本发明涉及农药
技术领域：
，尤其涉及一种含桃金娘乳液的制备方法及应用。
背景技术：
：目前植物病原真菌的防治以有机合成的化学药剂为主，大量使用化学农药对生态环境造成一定的影响，因此从植物中筛选新的抑菌活性物质是当今开发无公害杀菌剂的中药研究方向之一。在桃金娘果实中具有丰富的间苯三酚等酚类、黄酮类及蒽醌类等对植物病原菌有较好抑制作用的成分。然而酚类物质在空气中容易被氧化，在空气中暴露会导致其被氧化而导致结构发生异构化而导致变质。这类化合物在桃金娘植物细胞中的稳定性给我们提示，利用水包油的表面活性剂乳液对酚类物质进行提取，从而避免酚类物质与空气接触。这种提取方式，可以大大提高酚类物质的有效利用率。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供了一种含桃金娘乳液的制备方法，实现了充分提取的提取物有效的抑制病原真菌及美白防晒的效果。本发明采用的技术手段如下：一种含桃金娘乳液的制备方法，包括如下步骤：s1、将桃金娘果和葡桃果洗净，烘干粉碎；s2、用甲醇溶液进行提取，蒸发溶剂得滤渣，再用氯仿溶解滤渣，过滤，得第一滤渣和滤液；s3、将步骤s2的第一滤渣用甲醇溶解，减压蒸馏溶剂，得第一提取物，滤液进行减压蒸馏，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸钠，得液体液相；s4、将十二烷基硫酸钠或硬脂酸中的至少一种配制成水溶液；s5、将步骤s4的水溶液和去离子水按质量比为0.1～0.3:1的比例称取，加热至60～70℃，得混合液；s6、按质量比为0.5～1.5:1～2的比例将步骤s5配制的混合液加入s3液体液相中，高速搅拌，得乳化液；s7、将乳化液保温15～20min，降温调节ph值至4.5～6.5，得成品。优选地，所述步骤s1中桃金娘果和葡桃果的质量比为3:1～5:1。优选地，所述步骤s2中，用体积分数为60～80％的甲醇溶液在水浴摇床45℃～60℃下振荡提取1～2h。优选地，所述步骤s3中液体液相的质量浓度为0.1～10％。优选地，所述步骤s4中十二烷基硫酸钠或硬脂酸的质量浓度为0.1～15％。优选地，所述步骤s6中按质量比为0.5～0.8:1～1.2的比例将步骤s5配制的混合液加入s3液体液相中。优选地，所述步骤s6中在高速20000转/分下均匀搅拌。优选地，所述步骤s7中降温至30～40℃时调节ph值。本发明还提供了一种含桃金娘乳液在植物病原真菌和美白防晒中的应用。采用本发明所提供的一种含桃金娘乳液的制备方法，其制备过程中易于操作。通过甲醇和氯仿的结合使用对桃金娘果和葡桃果进行提取，且通过反复溶解提取，充分提取出酚类、黄酮类及蒽醌类多种活性化合物成分；加入十二烷基硫酸钠至提取物中，得到液体液相，预乳化提取物，使提取物不易氧化；十二烷基硫酸钠或硬脂酸或结合配置成稳定性较好的混合液，使得混合液对初步乳化的提取物进行进一步乳化的作用，制备的成品充分对酚类化合物、酮类等具有保护作用，使其不被空气氧化，在用于植物病原真菌的防治和美白防晒化妆品中，具有很好疗效的作用，具有稳定性。该方法简化了中间步骤，使制备过程更加高效和环保，成本也相应降低。具体实施方式以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实施例1一种含桃金娘乳液的制备方法，包括如下步骤：s1、将300g桃金娘果和100g葡桃果洗净，烘干粉碎。s2、用体积分数为60％的甲醇溶液在水浴摇床45℃下振荡提取1h。蒸发溶剂得滤渣，再用氯仿溶解滤渣，过滤，得第一滤渣和滤液。s3、将步骤s2的第一滤渣用甲醇溶解，减压蒸馏溶剂，得第一提取物，滤液进行减压蒸馏，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸钠，得质量浓度为0.1％的液体液相。s4、将质量浓度为0.1％的十二烷基硫酸钠配制成水溶液。s5、将步骤s4的水溶液和去离子水按质量比为0.1:1的比例称取，加热至60℃，得混合液。s6、按质量比为0.5:1的比例将步骤s5配制的混合液加入s3液体液相中，高速20000转/分下均匀搅拌，得乳化液。s7、将乳化液保温15min，降温至30℃时调节ph值至4.5，得成品。本发明还在植物病原真菌和美白防晒中的应用。实施例2一种含桃金娘乳液的制备方法，包括如下步骤：s1、将500g桃金娘果和100g葡桃果洗净，烘干粉碎。s2、用体积分数为80％的甲醇溶液在水浴摇床60℃下振荡提取2h。蒸发溶剂得滤渣，再用氯仿溶解滤渣，过滤，得第一滤渣和滤液。s3、将步骤s2的第一滤渣用甲醇溶解，减压蒸馏溶剂，得第一提取物，滤液进行减压蒸馏，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸钠，得质量浓度为10％的液体液相。s4、将质量浓度为15％的硬脂酸配制成水溶液。s5、将步骤s4的水溶液和去离子水按质量比为0.3:1的比例称取，加热至70℃，得混合液；s6、按质量比为1.5:2的比例将步骤s5配制的混合液加入s3液体液相中，高速20000转/分下均匀搅拌，得乳化液。s7、将乳化液保温20min，降温至40℃时调节ph值至6.5，得成品。本发明还在植物病原真菌和美白防晒中的应用。实施例3一种含桃金娘乳液的制备方法，包括如下步骤：s1、将400g桃金娘果和100g葡桃果洗净，烘干粉碎。s2、用体积分数为70％的甲醇溶液在水浴摇床50℃下振荡提取1.5h。蒸发溶剂得滤渣，再用氯仿溶解滤渣，过滤，得第一滤渣和滤液。s3、将步骤s2的第一滤渣用甲醇溶解，减压蒸馏溶剂，得第一提取物，滤液进行减压蒸馏，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸钠，得质量浓度为5％的液体液相。s4、将质量浓度均为5％的十二烷基硫酸钠和硬脂酸配制成水溶液。s5、将步骤s4的水溶液和去离子水按质量比为0.2:1的比例称取，加热至65℃，得混合液。s6、按质量比为0.8:1.2的比例将步骤s5配制的混合液加入s3液体液相中，高速20000转/分下均匀搅拌，得乳化液。s7、将乳化液保温17min，降温至35℃时调节ph值至5.5，得成品。本发明还在植物病原真菌和美白防晒中的应用。实施例4一种含桃金娘乳液的制备方法，包括如下步骤：s1、将300g桃金娘果和100g葡桃果洗净，烘干粉碎。s2、用体积分数为80％的甲醇溶液在水浴摇床60℃下振荡提取2h。蒸发溶剂得滤渣，再用氯仿溶解滤渣，过滤，得第一滤渣和滤液。s3、将步骤s2的第一滤渣用甲醇溶解，减压蒸馏溶剂，得第一提取物，滤液进行减压蒸馏，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，并加入十二烷基硫酸钠，得质量浓度为8％的液体液相。s4、将质量浓度为8％的十二烷基硫酸钠和硬脂酸配制成水溶液。s5、将步骤s4的水溶液和去离子水按质量比为0.2:1的比例称取，加热至70℃，得混合液。s6、按质量比为0.8:1的比例将步骤s5配制的混合液加入s3液体液相中，高速20000转/分下均匀搅拌，得乳化液。s7、将乳化液保温20min，降温至30℃时调节ph值至5.5，得成品。本发明还在植物病原真菌和美白防晒中的应用。为了验证本发明的有益效果，本发明做了以下实验：对比例1该对比例与实施例4的区别在于：s2、用体积分数为80％的甲醇溶液在水浴摇床60℃下振荡提取2h，过滤，得滤渣和滤液。s3、将步骤s2的滤渣用甲醇溶解，减压蒸馏溶剂，得第一提取物，滤液进行减压蒸馏，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，得质量浓度为8％的液体液相。对比例2该对比例与实施例4的区别在于：s2、用体积分数为80％的乙醇溶液在水浴摇床60℃下振荡提取2h，过滤，得滤渣和滤液。s3、将步骤s2的滤渣用乙醇溶解，减压蒸馏溶剂，得第一提取物，滤液进行减压蒸馏，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，得质量浓度为8％的液体液相。对比例3该对比例与实施例4的区别在于：s2、用体积分数为80％的乙醇溶液在水浴摇床60℃下振荡提取2h过滤，得滤渣和滤液。s3、将步骤s2的滤渣用乙醇溶解，减压蒸馏溶剂，得第一提取物，滤液进行减压蒸馏，得第二提取物，合并第一提取物和第二提取物，得质量浓度为8％的液体液相。s4、将质量浓度为8％的聚甘油脂肪酸酯配制成水溶液。对比例4该对比例与实施例4的区别在于：s6、按质量比为2:3的比例将步骤s5配制的混合液加入s3液体液相中，高速20000转/分下均匀搅拌，得乳化液。1材料与方法1.1供试菌种主要为甘蓝黑斑、烟草黑胫、辣椒炭疽、水稻胡麻叶、金桔沙皮、甘蔗凤梨、玉米大斑、茶轮斑以及贡柑链格等病原真菌。1.2抑制活性测试将培养好的致病菌用培养液进行稀释，稀释度为1:500-1:1000，将稀释后的含菌培养液分别定量加至96孔板的各个孔中，将实施例4的乳液配制成1mg/ml，分别取定量加至各个孔中。加完后置于恒温培养箱中28℃恒温培养48h，而后用酶标仪在630nm下测各孔吸光度，计算生长抑制率。2结果与分析2.1含桃金娘乳液抑菌活性见表1：含桃金娘果和葡桃果的提取物制备的乳液对孢子萌发抑制率和菌丝生长抑制率大都在80％以上，表明该乳液对病原菌孢子萌发和菌丝生长均表现较好的抑制效果。2.2病原真菌(甘蓝黑斑)抑制活性测试：计算实施例1～4和对比例1～4的病原真菌的生长抑制率，见表2：组别孢子萌发抑制率/％菌丝生长抑制率/％实施例183.685.4实施例285.489.7实施例386.390.8实施例489.392.4对比例170.272.3对比例271.675.3对比例365.468.7对比例472.373.5由上表可知，本发明乳液具有很好的抑制真菌的效果，通过本发明的制备步骤，使得桃金娘果和葡桃果的多种提取物充分提取出来，不同溶剂制备的提取物中，含量也会不同，主要是因为通过其操作步骤、溶剂的极性与其活性物质相匹配，通过预乳化和乳化的作用，使多种提取物不易被氧化，使得制备得的乳液具有抑制真菌的效果。本发明还做了以下实验：一、依据实施例4的制备方法，采用不同极性溶剂提取物对真菌的生长抑制情况如下表3所示：植物病原真菌甲醇乙醇氯仿乙醚乙酸乙酯甲醇+氯仿甘蓝黑斑80.175.470.460.262.385.9烟草黑胫76.778.173.172.170.386.7辣椒炭疽76.572.473.668.070.586.4水稻胡麻叶82.176.475.171.368.590.1金桔沙皮80.778.270.272.470.688.3甘蔗凤梨82.176.373.868.673.592.8玉米大斑80.570.571.570.962.990.8茶轮斑73.770.674.165.365.893.4贡柑链格74.975.176.562.772.894.2由上表可知，在甲醇和氯仿溶解剂制备的乳液对植物病原真菌具有较好的抑制作用，抑制率达85％以上，而其它溶剂提取物制备的乳液抑制效果差，表明抑制菌丝生长的活性物质可能只集中溶解在甲醇和氯仿极性成分中。二、乳液的抗紫外线性能根据能量的大小，紫外线分为3个区域，为uv-a区域，波长为320～400nm，日光能量最低，一般只会使皮肤晒黑；二是能量较高的uvb区域，波长290～320nm，它会晒黑晒伤皮肤；三是波长为200～290nm的uvc区域，日光能量最高，所以对皮肤的杀伤力也很大。设置空白例1：将未涂抹桃金娘乳液的实验组为空白实验1。将实施例1～4、对比例3涂抹在载玻片上，扫描基线后，扫描样品在uva、uvb、uvc内的紫外吸收平均值。检测结果见表4：通过表4的结果显示，实施例1～4制得的乳液对紫外线吸收效果好，具备较好的防晒功效，对比例3只采用单一的乙醇进行提取，且没有对提取物进行预乳化和乳化的作用，通过比较本发明较实施例3对紫外线的吸收效果较好。三、乳液对酪氨酸酶抑制活性测定酪氨酸酶是一种氧化还原酶，酪氨酸酶氧化可以促进l-酪氨酸生成黑色素，在酪氨酸形成黑色素的过程中，酪氨酸酶能促使l-酪氨酸生产l-多巴并进一步作用使l-多巴形成巴醌，多巴醌最终生成黑色素。抑制率的计算公式：[1-(t2-t1)/(c2-c1)]*100％c1是缓冲溶液和酪氨酸酶提取液的吸光度值，c2表示生成的黑色素的吸光度值，以c1为参比测c2的吸光度值即为c2-c1，表示在扣除酪氨酸酶提取液的吸光度后生成的黑色素的吸光度值。t1是加入样品、酪氨酸酶提取液和缓冲溶液的吸光度值，t2是经过样品抑制后生成的黑色素的吸光度值，同样的以t1为参比测t2的吸光度值得到t2-t1，表示在扣除样品和酪氨酸酶提取液吸光度的影响下，经过样品的抑制后的黑色素的吸光度值。实施例1至实施例4以及对比例1至对比例4获得的样品溶液在酪氨酸酶抑制活性测定中的抑制率结果如表5所示：实施例1至实施例4获得的含桃金娘和葡桃提取物的乳液对酪氨酸酶抑制能力强，可以用于皮肤美白。综上所述，采用本发明所提供的本发明公开了一种含桃金娘乳液的制备方法，其制备过程中易于操作。通过甲醇和氯仿的结合使用对桃金娘果和葡桃果进行提取，且通过反复溶解提取，充分提取出酚类、黄酮类及蒽醌类多种活性化合物成分；加入十二烷基硫酸钠至提取物中，得到液体液相，预乳化提取物，使提取物不易氧化；十二烷基硫酸钠或硬脂酸或结合配置成稳定性较好的混合液，使得混合液对初步乳化的提取物进行进一步乳化的作用，制备的成品充分对酚类化合物、酮类等具有保护作用，使其不被空气氧化，在用于植物病原真菌的防治和美白防晒化妆品中，具有很好疗效的作用，具有稳定性。该方法简化了中间步骤，使制备过程更加高效和环保，成本也相应降低。避免了其它化学物质农药的使用对环境造成的污染，农作物对其生物利用率高，效果显著；原料来源广泛，环保易降解。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护的范围之内。当前第1页12