一种提纯动物药材中纤溶酶并制备成中药组合物的方法
【专利摘要】本发明公开了一种利用膜分离技术分离提纯动物药材中纤溶酶成分，以及利用该成分制备中药组合物的制备方法，其方法步骤：（1）称取蚂蚁或土鳖虫适量，粉碎至形成粗粉；（2）加6倍量水浸泡，搅拌至匀浆，取匀浆液置恒温水浴、搅拌；（3）离心，弃去沉淀；（4）取离心液经孔径膜过滤；（5）滤液经超滤器（截留分子段3000-20000），超滤浓缩约呈1∶1（即药材与药液体积比），浓缩液冷冻干燥成粉，备用；（6）取冻干粉可单独使用或与其他成分配合成组合物再使用。本发明提供了一种新的方法分离提纯动物药材中纤溶酶成分，提取工艺简易，效果显著。
【专利说明】一种提纯动物药材中纤溶酶并制备成中药组合物的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及利用膜分离技术分离提纯动物药材中纤溶酶成分，以及利用该成分制备中药组合物的制备方法。
技术背景
[0002]纤溶系统是指纤溶酶原经特异性激活物作用转化为纤溶酶，导致体内纤维蛋白不断溶解的反应体系，主要包括纤溶酶原、纤溶酶、纤溶酶原激活物及纤溶酶原激活物抑制剂。
[0003]肝纤维化是肝脏对各种因素所致的慢性损伤的一种修复反应，其特征是细胞外基质(ECM)在肝内过度沉积，而ECM的降解受多种因素的调控，近年有研究显示纤溶酶原激活系统可通过调苄基质金属蛋白酶(MMPs)的活性参与ECM的降解过程。
[0004]纤溶酶可以直接降解纤维蛋白原和纤维蛋白，还可以降解多种ECM成分，包括纤维连接蛋白、层连蛋白等。此外，纤溶酶又是基质金属蛋白酶(MMPs)活化所必需的，MMPs是最重要的一类降解ECM的蛋白酶类。
[0005]肝纤维化属中医“癥结痞块”范畴，中医认为肝血瘀阻是基本病机，用药以活血化瘀为主的治疗原则；现代研究显示纤溶酶原激活系统与肝纤维化有直接关系，活血化瘀中药能明显影响机体纤溶系统，有抗凝血和促进纤维蛋白溶解的功效。因此我们选择中药中动物药材提取纯化具有纤溶活性的成分，研究其在抗肝纤维化的药物领域的开发。长期以来土鳖虫、蚂蚁制剂产品，传统和常规的制备方法是以水煎煮或醇回流提取、浓缩、烘干的制法，而且缺少可靠合理的工艺评估的考察指标，同时由于高温等因素对有效成分影响较大，我们选择采用匀浆常温提取、超滤截留浓缩的制备方法，可以极大的保留药材中动物蛋白有效成分。`
【发明内容】
[0006]针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种利用膜分离技术分离提纯动物药材中纤溶酶成分，以及利用该成分制备中药组合物的制备方法，其方法步骤:
1、称取蚂蚁或土鳖虫适量，粉碎至形成粗粉；
2、加6倍量水浸泡，搅拌至匀浆，取匀浆液置恒温水浴、搅拌；
3、离心，弃去沉淀；
4、取离心液经孔径膜过滤；
5、滤液经超滤器(截留分子段3000-20000)，超滤浓缩约呈1:1(即药材与药液体积比)，浓缩液冷冻干燥成粉，备用。
[0007]6、取冻干粉可单独使用或与其他成分配合成组合物再使用。
[0008]本发明有益效果:提供了一种新的方法分离提纯动物药材中纤溶酶成分，提取工艺简易，效果显著。【专利附图】
【附图说明】
[0009]图1为溶斑标记对照图。采用以尿激酶为对照，于纤维蛋白标准板上，采用本专利公开方法分离、纯化得到的纤溶酶样品溶圈面积显著。标记为5、6、7分别以尿激酶对照的溶斑面积的2.4,4.6,6.3倍。其中:溶斑标记1、2、3为药材提纯前的样品(用量比例为1:2:3);标记4为尿激酶对照；标记5、6、7为提纯药材中纤溶酶的样品(用量同标记1、2、3，比例% 1:2:3);标记8、9为阴性对照。
【具体实施方式】
[0010]实施例1:
取蚂蚁100g，粉碎成粗粉，加6倍量水浸泡，搅拌至匀浆，取匀浆液置恒温水浴(37°C )、搅拌(100转/分)10小时，离心，弃去沉淀，取离心液先经I μ m孔径膜预滤，滤液经0.2 μ m孔径膜滤过除菌，除菌滤液再经超滤器(截留分子段3000-20000)，超滤浓缩约呈1:1 (即药材与药液体积比)，浓缩液冷冻干燥成粉，备用。取冻干粉配制成每Iml相当蚂蚁0.1g溶液，以尿激酶溶液为对照液，用纤维蛋白平板法测定，结果见表1。
[0011]表1蚂蚁纤溶活性测定结果 _
【权利要求】
1.一种提纯动物药材中纤溶酶并制备成中药组合物的方法，其特征在于: 利用膜分离技术分离提纯动物药材中纤溶酶成分，以及利用该成分制备中药组合物。
2.根据权利要求1所述的对动物药材中纤溶活性成分定量的方法，其特征在于: 其方法步骤: (一)称取蚂蚁或土鳖虫适量，粉碎至形成粗粉； (二)加6倍量水浸泡，搅拌至匀浆，取匀浆液置恒温水浴、搅拌； (三)离心，弃去沉淀； (四)取离心液经孔径膜过滤； (五)滤液经超滤器，超滤浓缩约呈1:1(即药材与药液体积比)，浓缩液冷冻干燥成粉，备用; (六)取冻干粉可单独使用或与其他成分配合成组合物再使用。
3.根据权利要求2所述的提纯动物药材中纤溶酶并制备成中药组合物的方法，其特征在于:所述超滤器的截留分子段3000-20000。
【文档编号】A61K9/19GK103656630SQ201210032462
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年9月11日 优先权日:2012年9月11日
【发明者】乐智勇, 夏培元, 刘任, 刘丽玲, 辛小娜, 张兵兵 申请人:江苏仁寿药业有限公司