多肽构建体及其用途
【专利摘要】本发明提供了多肽构建体，其包含连接至结合细胞表面相关抗原的抗体或其抗原结合部分的肽或多肽信号传递配体，其中所述配体包含降低其对缺少所述抗原表达的细胞的效力的至少一个氨基酸取代或缺失。
【专利说明】多肽构建体及其用途
[0001] 相关申请 本申请要求在2011年10月28日提交的标题为"多肽构建体及其用途"的澳大利亚专 利申请2011904502的权益，其全部内容通过引用并入本文。
[0002] 发明领域 本申请涉及包含连接至抗体的突变的、弱化的多肽配体的多肽构建体，其中所述抗体 将所述突变配体指向在其表面表达与所述抗体结合的抗原和所述配体的受体的细胞。本发 明进一步涉及包括使用这些多肽构建体的治疗方法。
[0003] 发明背景 已描述多种肽和多肽配体通过与细胞表面上的受体相互作用而发挥功能，并且由此刺 激、抑制或另外调节生物应答，通常涉及带有所述受体的细胞内的信号转导途径。这类配体 的实例包括肽和多肽激素、细胞因子、趋化因子、生长因子、凋亡诱导因子等。天然配体可以 是可溶的，或者可以连接到另一细胞的表面。
[0004] 由于这类配体的生物活性，一些具有作为治疗剂的潜在用途。一些肽或多肽配 体已由管理机构批准作为治疗产品，包括例如，人生长激素、胰岛素、干扰素（IFN) - a 2b、 IFNa 2a、IFN0、红细胞生成素、G-CSF和GM-CSF。很多这些和其他配体已展示了在治疗 应用中的潜能，但也显示出在向人类患者施用时的毒性。毒性的一个原因是这些配体中的 大多数引发多种细胞上的受体，包括介导治疗作用的那些细胞之外的细胞。例如，在使用 IFNa 2b治疗多发性骨髓瘤时，其效用至少部分地在于其结合于骨髓瘤细胞上的I型干扰 素受体，这进而引发减少的增殖并因此限制疾病进展。然而，遗憾的是，这种IFN还结合体 内的多种其他正常细胞，引发多种其他细胞应答，其中一些是有害的（例如，流感样症状、 嗜中性白血球减少、抑郁）。配体的这种"脱靶（off target)"活性的结果是，很多配体不 适合作为药物候选物。在本文中，"脱靶活性"是指对于配体的天然受体，但在介导治疗有益 作用的那些细胞之外的细胞表面上的活性。
[0005] 即便一些配体，例如IFNa 2b，批准用于治疗医学状况，它们由于其"脱靶"生物活 性而耐受不良。脱靶活性和相关的不良耐受性还意味着，这些基于肽配体的药物中的一些 不能以足够高的剂量施用，以对介导治疗作用的靶细胞产生最佳治疗作用。
[0006] 类似地，自二十世纪80年代中期以来，已知干扰素，特别是IFNa，能够提高凋亡 并且减少某些癌细胞的增殖。这些生物活性由癌细胞表面上的I型干扰素受体介导，其在 受到刺激时，启动各种信号转导途径，导致增殖降低和/或诱导终末分化或凋亡。IFNa已 由FDA批准用于治疗多种癌症，包括黑素瘤、肾细胞癌、B细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性 骨髓性白血病（CML)和毛细胞性白血病。IFNa对肿瘤细胞的"直接"作用由IFNa对这些 细胞上的I型IFN受体的直接结合介导，并刺激凋亡、终末分化或降低的增殖。IFN a对非 癌细胞的"间接"作用是刺激免疫系统，这可通过导致免疫系统排斥肿瘤而产生额外的抗癌 作用。
[0007] 遗憾的是，I型干扰素受体也存在于大多数非癌细胞上。通过IFNa活化这些细胞 上的这种受体导致多种促炎细胞因子和趋化因子的表达，导致毒性。这种毒性阻止了 IFNa 以对癌细胞发挥最大抗增殖和促凋亡活性的水平向个体给药。
[0008] Ozzello 等人（Breast Cancer Research and Treatment 25:265-76，1993)描述 了将人IFNa与肿瘤靶向抗体共价连接，从而将IFNa的直接抑制活性定位到肿瘤，作为降 低肿瘤生长速率的途径，并且证实了这种缀合物在人癌症的异种移植模型中具有抗肿瘤活 性。所观察到的抗癌活性的机制归因于IFNa对癌细胞的直接作用，因为在试验中使用的 人IFNa没有可观地与鼠 I型IFN受体相互作用，该相互作用可导致间接抗癌作用。然而， 由于人IFNa与鼠细胞的结合的这种缺失，该作者不能评估抗体-INF a缀合物相对于游离 IFNa的毒性。这些作者使用化学方法以将IFNa连接至抗体。
[0009] Alkan 等人，(Journal of Interferon Research, volume 4, number 3, p. 355-63，1984)证实了将人IFNa连接至结合E.B.病毒（EBV)膜抗原（MA)的抗体提高了 其针对表达EBV-MA抗原的细胞的抗增殖活性。这种提高的效力依赖于靶细胞的抗原表达 和抗体的结合特异性二者。所测试的细胞系是癌细胞系WMR-WIL，成髓细胞白血病。该作 者提出IFN a与抗体的连接可用作癌症的治疗，因为它可减少肿瘤生长。Alkan等人没有解 决这些抗体-IFNa缀合物由于其与正常的抗原阴性细胞的相互作用而产生的潜在毒性。
[0010] 还已知抗体和IFNa之间的连接可通过制备融合蛋白构建体完成。例如，IDEC (W001/97844)公开了人IFNa与靶向肿瘤抗原⑶20的IgG重链C-末端的直接融合。其 他小组已公开了在IgG重链C-末端和IFNa之间的各种接头的用途。例如，US 7, 456, 257 公开了抗体重链恒定区的C-末端可通过序列（GGGGS)n (其中η可以是1、2或3)的插入 的富含丝氨酸-甘氨酸（S/G)接头连接至IFNa，并且无论接头长度如何，融合蛋白构建体 的IFNa活性没有显著差异。
[0011] Morrison 等人（US2011/0104112 A1 ;和 Xuan C，Steward KK, Timmerman JM, Morrison SL Targeted delivery of interferon-a via fusion to anti-CD20 results in potent antitumor activity against B-cell lymphoma. Blood 2010;115:2864 - 71) 也公开了连接至靶向癌症的IgG抗体重链C-末端的IFNa，具有插入的S/G接头，并且观 察到IgG和接头与IFNa的融合降低了 IFNa对于不在细胞表面上表达对应抗原的细胞的 活性。与作用于人细胞的人非融合蛋白IFNa (游离IFNa )相比，这些融合蛋白构建体的 降低的IFN活性是适度的，但鼠 IFNa对鼠细胞的作用看起来更为显著。如Morrison等人 和US 7, 456, 257中观察到的，由于融合至抗体的C-末端而导致的人IFNa活性降低是适 度的，并且通常认为是不利的，因为这降低了配体的效力。例如，Rossi等人（Blood vol. 114，No. 18，pp3864-71)指出了这种缺陷，他们使用可选的策略将IFNa连接至肿瘤靶向 抗体，其连接方式导致观察到没有IFNa活性的损失。
[0012] 现有技术通常教导使用有效的IFN并且将这种IFN靶向癌细胞。尽管这种方法导 致IFN对癌细胞的活性提高，但没有解决IFN对正常的"脱靶"细胞的活性的问题。在上述 现有技术实例中，抗体-IFNa融合蛋白的人IFNa部分，在暴露于不在其细胞表面表达对 应抗原的人细胞时，保持高比例的天然IFNa活性。这种活性可导致由于融合蛋白的IFNa 部分活化非癌的正常("脱靶"）细胞而产生的毒性。因此，存在降低基于配体的药物的"脱 靶"活性，同时保持这些配体的"中靶（on-target)"治疗作用的需求。保持目标特异性配 体活性并且同时降低基于配体的治疗剂的非目标毒性，将对在治疗上有用的配体产生更大 的治疗浓度窗口。例如，使用以下形式的人IFNa将是期望的，所述形式可使其活性指向癌 细胞，同时使其对正常人细胞的作用最小化。理想地，将最大程度地刺激癌细胞上的I型干 扰素受体，同时非癌细胞上的相同受体将经历最小的刺激。需要以如下方式将人IFNa靶 向癌细胞，使其对于展示抗原的癌细胞比不展示抗原的正常细胞具有显著更高的活性。相 同的逻辑适用于其他潜在的治疗性配体，例如其他细胞因子、肽和多肽激素、趋化因子、生 长因子、凋亡诱导因子等。
[0013] 发明概述 本发明已发现当具有大幅降低配体对其受体的亲和力的一个或多个突变的肽或多肽 信号传递配体连接到将所述突变配体靶向展示抗体的对应抗原的靶细胞的抗体时，保持了 所述配体对抗原阳性的祀细胞（target antigen-positive cells)的活性，同时大幅降低 了所述配体对抗原阴性的非祀细胞（non-target antigen-negative cells)的活性。最终 结果是如下的配体信号传递分子，其对抗原阳性靶细胞上的它的受体的活化的效力比对抗 原阴性非靶细胞强很多，这提供了降低由脱靶配体活性导致的毒性的方法。
[0014] 因此，本发明的第一方面提供了多肽构建体，其包含连接到结合细胞表面相关抗 原的抗体或其抗原结合部分的肽或多肽信号传递配体，其中所述配体包含降低其对缺少所 述抗原表达的细胞的效力的至少一个氨基酸取代或缺失。
[0015] 在第二方面，本发明提供了治疗个体的肿瘤的方法，包括向所述个体施用本发明 的多肽构建体。
[0016] 在第三方面，本发明提供了本发明的多肽构建体在癌症治疗中的用途。
[0017] 在第四方面，本发明提供了包含本发明的多肽构建体和药学上可接受的载体或稀 释剂的组合物。
[0018] 在第五方面，本发明提供了降低肽或多肽信号传递配体对带有配体受体的抗原阴 性细胞的效力，同时保持所述配体对带有配体受体的抗原阳性细胞的效力至与抗原阴性细 胞相比时更大程度的方法，所述方法包括修饰所述配体，以使所述配体包含使其对抗原阴 性细胞的效力降低的至少一个氨基酸取代或缺失，并将所述修饰的配体连接到抗体或其抗 原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合部分是对在抗原阳性细胞但不在抗原阴性细胞上 的细胞表面相关抗原特异性的。
[0019] 不同于未弱化的"天然"或"野生型"人配体与抗体或其抗原结合部分的连接（这 通常导致配体对抗原阳性细胞的效力比抗原阴性细胞高1-15倍），本发明证实，将突变的 弱化形式的配体连接到相同的抗体，能够对抗原阳性细胞产生比对抗原阴性细胞更高的效 力。
[0020] 在一个实施方式中，所述信号传递配体是IFNa或IFNP，并且使用如本文所述的 "脱靶"测试和"中靶（ARP) "或"中靶（Daudi) "测试，与游离的野生型配体相比，所述多肽 构建体显示至少10,至少100,至少1000,至少10000,或至少100000倍的超过抗原阴性细 胞的对抗原阳性细胞的更大选择性。
[0021] 本发明还提供了抗体-弱化配体融合蛋白，其中所述弱化配体是IFNa或IFN3， 并且其中所述融合蛋白构建体，在注射到具有建立的人肿瘤的小鼠时，能够消除肿瘤。
[0022] 本发明还提供了抗体-弱化配体融合蛋白，其中所述弱化配体是IFNa或IFN3， 并且其中所述融合蛋白构建体，在注射到具有体积大于500立方毫米的建立的人肿瘤的小 鼠时，能够消除肿瘤。
[0023] 本发明还提供了抗体-弱化配体融合蛋白，其中所述弱化配体是IFNa或IFN3， 并且其中所述融合蛋白构建体，在作为单个一次性治疗注射到具有建立的人肿瘤的小鼠 时，能够消除肿瘤。
[0024] 抗体-弱化配体融合蛋白，其中所述弱化配体是IFNa或IFNi3，并且其中所述融 合蛋白构建体能够消除小鼠中的建立的骨髓瘤肿瘤和建立的淋巴瘤肿瘤二者。
[0025] 在这些情况的每一种中，优选所述细胞表面相关抗原是⑶38。
[0026] 在一个实施方式中，所述包含至少一个氨基酸取代或缺失的信号传递配体的氨基 酸序列与野生型配体氨基酸序列具有大于90%或大于95%、或大于96%，或大于97%，或大于 98%或大于99%的序列同一性。
[0027] 在一个实施方式中，所述构建体是融合蛋白。
[0028] 在某些实施方式中，所述信号传递配体连接到抗体或其抗原结合部分的重链的 C-末端。在某些实施方式中，所述信号传递配体连接到抗体或其抗原结合部分的轻链的 C-末端。在这些实施方式的任一个中，所述配体可直接连接到抗体或其抗原结合部分的重 链或轻链的C-末端（即，没有插入的额外接头）。
[0029] 在一个实施方式中，所述细胞表面相关抗原选自I型MHC或Η)-1。
[0030] 在某些实施方式中，所述细胞表面相关抗原是骨髓瘤相关抗原，其选自CD38、 HM1. 24、CD56、CSl、CD138、CD74、IL-6R、Blys (BAFF)、BCMA、HLA-SR、激肽原、β 2 微球蛋白、 FGFR3、ICAM-1、蛋白裂解酶（matriptase)、CD52、EGFR、GM2、α 4-整联蛋白、IFG-1R 和 KIR， 且配体是IFN α。
[0031] 在一个实施方式中，所述信号传递配体选自IFNa 2b、IFN0、IL-4或IL-6中的任 一个。
[0032] 在所述信号传递配体是IFNa的某些实施方式中，氨基酸取代或缺失可以是在氨 基酸位置R33、R144或A145中的任何一个或多个。在某些实施方式中，所述信号传递配体 是 IFN a ,且所述取代选自 R144A iSE〇 ID NO:30i. FU44S ISEQ Η) NO:40)· RI44TiSEQl【）N(+):4l>.Rl44Y(SEQ!DXO:41.>,R】44〖<SEQIDNO:mRI44L(SriQ ID A1451) (SiiQ ID NO;44). A14511 ISI;Q ID NO;47). A I45Y ISBQ II) ^0:58). A145K CSEQ ID NO:49>. R33A+YNS (SEQ ID NO:65>. R33A <SEQ ID NO: t6> fil R144A+YXS <SE〇 ID NO:68)。
[0033] 在所述信号传递配体是IFNa且细胞表面相关抗原是CD38的某些实施方式中，所 述抗体是选自G003. G005. G024. MOR03077. MORO3079, MORO3080. MORO3100. 38SBI3. 38SBI8. 38SB19. 38SB30,3SSB3J, 38SB39, ΟΚ1?Ο, X355/02, X910/12. X355/07, X913/15, R5D1, R5E8, R10A2中的任一种或其抗原结合部分，或与ROT1、R5E8或R10A2具有大于95%，大于 96%，大于97%，大于98%或大于99%氨基酸序列同一性的抗体。
[0034] 在细胞表面相关抗原是CD38的某些实施方式中，所述多肽构建体的信号传递配 体是IFN a，且所述治疗是用于个体中选自多发性骨髓瘤、白血病或淋巴瘤的癌症。在具体 实施方式中，还使用类视黄醇，例如全反式视黄酸治疗所述个体。在细胞表面相关抗原是 CD38的某些实施方式中，所述肿瘤或癌症可选自多发性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、慢性骨 髓性白血病、慢性淋巴细胞性白血病或急性骨髓性白血病。
[0035] 在所述配体连接到抗体的实施方式中，所述抗体可以是IgG4。在【具体实施方式】中， IgG4包含S228P氨基酸取代。
[0036] 在所述多肽构建体的信号传递配体是IFNa的某些实施方式中，抗体或其抗原结 合部分可结合至病毒感染细胞上的细胞表面相关抗原。在这些实施方式中，细胞表面相关 抗原可选自病毒编码的蛋白、磷脂酰丝氨酸或磷脂酰丝氨酸结合蛋白。在细胞表面相关抗 原是磷脂酰丝氨酸或磷脂酰丝氨酸结合蛋白的实施方式中，所述构建体可用于治疗丙型肝 炎。
[0037] 在所述多肽构建体的信号传递配体是IFNa或IFN0的某些实施方式中，细胞表 面相关抗原选自⑶20、⑶38、⑶138或CS1。在配体是IFN a或IFN0的某些实施方式中， 所述肿瘤或癌症可选自多发性骨髓瘤、黑色素瘤、肾细胞癌、慢性骨髓性白血病或毛细胞性 白血病。
[0038] 在【具体实施方式】中，所述构建体是G005-HC-L0_IFNa (A14OT) IgG4。
[0039] 在所述多肽构建体的信号传递配体是IFNi3的某些实施方式中，所述细胞表面相 关抗原是T细胞、骨髓细胞或抗原呈递细胞的细胞表面相关蛋白。
[0040] 在所述多肽构建体的信号传递配体是IFNi3的某些实施方式中，所述细胞表面相 关抗原可选自（:丨)玉 CD4·(:丨+成OM4 CD71, m,A-OR. PD-I. 〖COS. CD3i α)1丨5, CDI Ic：· CD丨4, C:D52和PD-1。在这些实施方式中，所述构建体可 用于治疗以过度炎症表征的疾病，例如自身免疫性疾病。
[0041] 在所述多肽构建体的信号传递配体是IFN0的某些实施方式中，所述至少一个氨 基酸取代或缺失选自 R35A. R35T. E42K, M62I, CH8S, AMI Y. A142T, E〗《K, R I52H。在这 些实施方式中，IFN0也可具有C17S或C17A取代。
[0042] 在某些实施方式中，所述多肽构建体的信号传递配体是IFNY。在这些实施方式 中，所述细胞表面相关抗原可以是肿瘤相关抗原。在其他实施方式中，所述细胞表面相关抗 原可选自⑶14、？3?1、？4?、1^6?1^和1^6?1^。在这些实施方式中，所述构建体可用于治 疗以过度纤维化表征的疾病。
[0043] 在所述多肽构建体的信号传递配体是IFNY的某些实施方式中，所述至少一个氨 基酸取代或缺失选自残基A23和D24的缺失，S20I取代、A23V取代、D21K取代和D24A取 代。
[0044] 在所述多肽构建体的信号传递配体是IL-4的某些实施方式中，所述细胞表面 相关抗原选自 cna CD4, CD24, CD38, rD44 CB69XD7 丨 XD%. PD- UCOSXD52 和 PD-1。
[0045] 在所述多肽构建体的信号传递配体是IL-6的某些实施方式中，所述细胞表面 相关抗原选自 CD3XD4. CD24, CD38, C.D44, CD69· CD71, CD%· Η)-1 · ICOS, CD52 和 PD-1。
[0046] 在所述多肽构建体的信号传递配体是HGF的某些实施方式中，所述细胞表面相关 抗原选自 ASGR1、ASGR2、FSP1、RTI140/Ti_a、HTI56 和 VEGF 受体。
[0047] 在所述多肽构建体的信号传递配体是TGFi3的某些实施方式中，所述细胞表面相 g C'D3, CD4. CDS. CD24, CD3S. CD44. CD69. CD7 i. CD83. €D86, CD96, HLA-DR. PD-1. ICOiLCDH Ct)! 15XD I! c, CD 14XD52 和 PD-1。
[0048] 在所述多肽构建体的信号传递配体是红细胞生成素的某些实施方式中，所 述细胞表面相关抗原选自⑶241(RCHE基因的产物)、⑶117 (c-kit)、⑶71 (转铁蛋 白受体）、CD36 (血小板反应蛋白受体）、〇).从CD45RΑ, ΓΟI B, CD I邡， CD35· C7TO36. CD237. CTC3S· CD2.W和 CD240。
[0049] 在所述多肽构建体的信号传递配体是白细胞介素-10的某些实施方式中，所述细 胞表面相关抗原选自 CDllc、CD33 或 CD115、CD14、FSPl、FAP*PDGFR(a*e)。
[0050] 在第六方面，提供了具有可变区域的抗-CD38抗体，命名为 X9I0/12, X9LVI5· X355/02· X355/〇7· R5DI, R5ES或 R10A2,具有如下所述的序列：
【权利要求】
1. 多肽构建体，其包含连接至结合细胞表面相关抗原的抗体或其抗原结合部分的肽或 多肽信号传递配体，其中所述配体包含降低其对缺少所述抗原表达的细胞的效力的至少一 个氨基酸取代或缺失。
2. 权利要求1所述的多肽构建体，其中所述肽或多肽信号传递配体经肽键连接至所述 抗体或其抗原结合部分。
3. 权利要求1或权利要求2所述的多肽构建体，其中所述肽或多肽信号传递配体直接 或经长度为1-20个氨基酸的接头连接至所述抗体或其抗原结合部分。
4. 权利要求1-3中任一项所述的多肽构建体，其中所述肽或多肽信号传递配体连接至 所述抗体或其抗原结合部分的轻链或重链恒定区的C-末端。
5. 权利要求1-4中任一项所述的多肽构建体，其中所述肽或多肽信号传递配体选自 IFN、IL-4 和 IL-6。
6. 权利要求1-5中任一项所述的多肽构建体，其中所述肽或多肽信号传递配体选自 IFN a、IFN β 和 IFN γ。
7. 权利要求6所述的多肽构建体，其中所述IFNa的氨基酸序列选自SEQ ID NOs 1-3、 80-90、434和435,并且其中所述IFN a包含降低其对缺少所述抗原表达的细胞的效力的至 少一个氨基酸取代或缺失。
8. 权利要求7所述的多肽构建体，其中所述IFNa的氨基酸序列包含选自以下的至少 一个氨基酸取代：RH4A 〖SEQ !D NO:30h RI44S <SEQ ID NO:40}, RI44T (SIi〇 ID N〇;4!), R144Y ($E〇 ID N〇：43), R144! i$fi〇 ID m-J5k R144L (SEQ ID NO:37). A 145D iSEQ ID NO;44). A145H (SEQ ID KO;4?l A145Y {SEQ ID Ν?:58κ A145K iSEQ ID NO:49l R33A+YNS ISEQ ID ΝΟ:6?33Α ?[沿 ID NO:l6l 顧 R !44A+YNS (SEQ ID N(M8)。
9. 权利要求1-8中任一项所述的多肽构建体，其中所述抗体或其抗原结合部分结合其 中其细胞外结构域具有小于240kD分子量的抗原。
10. 权利要求1-9中任一项所述的多肽构建体，其中所述抗体或其抗原结合部分结合 这样的抗原，其中所述抗原以大于每个细胞12, 600个拷贝或大于每个细胞15, 000个拷贝 的密度存在于所述细胞上。
11. 权利要求1-10中任一项所述的多肽构建体，其中所述抗体或其抗原结合部分以从 50 nM、从25 nM、从10 nM、或从5 nM至ΙρΜ的亲和力结合所述细胞表面相关抗原。
12. 权利要求1-11中任一项所述的多肽构建体，其中所述细胞表面相关抗原选自 CD38、HM1. 24、CD56、CS1、CD20、CD74、IL-6R、Blys (BAFF)、BCMA、HLA-SR、激肽原、β 2 微球 蛋白、卩0卩1?3、1〇八厘-1、蛋白裂解酶、0)5236卩1?、6厘2、〇4-整联蛋白、正6-11?、1(11?、0)3、0)4、 CD8、CD24、CD44、CD69、CD71、CD83、CD86、CD96、HLA-DR、PD-1、ICOS、CD33、CD115、CDllc、 CD14、CD52、CD14、FSPl、FAP、PDGFRa、PDGFRP、ASGR1、ASGR2、FSP1、RTI140/Ti_a、HTI56、 VEGF受体、RCHE基因的产物CD241、CD117 (c-kit)、CD71 (转铁蛋白受体）、CD36 (血小板 反应蛋白受体）、CD34、CD45R0、CD45RA、CD115、CD168、CD235、CD236、CD237、CD238、CD239 和 CD240。
13. 权利要求1-12中任一项所述的多肽构建体，其中所述抗体或其抗原结合部分是抗 体或Fab片段。
14. 权利要求1-13中任一项所述的多肽构建体，其中所述构建体具有大于50的抗 原-特异性指数。
15. 权利要求14所述的多肽构建体，其中所述构建体具有大于100的抗原-特异性指 数。
16. 权利要求15所述的多肽构建体，其中所述构建体具有大于1000的抗原-特异性指 数。
17. 权利要求6所述的多肽构建体，其中所述肽或多肽信号传递配体是IFNi3且所述氨 基酸取代是R35A。
18. 组合物，其包含权利要求1-16中任一项所述的多肽构建体和药学上可接受的载体 或稀释剂。
19. 治疗个体中的肿瘤的方法，其包括向所述个体施用权利要求1-16中任一项所述的 多肽构建体或权利要求17所述的组合物。
20. 权利要求18的治疗个体中的肿瘤的方法，其中所述肿瘤选自多发性骨髓瘤或非霍 奇金淋巴瘤。
21. 权利要求1-16中任一项所述的多肽构建体在癌症治疗中的用途。
22. 权利要求1-16中任一项所述的多肽构建体在癌症治疗中的用途，其中所述癌症是 多发性骨髓瘤或非霍奇金淋巴瘤。
23. 降低肽或多肽信号传递配体对具有配体受体的抗原阴性细胞的效力，同时保持所 述配体对具有配体受体的抗原阳性细胞的效力至与所述抗原阴性细胞相比时更大程度的 方法，所述方法包括修饰所述配体，以使所述配体包含降低其对所述抗原阴性细胞的效力 的至少一个氨基酸取代或缺失，并将所述经修饰的配体连接至抗体或其抗原结合部分，其 中所述抗体或其抗原结合部分对在所述抗原阳性细胞上但不在所述抗原阴性细胞上的细 胞表面相关抗原是特异性的。
24. 权利要求23所述的方法，其中所述肽或多肽信号传递配体经肽键连接至所述抗体 或其抗原结合部分。
25. 权利要求23或权利要求24所述的方法，其中所述肽或多肽信号传递配体直接或经 长度为1-20个氨基酸的接头连接至所述抗体或其抗原结合部分。
26. 权利要求23-25中任一项所述的方法，其中所述肽或多肽信号传递配体选自IFN、 IL_4 和 IL_6。
27. 权利要求23-26中任一项所述的方法，其中所述肽或多肽信号传递配体选自 IFN a、IFN β 和 IFN γ。
28. 权利要求27所述的方法，其中在修饰前所述IFNa的氨基酸序列选自SEQ ID NOs 1-3、80-90、434 和 435。
29. 权利要求28所述的方法，其中所述修饰包含选自以下的至少一个氨基酸取代： R144A (SEQ ID NO:3C)l. R144S <SE〇 ID NO：4〇), R144T (SEQ ID NO;4I >, R144Y (SEQ ID NOi43). RI441 (SEQ ID NO:35). R144L <SEQ IE) NO;3?i. AI45D ISEQ ID N〇:44), A145H (SE〇 ID MO:47>, AI45Y cSE〇 ID NO:58), A145K iSEQ ID N0;4{)?. R33A+YNS (SI5〇 ID ^0:65). R.1.1A (SEQ ID Nr0:l6} $1 RI44A+YNS (SEQ ID NO:68> 0
30. 权利要求23-29中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分以从50 nM、从25 nM、从10 nM、或从5 nM至ΙρΜ的亲和力结合所述细胞表面相关抗原。
31. 权利要求23-30中任一项所述的方法，其中所述细胞表面相关抗原选自CD38、 HM1. 24、CD56、CS1、CD20、CD74、IL-6R、Blys (BAFF)、BCMA、HLA-SR、激肽原、β 2 微球蛋白、 FGFR3、ICAM-1、蛋白裂解酶、CD52、EGFR、GM2、α 4-整联蛋白、IFG-1R、KIR、CD3、CD4、CD8、 CD24、CD44、CD69、CD71、CD83、CD86、CD96、HLA-DR、PD-1、ICOS、CD33、CD115、CDllc、CD14、 CD52、CD14、FSPl、FAP、PDGFRa、PDGFRP、ASGR1、ASGR2、FSP1、RTI140/Ti_a、HTI56、VEGF 受体、RCHE基因的产物⑶241、⑶117 (c-kit)、⑶71 (转铁蛋白受体）、⑶36 (血小板反 应蛋白受体）、CD34、CD45R0、CD45RA、CD115、CD168、CD235、CD236、CD237、CD238、CD239 和 CD240。
32. 权利要求23-31中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合部分是抗体或 Fab片段。
【文档编号】A61P35/00GK104203982SQ201280064672
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2012年10月29日 优先权日:2011年10月28日
【发明者】D.S.小威尔逊, S.L.波古伊, G.E.米科塞尔, T.陶拉, W.科维, A.G.多伊勒, A.克拉克, M.波拉德, S.特兰, J.T-C.林 申请人:特瓦制药澳大利亚私人有限公司