专利名称：油棕酚类物质在预防动脉粥样硬化和心血管疾病中的抗肥胖和抗血脂异常作用的制作方法
技术领域：
本发明提供了延缓动物增重或肥胖、以及预防由致动脉粥样硬化饮食引起动物的血脂异常效应的方法。该方法包括向所述动物供应饮用水中的油棕酚类物质的步骤。油棕酚类物质的前述性能归因于当给予所述动物低脂肪的正常饮食时，在肝脏内上调脂肪酸β氧化和下调胆固醇生物合成。另外，当给予所述动物高脂肪的、含胆固醇的致动脉粥样化饮食时，油棕酚类物质还上调肝脏内的未折叠蛋白反应，下调脾脏内的抗原提呈(antigenpresentation)和抗原加工，以及上调心脏内的抗氧化基因。因此，对预防动脉粥样硬化和心血管疾病而言，油棕酚类物质可给予抗炎作用和抗氧化作用。
背景技术：
心血管疾病和动脉粥样硬化是世界上死亡的首要原因。已知各种风险因素与动脉 粥样硬化和心血管疾病的发病机通有关。这些因素包含闻胆固醇、闻脂血症、闻血糖、闻血压、肥胖、升高水平的血浆同型半胱氨酸和止血因子、家族史、性別、压力、吸烟、缺乏锻炼、高脂肪饮食、传染性试剂和衰老。随着时间的过去，有糖尿病的动脉粥样硬化患者通常比非糖尿病患者衰弱得更加严重。动脉粥样硬化是影响动脉血管的疾病，其涉及动脉的硬化(钙化)和在动脉内形成粥样斑块。正如其他慢性疾病一祥，动脉粥样硬化被认为是由体内有害自由基和活性氧的累积造成。它与系统免疫反应和炎症有夫。动脉粥样硬化引起两个主要问题梗塞(完全冠状动脉闭塞)和动脉瘤(部分冠状动脉闭塞)；实际上可将其看作是伤ロ愈合和慢性炎症的问题。动脉粥样硬化可能引起脑中风、心脏病和下肢的外周动脉闭塞性疾病。动脉粥样硬化的病理生理学包括各个重要阶段，其包含内皮的焦点粘附性(focaladhesiveness)、渗透性和促凝性(内皮功能紊乱)增强，粘附分子表达，单核细胞粘附和迁移，形成泡沫细胞和脂纹，平滑肌细胞(smooth muscle cell，SMC)从中膜迁移到血管内膜，形成斑块，以及最终斑块破裂和形成血栓。因此，动脉粥样硬化的普遍主题是由于LDL氧化而存在氧化应激和炎症。低密度脂蛋白(low-density lipoprotein,LDL)的氧化已被认可是动脉粥样硬化发展中重要的起始事件。活性氧可刺激LDL氧化；随后，巨噬细胞中的清道夫受体吸收没有被LDL受体识别的氧化性LDL，这导致形成了泡沫细胞和粥样斑块。另外，巨噬细胞也具有炎症信号受体(toll-like receptor),其绑定病原体样分子(pathogen-like molecule),并开始导致细胞活化的信号级联。这些巨噬细胞产生炎性细胞因子、趋化因子、自由基、生长调节分子、金属蛋白酶和其他水解酶。受细胞因子表达和巨噬细胞活化状态影响的泡沫细胞的细胞凋亡也促成了形成坏死核。之前的研究表明，动脉粥样硬化的血管壁中表达增强的基因是那些涉及炎症的基因，例如趋化因子和趋化因子受体、白介素和白介素受体、主要组织相容性复合体(majorhistocompatibility complex, MHC)分子、内皮细胞粘附分子、细胞外基质和基质重构蛋白、基质金属蛋白酶基因、转录因子、脂质代谢和血管钙化基因、以及巨噬细胞和平滑肌细胞特异性基因。另ー方面，动脉粥样硬化的血管壁中表达减少的基因包含抗粘附基因、抗增殖基因、抗炎基因以及分化型肌肉标记物。除了诸如血管成形术和搭桥手术的外科手术以タ卜，各种药物介入(pharmacological intervention)已用于治疗动脉粥样硬化和相关的心血管疾病。用于降低胆固醇和降低LDL的药物、以及那些增加高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)的药物通常用于预防动脉粥样硬化的发生。例如，他汀类药物用于抑制胆固醇生物合成中涉及的、称为Hmgcr(3-羟基-3-甲基戊ニ酰辅酶A，还原酶)的酶。由于血管增生对动脉粥样硬化极为重要，因此治疗动脉粥样硬化的另一治疗策略是使用细胞周期抑制剂，细胞周期抑制剂包含药物剂治疗、照射治疗和基因治疗。阻碍T细胞活化的免疫抑制性药物和抗炎药物(例如环孢霉素)也可用作动脉粥样硬化的治疗疗法。除了其降低胆固醇的性能外，他汀类药物也表现出包含免疫抑制性性能的多效性作用。接种疫苗也是促使保护性免疫以对抗动脉粥样硬化的迷人方法，所述接 种疫苗具有氧化性LDL、含修饰性磷脂的细菌或热休克蛋白。其他方法包括传递抗炎白介素和服用与促炎性白介素对抗的诱饵(decoy)和抗体。然而，大多数现有方法的目的在于治疗而不是预防动脉粥样硬化。随着公众健康意识的增强，通过流行病学研究和试验研究意识到，由于其高抗氧化活性，高植物化学物质含量的饮食也可针对自由基促使的疾病提供保护，所述自由基促使的疾病例如动脉粥样硬化和心血管疾病。例如，发现诸如维生素E、维生素C、类胡萝卜素、多酚和辅酶QlO的饮食抗氧剂能够预防动脉粥样硬化形成。同样发现的是，来自大豆、石榴、姜和红酒的酚类抗氧化剂通过LDL-依赖机制或通过其他LDL-独立机制减弱动脉粥样硬化；所述LDL-依赖机制例如降低LDL水平、抑制LDL氧化和增强抗氧化状态。同样建议的是，白藜芦醇(resveratrol)-红酒中发现的酚类植物抗毒素，通过预处理作用而非直接保护介导心肌保护。通过使心脏经受治疗量的应激实现预处理，从而扰乱正常的心血管内稳态和重建改进的内稳定状态；其中，所述改进的内稳定状态具有可承受后续的压カ损害的增强型心脏防御能力。还发现白藜芦醇会增强定期服用高卡路里饮食(on high-calorie diet)的老鼠的寿命和存活率。因此，植物酚类物质是预防动脉粥样硬化和相关心血管疾病的、有前景的候选物。油棕(Elaeis guineensis)包含各种具有显著的抗氧化性能的植物化学物质,例如类胡萝卜素、生育酚和生育三烯酚。通过完全无溶剂处理从棕榈油研磨废液(palm oilmill effluent, POME)提取的水溶性酚类物质重新获得了来自油棕的另ー类型的抗氧化齐U，将其认定为包含各种酚酸和多酚的棕榈树的精华⑧(Essence of Palm⑩)。这ー发现使得以下的双交叉方法更有效力在产生用于制药市场、营养食品市场和药用化妆品市场的高级产品的同时，減少POME造成的环境污染。油棕酚类物质展现出对抗LDL氧化的显著生物活性、増加用致动脉粥样化饮食喂养的仓鼠的HDL含量、以及减弱致动脉粥样化饮食喂养的兔子的血管内的动脉粥样硬化。在该研究中，通过假设提取物可能影响一定基因表达变化，我们扩展了油棕酚类物质可减弱动脉粥样硬化的知识。因此，我们通过采用低脂肪(14. 6%千卡/千卡的能量)的正常饮食或含胆固醇(0.15% w/w)的、高脂肪(40. 5%千卡/千卡的能量)的致动脉粥样化饮食喂养老鼠验证了这ー假设。进ー步为每个组提供蒸馏水(对照组)或油棕酚类物质(试验组)。通过收获主要器官(如肝脏、脾脏和心脏)、将其用于微阵列基因表达谱(gene expression profiling)分析,我们鉴定了在正常饮食喂养的老鼠体内由油棕酹类物质引起的生物学变化、在致动脉粥样化饮食喂养的老鼠体内由致动脉粥样化饮食和油棕酚类物质引起的生物学变化，而且发现了提取物如何改变致动脉粥样化饮食引起的基因表达谱。
发明内容
本发明涉及用于提供抗肥胖性能或抗血脂异常性能的组合物，因此涉及对动脉粥样硬化和与其相关的心血管疾病的预防。
图I是老鼠的体重和器官重量的图表；图2是基因表达微阵列路径图谱(GenMAPP)的示意图，其展示了油棕酚类物质在 肝脏内对各功能和基因的显著改变；图3是致动脉粥样化饮食在肝脏内上调的基因的示意图；图4是致动脉粥样化饮食在肝脏胆固醇生物合成通路中下调的基因的示意图；图5是致动脉粥样化饮食在脾脏内调节的基因的示意图；图6是致动脉粥样化饮食在心脏内调节的基因的示意图；图7是油棕酚类物质在肝脏的未折叠蛋白反应网络中上调的基因的示意图；图8是油棕酚类物质在脾脏的抗原提呈网络中下调的基因的示意图；图9是油棕酚类物质在心脏的抗氧化通路中上调的基因的示意图；图10是与致动脉粥样化饮食相比、当受油棕酚类物质调节时体现出方向变化的基因比例的不意图；图11是在倍数变化的方向方面、通过致动脉粥样化饮食和油棕酚类物质显著改变的基因的对比图(以肝脏数据为例)；图12是微阵列和实时qRT-PCR试验确定的八个靶基因的基因表达倍数变化及其相关性的不意图；图13是对小鼠的血清样品进行的细胞因子性能分析(cytokine profiling)的结果的不意图；以及图14是对小鼠的血清样品进行的抗氧化分析(antioxidant analysis)的结果的示意图。
具体实施例方式该研究中指定的所有雄性近交系免疫缺陷的小鼠(BALB/c mice) (n=40)均购买自马来西亚吉隆坡医学研究协会，这些雄性近交系BALB/c小鼠的年龄大约为刚刚断奶后五周。所有动物程序得到马来西亚-吉隆坡-马来西亚大学-动物饲养和使用协会(AnimalCare and Use Committee of the University of Malaya,Kuala Lumpur, Malaysia；的批准。将各动物随机分配至笼(n=5/笼)，并使其适应新环境一周，其间提供蒸馏水和购买自马来西亚大学的标准饲料(chow diet)。在试验开始时，将动物的饮食更改为定制的、低脂肪的正常饮食(58. 2%千卡/千卡的碳水化合物、27. 2%千卡/千卡的蛋白质和14. 6%千卡/千卡的脂肪，其包含纤维素、矿物质混合物、维生素混合物和消旋(DL型)蛋氨酸)，或者更改为定制的、高脂肪的致动脉粥样化饮食(40. 5%千卡/千卡的碳水化合物、19. 0%千卡/千卡的蛋白质和40. 5%千卡/千卡的脂肪,其包含O. 15% w/w的胆固醇、以及纤维素、矿物质混合物、维生素混合物和DL型蛋氨酸)。正常对照组(n=10)和致动脉粥样化对照组(H=IO)随意补充作为饮品的蒸馏水，而正常试验组(n=10)和致动脉粥样化试验组(n=10)随意补充作为饮品的油棕酚类物质。提供的油棕酚类物质的抗氧化剂含量大约为1500ppm没食子酸当量。每天更换食物和液体。在动物喂养过程中，每周监控体重。六周后通过采用こ醚的安乐死术处死小鼠，通过心脏穿刺采集血样。切离、吸干、称重六个主要器官(包含肝脏、脾脏、心脏、肾、肺和大脑)，在液氮中快速冷冻并保存在-80° C。小鼠的体重在六个周的喂养期内自始至终每周稳定增加；而且，与定期服用正常 饮食的小鼠相比，定期服用致动脉粥样化饮食的那些小鼠在增重方面体现出更高的增长(图1A)。相比之下，正常试验组的小鼠在六个周的喂养期内自始至终增重延缓(图1A)。当比较动物的器官重量时，发现致动脉粥样化饮食导致小鼠肝脏的重量増加(图1B)。另ー方面，油棕酚类物质在提供正常饮食和致动脉粥样化饮食的小鼠内没有显著影响器官重量(图1B)。这些结果表明，致动脉粥样化饮食中添加的额外的脂肪和胆固醇使得其能量含量増加。这导致两组致动脉粥样化饮食中的小鼠肝脏增大且造成更高增重，肝脏增大从而适应为处理脂肪和胆固醇而增长的需求。将从约一半动物(n=4)获得的一部分全血样品(200μυ等分到含こニ胺四こ酸(ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA)(安比恩，奥斯汀，德克萨斯州(Ambion,Austin, TX))的小管内、以防止凝血。在解剖动物之后立即将这些全血样品送往位于马来西亚-雪兰莪州-沙登的马来西亚普特拉大学(UPM)、兽医学院、兽医病理学和微生物学系的临床生物化学和血液学实验室(Clinical Biochemistry and Hematology Laboratory,Department of Veterinary Pathology and Microbiology, Faculty of VeterinaryMedicine, University of Putra Malaysia(UPM), Serdang, Selangor, Malaysia),以进ィ丁血液学分析。使用动物血球计数器兽用血液分析仪(Vet Hematology Analyzer)(奥里巴ABX,法国(Horiba ABX, France))进行分析。在以3300rpm离心5分钟之前，允许来自所有动物(n=10)的剩余血样在室温下凝结2小时，以获得血清；离心之后收集清液层并将其保存在-20°C。使每个血清样品(n=6每组)的一部分((IOOyL)保持等分，以进行细胞因子性能分析和抗氧化分析。随后，将剩余血清样品(每重复约200yL)送出，以使用罗氏/日立902化学分析仪(瑞士、罗氏/日立)在UPM兽医学院、兽医病理学和微生物学系的临床生物化学和血液学实验室进行临床生物化学分析。检查的临床生物化学參数包含丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、葡萄糖、血清总蛋白、白蛋白、球蛋白、白蛋白球蛋白比(A G比)、总胆固醇、甘油三酷、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。由于血细胞溶血，从数据分析中排除每个对照组的两个样品和每个试验组的三个样品。在血液学方面，与提供正常饮食的小鼠相比，提供致动脉粥样化饮食的小鼠的白血球水平、中性粒细胞水平和淋巴细胞水平显著增加(表I)，这表明存在炎性反应。油棕酚类物质没有影响两个模组(module)中的血液学參数(表I)。在临床生物化学方面，致动脉粥样化饮食引起的显著变化涉及葡萄糖水平(丨)、白蛋白水平(丨)、球蛋白水平(丨)、A : G水平(丨)、总胆固醇水平(丨)、LDL-C水平(丨)和HDL-C水平(丨)(表2)。油棕酚类物质没有引起每个模组中测量的临床生物化学參数的显著变化，除了其使得致动脉粥样化饮食模组的葡萄糖水平正常以外(表2)。表I :使用小鼠全血样品测量的血液学參数
权利要求
1.一种用于提供抗肥胖性能或抗血脂异常性能的组合物，其特征在于，所述组合物包括油棕酚类物质。
2.一种用于提供抗肥胖性能或抗血脂异常性能的组合物，其特征在于，所述组合物包括来自油棕的提取物。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述提取物包括油棕酚类物质。
4.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物用于预防动脉粥样硬化和心血管疾病以及其相关的疾病。
5.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物用于降低致动脉粥样化饮食的炎性作用。
6.根据权利要求I至5所述的组合物，其特征在于，所述组合物预防所述致动脉粥样化饮食弓I起的氧化应激。
7.根据权利要求I至5中任ー权利要求所述的组合物，其特征在于，所述组合物延缓肥胖发作，并减弱致动脉粥样化饮食的炎性反应，其中所述组合物有助于抑制所述炎性反应，从而改善动脉粥样硬化。
8.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物延缓增重或肥胖，从而预防血脂异常的影响。
9.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物还用于促使胆固醇生物合成的減少。
10.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物还用于上调脂肪酸β氧化。
11.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物还用于通过上调脂肪酸β氧化抑制肝脏脂肪累积和内脏脂肪累积。
12.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物还用于预防糖尿病。
13.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物还用于预防酒精促使的肝损伤。
14.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物还用于上调未折叠蛋白反应，因此消除不可重折叠的蛋白质。
15.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物还用于下调抗原提呈。
16.根据权利要求I所述的组合物，其特征在于，所述组合物还用于降低致动脉粥样化饮食引起的受损蛋白质。
17.根据权利要求I所述的组合物，其特征在干，从棕榈油的任一部分获得所述提取物。
18.根据权利要求I所述的组合物，其特征在干，从棕榈油研磨植物液获得所述提取物。
19.药学可接受量的组合物在制备药物中的应用，其中所述药物用于在有需要的病人体内治疗和预防动脉粥样硬化和与其相关的心血管疾病，所述组合物包括含油棕酚类物质的提取物。
20.根据权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述组合物以固体制剂的形式提供。
21.根据权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述组合物以液体制剂的形式提供。
22.根据权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述组合物以溶液形式提供。
23.根据权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述组合物以药学有效的形式提供。
24.根据权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述组合物以营养食品的形式提供。
25.根据权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述组合物以营养补充品的形式提供。
26.根据权利要求19所述的组合物，其特征在于，所述组合物以适合口服的形式提供。
全文摘要
来自油棕(Elaeis guineensis)的水溶性酚类物质具有显著的抗氧化性能和健康促进性能。该发明记载了使小鼠服用油棕酚类物质的作用，其目的在于确认这些化合物对于预防动脉粥样硬化和心血管疾病是否具有显著的抗肥胖性能或抗血脂异常性能。我们首先探究了油棕酚类物质在提供有低脂肪的正常饮食的小鼠肝脏内引起的基因表达变化，其中上调脂肪酸β氧化基因，同时下调五个胆固醇生物合成基因。另外，提供有油棕酚类物质的小鼠的增重得以延缓，表明油棕酚类物质在延缓肥胖发作上发挥作用。使用伊格敏纳微阵列，我们发现致动脉粥样化饮食引起氧化应激，上调炎性反应且增加肝脏、脾脏和心脏内的代谢物和细胞的代谢回转。相反地，我们发现油棕酚类物质在小鼠体内显现出减弱致动脉粥样化饮食的作用的迹象。该提取物增加肝脏内的未折叠蛋白反应，同时减弱了脾脏内的抗原提呈和抗原加工。油棕酚类物质也使得心脏内的抗氧化基因的表达增加。与致动脉粥样化饮食相比，不同器官内受油棕酚类物质调控的大多数基因在调控方向上显现出差别。
文档编号A61P3/06GK102821774SQ201180012698
公开日2012年12月12日 申请日期2011年1月7日 优先权日2010年1月7日
发明者拉维加德维·沙姆巴沙穆提, 谭友爱, 卡里亚纳·桑德拉姆·P.·马尼卡姆, 莫哈末·巴斯利·瓦西德 申请人:马来西亚棕榈油协会