专利名称：3’,5’-环胞苷二月桂酸酯脂质体及其制备方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域。确切地说它是一种3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯脂质体 及其制备方法。
背景技术：
环胞苷是临床上常用的抗白血病药物，但是，环胞苷易被肝脏中的胞嘧啶脱氨酶 脱氨降解而失去抗癌活性。为了维持有效的血药浓度，必须对患者连续多次地给药，造成骨 髓抑制和病人消瘦。为提高环胞苷的疗效，克服其在体内易脱氨降解的缺点，发明人对环胞 苷的分子结构进行了改造，在其戊糖环上连接了两条月桂酸脂肪链，合成了 3’，5’ -环胞苷 二月桂酸酯，其分子结构见说明书附图1。实验证明，3 ’，5 ’ _环胞苷二月桂酸酯的抗癌活性高于其母体药物环胞苷。由于在 环胞苷的戊糖环的3’，5’位上连接了两条月桂酸脂肪链，所以3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯 分子的水溶性差，造成了给药难和吸收难的问题。发明人利用脂质体作为药物载体，自主 研制了 3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯脂质体，并对其显微形态、包封率、粒度分布及药效学进 行了研究。结果表明，脂质体颗粒呈球型，粒度分布均勻，包封率高，抗癌活性比游离的3’， 5’ -环胞苷二月桂酸酯提高了 1.68倍。
发明内容
本发明的目的是提供3’，5’-环胞苷二月桂酸酯脂质体及其制备方法，以改善3’， 5’ _环胞苷二月桂酸酯给药难和吸收难的缺陷，同时提高药物的疗效。由于脂质体本身对 人体无毒，无免疫原性，适合于生物体内降解，在血液中稳定。通过脂质体的包裹技术，可以 保护被包裹的3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯在血液中不被稀释和降解，提高药物的生物利用 度，实施高效安全的程序精确释药模式。本发明是由3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯与作为辅料的天然卵磷脂、胆固醇、稳定剂 制备而成的脂质体。制备方法采用反相蒸发法。制备脂质体所采用的磷脂均是天然卵磷脂 (蛋黄卵磷脂、大豆卵磷脂、猪脑卵磷脂)。其组成包括3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯、天然卵 磷脂、胆固醇及稳定剂。其中卵磷脂与胆固醇的摩尔比为1 1，膜材与3’，5’ -环胞苷二 月桂酸酯的摩尔比为2 1，稳定剂二硬脂酰基磷脂酰胆碱与磷脂的比例为0.5 1。本发明的优点是合成了 3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯，并发展了 3’，5’ -环胞苷二 月桂酸酯脂质体释药系统，改善了 3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯因水溶性差导致的给药难和 吸收难的缺陷，同时提高了药物的疗效。本发明制备的脂质体具有颗粒呈球型，粒度分布均 勻，包封率高的特点。
本发明说明书附图共4幅，图1为3’，5’-环胞苷二月桂酸酯的分子结构。图2为 3 ’，5 ’ -环胞苷二月桂酸酯脂质体的透射电镜照片。图3为3 ’，5 ’ -环胞苷二月桂酸酯脂质体分别在室温及37°C条件下经72小时温育后的粒度分布图。图4为空白脂质体分别在室 温及37 °C条件下经72小时温育后的粒度分布图。
具体实施例方式本发明的具体制备方法，由以下实施实例举例说明。但本发明的的保护范围不局 限于此。实施例(一)制备采用反相蒸发法制备3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯脂质体。天然卵磷脂经氧化铝柱 层析分离得纯品，将卵磷脂胆固醇二硬脂酰基磷脂酰胆碱按1 ι 0.5的摩尔比置 于鸡心瓶中，加入适量的氯仿使其溶解。准确称取所需量的3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯， 加入同一鸡心瓶中使其溶解，45°C氮气气氛中减压旋转蒸发除去氯仿，在鸡心瓶内壁上形 成干膜，将乙醚及PH值为7. 15的磷酸缓冲溶液按3 1的体积比加入(先加入乙醚使脂 膜溶解，然后再加入磷酸盐缓冲溶液)，经超声波清洗仪20min的超声分散后，将得到的混 合物在旋转蒸发仪上旋转蒸发成胶状除去乙醚，再加入所需量的磷酸缓冲溶液震荡5min， 在25-30°C的条件下继续在旋转蒸发仪上旋转蒸发IOmin彻底除去有机溶剂，即制得乳白 色的3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯脂质体悬浮液。最后充氮气至乙醚味消失。未包封的3’， 5’ -环胞苷二月桂酸酯通过S印hadex G-75 (葡聚糖凝胶G-75)柱(30cmX 1. 5cm)以磷酸 缓冲溶液为洗脱液洗脱除去。(二)显微形态鉴定3’，5’-环胞苷二月桂酸酯脂质体样品用磷钨酸溶液ω (P20524 (WO3) 44 (H2O) = 1% 染色，用JEM-1200EX透射电镜拍照。附图1显示，脂质体颗粒呈球型。(三)包封率的测定用RP-HPLC测定3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯标准系列的色谱图，通过峰面积与 浓度线性回归得标准曲线。用S印hadex G-75柱层析、以PH值7. 15的磷酸缓冲溶液为 洗脱液、洗脱除去未包封药物。包封药物的量通过标准曲线求得。含量测定的重现性为 100. 26%，SD士0. 76，CV = 0. 88%，η = 4。测得3，，5，-环胞苷二月桂酸酯脂质体的包封 率为(86. 8 士 2. 4) %。(四)粒径测定用库尔特TA-II型计数器测定3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯脂质体及空白脂质体在 室温及经72小时37°C温育后的粒度分布，并用Carstensen公式计算平均粒径及温育前后 平均粒径的变化。
权利要求
3’，5’ 环胞苷二月桂酸酯脂质体，其特征在于含有环胞苷二月桂酸酯、以及作为辅料的天然卵磷脂、胆固醇及稳定剂。
2.根据权利要求1所述的3’，5’_环胞苷二月桂酸酯脂质体，其特征在于膜材卵磷脂 与胆固醇的摩尔比为1 1。
3.根据权利要求1所述的3’，5’_环胞苷二月桂酸酯脂质体，其特征在于膜材与药物 的摩尔比为2 1。
4.根据权利要求1所述的3’，5’_环胞苷二月桂酸酯脂质体，其特征在于稳定剂为二 硬脂酰基磷脂酰胆碱，与卵磷脂的摩尔比为0.5 1。
5.3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯脂质体的制备方法，包括如下步骤①将蛋黄卵磷脂、胆固醇及二硬脂酰基磷脂酰胆碱按1 1 0.5的摩尔比溶于适量 氯仿中，将3’，5’_环胞苷二月桂酸酯按膜材与药物摩尔比为2 1的量溶入上述氯仿混合 液中，在45°C氮气气氛中减压旋转蒸发除去氯仿，在鸡心瓶内壁上形成脂膜；②用无水乙醚溶解步骤①制得的脂膜，再加入PH值为7.15的磷酸缓冲溶液，乙醚与缓 冲溶液的体积比为3 1，超声分散20min，制得0/W型乳浊液；③将步骤②得到的0/W型乳浊液旋转蒸发成胶状，再加入所需量的PH值7.15的磷酸 缓冲溶液，震荡5min，于25-30°C旋转蒸发lOmin，制得乳白色的3’，5’-环胞苷二月桂酸酯 脂质体；④将步骤③制得的脂质体通过S印hadexG-75柱，以PH值7. 15的磷酸缓冲溶液为洗 脱液洗脱，除去未包封的3’，5’ -环胞苷二月桂酸酯；
6.根据权利要求5所述的3’，5’_环胞苷二月桂酸酯脂质体的制备方法，其特征在于 采用反相蒸发法；运用S印hadex G-75柱层析、以PH值7. 15的磷酸缓冲溶液为洗脱液、洗 脱除去未包封药物，得到本发明的产品。
全文摘要
本发明公开了一种可用于治疗白血病、恶性淋巴瘤及某些实体瘤的新型环胞苷衍生物的脂质体制剂及其制备方法。本发明属于医药技术领域。发明人通过对环胞苷的分子结构进行改造，得到环胞苷的酯化衍生物3’，5’-环胞苷二月桂酸酯，并采用反相蒸发法，由3’，5’-环胞苷二月桂酸酯与作为辅料的天然卵磷脂、胆固醇、稳定剂二硬脂酰基磷脂酰胆碱制成脂质体。本发明制备的脂质体是一种独创的新型环胞苷衍生物缓释靶向制剂，不仅包封率高(86.8±2.4)％，而且具有粒度分布均匀、稳定性高的特点，提高了药物的疗效，克服了3’，5’-环胞苷二月桂酸酯因水溶性差造成的给药难和吸收难的缺点。本发明的制备工艺简单，主要工艺参数易于控制，操作条件较温和，便于工业化生产。
文档编号A61P35/02GK101953786SQ20091025650
公开日2011年1月26日 申请日期2009年12月14日 优先权日2009年12月14日
发明者张丽, 王继波, 石振燕 申请人:青岛大学