作为抗癌治疗的蛋白质靶的氧化鲨烯环化酶的制作方法
【专利摘要】本发明鉴定的胆固醇生物合成途径(包括氧化鲨烯环化酶)作为抗肿瘤治疗的新蛋白质靶。本发明还提供一类含有与芳环结构连接的叔胺的氧化鲨烯环化酶抑制剂作为新类别的抗癌药。本文中公开的化合物已经在19个细胞系中以及在裸鼠中的人乳腺及前列腺异种移植物肿瘤生长物内测试过，所述细胞系包括乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肺癌细胞(包括耐药性肺癌H69AR细胞)，结肠癌细胞、卵巢癌细胞(包括耐药性OVCAR-3细胞)和胰腺癌细胞，并且已经证实有活性。
【专利说明】作为抗癌治疗的蛋白质靶的氧化鲨烯环化酶
[0001]本申请要求2010年12月27日提交的美国临时申请号61/460，167和2011年08月28日提交的美国临时申请号61/628，324的优先权益，所述文献的公开内容通过引用的方式如其中所书写那样完整并入。
基金声明
[0002]本发明是在美国政府支持下在国家健康研究所资助的基金号R21GM088517、R56CA86916和T15LM07089做出的。美国政府享有本发明中的某些权利。
[0003]本文中公开了抗癌药物和治疗方法，更具体地涉及用于治疗癌症的新蛋白质靶，连同其抑制剂。
[0004]OSC及其抑制剂:所述的酶一氧化鲨烯环化酶(‘0SC’)已知是胆固醇生物合成途径的一部分，因而OSC将氧化鲨烯转化成羊毛固醇，形成类固醇支架[1，2]。已经报道OSC的众多抑制剂，包括一系列含有叔胺、己氧基间隔团和无约束的溴苯基的抑制剂，如式I
【权利要求】
1.一种治疗癌症的方法，所述方法包括步骤:向有需求的患者给药治疗有效量的胆固醇生物合成途径中蛋白质靶的抑制剂。
2.根据权利要求1中所述的方法，其中所述蛋白质靶不是羟甲戊二酰辅酶A还原酶。
3.根据权利要求2中所述的方法，其中所述蛋白质靶是氧化鲨烯环化酶。
4.根据权利要求1中所述的方法，其中所述癌症选自乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、胰癌、肝癌、甲状腺癌、胃癌、子宫癌、淋巴瘤、脑癌、皮肤癌、肾癌、口腔癌、喉癌、舌癌和膀胱癌，以及白血病，及它们的耐药性表型。
5.根据权利要求1中所述的方法，其中所述癌细胞不具有P53突变。
6.根据权利要求1中所述的方法，其中所述癌细胞是HER2/neu阳性的乳腺癌细胞。
7.根据权利要求1中所述的方法，其中所述癌细胞是雌激素受体和孕酮受体阳性的乳腺癌细胞。
8.根据权利要求1中所述的方法，其中所述癌细胞是雌激素受体、孕酮受体和HER2/neu为三阴性的乳腺癌细胞。
9.根据权利要求1中所述的方法，其中所述癌细胞发生凋亡。
10.根据权利要求1中所述的方法，其中抑制剂是并非PRIMA-1的化合物。
11.根据权利要求10中所述的方法，其中所述化合物是与至少两个芳环结构连接的叔胺。
12.根据权利要求11中所述的方法，其中所述化合物具有式1:
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述化合物是4'-[6-(烯丙基甲基氨基)己氧基]-4-溴-2'-氟二苯甲酮延胡索酸酯。
14.一种降低癌细胞生存力的方法，所述方法包括步骤:抑制细胞的胆固醇生物合成途径中的蛋白质靶的活性。
15.根据权利要求14中所述的方法，其中所述蛋白质靶不是羟甲戊二酰辅酶A还原酶。
16.根据权利要求15中所述的方法，其中所述蛋白质靶是氧化鲨烯环化酶。
17.根据权利要求14中所述的方法，其中所述细胞选自乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肺癌细胞、结肠癌细胞、卵巢癌细胞、胰癌细胞、肝癌细胞、甲状腺癌细胞、胃癌细胞、子宫癌细胞、淋巴瘤、脑癌细胞、皮肤癌细胞、肾癌细胞、口腔癌细胞、喉癌细胞、舌癌细胞和膀胱癌细胞，以及白血病细胞，及它们的耐药性表型。
18.根据权利要求14中所述的方法，其中所述细胞不具有p53突变。
19.根据权利要求14中所述的方法，其中所述癌细胞发生凋亡。
20.根据权利要求14中所述的方法，其中所述癌细胞是HER2/neu阳性的乳腺癌细胞。
21.根据权利要求14中所述的方法，其中所述癌细胞是雌激素受体和孕酮受体阳性的乳腺癌细胞。
22.根据权利要求14中所述的方法，其中所述癌细胞是雌激素受体、孕酮受体和HER2/neu为三阴性的乳腺癌细胞。
23.根据权利要求14中所述的方法，其中抑制步骤用并非PRIMA-1的化合物实现。
24.根据权利要求23中所述的方法，其中所述化合物是与至少两个芳环结构连接的叔胺。·
25.根据权利要求24中所述的方法，其中所述化合物具有式1:
26.根据权利要求25所述的方法，其中所述化合物是4'-[6-(烯丙基甲基氨基)己氧基]-4-溴-2'-氟二苯甲酮延胡索酸酯(Ro48-8071)。
27.一种化合物的用途，所述化合物抑制细胞的胆固醇生物合成途径中蛋白质靶的活性，用于治疗癌症。
28.根据权利要求27中所述的用途，其中所述蛋白质靶不是羟甲戊二酰辅酶A还原酶。
29.根据权利要求28中所述的用途，其中所述蛋白质靶是氧化鲨烯环化酶。
30.根据权利要求27中所述的用途，其中所述癌症选自乳腺癌、前列腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、胰癌、肝癌、甲状腺癌、胃癌、子宫癌、淋巴瘤、脑癌、皮肤癌、肾癌、口腔癌、喉癌、舌癌和膀胱癌，以及白血病，及它们的耐药性表型。
31.根据权利要求27中所述的用途，其中所述细胞不具有p53突变。
32.根据权利要求27中所述的用途，其中所述癌细胞发生凋亡。
33.根据权利要求27中所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌，其细胞是HER2/neu阳性的。
34.根据权利要求27中所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌，其细胞是雌激素受体阳性和孕酮受体阳性的。
35.根据权利要求27中所述的用途，其中所述癌症是乳腺癌，其细胞是雌激素受体、孕酮受体和HER2/neu三阴性的。
36.根据权利要求27中所述的用途，其中抑制步骤用并非PRIMA-1的化合物实现。
37.根据权利要求36中所述的用途，其中所述化合物是与至少两个芳环结构连接的叔胺。
38.根据权利要求37中所述的用途，其中所述化合物具有式1:
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述化合物是4'-[6-(烯丙基甲基氨基)己氧基]-4-溴-2'-氟二苯甲酮延胡索酸酯(Ro48-8071)。
40.一种用于测定化合物的促凋亡特性或抗增殖特性的方法，所述方法包括: a)使包含氧化鲨烯环化酶活性的哺乳动物癌细胞的样品与所述化合物接触；b)测量样品中以下标记的任一者或多者的水平: i)凋亡标记和 ii)2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇中的一者或多者；以及 c)将与所述化合物接触的样品中(i)和(ii)的任一者或多者的水平与对照样品中(i)和(ii)的任一者或多者的水平比较， 其中2，3-(S)_氧化鲨烯水平及凋亡标记水平与凋亡及抗增殖水平直接相关，并且羊毛固醇水平及胆固醇水平与凋亡及抗增殖水平反相关。
41.根据权利要求40中所述的方法，其中所述方法测量所述样品中2，3-(S)-氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇的任一者的水平。
42.根据权利要求41中所述的方法，其中所述方法测量所述样品中凋亡标记的水平，所述凋亡标记是膜联蛋白V。
43.一种用于鉴定抑制癌细胞增殖的药物的方法，包括: a)提供包含氧化鲨烯环化酶活性的癌细胞的测试样品； b)或者: i)通过以下方式测定所述测试样品中的氧化鲨烯环化酶活性:使所述测试样品与测试药物接触并且将所述测试样品中2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇的任一种的水平与对照样品中2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇的任一种的水平比较；或 ii)通过以下方式测定所述测试样品中的氧化鲨烯环化酶活性:在第一时点测量所述样品中2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇的任一种的水平；使所述样品与测试药物接触，并且在第二时间点测量所述样品中2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇的任一种的水平；和 c)基于以下情况，测定所述测试药物是否为调节氧化鲨烯环化酶胞内活性的药物: i)与所述对照样品相比，所测试述样品中2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇的任一者的水平的变化；或 ii)从所述第一个时间点至所述第二时间点，所测试述样品中2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇的任一者的水平的变化； 其中2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇的任一者的水平与所述胞内氧化鲨烯环化酶活性水平相关。
44.一种用于鉴定治疗癌症的化合物的方法，包括: a)提供癌细胞的测试样品； b)使所述测试样品与测试化合物接触； c)确定2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇中的一者或多者的降低程度； d)任选地，测定: i)凋亡标记水平的增加；和 ii)活癌细胞水平的下降； e)鉴定所述测试化合物作为以下化合物 i)抑制胆固醇生物合成途径中酶的活性的化合物； ii)在癌细胞中促进凋亡的化合物；或 iii)杀死癌细胞的化合物；和其中2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇的任一者的水平与所述抗癌活性水平相关。
45.一种制备包含治疗癌症的化合物的组合物的方法，所述方法包括: a)提供癌细胞的测试样品； b)使所述测试样品与测试化合物接触； c)测定2，3-(S)_氧化鲨烯、羊毛固醇和胆固醇中任一者的降低程度； d)任选地，测定: i)凋亡标记水平的增加；和 ii)活癌细胞水平的下降； e)鉴定所述测试化合物作为以下化合物 i)抑制胆固醇生物合成途径中酶的活性的化合物； ii)在癌细胞中促进凋亡的化合物；或 iii)杀死癌细胞的化合物；和 f)将如此鉴定的测试化合物或所述测试化合物的功能性类似物或同系物与载体混合，因而制备所述组合物。
46.根据权利要求45中所述的方法，其中胆固醇生物合成途径中的所述酶不是羟甲戊二酰辅酶A还原酶。
47.根据权利要求46中所述的方法，其中胆固醇生物合成途径中的所述酶是氧化鲨烯环化酶。
48.根据权利要求45中所述的方法，其中所述凋亡标记是膜联蛋白V。
49.一种筛选在哺乳动物中抑制肿瘤生长的药物的方法，所述方法包括: a)使细胞与测试药物接触； b)检测所述氧化鲨烯环化酶活性； c)与对照中的氧化鲨烯环化酶活性相比，评定氧化鲨烯环化酶活性的下降，作为所述测试药物是哺乳动物中抑制肿瘤生长的药物的指示。
【文档编号】A61P35/00GK103596570SQ201180063224
【公开日】2014年2月19日 申请日期:2011年12月22日 优先权日:2010年12月27日
【发明者】邹晓勤, 萨尔曼·M·海德, 梁雅韵, 山姆·Z·格林特, 黄胜友 申请人:密苏里大学管委会