促红细胞生成素及其衍生物在制备治疗疾病中促进凋亡细胞清除的药物中的应用
【技术领域】
[0001]本发明属于生物医药领域，涉及一种促红细胞生成素及其衍生物在制备治疗疾病中促进凋亡细胞清除的药物中的应用。
【背景技术】
[0002]为维持机体正常新陈代谢和功能，据估计健康机体内每天有数以亿计细胞凋亡，如:中性粒细胞和红细胞的衰老凋亡、胸腺T细胞发育过程中不成熟细胞通过凋亡去除、男性精子发育过程中错误分化细胞通过凋亡去除等；并且在机体炎症/损伤时也伴随大量细胞的凋亡，如:组织细胞在外力作用下的凋亡、急性炎症反应过程中中性粒细胞由于自身寿命很短容易发生凋亡、免疫应答中T和B淋巴细胞所发生的激活诱导的凋亡等。
[0003]细胞凋亡是一种“安全”的死亡方式，凋亡细胞细胞膜保持完整，细胞内容物不外漏，不对机体造成损伤。但凋亡细胞细胞膜完整性维持需消耗能量；而凋亡细胞由于线粒体功能缺失，仅靠残余ATP供能，未及时清除凋亡细胞易发生二次坏死(secondarynecrosis)，细胞膜完整性破坏，释放细胞内容物。凋亡细胞内容物中的HMGB1、尿酸(在胞外环境中会形成结晶)等作为“内源性危险信号”可通过Toll样受体等，激活巨噬细胞，诱导TNF-α、IL-1 β、IL-12等炎症因子、上调共刺激分子、趋化炎症细胞浸润，导致局部炎症环境；而释放的蛋白水解酶等可直接导致周围组织损伤。因此，未及时清除的凋亡细胞可扩大局部炎症反应，加重局部炎症损伤，导致急性炎症慢性化。同时凋亡细胞内容物中的双链DNA、组蛋白等多种自身抗原也被释放，可被抗原提呈细胞提呈，在炎症环境中，激活自身抗原特异淋巴细胞，打破免疫耐受，诱导系统性红斑狼疮(SLE)等系统性自身免疫病。
[0004]机体对凋亡细胞的吞噬清除主要通过巨噬细胞。巨噬细胞对凋亡细胞的及时吞噬清除，不仅可以防止凋亡细胞的“二次坏死”，同时可抑制巨噬细胞分泌TNF-a等炎症因子，促进其分泌IL-lO、TGF-0、PGE2 (Prostaglandin E2)等炎症抑制因和VEGF等组织修复分子。因此，巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬，清除了局部的凋亡细胞、促使局部的炎症/损伤环境向炎症抑制转化，并促进组织修复，使炎症/损伤部位重新恢复稳态(homeostasis)，是促使炎症/损伤康复的中心环节。
[0005]无论是巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬清除障碍，还是细胞凋亡过多，均可导致凋亡细胞聚集，发生二次坏死，从而导致持续性的慢性炎症，与多种严重危害人类健康的难治性、慢性疾病密切相关，如:动脉粥样硬化、慢性阻塞性肺气肿、系统性红斑狼疮、神经退行性变、变态反应性疾病等。虽然炎症通常不是这些疾病的诱导因素，但持续的低炎症状态，促使/加剧组织损伤是这些疾病的共同致病通路之一。如在动脉粥样硬化损伤区可观察到巨噬细胞吞噬功能不足导致的凋亡细胞聚集，而凋亡细胞二次坏死可加剧炎症损伤，与损伤进展和动脉血栓形成密切相关。
[0006]促红细胞生成素(ΕΡ0)是机体最重要的促造血因子，通过激活表达于红系细胞上的ΕΡ0受体(EP0R)，促进红系祖细胞分裂分化为成熟红细胞，在临床上广泛用于治疗多种原因导致的贫血。EPOR与EPO作用高度保守，不与除EPO外其它细胞因子作用。由于EPO的重要医药价值，EPO以能人工生成，并且进行了多种人工修饰，如PEG化EPO、高糖基化EPO、去唾液酸化EPO、氨甲酰化EPO、以及EPO来源的一些短肽片段，均保留了激活EPOR的功能。
[0007]目前通过促红细胞生成素激活巨噬细胞上的促红细胞生成素受体，促进巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬清除还尚未有研究和专利公布。
【发明内容】
[0008]有鉴于此，本发明的目的在于提供一种促红细胞生成素及其衍生物的新用途，即促红细胞生成素及其衍生物在制备治疗疾病中促进凋亡细胞清除的药物中的应用，为治疗多种疾病中凋亡细胞的聚集提供了新的治疗思路，还提供了一种用于治疗疾病中促进凋亡细胞清除的药物和以促红细胞生成素受体为靶点开发的药物在凋亡细胞吞噬清除调控及在治疗炎症性和自身免疫性疾病中的新思路。所述药物在通过在治疗炎症性和自身免疫性疾病中的应用中证实了促红细胞生成素及其衍生物激活了巨噬细胞促红细胞生成素受体，可在多种疾病中促进巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬清除，促进疾病的康复，具有重要的临床应用价值。
[0009]为实现上述目的，本发明的技术方案如下:
[0010]本发明提供了一种促红细胞生成素及其衍生物在制备治疗疾病中促进凋亡细胞清除的药物中的应用。
[0011]促红细胞生成素(ΕΡ0)是机体最重要的促造血因子，通过激活表达于红系细胞上的ΕΡ0受体(EP0R)，促进红系祖细胞分裂分化为成熟红细胞，在临床上广泛用于治疗多种原因导致的贫血。EP0R与ΕΡ0作用高度保守，不与除ΕΡ0外其它细胞因子作用。由于ΕΡ0的重要医药价值，ΕΡ0以能人工生成，并且进行了多种人工修饰，如PEG化ΕΡ0、高糖基化ΕΡ0、去唾液酸化ΕΡ0、氨甲酰化ΕΡ0、以及ΕΡ0来源的一些短肽片段，均保留了激活EP0R的功能。
[0012]所述促红细胞生成素及其衍生物包括涵盖具有促红细胞生成素活性的由组织、蛋白质合成、天然或重组细胞的细胞培养获得的天然或重组蛋白的任何蛋白质，还包括突变型蛋白质、经修饰的蛋白质和促红细胞生成素来源的保留其活性的小分子肽。如氨甲酰化ΕΡ0和ΕΡ0来源小分子肽，所述促红细胞生成素及其衍生物均具有激活EP0R的活性。
[0013]作为一种优选，所述促红细胞生成素及其衍生物包括重组人促红细胞生成素，氨甲酰化促红细胞生成素和促红细胞生成素来源小分子肽。
[0014]作为一种优选，本发明使用重组人促红细胞生成素。
[0015]进一步，所述促红细胞生成素及其衍生物在制备治疗急慢性炎症所致的疾病中促进凋亡细胞清除的药物中的应用；或所述促红细胞生成素及其衍生物在制备治疗自身免疫性疾病中促进凋亡细胞清除的药物中的应用；或所述促红细胞生成素及其衍生物在制备治疗动脉粥样硬化疾病中促进凋亡细胞清除的药物中的应用；或所述促红细胞生成素及其衍生物在制备治疗创伤愈合中促进凋亡细胞清除的药物中的应用。
[0016]炎症通常可依病程经过分为两大类:急性炎症(acute inflammat1n)和慢性炎症(chronic inflammat1n)。急性炎症起病急骤，持续时间短，仅几天，以渗出病变为其特征，炎症细胞浸润以粒细胞为主。慢性炎症持续时间较长，常数月到数年，常以增生病变为主，其炎症细胞浸润则以巨噬细胞和淋巴细胞为主。
[0017]自身免疫性疾病是免疫系统对自身机体的成份发生免疫反应，造成损害而引发疾病。许多疾病相继被列为自身免疫性疾病，本来，正常情况下免疫系统只对侵入机体的外来物，如细菌、病毒、寄生虫以及移植物等产生反应，消灭或排斥这些异物。在某些因素影响下，机体的组织成份或免疫系统本身出现了某些异常，致使免疫系统误将自身成份当成外来物来攻击。这时候免疫系统会产生针对机体自身一些成份的抗体及活性淋巴细胞，损害破坏自身组织脏器，导致疾病。自身免疫性疾病主要是由过度免疫反应所产生的大量免疫细胞和免疫球蛋白堆积所致，从而损害了正常组织，使之发生病变和功能损害。
[0018]动脉粥样硬化(atherosclerosis)是一种慢性的、渐进性动脉疾病，不同病因导致血管内皮细胞受损均可逐渐导致血管皮下脂肪堆积，从而诱导慢性、渐进性炎症。患者动脉中沉积的脂肪部分可全或部分堵住了血流，导致血供减少，是多种脑血管性疾病的主要病因。动脉粥样硬化斑块区通常有多种炎症细胞的浸润，其中巨噬细胞对斑块区凋亡细胞吞噬清除起着重要作用；由于巨噬细胞功能障碍导致的凋亡细胞聚集。及二次坏死，可诱导炎症因子风暴，导致动脉斑块脱落，照成血管栓塞，是动脉粥样硬化致死的主要病因。
[0019]创伤愈合中常见的是皮肤创伤愈合，皮肤伤口愈合是一个由炎症细胞，角质上皮细胞，成纤维细胞，血管内皮细胞，细胞外基质，细胞因子以及生长因子等多种细胞和多种介质共同参与的复杂过程。巨噬细胞对凋亡中性粒细胞的吞噬清除，在皮肤伤口愈合过程中起着重要作用。在肥胖或糖尿病患者中，由于巨噬细胞功能受损，导致伤口凋亡细胞聚集，发生二次坏死，诱导慢性炎症，出现慢性、不愈合性伤口，是肥胖或糖尿病患者的重要并发症。本发明的新应用可其促进凋亡的细胞在伤口聚集，及增强巨噬细胞对凋亡细胞的吞噬促进皮肤伤口愈合的治疗作用。
[0020]本发明所述疾病并不仅限于上述几种，只要是能在疾病中起到促进凋亡细胞清除的作用的，所指疾病均落在在本发明保护范围内。
[0021]进一步，所述促红细胞生成素及其衍生物在制备治疗急性和慢性腹膜炎中促进凋亡细胞清除的药物中的应用。
[0022]进一步，所述促红细胞生成素及其衍生物在制备治疗系统性红斑狼疮中促进凋亡细胞清除的药物中的应用。系统性红斑狼疮是自身免疫介导的、以免疫性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织病，系统性红斑狼疮的发生与凋亡紊乱密切相关。细胞凋亡增加和(或)凋亡细胞清除障碍都会导致凋亡细胞积聚。而凋亡过程中自身抗原的暴露和被修饰则导致了自身抗原免疫原性增加，从而在凋亡细胞积聚时会导致具有免疫原性的自身抗原暴露于免疫系统，引起自身免疫反应的发生。本发明