备和活性检测IL一2的诱生无菌制脾细胞悬液方法同前，用P脂I一1640培养液洗涤2次，配成lX10Vml细胞悬液，每孔100ul加入96孔培养板中，使每孔细胞为5X106个。离心收集上清液，置一2(TC冰箱保存备用。制备活化的脾细胞悬液无菌制脾细胞悬液方法同前，制成5X106个/ml细胞悬液，加入ConA使其浓度5ul/ml，置37'C，5%0)2饱和湿度培养48h，收集细胞，离心两次，重悬于PRMI—1640培养液中，作为IL一2活性检测细胞。IL一2活性检测取一2(TC保存的IL—2上清液和检测小鼠脾细胞，在96孔培养板中，每孔加入IL一2上清液和反应细胞各100ul，阴性对照组加100y1PRMI—1640培养液，各设4个平行样。置37。C，5XC02饱和湿度培养48h，每孔加入MTT(5mg/ml)10ul，继续培养4h，弃上清，加入酸化异丙醇100w1，充分振荡后静置20min，全自动酶标仪MTT法比色分析法测定IL一2活性(0D值)。表3、受试物对荷瘤H22小鼠NK细胞活性的^"向(5T士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>受试物高、中剂量组与荷瘤H22组比较tP0.05,**P<0.01。表5、受试物对荷瘤H22小鼠脾细胞IL--2活性的影响(X—±S)分组齐懂(mg/kg)动物数IL-2活性(OD值)对照组—100.134土0.021一100.075±0.029AH22+CP20100.060±0.017aH22+本品500100.123±0.032*H22+本品250100.089±0.019H22+本品125100.070±0.022受试物高剂量与荷瘤H22组比较*<0.05，H22和H22+CP与正常对照组比较^<0.05。NK细胞是细胞免疫中非特异部分，很多研究发现荷瘤H22机体NK细胞活性明显降低，本实验也得到同样的结果。即荷肝癌(H22)模型组小鼠的NK细胞活性处于严重低下状态，而受试物高、中剂量组与荷瘤组比较NK细胞活性有明显增强，高剂量组同时促进脾细胞淋转。IL一2主要是由活化的辅助性T淋巴细胞产生的细胞因子，IL一2具有自身正向免疫调节作用，但在大多数荷瘤机体，IL一2系统处于明显的抑制或紊乱。实验结果表明，荷瘤小鼠的IL一2活性低于正常组，而受试物高剂量组IL一2活性显著高于荷瘤组。受试物通过调节和增强机体免疫功能，发挥其抗肿瘤作用。本发明药物的抗炎作用实验试验材料动物Wistar雄性大鼠，购自长春高新医学动物实验研究中心，合格10-5112，体重220-260g。昆明种小鼠19-21g，雌雄均用，购自吉林大学基础医学院动物实验中心，许可证号SCXK-(吉)2003-0001。药物药名、来源、批号、配制方法。试验方法与结果1.对大鼠角叉菜胶性足肿胀取大鼠50只，随机分为五组对照组，0.2g/kg阳性药阿司匹林组，0.35、0.175、0.875g/kg受试药三个给药组，共五组。连续给药5天，于末次给药l小时后于大鼠右后足腱膜下注入0.05。/。角叉菜胶0.15ml/只，然后于注射后l、2、3、4、5、6小时测其足肿胀(先于注射前测正常大鼠足周长)，以于正常足值之差作为肿胀度。结果见表1。表l.对大鼠角叉菜喷性组肿胀的影响组别剂量足肿胀程度g/kglh2h3h4h5h6h对照组7.7±1.316.7±1.820.5±2.620.5±2.319.9±1.917.8±1.0阳性药3.26.6±1.514.8±2.0*17.8±2.2*18.6±2.517.2±2.217.6±1.8受试药0.355.8±1.4**13.4±2.4**17.5±1.8**17.8±2.1*17.8±2.2*16.3±1.6*受试药0.1756.2±1.0**13.9±2.4**18.1±1.7*.18.4±1.6*18.2±1.6*17.3±1.9受试药0.8756.4±1.4*14.3±2.9*18.9±2.520.0±0.519.3±1.717.6±2.1与对照组比较tp〈0.05。2.对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响取雄性小鼠50只，随机分为对照，阿司匹林0.2g/kg，0.35、0.175、0.875g/kg受试药三个给药组，共五组，每组10只，每天给药1次，连续5日，于末次给药lh后，与小鼠右耳涂二甲苯20W，20min后处死小鼠，利用9mm铁冲下动物左右耳，以动物左右耳差作为肿胀度，进行"t"检验，结果见表2。_表2.对小鼠二甲i苯耳肿胀的影响_组别剂量(g/kg)肿胀程度(Amm)对照组13.32±3.34阳性药4.69.80±3.04*受试药0.359.59±2.32**受试药0.17510.45±2.56*受试药0.87510.96±5.79*与对照组比较木p〈0.05。从表l、2可见，受试药具有明显的抗炎作用。本发明药物的动物急性毒性实验资料摘要受试物的LDs。为2.4485g/kg，U为2.39522.5018g/kg。实验目的观察受试物一次性给予饥饿小鼠后产生的急性毒性反应和死亡情况。受试药物受试物，长春中医药大学研发中心提供，含量67%。批号070717。动物昆明种小鼠，雌雄各半。购自长春卫生部生物制品研究所，合格证号为SCXK-2002-0001。方法取小鼠60只，按体重及性别随机分为6组，每组10只，雌雄各半。各组分别按附表所示剂量灌胃给药1次，给药容积为0.2ml/10g。观察给药14日内小鼠急性毒性反应情况及死亡分布，给与受试物组24h左右后动物出现死亡，并根据各剂量组死亡情况，依Bliss计算半数致死量(LD5。)及其95%可信限(Us)。结果-灌胃给药后小鼠不动或少动、深呼吸、强直性抽搐而死亡，死亡时间多数在给药24h后，偶有48h后死亡的，肉眼尸检未发现主要脏器有异常改变。表l.受试物小鼠LDs。的测定剂量(g/kg)对数剂量(x)动物数(只)死亡动物数(只)死亡率(％)4.0000.602110101003.2000.5051108802.5600.4082105502.0480.3113103301.6380.2144101101.310720.11751000LD50=2.4485g/kgU=2.39522.5018g/kg,实施例la.取小飞蓬干燥全草，加入4倍量的40%乙醇回流提取2次，每次分别1小时和3小时；b.合并提取液，浓縮至干，将所得干品加水溶解，过滤，滤液加于己处理好的大孔树脂D101柱上，经过大孔吸附树脂DIOI柱洗脱，先用水洗脱，至洗脱液无色，再用10%乙醇洗脱，再将该10%乙醇洗脱液浓縮干燥，得小飞蓬总黄酮提取物。18实施例2a.取小飞蓬干燥全草，加入6倍量的70%乙醇回流提取3次，每次分别l小时、2小时和3小时；b.合并提取液，浓縮至干，将所得干品加水溶解，过滤，滤液加于巳处理好的大孔树脂DM301柱上，经过大孔吸附树脂DM301柱洗脱，先用水洗脱，至洗脱液无色，再用70%乙醇洗脱，再将该70%乙醇洗脱浓縮干燥，得小飞蓬总黄酮提取物。实施例3a.取小飞蓬干燥全草，加入8倍量的90%乙醇回流提取4次，每次分别1小时、2小时、2小时和3小时；b.合并提取液，浓縮至干，将所得干品加水溶解，过滤，滤液，加于已处理好的大孔树脂AB8柱上，经过大孔吸附树脂AB8柱洗脱，先用水洗脱，至洗脱液无色，再用90%乙醇洗脱，再将该90%乙醇洗脱浓縮干燥，得小飞蓬总黄酮提取物。实施例4a.取小飞蓬干燥全草，加入5倍量的50%甲醇回流提取2次，每次分别1小时和3小时；b.合并提取液，浓縮至干，干品加甲醇溶解后用大孔树脂HPD600拌样，加于己处理好的大孔树脂HPD600柱上，经过大孔吸附树脂HPD600柱洗脱，先用水洗脱，至洗脱液无色，再用50%乙醇洗脱，再将该50%乙醇洗脱浓縮干燥，得小飞蓬总黄酮提取物。实施例5a.取小飞蓬干燥全草，加入6倍量的30%甲醇回流提取3次，每次分别l小时、2小时和3小时；b.合并提取液，浓縮至干，干品加乙醇溶解后用大孔树脂HPD100拌样，加于已处理好的大孔树脂HPD100柱上，经过大孔吸附树脂HPD100柱洗脱，先用水洗脱，至洗脱液无色，再用30%乙醇洗脱，再将该30%乙醇洗脱浓缩干燥，得小飞蓬总黄酮提取物。实施例6a.取小飞蓬干燥全草，加入7倍量的60%甲醇回流提取4次，每次分别1小时、2小时、2小时和3小时；b.合并提取液，浓縮至干，干品加乙醇溶解后用适量大孔树脂DM130拌样，加于已处理好的大孔树脂DM130柱上，经过大孔吸附树脂DMBO柱洗脱，先用水洗脱，至洗脱液无色，再用60%乙醇洗脱，再将该60%乙醇洗脱浓縮干燥，得小飞蓬总黄酮提取物。本发明提取物还可能通过下述方法获得(1).加热回流提取法取小飞蓬干燥全草(粉碎24cm)4份，每份各50g，分别加入有机溶剂乙酸乙酯、丙酮，250350ml，溶剂量为药材量的57倍，加热回流提取24次，每次l3小时；合并提取液，6080'C回收溶剂，608(TC减压干燥得干品。(2).超声法提取法取小飞蓬干燥全草(粗粉)4份，每份各50g，分别加入4090%有机溶剂乙醇、甲醇，或乙酸乙酯、丙酮250350ml，溶剂量为药材量的57倍，超声3060KHz提取24次，每次0.51小时。合并提取液，608CTC回收溶剂，608(TC减压干燥得干品。(3).超临界提取法取小飞蓬干燥全草(粗粉)50g，投入萃取釜中，设置分离釜I温度4(TC、分离釜I压力7.0MPa、分离釜II压力6MPa，温度35'C，在萃取压力2050Mpa，萃取温度3050。C，萃取时间13小时，CO2流量2030L七，萃取级数12，乙醇夹带剂浓度2570%条件提取总黄酮。萃取达到预定时间后，收集提取物，除去水分。(4).浸渍提取法取小飞蓬干燥全草(2060目)4份，每份各50g，分别加入40100°/。有机溶剂:乙醇、甲醇、乙酸乙酯或丙酮等250350ml，溶剂量为药材量的57倍，浸泡提取24次，每次1248小时。合并提取液，608(TC回收溶剂，608(TC减压干燥得干品。(5).渗漉提取法取小飞蓬千燥全草(40100目)4份，每份各50g，分别加入40100%有机溶剂乙醇、甲醇、乙酸乙酯或丙酮50100ml，溶剂量为药材量的12倍，浸泡24小时，装入渗漉器中，缓缓从渗漉器顶部加上述有机溶剂250350ml(溶剂量为药材量的57倍)，放置2448小时后打开下口开关，使渗漉液缓缓流出。6080°C回收溶剂，6080'C减压干燥得干品。(6).微波提取法取小飞蓬干燥全草(40100目)4份，每份各50g，分别加入40100%有机溶剂乙醇、甲醇、乙酸乙酯、丙酮40005000ml，使用微波提取器提取，微波功率190250W，提取24次，每次525min。合并提取液，过滤，6080。C回收溶剂，608(TC减压干燥得干品。本发明实施例中所用大孔树脂的性能指标表:<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>权利要求1、一种小飞蓬总黄酮提取物，其特征在于是由下述方法得到的a.取小飞蓬干燥全草，加入4～8倍量的40％～95％乙醇或甲醇回流提取2～4次，每次1～3小时；b.合并提取液，浓缩至干，将所得干品加水溶解、过滤，将滤液加于已处理好的大孔树脂柱上；或干品加甲醇或乙醇溶解后用大孔树脂拌样，加于已处理好的大孔树脂柱上，经过大孔吸附树脂柱洗脱，先用水洗脱，至洗脱液无色，再用4～7个柱装体积的10％～90％乙醇洗脱，回收洗脱液、浓缩至干，得小飞蓬总黄酮提取物。2、如权利要求1所述的小飞蓬总黄酮提取物的制备方法，其特征在于包括下列步骤a.取小飞蓬干燥全草，加入48倍量的40%95%乙醇或甲醇回流提取2~4次，每次1~3小时；b.合并提取液，浓縮至干，将所得干品加水溶解、过滤，将滤液加于己处理好的大孔树脂柱上；或干品加甲醇或乙醇溶解后用大孔树脂拌样，加于已处理好的大孔树脂柱上，经过大孔吸附树脂柱洗脱，先用水洗脱，至洗脱液无色，再用47个柱装体积的10%90%乙醇洗脱，回收洗脱液、浓缩至干，得小飞蓬总黄酮提取物。3、如权利要求2所述的小飞蓬总黄酮提取物的制备方法，其特征在于步骤b中大孔吸附树脂柱采用DM301、DlOl、AB8、DM130、HPDIOO、HPD600或DA201。4、如权利要求1所述的小飞蓬总黄酮提取物在制备抗肿瘤药物及抗肿瘤辅助药中的应用。全文摘要本发明涉及一种小飞蓬总黄酮提取物及其制备方法和药物用途，属于中药领域。a.取小飞蓬干燥全草，加入4～8倍量的40％～95％乙醇或甲醇回流提取2～4次，每次1～3小时；b.合并提取液，浓缩至干，将所得干品加水溶解、过滤，将滤液加于已处理好的大孔树脂柱上；或干品加甲醇或乙醇溶解后用大孔树脂拌样，加于已处理好的大孔树脂柱上，经过大孔吸附树脂柱洗脱，先用水洗脱，至洗脱液无色，再用4～7个柱装体积的10％～90％乙醇洗脱，回收洗脱液、浓缩至干，得小飞蓬总黄酮提取物。该发明的有益效果填补了制备小飞蓬总黄酮提取物的空白并扩展了其在制备抗肿瘤药物及抗肿瘤辅助药领域的应用范围。文档编号A61K36/28GK101474230SQ20091006648公开日2009年7月8日申请日期2009年1月23日优先权日2009年1月23日发明者严铭铭,何晓红,威刘,毕胜男,赵大庆,帅邵申请人:长春中医药大学