专利名称：一种田七提取物及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及植物中的活性提取物，具体涉及一种田七提取物及其应用。
背景技术：
人类巨细胞病毒(Human Cytomeglovirus，HCMV)在人群中具有较高的隐性感染率，文献报道的人血清HCMV-IgG阳性率在40% 90%之间。正常人感染HCMV后一般不产生临床症状，但当处于免疫力被抑制的病理或生理状态时，如艾滋病患者、器官移植患者及妇女妊娠期等，则可能会激活病毒，引起发烧，视网膜炎、胸膜炎、动脉硬化、结肠憩室炎等， 而妇女妊娠早期的HCMV感染则与死胎及新生儿先天性致畸等密切相关。目前被FDA批准用于治疗HCMV感染的药物有更昔洛韦、缬更昔洛韦、西多福韦、膦甲酸钠、福米韦生等，这些药物由于具有极大的毒副作用，被禁止使用于孕妇与婴幼儿，使用这些药物常见的不良反应有骨髓抑制，用药后约40%的患者中性粒细胞数减低至1000/mm3以下，约20%的患者血小板计数减低至50000/mm3以下，此外还有贫血；中枢神经系统症状如精神异常、紧张、震颤等，发生率约5%，偶有昏迷、抽搐等；可出现皮疹、瘙痒、药物热、头痛、头昏、呼吸困难、恶心、呕吐、腹痛、食欲减退、肝功能异常、消化道出血、心律失常、血压升高或降低、血尿、血尿素氮增加、脱发、血糖降低、水肿、周身不适、肌酐增加、嗜酸性细胞增多症、注射局部疼痛、 静脉炎等；有巨细胞病毒感染性视网膜炎的艾滋病患者可出现视网膜剥离。鉴于以上药物的毒副作用和服用后的不良反应，所以开发新型高效无毒抗HCMV药物显得意义重大，特别是在传统的中草药中寻找抗病毒药物成了目前该领域研究的一个热点和亮点。近年来已有采用具有抗病毒活性的中成药用于抗巨细胞病毒研究，如公开号为 CN1302637的中国发明专利，公开了一种以蒲公英、大青叶、金银花和鱼腥草以等重量比列混合，证实此提取物有一定的抗巨细胞病毒效果，临床疗效表明该药治疗围产期人巨细胞病毒活动性感染有效率达78. 05% ；陈素华等(Chen S，Xiong J，Xing W，et al. A study on the traditional Chinese medicine Jinyebaidu for prevention and treatment of intrauterine infection with guinea pigs cytomegalovirus. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2005，25 (6) :721-723.)以豚鼠为模型，与未添加药物的对照组相比，发现中药金叶败毒可以降低妊娠期感染(从100%降为50%)、宫内感染率(从100% 降为75 % )、致畸率(从64. 4%降为25. O % )；还有用单一植物粗提物的初步研究，如 Edziri Hayet 等(Edziri Hayet, Mastouri Maha, Ammar Samia, et al. Anti-microbial, antioxidant, and antiviralactivities of Retama raetam(Forssk. )ffebb flowers growing inTunisia. World J Microbiol Biotechnol. 2008，24 :2933-2940.)在研究豆科(Fabaceae)植物罗腾树(Retama raetam Forss k. Webb)抗菌、抗病毒、抗氧化活性时，发现该植物花朵的甲醇提取物具有中等抗巨细胞病毒活性(IC5Q = 250yg/ml).有些研究已经深入到单组份，而且对抗病毒的机理做了初步阐明，如Hong ^ien等(Zhen H， Fang F, Ye DY, et al. Experimental study on the action of allitridin against human cytomegalovirus in vitro-Inhibitory effects on immediate-early genes. Antiviral Res. 2006,72(1) :68-74.)从大蒜中提取的大蒜新素可以有效抑制IEl与IE2基因的转录，影响病毒的DNA复制，最终实现抑制病毒的复制。中药田七，又称三七、金不换、盘龙七等，作为一种名贵药村，是具有独特功能的人参属中的优异品种。据药物成份分析，田七主要含六种皂苷和谷留醇、胡萝卜甙、黄酮类化合物，皂苷是田七的主要成分，对增强体力，改善心肌氧代谢，提高动物缺氧的耐受力很有作用；谷留醇和胡萝卜甙能降血脂；而黄酮类化合物是扩张冠状动脉、改善心肌供血、增加血管弹性的有效成分，因而常食田七，不仅对冠心病、心绞痛有显著疗效，而且对冠心病、心绞痛有预防功能，同时还具有滋补强壮作用。近年来有研究表明，田七中的三萜类皂苷具有抗肿瘤抗氧化的功效，但迄今为止尚未发现田七提取物具有抗人巨细胞病毒的功效。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种制备方法简单、细胞毒性小的田七提取物及其在制药中的应用。本发明所述的田七提取物，该提取物中总黄酮类物质和总皂苷类物质的质量比为 2 5 1。优选的，提取物中总黄酮类物质和总皂苷类物质的质量比为3 4 1。所述田七提取物中总黄酮类物质和总皂苷类物质可按常规方法制备，具体可采用以下方法制备取田七粉碎，95%的乙醇回流提取，收集滤液，浓缩至浸膏，浸膏用甲醇溶解，经大孔树脂吸附，以30 50%乙醇洗脱，收集洗脱液得洗脱液A，再用55 70%乙醇洗脱，收集洗脱液得洗脱液B ；将洗脱液A浓缩至干，得到总皂苷类物质，将洗脱液B浓缩至干，得到总黄酮类物质。本发明还包括上述田七提取物在制备抗人巨细胞病毒药物中的应用。本发明还包括上述田七提取物在制备治疗孕期人巨细胞病毒感染的药物中的应用。为了更好的理解本发明，下面通过实验来进一步说明本发明所述田七提取物在制药中的应用。一、细胞毒性实验(MTT)根据卫生部颁布的《新药临床前研究指导原则汇编(药学、药理学、毒理学)》关于抗病毒进行实验设计，采用细胞病变法进行体外抗病毒实验。实验步骤(1)在250ml细胞培养瓶中接种人包皮成纤维细胞(HFF)；(2)待细胞铺满后，倒掉上清，用IXGKNP清洗两次，加入配制好的0.05%胰酶，待细胞消化后，加入含10% FBS的培养基终止反应；(3)将细胞吹勻，计数，转入96孔板(104/孔)，其中第1列与第12列，加入不含细胞的培养基，放入(X)2培养箱，于37°C，5% CO2条件下培养；(4)培养Mh，观察细胞，状态良好，按以下表1中的数据加入不同浓度的田七提取物，其中第11列不加药物，作为对照；⑶了浊后，每孔分别加入含肌!^!!^/!^)的培养基20μ 1，孵育4h ；(6)吸干上清，加入DMSO (150 μ 1/孔)，在振荡器上混勻IOmin ；
(7)用酶标仪读板，记录OD57tlnm值。按上述步骤重复以上实验3次，结果如表1所示(以均数士S. D.表示)。表1 本发明所述田七提取物对HFF细胞毒性(三次实验均值)
权利要求
1.一种田七提取物，其特征在于该提取物中总黄酮类物质和总皂苷类物质的质量比为2 5 1。
2.根据权利要求1所述的田七提取物，其特征在于所述总黄酮类物质和总皂苷类物质的质量比为3 4 1。
3.根据权利要求1或2所述的田七提取物，其特征在于所述田七提取物中总黄酮类物质和总皂苷类物质的制备方法为取田七粉碎，95%的乙醇回流提取，收集滤液，浓缩至浸膏，浸膏用甲醇溶解，经大孔树脂吸附，以30 50%乙醇洗脱，收集洗脱液得洗脱液A，再用55 70%乙醇洗脱，收集洗脱液得洗脱液B ；将洗脱液A浓缩至干，得到总皂苷类物质， 将洗脱液B浓缩至干，得到总黄酮类物质。
4.权利要求1 3中任一项所述田七提取物在制备抗人巨细胞病毒药物中的应用。
5.权利要求1 3中任一项所述田七提取物在制备治疗孕期人巨细胞病毒感染的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种田七提取物及其应用。所述的田七提取物中总黄酮类物质和总皂苷类物质的质量比为2～5∶1。实验表明，本发明所述的田七提取物细胞毒性小，能有效抑制人巨细胞病毒引起的病变，其作用与更昔洛韦相当；对于防治孕期巨细胞病毒的感染有很好的效果，可作为新的抗巨细胞病毒药物的活性组分。
文档编号A61P31/22GK102166238SQ201110088429
公开日2011年8月31日 申请日期2011年4月8日 优先权日2011年4月8日
发明者张旋, 沈星灿, 蔡豪斌, 黄英星 申请人:广西师范大学, 桂林英美特生物技术有限公司