癌症的组合治疗的制作方法
【专利摘要】一种试剂，其包含具有功能基因的载体、可被所述基因的表达产物转化为细胞毒性试剂的前药以及另外的细胞毒性试剂，其作为组合制品用于在癌症或特征为受损的错配修复（MMR）途径的疾病的治疗中同时、顺次或分开使用，其中所述给药方案包含在不晚于所述前药治疗完成后7天开始所述另外的细胞毒性试剂治疗。
【专利说明】癌症的组合治疗
【技术领域】
[0001]本发明涉及用于治疗癌症或特征为受损的错配修复(MMR)途径的疾病的药物组
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【背景技术】
[0002] I型单纯疱疹病毒，胸苷激酶(HSV-tk)基因治疗是基于可将非毒性化合物例如更昔洛韦(gancivlovir，GCV)转化为毒性代谢物的前药激活酶。HSV_tk/GCV造成的细胞破坏是细胞周期依赖性的，其中仅正在分裂的细胞受影响。这在脑癌症基因治疗中尤其有利，其中正在迅速分裂的肿瘤细胞被非分裂的正常脑细胞包围。通过HSV-tk进行的治疗在EP1135513 中公开。
[0003]替莫唑胺(Temozolomide，TMZ，咪唑四嗪酮)是可以穿过血脑屏障(BBB)的口服烷化剂。替莫唑胺是口服的烷化剂，其是达卡巴嗪(dacarbazine)的衍生物。TMZ在生理pH下经历自发水解为其活性形式3-甲基-(三氮烯-1-基)咪唑-4羧酰胺(MTIC)。细胞毒性的主要模式是通过在鸟嘌呤的O6-位置上添加甲基(06-mG)。
[0004]O6-HiG自身对细胞是没有毒性的。但是，由于通过错配修复(MMR)途径进行修复时无效的重复周期，O6-HiG将变为细胞毒性的。这将最终导致DNA链断裂。已知，当不存在起作用的MGMT修复途径时(在50%的恶性胶质瘤中发生)，有功能的MMR途径对于使细胞对TMZ敏感是必要的。此外，MMR途径的缺陷可以导致对烷化剂例如TMZ几乎100倍的抗性。
[0005]Rainov et al (Cancer Gene Therapy, Vol8, No9, 2001:pp662~668)的论文报告了一些关于HSV-tk/GCV基因治疗和TMZ化学治疗的组合的实验，但是其数据没有显示出任何令人信服的关于协同作用的证据。
【发明内容】
[0006]本发明是基于这样的发现，即HSV-tk基因治疗增加了关键错配修复(MMR)途径蛋白即MSH2和MLHl的基因表达。这导致了以下发现:HSV_tk/GCV基因治疗使细胞对化学治疗剂例如替莫唑胺(TMZ)敏感。
[0007]由本发明人设计的研究确认了，载体/前药基因治疗(例如HSV-tk/GCV)和细胞毒性试剂(cytotoxic agent)的组合,与单独使用各个组分，即使用化学治疗或载体/前药基因治疗时相比，对某些疾病有增强的效力(测试了癌症，但认为这适用于所有特征为受损的MMR途径的疾病)。
[0008]还发现，这些组分的给药方案对于本发明中观察到的令人惊奇的技术效果即协同作用是关键的。本发明人已发现由载体/前药基因治疗造成的MMR途径的上调需要大约2天，并且在停止前药治疗后持续最多7天。因此，为了看到协同作用，有必要在不晚于完成前药治疗后7天开始给予所述细胞毒性试剂。
[0009]此外，当要治疗的病症的特征为受损的MMR途径时，据认为仅通过给予所述载体/前药基因治疗就可以达到治疗益处。[0010]在第一方面，本发明的特征在于新的给药方案。因此，根据第一方面，本发明为一种试剂，包含具有功能基因的载体、可被所述基因的表达产物转化为细胞毒性试剂的前药以及另外的细胞毒性试剂，所述试剂作为组合制品用于在癌症或特征为受损的错配修复(MMR)途径的疾病的治疗中同时、顺次或分开使用，其中所述给药方案包含在给予所述载体后开始前药治疗，以及在不晚于所述前药治疗完成后7天开始另外的细胞毒性试剂治疗。
[0011]根据第二方面，本发明为一种试剂，包含具有功能基因的载体以及可被所述基因的表达产物转化为细胞毒性试剂的前药，所述试剂作为组合制品用于在特征为受损的错配修复(MMR)途径的疾病的治疗中同时、顺次或分开使用。
[0012]根据第三方面，一种治疗多形性成胶质细胞瘤的方法，包括以下步骤:
[0013]a.在人患者中诊断多形性成胶质细胞瘤；
[0014]b.在所述患者中鉴定至少一个多形性成胶质细胞瘤肿瘤；
[0015]c.切除所述多形性成胶质细胞瘤肿瘤以除去至少一部分所述多形性成胶质细胞瘤肿瘤并暴露瘤床组织；
[0016]d.向所述瘤床组织给予具有编码胸苷激酶的基因的AdHSV-tk腺病毒载体，籍此所述AdHSV-tk腺病毒载体转染所述瘤床组织并且所述瘤床组织表达所述编码胸苷激酶的基因;
[0017]e.在向所述人患者给予所述腺病毒载体后约5至约19天内，还向所述人患者给予更昔洛韦；
[0018]f.经口或通过静脉输注向所述人患者给予替莫唑胺。 【专利附图】
【附图说明】
[0019]图1示出了对于不同的HSV-tk/GCV和TMZ/给药方案，在第28天和第42天时的平均肿瘤体积。
[0020]图2示出了不同的HSV-tk/GCV和TMZ给药方案的生存率。
【具体实施方式】
[0021]本发明需要给予具有功能基因的载体以及可被所述基因的表达产物转化为细胞毒性试剂的前药。优选地，所述功能基因为功能性胸苷激酶基因。优选地，所述前药为更昔洛韦或其类似物。应理解所述前药治疗应在已经给予所述载体后开始。优选地在给予所述载体后5-19天给予所述前药。
[0022]或者，自杀基因例如胞嘧啶脱氨酶(deminase)、细胞色素P450、大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶以及羧肽酶G2，适用于本发明。这些自杀基因可分别地与适合的前药例如5-氟胞嘧唳、环磷酰胺、6-甲基嘌呤(methylepurine)或F-araAMP或4-苯甲酰基-L-谷氨酸(CMDA)或它们的化学类似物组合使用。在一个实施方案中，所述自杀基因即所述载体为胞嘧啶脱氨酶，所述前药为5-氟胞嘧啶，适用于本发明。
[0023]所述载体优选局部给予。当治疗用于癌性肿瘤时，例如可将所述载体直接给予至该癌性肿瘤中。或者，优选手术除去所述癌性肿瘤，然后将所述载体给予至所述肿瘤腔壁中。
[0024]本文使用的术语“肿瘤腔壁”意指除去肿瘤(或该肿瘤的一部分)后剩下的表观健康组织(即在外科医生看来是表观健康的组织)区域。虽然所述组织表观上健康，但其可能含有恶性细胞。术语“肿瘤腔壁”是指非肿瘤团块的区域。
[0025]优选地，所述肿瘤切除尽可能是完全的，即多于90%、95%或98%。在优选的实施方案中，通过注射将所述载体给予至所述肿瘤腔壁约Icm (优选0.5-5cm，更优选0.8-3cm)深处。这确保了所述载体进入健康组织，即靶向主要健康的细胞(但是应理解一些恶性细胞可能位于所述表观健康组织的区域)
[0026]用于转移所述基因的载体可以是任何病毒载体。但是，优选地，其源自腺病毒或慢病毒。更优选地，其源自腺病毒。
[0027]本发明为组合治疗，包括给予基因治疗载体、前药和细胞毒性试剂。所述细胞毒类试剂优选地不同于由所述前药转化(例如更昔洛韦的转化)产生的细胞毒性试剂，但是除此之外所述细胞毒性试剂的确切性质是不重要的，但其应该优选地为其功能被受损的MMR途径损害的药物。一些优选的细胞毒性试剂为:
[0028]a)氯乙基化试剂例如卡莫司汀、洛莫司汀、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀或链佐星；
[0029]b)非经典的烧化剂例如丙卡巴肼(procarbazine);
[0030]c)甲基化三嗪例如替莫唑胺、达卡巴嗪、六甲蜜胺(altretamine)或二溴甘露醇；
[0031]d)DNA交联剂例如顺钼、卡钼、奈达钼、奥沙利钼、三钼(triplatin)、四硝酸酯或沙钼；
[0032]e)拓扑异构酶II抑制剂例如多柔比星、表柔比星、阿柔比星、柔红霉素、伊达比星、氨柔比星、吡柔比星、戍柔比星或佐柔比星、米托蒽醌或匹杉琼(pixantrone)；
[0033]f)拓扑异构酶I抑制剂例如托泊替康、喜树碱、伊立替康、鲁比替康(rubitecan)或贝洛替康(belotecan)；
[0034]g)抗代谢物(喃唳(pyrmidine)类似物)例如5_FU、卡培他滨、替加氟、卡莫氟、氟尿苷或阿糖胞苷；
[0035]h)抗代谢物(嘌呤类似物)例如6-硫鸟嘌呤或巯基嘌呤；或
[0036]i)细胞毒性DNA烷化剂。
[0037]最优选的细胞毒性试剂为替莫唑胺(TMZ)。
[0038]为实现载体/前药/细胞毒之间的协同作用，有必要使MMR途径上调，因此给予方案/给药方案是关键性的。
[0039]本文使用的“细胞毒性治疗”和“前药治疗”意指细胞毒性和前药的给药方案、治疗过程。这些治疗持续指定的时间。但是所述载体仅需要给予一次。
[0040]优选地，所述另外的细胞毒性试剂治疗在不晚于前药治疗完成后7天开始。更优选地，所述细胞毒性试剂治疗在不晚于前药治疗完成后6、5、4、3、2或I天开始。优选地，所述细胞毒性试剂治疗在前药治疗完成后I天以内开始。
[0041]为了免生疑问，细胞毒性治疗在前药治疗完成后立即开始的情况以及细胞毒性治疗在前药治疗完成前开始的情况(即存在同时给予的时期)都包括在本发明范围内。
[0042]所述细胞毒性治疗和前药治疗可以同时开始。但是优选地，所述细胞毒性试剂治疗在不早于前药治疗开始后2天开始。这可实现最有效的给药，因为所述细胞毒性和前药仅在MMR途径已经被上调后才组合。这是最有效的给药方案。[0043]优选地，所述前药治疗和另外的细胞毒性试剂治疗重叠。更优选地，所述治疗重叠至少3天。更优选地,它们重叠至少7、10、14或18天。
[0044]优选地，所述前药治疗持续10-20天。更优选地，其持续11-19天、12-18天或13-17天。优选地，其持续14天。
[0045]在一个优选的实施方案中，所述前药治疗在给予载体(基因转移)后2-5天时开始。更优选地，所述前药治疗在基因转移后5天时开始。
[0046]优选地，所述另外的细胞毒性治疗应该最早在开始前药治疗后2天时开始，并且最晚在停止前药治疗后7天时开始。
[0047]所述另外的细胞毒性试剂治疗应该最早与前药治疗同时开始。应该理解，优选地，所述另外的细胞毒性试剂治疗在不早于前药治疗开始后2天开始。
[0048]MMR途径的上调对于本发明是关键的。因此，应该理解，本发明的试剂可用于治疗许多病症。这些病症的实例为癌症、光化性角化病、翼状胬肉糖尿病视网膜病变、动脉粥样硬化、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、结节病、特发性肺纤维化、类风湿性关节炎、眼的假鳞片样脱皮综合征以及阿尔茨海默病。
[0049]最优选的治疗用于癌症。优选地，所述治疗用于癌性肿瘤，例如恶性胶质瘤或前列腺肿瘤。本发明的试剂可用于治疗特征为正常或受损的MMR途径的癌症。
[0050]在另外的优选实施方案中，当用于治疗癌性肿瘤时，本发明的试剂还包括给予辐射。所述辐射优选地在给予所述载体和前药后给予，并且辐射治疗优选地与细胞毒性化学治疗试剂同时开始(治疗优选地同时进行)。
[0051]如下研究阐述了本发明。
[0052]班究
[0053]在大鼠胶质瘤模型中进行了关于肿瘤生长速率的研究。有6个患者组。给予的试剂和给药方案的详情在下表1中示出。
[0054]表1
[0055]
【权利要求】
1.一种试剂，其包含具有功能基因的载体、可被所述基因的表达产物转化为细胞毒性试剂的前药以及另外的细胞毒性试剂，其作为组合制品在癌症或特征为受损的错配修复(MMR)途径的疾病的治疗中同时、顺次或分开使用，其中所述给药方案包含在不晚于所述前药治疗完成后7天开始所述另外的细胞毒性试剂治疗。
2.权利要求1的试剂，其中所述另外的细胞毒性试剂治疗在不早于前药治疗开始后2天开始。
3.权利要求1或2的试剂，其中所述前药治疗和另外的细胞毒性试剂治疗重叠。
4.权利要求3的试剂，其中所述治疗重叠至少3天。
5.前述权利要求任一项的试剂，其中所述前药治疗持续10-20天。
6.前述权利要求任一项的试剂，其中所述另外的细胞毒性试剂治疗持续最长达50天。
7.前述权利要求任一项的试剂，其中所述特征为受损的错配修复途径的疾病为光化性角化病、翼状胬肉糖尿病视网膜病变、动脉粥样硬化、哮喘、慢性阻塞性肺疾病、结节病、特发性肺纤维化、类风湿性关节炎、眼的假鳞片样脱皮综合征、阿尔茨海默病或癌症。
8.前述权利要求任一项的试剂，其中所述治疗用于癌症。
9.权利要求8的试剂，其中所述治疗用于癌性肿瘤例如恶性胶质瘤或前列腺肿瘤。
10.权利要求8或9的试剂，其中将所述载体直接给予至所述肿瘤中，或给予至在至少部分切除肿瘤后形成肿瘤腔壁的健康组 织中。
11.权利要求10的试剂，其中所述切除为至少95%完全的。
12.权利要求8-11任一项的试剂，其中将所述载体给予至所述肿瘤腔壁中，优选在约Icm的深度。
13.权利要求8-12任一项的试剂，其额外地包括向所述肿瘤给予辐射。
14.前述权利要求任一项的试剂，其中所述功能基因为胸苷激酶。
15.前述权利要求任一项的试剂，其中所述载体源自腺病毒或慢病毒。
16.前述权利要求任一项的试剂，其中所述前药为更昔洛韦或其类似物。
17.前述权利要求任一项的试剂，其中所述另外的细胞毒性试剂选自如下试剂: a)氯乙基化试剂例如卡莫司汀、洛莫司汀、福莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀或链佐星； b)非经典的烷化剂例如丙卡巴肼； c)甲基化三嗪例如替莫唑胺、达卡巴嗪、六甲蜜胺或二溴甘露醇； d)DNA交联剂例如顺钼、卡钼、奈达钼、奥沙利钼、三钼、四硝酸酯或沙钼； e)拓扑异构酶II抑制剂例如多柔比星、表柔比星、阿柔比星、柔红霉素、伊达比星、氨柔比星、吡柔比星、戊柔比星或佐柔比星、米托蒽醌或或匹杉琼； f)拓扑异构酶I抑制剂例如托泊替康、喜树碱、伊立替康、鲁比替康或贝洛替康； g)抗代谢物(喃唳(pyrmidine)类似物)例如5-FU、卡培他滨、替加氟、卡莫氟、氟尿苷或阿糖胞苷； h)抗代谢物(嘌呤类似物)例如6-硫鸟嘌呤或巯基嘌呤；或 i)细胞毒性DNA烷化剂。
18.—种试剂，其包含具有功能基因的载体以及可被所述基因的表达产物转化为细胞毒性试剂的前药，其作为组合制品用于在特征为受损的错配修复(MMR)途径的疾病的治疗中同时、顺次或分开使用。
19.根据权利要求18所述的组合试剂，其还包含一个或多个权利要求1-16任一项的特征。
20.一种治疗多形性成胶质细胞瘤的方法，所述方法包含以下步骤: a.在人患者中诊断多形性成胶质细胞瘤； b.在所述患者中鉴定至少一个多形性成胶质细胞瘤肿瘤； c.切除所述多形性成胶质细胞瘤肿瘤以除去至少一部分所述多形性成胶质细胞瘤肿瘤并暴露瘤床组织； d.向所述瘤床组织给予具有编码胸苷激酶的基因的AdHSV-tk腺病毒载体，籍此所述AdHSV-tk腺病毒载体转染所述瘤床组织并且所述瘤床组织表达所述编码胸苷激酶的基因； e.在向所述人患者给予所述腺病毒载体后约5至约19天内，还向所述人患者给予更昔洛韦； f.经口或通过静脉输注向所述人患者给予替莫唑胺。
21.权利要求20的方法，其中所述多形性成胶质细胞瘤为复发性多形性成胶质细胞瘤。
22.权利要求20或21的方法，其中将所述替莫唑胺在数个28-天周期中给予，每个周期包含在所述28-天周期的第1-5天每天给予约150mg/m2/天的剂量,然后在所述28-天周期的第6-28天给予约Omg/m2/天的剂量。
23.权利要求22的方法，其中所述数个28-天周期之前有约42天的时期，其中以约75mg/m2/天的剂量给予替莫唑胺。
24.权利要求20-23任一项的方法，其中所述AdHSV-tk腺病毒载体和更昔洛韦各自以可有效诱导MMR途径的量给予。
25.权利要求24的方法，其中所述替莫唑胺的给药是在MMR途径被诱导期间开始。
26.权利要求25的方法，其中所述替莫唑胺的给药是在开始给予更昔洛韦后不超过约7天内开始。`
27.权利要求26的方法，其中所述替莫唑胺的给药是与所述更昔洛韦的给药约同时开始。
28.根据权利要求1-19任一项的试剂或组合试剂，另外地包含权利要求20-27的特征的任一个。
【文档编号】A61K38/45GK103491977SQ201280005772
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2012年1月18日 优先权日:2011年1月18日
【发明者】安-玛丽·玛塔, H·萨姆拉纳亚基, J·皮卡瑞内恩, S·伊阿-赫特图阿拉 申请人:Ark治疗学有限公司