针对肺炎链球菌（Streptococcus Pneumoniae）的疫苗和组合物的制作方法
【专利摘要】肺炎链球菌是主要的健康问题，特别是对非常年幼、年老或者免疫受损的患者。本披露尤其提供了某些针对肺炎链球菌高度有效的疫苗和药物组合物。这些抗原可以治疗性地或预防性地使用。
【专利说明】针对肺炎链球菌（Streptococcus Pneumon i ae)的疫苗和组
合物[0001]相关申请
[0002]本申请要求2011年I月20日提交的美国临时申请号61/434，818的申请日的权益。所提到的申请的整个传授内容通过引用明确地结合在此。
[0003]政府支持
[0004]这项工作是在政府支持下在由美国国家卫生研究院（National Institutes ofHealth)授予的许可号AI066013下进行的。因此，美国政府拥有本发明中的某些权利。
[0005]I.背景
[0006]肺炎球菌疾病一直是美国乃至全球范围内导致疾病和死亡的主要原因。每年数以百万计的肺炎、脑膜炎、菌血症以及中耳炎的病例都是由病原体肺炎链球菌感染所致。肺炎链球菌是具有荚膜的革兰氏阳性球菌，它在大约5% -10%的健康成人和20% -40%的健康儿童的鼻咽中都有定植。当肺炎链球菌被携带到咽鼓管、鼻窦、肺、血流、脑膜、关节间隙、骨骼以及腹膜腔中时，正常的定植变成有感染性的。肺炎链球菌具有若干毒力因子，它们使得有机体能够避开免疫系统。实例包括多糖荚膜，它防止被宿主免疫细胞吞噬；蛋白酶，它们抑制补体介导的调理作用；以及蛋白质，它们引起宿主细胞溶解。在多糖荚膜中，复合多糖的存在形成了将肺炎双球菌分成不同血清型的基础。到目前为止，已经鉴定出了肺炎链球菌的93种血清型。
[0007]已经使用不同的药物组合物来利用针对肺炎链球菌感染的免疫应答。多价肺炎球菌疫苗PPV-23被开发用来预防成人和老年群体中由于肺炎链球菌所造成的肺炎和其他侵袭性疾病。所述疫苗含有来自肺炎链球菌的23种血清型的荚膜多糖（CP)。作为T细胞非依赖性抗原，这些CP只诱导短暂的抗体应答，从而需要重复给药，这增加了免疫耐受性的风险。针对肺炎链球菌出现的抗体称为抗荚膜抗体，被认为对成人和具有免疫能力的个体具有保护作用。然而，年龄在2岁以下的儿童和免疫受损的个体，包括老年人，不能很好地对T细胞非依赖性抗原作出反应，并且因此，不能得到PPV-23的最佳保护。另一种肺炎链球菌疫苗沛儿（Prevnar)包括与白喉类毒素蛋白质结合的来自7种肺炎链球菌菌株的细菌多糖。这种疫苗诱导B和T细胞应答。然而，因为它只提供针对7种肺炎球菌血清型的保护，所以血清型替换会致使沛儿失效。血清型替换已经在若干临床试验和流行病学研究中得到证明，从而需要开发这些疫苗的不同制剂。实例是最近引进的针对13种肺炎球菌血清型的沛儿13(PreVnarl3)。另外，这两种沛儿制剂制造起来昂贵，大大地限制了它们在发展中世界的可供使用性。由23种经纯化的但未结合的多糖组成的PPV-23具有更广泛的覆盖范围，但对处于肺炎球菌疾病的最高风险中的群体，即年龄在2岁以下的儿童不提供保护。
[0008]因此，仍然需要设计比当前策略提议更有效的药物组合物。具体来说，这些组合物需要合并新颖的或特异性抗原来引发针对肺炎链球菌的免疫应答。
[0009]II.
【发明内容】
[0010]肺炎链球菌是主要的健康问题，特别是对非常年幼、年老或者免疫受损的患者。虽然肺炎链球菌的DNA和蛋白质序列信息已经知道了一段时间，并且研究人员长期以来已经尝试产生针对肺炎链球菌的疫苗，但是主要问题是如何从肺炎链球菌基因组中的约2100个基因中鉴定出保护性多肽。本申请呈现了被设计用来鉴定肺炎链球菌基因组中最具免疫原性蛋白质的全基因组筛选的结果。这一筛选所产生的若干命中物已经在小鼠模型中显示了针对肺炎链球菌定植的保护，以及在一些情况下针对定植和肺炎链球菌诱导的败血症的保护。因此，本披露尤其提供了某些针对肺炎链球菌的高度有效的疫苗。这些疫苗可以用于治疗性的或预防性的用途。本披露还提供了特异性抗原和使用这些抗原来引发针对肺炎链球菌的免疫应答的方法。
[0011]在某些方面，本披露提供了疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和具有包含SEQID NO :265或268 (或由其组成）的氨基酸序列或其免疫原性片段的多肽。在一些实施例中，所述多肽包含外源信号序列。举例来说，所述多肽可以具有包含SEQ ID NO :266的氨基酸序列或其免疫原性片段。所述多肽可以具有由以下各项组成的氨基酸序列：SEQ ID NO：265,266 或 268。
[0012]在一些实施例中，所述疫苗制剂进一步包含第一多肽，它具有包含SEQ IDNO ：1-23,267以及269-270之一（或由其组成）的氨基酸序列或其免疫原性片段。在某些实施例中，所述疫苗制剂进一步包含第二多肽，它具有包含SEQ IDNO : 1-23、267以及269-270中的任一个的氨基酸序列或其免疫原性片段。
[0013]在某些实施例中，所述第一和所述第二多肽属于（i)-(vi)的不同组：（i)SEQIDNO :1或其免疫原性片段，(ii)SEQ ID NO :2-5和14-17之一或其免疫原性片段，(iii)SEQID NO ：6-7和18-19之一或其免疫原性片段，(iv) SEQ ID NO ：8或其免疫原性片段，(v) SEQID NO :9-10 和 20-21 之一或其免疫原性片段，以及（vi)SEQ ID NO : 11_13、267 以及 269-270之一或其免疫原性片段。
[0014]在一些此类实施例中，所述疫苗制剂包含具有包含SEQ ID N0:6、SEQ IDNO :7、SEQID NO :9或SEQ ID NO : 10的氨基酸序列的多肽。在一些实施例中，所述疫苗制剂包含由SEQ ID NO :6或7组成的多肽和由SEQ ID NO ：9或10组成的多肽。
[0015]在此的方面或实施例中的任一个中，所述疫苗制剂可以包含SEQ ID NO =265,266或268的多肽，它是具有从I到20个氨基酸残基从N末端、C末端或两个去除的截短片段。在一些实施例中，所述疫苗制剂实质上不含除具有包含SEQ ID NO :1-21和265-270中的任一个的氨基酸序列的多肽外的其他肺炎链球菌多肽。
[0016]在某些实施例中，所述疫苗制剂包含一种或多种多肽，它或它们具有包含SEQ IDNO ：22或23的氨基酸序列或其免疫原性片段。
[0017]在另一个方面，本发明提供了多种疫苗制剂，它们包含已知的肺炎链球菌抗原，如pneumolysoid、胆碱结合蛋白A(CbpA)或肺炎球菌表面蛋白A(PspA)或其衍生物；以及来自表1或表2的一种、两种或三种多肽。示例性疫苗制剂包含：（i)多肽，它具有包含SEQ IDNO :1-23和265-270中的一个或多个（或由其组成）的氨基酸序列或其免疫原性片段，(ii)pneumolysoid,以及（iii)药学上可接受的载体。另一种示例性疫苗制剂包含：（i)多肽，它具有包含SEQ IDNO ：1-23和265-270中的一个或多个（或由其组成)的氨基酸序列或其免疫原性片段，（ii)CbpA或其衍生物，以及（iii)药学上可接受的载体。另一种示例性疫苗制剂包含：（i)多肽，它具有包含SEQ ID NO :1-23和265-270中的一个或多个（或由其组成）的氨基酸序列或其免疫原性片段，（ii)PspA或其衍生物，以及（iii)药学上可接受的载体。在一些此类实施例中，（i)的多肽包含SEQ ID NO :2-5、6、7、9-13以及265-267中的任一个。在一些实施例中，所述疫苗制剂进一步包含第二多肽，它具有包含SEQ ID NO：1-23和265-270之一的氨基酸序列。在一些实施例中，pneumolysoid是PdT、Pd_A、Pd_B、rPd2、rPd3、Ply8、A 6PLY、L460D (参见例如 US2009/0285846 和 L.米切尔(L. Mitchell),对肺炎链球菌pneumolysoid的保护性免疫应答（Protective Immune Responses toStreptococcus pneumoniae Pneumolysoids), ASM2011 会议摘要，2011)或其变体。在一些实施例中，PspA的衍生物包含PspA的脯氨酸富集区的全部或片段。
[0018]在某些实施例中，所述多肽与免疫原性载体结合。在一些实施例中，所述疫苗制剂包含至少脂化多肽。
[0019]在一些实施例中，所述疫苗制剂进一步包含结合的肺炎链球菌多糖。这些结合多糖可以例如如美国专利5，623，057、美国专利5，371，197或PCT/US2011/023526中所述。
[0020]在一些实施例中，所述疫苗制剂进一步包含佐剂。所述佐剂可以是例如toll样受体（TLR)激动剂。所述佐剂可以是例如明帆。在一些实施例中，所述疫苗制剂包含1-1000 u g的每种多肽和1-250 u g的所述佐剂。
[0021]在某些实施例中，所述疫苗制剂所诱导的Th17细胞应答比通过对照组无关抗原在接触Th17细胞之后所诱导的Th17细胞应答大至少I. 5倍。在一些实施例中，所述疫苗制剂在未感染的受试者中抑制了被肺炎链球菌感染。在某些实施例中，所述疫苗制剂抑制了肺炎链球菌在个体中定植。在一些实施例中，所述疫苗制剂抑制肺炎链球菌症状或后遗症。举例来说，所述疫苗制剂抑制肺炎链球菌诱导的败血症。
[0022]在某些方面，本披露提供了用于治疗罹患或易受肺炎链球菌感染的受试者的方法，它包含给予有效量的在此描述的这些疫苗制剂中的任一种。
`[0023]在一些实施例中，所述方法在未感染的受试者中抑制了被肺炎链球菌感染。在一些实施例中，所述方法抑制了肺炎链球菌在受试者中定植。在一些实施例中，所述方法抑制肺炎链球菌症状或后遗症。示例性后遗症是败血症。
[0024]在某些实施例中，所述方法用一个剂量治疗受试者。在其他实施例中，所述方法用两个或三个剂量治疗受试者。在一些实施例中,所述方法在三个剂量内治疗受试者。
[0025]在某些实施例中，所述受试者是人类。
[0026]本披露提供了例如疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和一种或多种多肽，所述一种或多种多肽具有包含SEQ ID NO :1-13、265、266以及267中的任一个的氨基酸序列或其免疫原性片段。
[0027]本披露还提供了疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和至少一种多肽，所述至少一种多肽具有包含SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :10或SEQ ID NO :265的氨基酸序列或其免疫原性片段。本披露进一步提供了疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和至少一种多肽，所述至少一种多肽具有由SEQ ID NO :7、SEQID NO ：9或SEQ ID NO :265组成的氨基酸序列或其免疫原性片段。
[0028]另外，本申请提供了疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和一种或多种多肽，所述一种或多种多肽具有包含SEQ ID N0:14-23、268、269以及270中的任一个的氨基酸序列或其免疫原性片段。
[0029]本披露进一步提供了免疫原性组合物，它包含药学上可接受的载体和两种或更多种多肽，所述两种或更多种多肽具有包含SEQ ID N0:l-13、265、266以及267中的任一个的氨基酸序列或其免疫原性片段。
[0030]本披露还提供了疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和两种或更多种多肽，所述两种或更多种多肽具有包含SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :10或SEQ IDNO :265的氨基酸序列或其免疫原性片段。本披露进一步提供了疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和两种或更多种多肽，所述两种或更多种多肽具有由SEQ ID N0:7、SEQ ID NO :9或SEQ ID NO :265组成的氨基酸序列或其免疫原性片段。本披露还提供了疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和两种或更多种多肽，所述两种或更多种多肽具有包含SEQ ID N0:6、SEQ ID NO :9以及SEQ ID NO :265的氨基酸序列或其免疫原性片段。另外，本披露提供了疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和两种或更多种多肽，所述两种或更多种多肽具有包含SEQ ID N0:7、SEQ ID NO :10以及SEQ ID NO :265的氨基酸序列或其免疫原性片段。在一些实施例中，包含SEQ ID NO :265的氨基酸序列包含外源信号序列。
[0031]本披露还提供了疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和三种或更多种多肽，所述三种或更多种多肽具有对应地包含SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :10以及SEQ ID NO :265的氨基酸序列或其免疫原性片段。本披露进一步提供了疫苗制剂，它包含药学上可接受的载体和三种或更多种多肽，所述三种或更多种多肽具有对应地由SEQ ID NO :7、SEQ ID NO ：9以及SEQ ID NO :265组成的氨基酸序列或其免疫原性片段。
[0032]III.附图简要说明
[0033]图I显示了由小鼠的血液样品所产生的IL-17的浓度，这些小鼠用一种或多种指定蛋白质和霍乱毒素佐剂进行免疫，接着用杀死的无荚膜的全细胞肺炎链球菌进行刺激，如实例5中所述。左图以散点图形式显示了数据，并且右图显示了每种样品的平均值和标准偏差。免疫组“A113”表示用SP2108、SP0148以及SP1634的组合免疫的动物。
[0034]图2显示了由小鼠的血液样品所产生的IL-17的浓度，这些小鼠用一种或多种指定蛋白质和霍乱毒素佐剂进行免 疫，接着用三种蛋白质（SP2108、SP0148以及SP1634)的组合进行刺激，如实例5中所述。
[0035]图3显示了从小鼠的洗鼻液中获得的肺炎链球菌菌落的数目，这些小鼠用一种或多种指定蛋白质和霍乱毒素佐剂免疫，接着通过鼻内给予肺炎链球菌进行攻击，如实例5中所述。003表示对照组无关抗原。
[0036]图4显示了由小鼠的血液样品所产生的IL-17的浓度，这些小鼠用一种或多种指定蛋白质和霍乱毒素佐剂进行免疫，接着用杀死的无荚膜的全细胞肺炎链球菌进行刺激，如实例6中所述。
[0037]图5显示了由小鼠的血液样品所产生的IL-17的浓度，这些小鼠用一种或多种指定蛋白质和霍乱毒素佐剂进行免疫，接着用一种或多种指定蛋白质进行刺激，如实例6中所述。
[0038]图6显示了从小鼠的洗鼻液中获得的肺炎链球菌菌落的数目，这些小鼠用一种或多种指定蛋白质和霍乱毒素佐剂进行免疫，接着通过鼻内给予肺炎链球菌进行攻击，如实例6中所述。基因名称为US12(NP_044543. I、NC_001798. I ;在所述图中显示为003)的HSV-2蛋白ICP47和卵白蛋白（OVA)表示对照组抗原。
[0039]图7显示了从小鼠的洗鼻液中获得的肺炎链球菌菌落的数目，这些小鼠用一种或多种指定蛋白质和霍乱毒素佐剂进行免疫，接着通过鼻内给予肺炎链球菌进行攻击，如实例7中所述。
[0040]图8显示了从BALB/c小鼠的洗鼻液中获得的肺炎链球菌菌落的数目，这些小鼠用一种或多种指定蛋白质和霍乱毒素佐剂进行免疫，接着通过鼻内给予肺炎链球菌进行攻击，如实例8中所述。
[0041]图9显示了由小鼠的血液样品所产生的IL-17A的浓度，这些小鼠用指定蛋白质和霍乱毒素佐剂进行免疫，接着用免疫蛋白质（左图）或杀死的无荚膜的全细胞肺炎链球菌(右图）进行刺激，如实例9中所述。
[0042]图10显示了从小鼠的洗鼻液中获得的肺炎链球菌菌落的数目，这些小鼠用指定蛋白质和霍乱毒素佐剂进行免疫，接着通过鼻内给予肺炎链球菌进行攻击，如实例10中所述。
[0043]图11显示了小鼠的存活情况，这些小鼠用指定蛋白质和佐剂明矾进行免疫，接着用肺炎链球菌进行吸气攻击，如实例11中所述。
[0044]图12显示了小鼠的存活情况，这些小鼠用指定蛋白质和佐剂明矾进行免疫，接着用肺炎链球菌进行吸气攻击，如实例12中所述。
[0045]图13显示了从小鼠的洗鼻液中获得的肺炎链球菌菌落的数目，这些小鼠用指定蛋白质和霍乱毒素佐剂进行免疫，接着通过鼻内给予肺炎链球菌进行攻击，如实例13中所述。
[0046]图14显示了由小鼠的血液样品所产生的IL-17A的浓度，这些小鼠用指定蛋白质和明矾进行免疫，接着用左上方指定的蛋白质进行刺激，如实例14中所述。
[0047]图15显示了从小鼠的洗鼻液中获得的肺炎链球菌菌落的数目，这些小鼠用指定蛋白质和明矾或者用杀死的无荚膜的全细胞肺炎链球菌加明矾（WCV)进行免疫，接着通过鼻内给予肺炎链球菌进行攻击，如实例15中所述。
[0048]图16显示了从小鼠的洗鼻液中获得的肺炎链球菌菌落的数目，这些小鼠用指定蛋白质和明矾或者用杀死的无荚膜的全细胞肺炎链球菌加明矾（WCV)进行免疫，接着通过鼻内给予肺炎链球菌进行攻击，在如实例16中所述的两个合并研究中。
[0049]图17显示了从小鼠的洗鼻液中获得的肺炎链球菌菌落的数目，这些小鼠用指定蛋白质和明矾或者用杀死的无荚膜的全细胞肺炎链球菌加明矾（WCB)进行免疫，接着通过鼻内给予肺炎链球菌进行攻击，如实例17中所述。
[0050]图18显示了小鼠的存活情况，这些小鼠用对指定蛋白质有特异性的抗体或血清注射，接着用肺炎链球菌进行吸气攻击，如实例18中所述。
[0051]图19显示了在六个分开的吸气攻击研究中受保护免于发生败血症的动物的百分比，在实例12和18中更详细地描述了这些研究中的两个。
[0052]IV.详细说明
[0053]A.用于肺炎链球菌疫苗和免疫原性组合物的特异性多肽和核酸
[0054]本申请所述的肺炎链球菌疫苗包括一种或多种如表1中所列的多肽或者基因，或下文所述的它们的变体或片段。所述疫苗可以包括包含表1的序列或者其变体或者免疫原性片段的多肽，或者由表1的序列或其变体或者免疫原性片段组成的多肽。每种基因和多肽的DNA和蛋白质序列可以通过在公用数据库Entrez Gene (在万维网上的NCBI NIH网站,www. ncbi. nlm. nih. gov/sites/entrez ? db = gene)中在肺炎链球菌 TIGR4 基因组中 搜索基因座标签找到，并且所指定的序列也包括在本申请中。
[0055]表1.用于疫苗制剂的免疫原性多肽
[0056]
【权利要求】
1.疫苗制剂，其包含药学上可接受的载体和多肽，所述多肽具有包含SEQID NO:265或268的氨基酸序列或其免疫原性片段。
2.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述多肽包含外源信号序列。
3.如权利要求2所述的疫苗制剂，其中所述多肽具有包含SEQID N0:266的氨基酸序列或其免疫原性片段。
4.如权利要求1所述的疫苗制剂，其中所述多肽具有由SEQID NO:265或268组成的氨基酸序列。
5.如权利要求1所述的疫苗剂剂，其中所述多肽具有由SEQID N0:266组成的氨基酸序列。
6.如权利要求1所述的疫苗制剂，进一步包含第一多肽，所述第一多肽具有包含SEQID NO: 1-23,267以及269-270之一的氨基酸序列或其免疫原性片段。
7.如权利要求6所述的疫苗制剂，进一步包含第二多肽，所述第二多肽具有包含SEQID NO: 1-23,267以及269-270中的任一个的氨基酸序列或其免疫原性片段。
8.如权利要求7所述的疫苗制剂，其中所述第一和所述第二多肽属于（i)-(viii)的不同组： (i)SEQID NO: I或其免疫原性片段， (ii)SEQID NO:2-5 14-1 7之一或其免疫原性片段， (iii)SEQID NO:6-7 18-19之一或其免疫原性片段， (iv)SEQ ID NO:8或其免 疫原性片段， (V)SEQ ID NO:9-10和20-21之一或其免疫原性片段， (vi)SEQID NO: 11-13,267以及269-270之一或其免疫原性片段， (vii)SEQID NO:22或其免疫原性片段，以及 (viii)SEQID NO:23或其免疫原性片段。
9.如权利要求6所述的疫苗制剂，包含多肽，所述多肽具有包含SEQID NO: 6的氨基酸序列。
10.如权利要求6所述的疫苗制剂，包含多肽，所述多肽具有包含SEQID NO:7的氨基酸序列。
11.如权利要求6所述的疫苗制剂，包含多肽，所述多肽具有包含SEQID NO:9的氨基酸序列。
12.如权利要求6所述的疫苗制剂，包含多肽，所述多肽具有包含SEQID NO: 10的氨基酸序列。
13.如权利要求7所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂包含由SEQID NO:6或7组成的多肽和由SEQ ID NO:9或10组成的多肽。
14.如权利要求1到13中任一项所述的疫苗制剂，其中SEQID NO:265,266或268的多肽是具有1-20个氨基酸残基从N末端、C末端、或两个末端去除的截短片段。
15.如权利要求1到14中任一项所述的疫苗制剂，实质上不含除了具有包含SEQIDNO: 1-23和265-270中的任一个的氨基酸序列的多肽之外的其他肺炎链球菌多肽。
16.如权利要求1所述的疫苗制剂，进一步包含一种或多种多肽，所述一种或多种多肽具有包含SEQ ID NO:22或23的氨基酸序列或其免疫原性片段。
17.如权利要求1到16中任一项所述的疫苗制剂，其中一种或多种多肽被结合到免疫原性载体。
18.如权利要求1到17中任一项所述的疫苗制剂，包含至少一种脂化多肽。
19.如权利要求1到18中任一项所述的疫苗制剂，进一步包含佐剂。
20.如权利要求19所述的疫苗制剂，其中所述佐剂是toll样受体（TLR)激动剂。
21.如权利要求19所述的疫苗制剂，其中所述佐剂是明矾。
22.如权利要求19所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂包含I-1000iig的每种多肽和1-250 Ug的所述佐剂。
23.如权利要求1到22中任一项所述的疫苗制剂，其在接触Th17细胞之后诱导比通过对照无关抗原所诱导的Th17细胞应答大至少I. 5倍的Th17细胞应答。
24.如权利要求1到23中任一项所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂在未感染的受试者中抑制被肺炎链球菌感染。
25.如权利要求1到24中任一项所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂抑制肺炎链球菌在个体中定植。
26.如权利要求1到25中任一项所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂抑制肺炎链球菌症状。
27.如权利要求26所述的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂抑制肺炎链球菌诱导的败血症。
28.用于治疗罹患或易受肺炎链球菌感染的受试者的方法，包括给予有效量的根据权利要求I到27中任一项所述的疫苗制剂。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述方法在未感染的受试者中抑制被肺炎链球菌感染。
30.如权利要求28所述的方法，其中所述方法抑制肺炎链球菌在受试者中定植。
31.如权利要求28所述的方法，其中所述方法抑制肺炎链球菌症状。
32.如权利要求28所述的方法，其中所述方法抑制肺炎链球菌诱导的败血症。
33.如权利要求28所述的方法，其中所述方法用一个剂量治疗受试者。
34.如权利要求28所述的方法，其中所述方法在三个剂量之内治疗受试者。
35.如权利要求28所述的方法，其中所述受试者为人类。
【文档编号】A61K38/00GK103501809SQ201280006067
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2012年1月20日 优先权日:2011年1月20日
【发明者】T·吉拉恩, R·马利 申请人:健诺西生物科学公司, 儿童医学中心有限公司