专利名称：一种自异体表皮细胞混合悬液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种具有皮肤创面修复作用的自异体表皮细胞混合悬液制备方法。属生物医学工程领域。
背景技术：
创面修复是烧伤治疗的重要组成部分，继各种皮片、皮瓣和微粒皮用于移植手术后，近年来又兴起了表皮细胞培养和体外构建皮肤组织的组织工程技术，并已成为临床医学和医学生物工程领域的研究热点。表皮细胞培养和移植技术可为深度烧伤创面的治疗提供充足的皮肤组织，其中，表皮细胞膜片体外培养和移植技术已成功用于烧伤患者临床救治，但细胞膜片的机械性能差、对操作水平要求高、难以运输和与创面基质粘着性能差，其临床应用范围受到了限制。体外培养表皮细胞以游离方式应用于皮肤创面，是以表皮细胞修复皮肤创面的一种新方法。
发明内容
为了提高表皮细胞在创面修复中的临床应用效果，本发明提供一种自异体表皮细胞混合悬液的制备方法，该方法通过将体外培养的自体表皮细胞和异体表皮细胞与一定浓度的高分子水溶液混合，使细胞以悬浮状态存在。此细胞悬液移植到烧伤创面，能够使创面再上皮化，从而修复创面。本发明的技术方案是取患者自体刃厚皮，通过酶反应获取游离表皮细胞；实验室进行培养，至一定量时与已储存的异体表皮细胞混合进行第二阶段培养。将培养的自异体表皮细胞进行酶反应后得到游离自异体表皮细胞，将其加入高分子水溶液制备成为自异体表皮细胞悬液。具体来说，取患者自体皮肤，经清洗、消毒，剪裁成为0. 3X0. 3cm的方形小皮片，经Dispase酶中消化，分离表真皮。将分离的表皮至于胰蛋白酶溶液中消化后，力口入少量小牛血清终止消化，过滤，离心，重悬细胞。将上述细胞与同浓度的异体表皮细胞混合，体外培养。细胞增殖后，消化、离心得到游离自异体表皮细胞。以纤维蛋白胶重悬和稀释表皮细胞，得到自异体表皮细胞混合悬液。
具体实施例方式下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。实施例一取患者皮肤，面积为2X 3cm，以生理盐水充分清洗后，置洗必泰中消毒，剪裁成为 0.3X0. 3cm的方形小皮片，经0. 2%的Dispase酶在4°C消化16h，剥离表皮组织。将表皮块至于0. 25%胰蛋白酶中，在37°C下消化10-20min，加入少量小牛血清终止消化，过滤，离心，以DMEM重悬细胞，细胞浓度为2X106/ml。将上述细胞与同浓度的异体表皮细胞混合， 至DMEM培养液中，在37°C、5% CO2培养箱中培养，每2天换液1次。细胞增殖成团簇，细胞活力大于90%时，消化、离心得到游离自异体表皮细胞。以纤维蛋白胶重悬和稀释表皮细胞，得到终浓度为lX107ml的自异体表皮细胞混合悬液。
权利要求
1.一种自异体表皮细胞混合悬液，其特征在于外观为透明且成胶状，是以体外培养自异体表皮和经高分子溶液重悬的方法所得到。
2.如权利要求1所述的自异体表皮细胞混合悬液，其特征在于表皮细胞包括从皮肤组织分离培养得到的自体表皮细胞，和低温储藏的异体表皮细胞。
3.如权利要求1所述的自异体表皮细胞混合悬液，其特征在于自体皮肤经分散酶和胰蛋白酶消化得到自体游离表皮细胞。
4.如权利要求1所述的自异体表皮细胞混合悬液，其特征在于自体皮肤经分散酶消化10-20小时，经胰蛋白酶消化10-50分钟。
5.如权利要求1所述的自异体表皮细胞混合悬液，其特征在于以浓度为1-20%的纤维蛋白水溶液胶体重悬自异体表皮细胞，自异体表皮细胞混合悬液的浓度为1-10X107 ml ο
全文摘要
本发明专利涉及生物医学工程领域，具体涉及一种自异体表皮细胞混合悬液的制备方法。该自异体表皮细胞混合悬液是由自体表皮细胞培养、自异体表皮细胞培养和自异体表皮细胞经消化、重悬得到的。避免大面积自体植皮手术对皮肤的损伤，自体表皮细胞膜片操作复杂、机械性能差等缺点，有利于将表皮细胞应用于烧伤创面的治疗，提高创面的愈合效率和效果，减少病人的手术次数和医疗支出。
文档编号A61L27/60GK102488930SQ20111041933
公开日2012年6月13日 申请日期2011年12月15日 优先权日2011年12月15日
发明者吕国忠, 朱宇刚, 蔡良良, 赵朋, 黄继人 申请人:无锡市第三人民医院