专利名称：一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体及其制备方法
一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体及其制备方法技术领域：
本发明涉及生物医用药物载体技术领域，特别涉及一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体及其制备方法。背景技术：
药物载体的研究一直是医药领域的热点之一，其中新材料的开发与使用在药物载体研究中占据重要地位。
磁小体是由趋磁细菌体内合成的天然磁性纳米颗粒。作为趋磁细菌的核心结构， 磁小体由外部的脂质双分子层和内部的矿质晶体(Fe3O4或者Fe3S4)组成，在细胞内成链状排列。其中，磁小体表面的脂质双分子膜厚度为2-3nm，磁小体膜上有丰富的磷脂酰乙醇胺， 使其表面为电负性。在磁小体上膜上有大量的蛋白质和氨基酸，这些蛋白和氨基酸(如伯氨基等)在一些双向交联剂(戊二醛、乙二醛、二琥珀酰亚胺脂肪酸脂等)的作用下可被用于连结生物活性分子。而京尼平是一种从桅子果实中提取得到的生物交联剂，能与伯氨基发生反应，发生交联反应的条件温和，特别是其急性毒性远远低于戊二醛等化学交联剂。 与人工合成的磁性纳米颗粒相比，细菌体内合成的磁小体具有形态均一、粒径分布较窄、生物膜包裹和生物相容性好等特点，因而在生物医学、药学、生物材料等领域有广阔的应用前旦 -5^ O
甲氨蝶呤是一种临床用于抗代谢和抗叶酸的广谱抗肿瘤药物，对急性白血病、恶性淋巴瘤蕈样肉芽肿、多发性骨髓瘤、头颈部癌、支气管肺癌、各种软组织肉瘤、乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、睾丸癌、恶性葡萄胎、绒毛膜上皮癌等都适用。但是其水溶性较差，且对胃肠道、肝脏、泌尿生殖系统、呼吸系统、血液系统、中枢系统等有不同程度的毒副作用。采用京尼平将甲氨蝶呤负载到磁小体上，能够构建出一种天然的磁靶向抗肿瘤药物投递系统， 同时可以提高甲氨蝶呤的利用率和降低其对正常细胞和组织的毒副作用。
发明内容
本发明要解决的技术问题之一，在于提供一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体， 能够构建出一种天然的磁靶向抗肿瘤药物投递系统，同时可以提高甲氨蝶呤的利用率和降低其对正常细胞和组织的毒副作用。
本发明是这样实现技术问题之一的
—种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体，所述甲氨蝶呤是通过京尼平交联到磁小体的生物膜上。
进一步地,所述磁小体是从趋磁细菌体内提取获得。
本发明要解决的技术问题之二，在于提供一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的制备方法，该方法工艺简单，操作方便，制备过程不采用有毒的有机溶剂，绿色环保，是一种环境友好型的药物载体，因而实用性强且具有广阔的应用前景。
本发明是这样实现技术问题之二的
一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的制备方法，包括如下步骤
步骤10、将提纯并冷冻干燥后的磁小体颗粒分散一溶剂中，然后加入甲氨蝶呤溶液；
步骤20、将步骤10的混合液超声分散，充分混合；
步骤30、加入京尼平溶液，继续超声分散均匀；
步骤40、将步骤30的混合液放入摇床中交联，交联饱和后即获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体。
进一步地，所述磁小体是从趋磁细菌体内提取获得。
进一步地，步骤10中的溶剂为PBS缓冲液或生理盐水。
进一步地，步骤30的超声分散为间歇超声分散。
进一步地，所述步骤40具体为将步骤30的混合液放入温度为4 °C _40°C、转速为 500rpm以下的摇床中交联，交联饱和后即获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体。
本发明具有如下优点
磁小体具有天然的外部脂质双分子层和内部矿质晶体(Fe3O4或者Fe3S4)结构,是一种天然的靶向性载体；京尼平为天然提取的交联剂，毒性远低于戊二醛和许多其他常用交联剂，同时对消化系统、心血管系统和中枢神经系统疾病有显著疗效且还具有一定的抗炎和治疗软组织损伤作用，产品具有一定的介入治疗效果。此外，载体的制备过程中由于不采用有毒的有机溶剂，绿色环保，符合当前对环境友好型材料的要求。
制备的负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体无突释效应，载药量和包封率高，释放周期长，能够在两个月内持续释放近80%的药物；且能够构建出一种天然的磁靶向抗肿瘤药物投递系统，同时可以提高甲氨蝶呤的利用率和降低其对正常细胞和组织的毒副作用。该药物载体生物膜包裹和生物相容性好等特点，同时该制备方法工艺简单，操作方便，因而实用性强且具有广阔的应用前景。
具体实施方式
本发明涉及一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体，所述甲氨蝶呤是通过京尼平交联到磁小体的生物膜上；所述磁小体是从趋磁细菌体内提取获得。
本发明还涉及一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的制备方法，包括如下步骤
步骤10、将提纯并冷冻干燥后的磁小体颗粒分散一溶剂中，然后加入甲氨蝶呤溶液；
步骤20、将步骤10的混合液超声分散，充分混合；
步骤30、加入京尼平溶液，继续超声分散均匀；
步骤40、将步骤30的混合液放入摇床中交联，交联饱和后即获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体。
所述磁小体是从趋磁细菌体内提取获得。
较优的，步骤10中的溶剂为PBS缓冲液或生理盐水。
较优的，步骤30的超声分散为间歇超声分散。
较优的，所述步骤40具体为将步骤30的混合液放入温度为4°C _40°C、转速为 500rpm以下的摇床中交联，交联饱和后即获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体。
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例一
将提纯并冷冻干燥后的磁小体颗粒分散于pH为7. 4的PBS溶液中，获得浓度为 O. lmg/mL的磁小体溶液；然后加入等量的甲氨蝶呤溶液，超声分散(50W，5min)。充分混匀后,加入10mg/mL京尼平溶液,使混合液中京尼平浓度为lmg/mL,继续间歇超声分散(50W, 每次Imin,间隔5min),重复10次,再将混合液放入37°C、60rpm的摇床中交联24h。
最后，获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的载药量为48.6%，包封率为 94. 4%,O. 5小时的释放量为4. 8%，不存在突释效应，两个月时累积释放率为82. 4%。
实施例二
本实施例与实施例一基本相同，所不同的是混合液中京尼平浓度为O. 5mg/mL。
最后，获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的载药量为48.0%，包封率为 86. 6%,O. 5小时的释放量为5. 4%，不存在突释效应，两个月时累积释放率为82.1 %。
实施例三
本实施例与实施例一基本相同，所不同的是混合液中京尼平浓度为5mg/mL。
最后，获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的载药量为49.0%，包封率为 90. 4%,0.5小时的释放量为5. 3%，不存在突释效应，两个月时累积释放率为85. 1%。
实施例四
本实施例与实施例一基本相同，所不同的是交联反应时间为12h。
最后，获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的载药量为46. 3 %，包封率为86.1%，0. 5小时的释放量为5.5%，不存在突释效应，两个月时累积释放率为78.0%。
实施例五
本实施例与实施例一基本相同，所不同的是交联反应时间为48h。
最后，获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的载药量为46.5%，包封率为87.3%,O. 5小时的释放量为4. 0%，不存在突释效应，两个月时累积释放率为66. 1%。
本发明制备的负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体无突释效应，载药量和包封率高， 释放周期长，能够在两个月内持续释放近80%的药物；且能够构建出一种天然的磁靶向抗肿瘤药物投递系统，同时可以提高甲氨蝶呤的利用率和降低其对正常细胞和组织的毒副作用。该药物载体生物膜包裹和生物相容性好等特点，同时该制备方法工艺简单，操作方便， 因而具有实用性强及广阔的应用前景。
本发明使用的磁小体具有天然的外部脂质双分子层和内部矿质晶体(Fe3O4或者 Fe3S4)结构，是一种天然的靶向性载体；京尼平为天然提取的交联剂，毒性远低于戊二醛和许多其他常用交联剂，同时对消化系统、心血管系统和中枢神经系统疾病有显著疗效且还具有一定的抗炎和治疗软组织损伤作用，产品具有一定的介入治疗效果。此外，载体的制备过程中由于不采用有毒的有机溶剂，绿色环保，符合当前对环境友好型材料的要求。
虽然以上描述了本发明的具体实施方式
，但是熟悉本技术领域的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本发明的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本发明的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本发明的权利要求所保护的范围内。
权利要求
1.一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体，其特征在于所述甲氨蝶呤是通过京尼平交联到磁小体的生物膜上。
2.根据权利要求1所述的一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体，其特征在于所述磁小体是从趋磁细菌体内提取获得。
3.一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的制备方法，其特征在于包括如下步骤步骤10、将提纯并冷冻干燥后的磁小体颗粒分散一溶剂中，然后加入甲氨蝶呤溶液；步骤20、将步骤10的混合液超声分散，充分混合；步骤30、加入京尼平溶液，继续超声分散均匀；步骤40、将步骤30的混合液放入摇床中交联，交联饱和后即获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体。
4.根据权利要求3所述的一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的制备方法，其特征在于所述磁小体是从趋磁细菌体内提取获得。
5.根据权利要求3或4所述的一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的制备方法，其特征在于步骤10中的溶剂为PBS缓冲液或生理盐水。
6.根据权利要求3或所述的一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的制备方法，其特征在于步骤30的超声分散为间歇超声分散。
7.根据权利要求3或4所述的一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体的制备方法，其特征在于所述步骤40具体为将步骤30的混合液放入温度为4°C -40°C、转速为500rpm以下的摇床中交联，交联饱和后即获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体。
全文摘要
本发明提供一种负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体及其制备方法，所述甲氨蝶呤是通过京尼平交联到磁小体的生物膜上，所述磁小体是从趋磁细菌体内提取获得；制备方法如下步骤10、将提纯并冷冻干燥后的磁小体颗粒分散一溶剂中，然后加入甲氨蝶呤溶液；步骤20、将步骤10的混合液超声分散，充分混合；步骤30、加入京尼平溶液，继续超声分散均匀；步骤40、将步骤30的混合液放入摇床中交联，交联饱和后即获得负载甲氨蝶呤的磁小体药物载体。本发明能够构建出一种天然的磁靶向抗肿瘤药物投递系统，同时可以提高甲氨蝶呤的利用率和降低其对正常细胞和组织的毒副作用，该制备方法工艺简单，操作方便。
文档编号A61P35/00GK102989005SQ201210519308
公开日2013年3月27日 申请日期2012年12月5日 优先权日2012年12月5日
发明者刘源岗, 王士斌, 谢茂彬, 邓琼嘉, 陈爱政 申请人:华侨大学