一种多肽在制备治疗核因子-κB异常活化疾病药物中的用途
【专利摘要】本发明涉及一种多肽在治疗核因子-κB异常活化疾病药物中的用途，涉及炎症和自身免疫性疾病及其他和核因子-κB（NF-κB）活化异常有关疾病的药物的应用。该多肽具有抑制核因子-κB活化，并阻断核因子-κB介导的多个参与炎症过程的炎症因子的表达和产生，达到抑制炎症细胞的增殖和炎症细胞参与的炎症过程的生物效应。应用该多肽及衍生物，或通过转染相应的cDNA在细胞内表达该多肽，能达到有效抑制炎症细胞增殖及炎症过程的作用，在制备炎症，自身免疫病及有关疾病的治疗药物、及诊断试剂的中具有独特的使用价值。
【专利说明】—种多肽在制备治疗核因子-K B异常活化疾病药物中的用途
【技术领域】
[0001]本发明属于医学生物工程领域，涉及一种多肽在制备治疗核因子-K B异常活化疾病药物中的用途。
【背景技术】
[0002]核因子-K B (NF-KB)是调节细胞基因转录的关键因子之一，活化后的核因子- K B (NF-K B)可直接启动和调节众多参与炎症反应、免疫反应相关基因的转录，调控大量细胞因子、黏附分子的表达，在机体的炎症、免疫反应等方面发挥重要作用。免疫功能失调引起的炎症和炎症相关性疾病(病毒感染，休克，过敏性疾病，炎症和自身免疫病)严重危害人类健康。大量研究表明，这些疾病的发生与发展和NF-κ B的活化有密切关系，因此研究表明，通过调控NF-K B的活化，从而对多种疾病的临床治疗发挥良好的干预作用，寻找有效抑制NF-κ B活化的化合物和药物就意味着寻找这些疾病的治疗手段。然而目前现代医学和药物所应用的抑制NF-κ B活性的多种措施，由于效价、特异性、副反应、可行性等多方面的问题，临床应用往往受到限制。目前人们正加紧研发以NF- K B和它介导的信号转导通路为药物靶点的新化合物用于治疗多种疾病特别是炎症性疾病药物。
[0003]NF- K B是一种能与免疫球蛋白轻链基因的增强子B序列(GGGACTYrcc)特异性结合的核蛋白，因首先发现其参与B细胞免疫球蛋白的K轻链转录调控而命名。NF- K B家族成员中，由p50 / p65亚基形成的二聚体具有NF-K B分子主要的生物活性。在细胞未受刺激的状态下，NF- K B与一类被称为NF-KB抑制因子(IKB)的家族抑制蛋白结合，使NF- κ B二聚体无法从细胞质向细胞核内转移，阻止NF- κ B结合到相关基因序列，从而抑制NF- κ B的调节蛋白质表达的生物活性。当细胞受到各种内源性、外源性的配体以及机械性、化学性等刺激后，IKB不再和NF- κ B结合，NF- κ B从胞质移位到核内，并经过多个蛋白质激酶的磷酸化激活，激活后的NF- κ B并结合到靶基因的启动子或增强子区域的NF- κ B结合序列，调节(增加或减少)靶基因转录和蛋白合成。
[0004]NF-κ B可诱导许多因子转录，如细胞因子、趋化因子、黏附分子、生长因子、免疫受体、促/抑凋亡蛋白、补体、病毒、iN0S、C0X-2等，特别是NF-KB和多种炎症性因子的表达和产生密切相关，比如:白介素1(11-1)，白介素2(11^-2)，白介素6(11^-6)，白介素8(11^-8)，肿瘤坏死因子A(TNF-A)，内皮细胞黏附分子如自细胞黏附分子-1 (ELAM-1)和细胞间黏附分子-1 (ICAM-1)，趋化因子如单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)等。所以，NF-κ B对免疫功能的调节非常关键，而NF- κ B的活化在这一过程中起着至关重要的作用。
[0005] 虽然目前炎症发病的详细机制仍不明确，多数研究认为免疫功能紊乱在炎症疾病发病中起关键作用，同时也发现NF- κ B的活化在大多数炎症疾病中存在，所以NF- κ B的活化过程目前已成为治疗炎症疾病的靶点，而能阻断NF-κ B生物活性的抑制剂具有良好的调节炎症过程的作用。细胞内外的多种刺激可通过多种信号通路激活NF-κ B，活化的NF-κ B可以调节多种基因的表达，对多种细胞内过程特别是机体免疫反应起着非常重要的作用，我们可以通过调节这些信号通路来抑制NF-K B的活化，从而调节多种炎症因子的产生和分泌，使炎症反应减轻或消除，从而达到治疗多种疾病的目的。所以，开发具有以NF-kB激活的信号通路中任何一个环节为靶点的细胞内阻断剂，以此来获得靶向性强、副作用小的药物，为治疗多种疾病新药开发新的途径。
[0006]目前研究已证实PI3K (三磷酸肌醇-3-激酶)参与了 NF- κ B的活化和免疫反应过程，所以抑制ΡΙ3Κ的活性是一个切实可行的抑制NF- κ B信号转导从而达到治疗NF- κ B活化异常引起的疾病特别是炎症相关疾病的方法，目前也有多种ΡΙ3Κ抑制剂正在进行临床前或临床研究应用于治疗NF-κ B异常激活比如炎症性疾病，但是，由于目前开发的ΡΙ3Κ抑制剂存在抑制特异性低等问题，体内毒性和副作用大，严重影响了 ΡΙ3Κ抑制剂应用于治疗NF-kB异常活化相关疾病药物中。
[0007]PI3K由多个亚型成员构成，其中P55PIK就是PI3K家族成员，以前研究结果证明P55PIK参与了激活NF- κ B信号转导，特别是高表达p55PIK促进了 NF- κ B信号转导活化，比如ρ65蛋白质的磷酸化。所以，如果能阻断Ρ55ΡΙΚ信号转导是可以阻断NF- κ B活化，从而影响NF- κ B介导的生物学功能。
【发明内容】
[0008]本发明的目的提供一种抑制NF-κ B活化的信号通路的多肽，该多肽具备抑制NF- κ B活化的信号通路特别是降低NF- κ B中ρ65亚基的磷酸化的生物学功能，从而调节NF-K B转录因子结合目的基因的能力，影响NF-K B目的基因产物蛋白质的转录和表达。由于NF-κ B参与了多种疾病过程，所以该多肽可以有效治疗由于NF-κ B异常活化相关疾病特别是炎症。除炎症外，该多肽还可以用于治疗其他由于NF-kB参与的疾病比如:病毒感染，休克，神经退化性疾病，过敏性疾病和自身免疫病等。
[0009]上述抑制NF- κ B活化的信号通路的多肽的氨基酸序列为:甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸-天门冬氨酸-脯氨酸，简称Ρ15多肽。Ρ15多肽具备抑制NF- κ B活化的信号通路特别是降低NF- κ B中ρ65亚基的磷酸化的生物学功能，从而调节NF- κ B转录因子结合目的基因的能力，影响NF-kB目的基因产物蛋白质的转录和表达。由于NF-κ B参与了多种疾病过程，所以该多肽可以有效治疗由于NF-κ B异常活化相关疾病特别是炎症。除炎症外，该多肽还可以用于治疗其他由于NF-κ B参与的疾病比如:病毒感染，休克，过敏性疾病和自身免疫病等。
[0010]本发明提供的是Ρ15多肽在治疗NF-K B异常活化疾病(如病毒感染，休克，过敏性疾病和自身免疫病)的药物中的应用，和Ρ15多肽现已公开的阻断PCNA结合DNA聚合酶，从而阻止细胞DNA合成抑制细胞增殖的用途并不相同。(建议保留，这点很重要，审查员百分百可以查到原来的Ρ15专利，此处先行说明，对以后答辩可以埋下伏笔)
[0011]在研究中，我们发现了一个多肽片段在细胞中抑制了 NF-K B中Ρ65亚基蛋白质的磷酸化。该多肽片段的序列为:甲硫氨酸一脯氨酸一酪氨酸一丝氨酸一苏氨酸一谷氨酸一亮氨酸一异亮氨酸一苯丙氨酸一酪氨酸一异亮氨酸一谷氨酸一甲硫氨酸-天门冬氨酸-脯氨酸；(见《氨基酸和核苷酸序列表》)，在以后该多肽称为Ρ15，由于NF-κ B的ρ65蛋白质的磷酸化改变了 NF- κ B转录因子和其目的基因的结合及NF- κ B的目的基因的转录水平，从而改变了这些目的基因编码的蛋白质的表达和产生。由于这些蛋白质很多参与了多种细胞过程特别是免疫过程和炎症过程，所以P15多肽片段是NF- κ B信号通路的抑制剂。根据这一结果，我们设想，如果在细胞中表达P15，这一多肽能抑制NF- κ B的p65和/或其他蛋白的磷酸化，从而抑制了 NF-κ B介导的信号转导通路。
[0012]证明上述模型的关键之处在于把P15多肽导入细胞中，再观察P15多肽对NF-κ B介导的信号转导通路(比如P65磷酸化)和NF- κ B调节目的基因(比如肿瘤坏死因子A，TNF-α )表达和产生的影响。为达到这一目的，我们采用分子生物学的手段，制造一个DNA构建体，这一构建体编码含有Ρ15多肽片段的融合蛋白，再把这种构建体转入培养的人细胞中，然后观察表达Ρ15多肽片段的细胞中NF-κ B中Ρ65亚基的磷酸化和细胞中编码TNF蛋白质的信使RNA量的变化。另外，我们还通过人工合成的方式，生产一个由具有穿透细胞膜的多肽片段和Ρ15多肽构成的PTD-P15融合多肽；PTD的序列为:精氨酸-天门冬氨酸-亮氨酸-酪氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-赖氨酸-天门冬氨酸-精氨酸。在培养的细胞中加入PTD-P15融合多肽，再观察进入细胞的P15多肽对NF- κ B P65亚基的磷酸化和细胞产生和分泌的TNF- α的影响。为了观察Ρ15多肽对动物模型中炎症发生和发展的影响，我们通过注射PTD-P15融合多肽，观察PTD-P15融合多肽能否抑制动物模型中炎症的发生和发展。
[0013]实验结果表明，在几种不同的培养细胞系中表达Ρ15多肽或加入PTD-P15融合多肽，Ρ15降低了 NF-KBp65亚基的磷酸化，导致这些细胞的NF-κ B转录因子结合目的基因(比如NF- κ B的一个主要目的基因TNF- α )，抑制了 NF- κ B的活化其他几个证明NF- κ B活化的观察指标都显著降低，证明了 Ρ15多肽具有抑制NF-κ B活化能力，是一个NF-κ B信号通路抑制剂；同时，注射PTD-P15融合多肽能够抑制动物模型中炎症的发生和发展。
[0014]Ρ15多肽在应用时，可采用能穿膜的融合多肽的形式，制成注射剂、外用喷剂，外用涂抹液，外用膏剂等，或制备成脂质体包裹融合多肽的口服药剂，此外，还可将Ρ15多肽的核酸序列与质粒构建载体、或插入病毒内，然后制备成可以直接在细胞内表达的注射剂。
[0015]需要说明的是，Ρ15多肽在制备成穿膜融合多肽时，不限于和PTD这一种多肽片段进行构建，还可以采用其他具有穿膜功能的多肽片段，都属于Ρ15多肽的应用范围。
[0016]本发明的有益效果:与现有抑制NF-kB激活的方法相比，本发明的优点如下:
[0017]①Ρ15降低了 NF-kBP65的活化，从而抑制了 NF-κ B结合目的基因的作用，导致NF- κ B调节的目的基因的转录水平的改变，由于NF- κ B调节的目的基因编码的蛋白质参与了多种生物过程和多种疾病的发生和发展，Ρ15的发明为治疗肿瘤和其他细胞生长异常疾病新药的设计和筛选，提供了一种新的方法和途径。同时，PTD-P15融合多肽能有效地抑制炎症，证明Ρ15多肽在穿透细胞膜后仍具有抑制NF- κ B激活的生物学效应，也说明具有穿膜功能的多肽或分子也可能用于帮助具有生物学活性Ρ15穿透细胞膜。
[0018]②Ρ15多肽毒副作用低，抗原性弱，实验结果也发现Ρ15多肽对细胞凋亡没有明显的影响，所以对正常细胞没有明显的杀伤作用。由PTD-P15融合多肽加入培养细胞和应用于动物体内，也没有观察到明显的毒性。
[0019]③在细胞中表达Ρ15多肽和PTD-P15融合多肽能有效抑制多种人类和鼠类肿瘤细胞中NF- κ B的激活和动物模型中炎症疾病，证明Ρ15在由于NF- κ B异常激活导致疾病特别是炎症的治疗方面具有高效、广谱等优点。
[0020]④PTD-P15融合多肽分子量小，能化学合成，便于大规模直接应用于临床，同时也可用其他的方法(比如用质粒及病毒载体)把P15多肽投人到细胞内，以达到治疗NF-K B活化相关疾病的目的。
【专利附图】
【附图说明】
[0021]图1为P15减少NF-K B信号通路中p65蛋白质磷酸化的免疫印迹照片。
[0022]图2a~2f为P15多肽抑制TNF-α，白介素I (IL-Ιβ)和白介素6 (IL-6)炎症因子表达的对比数据图；
[0023]图2a为TNF- a mRNA的表达水平对比图；
[0024]图2b为IL-1 β mRNA的表达水平对比图；
[0025]图2c为IL_6mRNA的表达水平对比图；
[0026]图2d为TNF- α的浓度对比图；
[0027]图2e为IL-1 β的浓度对比图；
[0028]图2f为IL-6的浓度对比图。
[0029]图3为小鼠注射LPS诱导的死亡试验中小鼠存活率对比图。
[0030]图4为小鼠鼻炎试验中鼻腔组织病理切片的对比图。
【具体实施方式】
[0031]下面借助具体实验及其数据结果对本发明进行论证说明，但应该说明的是，这些例子并不对本发明加以限制。P15多肽在下列实验中证明其抑制NF-K B信号转导和激活的生物学作用和P15在制备治疗NF- K B活化相关疾病(如炎症等)药物的用途，包括但不限于下列实验。
[0032]试验例1:在pEGFP质粒中引入编码P15多肽的cDNA，DNA构建体表达P15-GFP融合蛋白的检测
[0033]pEGFP-Nl质粒载体购于美国Clontech公司，质粒包含编码绿色荧光蛋白(GFP)的cDNA，用Ec0R1-BamHI (购于美国Promega公司)酶切质粒，酶切后的质粒在琼脂糖胶中分离、纯化，用于以后的连接反应。从胶中回收DNA片段的试剂盒来自德国Qiagen公司。
[0034]编码P15多肽的cDNA来源于人工合成的双链DNA，其序列为:
[0035]单链1:
[0036]5’ TTTTGAATTCATGCCCTATTCGACAGAACTGATATTTTATATTGAAATGGATCCTGGATCC ；
[0037]单链2:
[0038]5， TTTTGGATCCAGGATCCATTTCAATATAAAATATCTGTTCTGTCGAATAGGGCATGAATTCo
[0039]两个单链混合后，结合成双链DNA，产物经过纯化后(纯化用的试剂盒来自德国Qiagen公司)，用Ec0R1-BamHI酶切；再用琼脂糖胶纯化，然后和酶切纯化后的载体PEGFP-Nl进行连接反应(连接试剂盒来自美国Promega公司)。转化细菌后(感受态细菌来自美国Promega公司),选出阳性克隆,其cDNA序列的正确性通过核酸序列测定得到证实后，大规模纯化制备质粒(大规模纯化试剂盒来自美国Promega公司),用于以后的实验。这种质粒在真核细胞分别表达一个P15和GFP的融合蛋白，表达的P15连接在GFP的N未端，该融合蛋白称为P15-GFP。
[0040]转染试剂盒购于美国Invitrogen (目录号为11668)，转染实验也按照生产厂家提供的使用说明完成。C0S7细胞培养在10%小牛血清DMEM营养液中。转染48小时后，C0S7细胞用生理盐水(PBS)洗两次，加入细胞裂解液裂解细胞，用超声波破坏DNA后，加入适量的2-巯基乙醇和溴酚蓝，于沸水中处理5分钟，置于冰上保存，随后上样于质量浓度为12%的SDS —聚丙烯酰胺凝胶电泳。分离后的蛋白转移到尼龙膜上，此膜用抗GFP抗体(购于美国Invitrogen，目录号为R970)检测融合蛋白的产生，结果证实了 P15-GFP在细胞中的表达。
[0041]试验例2:P15多肽的表达减少NF- K B中p65的磷酸化
[0042]因为NF-κ B中P65蛋白质536位丝氨酸的磷酸化增加p65调控多个炎症因子的转录和表达，p65的第536位丝氨酸磷酸化(p_p65Seri36)是NF- κ B活化的标志，所以测定NF- K B ρ65磷酸化水平是常用的检查NF- κ B信号转导通路活化的指标之一。用THPl细胞(人单核白血病细胞系，购自美国ATCC)检测Ρ15多肽对细胞中NF-κ B ρ65蛋白质磷酸化(p-p65Ser536)的影响。THPl细胞在含质量浓度为10%胎牛血清(FBS)的RPMI1640培养液，370C >5% (体积)C02/95% (体积)空气培养条件下培养于10厘米细胞培养皿中。能识别p65蛋白质中536位丝氨酸磷酸化位点(p_p65Sel:536)的特异性抗体和识别p65蛋白质的对照抗体均来自 Santa Cruz b1technology, inc.
[0043]实验质粒:pEGFP_P15 (表达P15-GFP融合蛋白)
[0044]对照质粒:pEGFP_Nl
[0045]试验步骤:将用于转染的质粒和脂质体转染试剂(购自购于美国Invitrogen)混合后，室温放置15分钟，分别加入培养于RPMI1640营养液的THPl细胞中(细胞密度约为50%)在37°C中培养5小时，再加质量浓度为10%胎牛血清，继续培养48小时。我们用上述质粒转染THPl细胞，两天后 ，采用流式细胞仪把转染了 DNA的GFP阳性细胞挑选出来，分析这些细胞的中NF-κ B中P65磷酸化的水平(p_p65Seri36)。
[0046]试验结果表明:表达P15能抑制细胞中NF- κ B中p65磷酸化水平。
[0047]试验例3:人工合成由具有穿膜功能的多肽和P15多肽组成的PTD-P15融合多肽
[0048]P15多肽并不能自由通透细胞膜，为了进一步观察P15对NF- κ B介导的信号转导通路及多个炎症因子合成和产生的影响，我们人工合成能穿透细胞膜的Ρ15融合多肽。该融合多肽被称为PTD-P15融合多肽，
[0049]PTD-P15融合多肽的氨基酸序列为:精氨酸-天门冬氨酸_亮氨酸_酪氨酸_天门冬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-赖氨酸-天门冬氨酸-精氨酸-甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸-天门冬氨酸-脯氨酸；
[0050]其中，Ρ15片段的氨基酸序列为:甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸-天门冬氨酸-脯氨酸；
[0051]具有穿透细胞膜功能的PTD多肽片段氨基酸序列为:精氨酸-天门冬氨酸-亮氨酸-酪氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-赖氨酸-天门冬氨酸-精氨酸。
[0052]同时设计和合成一个对照多肽，其氨基酸序列为:天门冬氨酸-精氨酸-精氨酸-天门冬氨酸-亮氨酸-酪氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-赖氨酸-天门冬氨酸-精氨酸-甲硫氨酸-丙氨酸-甘氨酸-苏氨酸-甲硫氨酸。
[0053]试验例4 =PTD-P15融合多肽抑制NF- κ Βρ65蛋白质的磷酸化。
[0054]因为NF- κ B中ρ65蛋白质536位丝氨酸的磷酸化增加ρ65调控多个炎症因子的转录和表达，Ρ65蛋白质中563位丝氨酸磷酸化(p-p65SM536)是NF-κ B活化的标志，所以测定NF-kB ρ65磷酸化水平是常用的检查NF-κ B信号转导通路活化的指标之一。人外周血白细胞(采集用正常志愿者)培养于培养皿中，分别加入试验例3中合成的对照多肽、PTD-P15融合多肽，细胞培养过夜后，收集细胞，用免疫印迹法检查细胞中NF-κ B中ρ65蛋白质中536位的丝氨酸磷酸化水平，免疫印迹照片如图1所示，纵向来看:a为空白对照、b为对照多肽、c为P15多肽；横向来看:X为磷酸化p65 (p-p65Ser536 )水平、Y为p65蛋白质水平、Z为GAPDH (甘油醛-3-磷酸脱氢酶)水平。结果显示PTD-P15融合多肽能减少p65磷酸化，所以，PTD-P15融合多肽能抑制细胞中NF- κ B的活化，而已阻断了 NF- κ B介导的信号转导。
[0055]试验例5 =PTD-P15融合多肽影响多个炎症因子的产生和表达的实验。
[0056]因为NF-κ B调节血液白细胞中多个炎症因子的转录和表达，所以测定血液白细胞产生和分泌炎症因子是常用的检查NF-κ B信号转导通路活化的指标之一。
[0057]收集健康人外周血5毫升，分离其中的白细胞，采用脂多糖(LPS)刺激人外周白细胞表达多种炎症因子，再加入PTD-P15融合多肽，检测其对多个炎症因子(TNF- α，白介素I和白介素6)表达(mRNA)和产生的影响。
[0058]试验步骤:分离的外周白细胞分成6组，分别在含10%胎牛血清的RPMI1640培养液，37°C，5% (体积)C02/95% (体积)空气培养条件下培养于10厘米细胞培养皿，其中一组培养细胞中加入对照多肽(空白对照组)用以对照，另外5组分别添加融合多肽、融合多肽及LPS、LPS、对照多肽及LPS。添加融合多肽的时机为加入LPS (100微克/毫升)2小时后，加入PTD-P15融合多肽(浓度100微克/毫升)，培养24小时收取细胞培养液和细胞，测定培养液中的炎症因子(TNF- α，白介素I和白介素6)，收集细胞的mRNA，利用定量RT-PCR分析细胞中mRNA表达。结果如图2a~2f所示，图中编号及对应的组别为，01为对照、02为融合多肽、03为融合多肽+LPS、04为LPS、05为对照多肽+LPS、06为对照多肽。
[0059]结果表明:PTD_P15融合多肽抑制细胞中LPS诱导的炎症因子的表达和产生。
[0060]试验例6 =PTD-P15融合多肽抑制LPS诱导的炎症小鼠死亡的实验。
[0061]因为脂多糖(LPS)可以激活炎症细胞的增殖和炎症因子的产生和分泌，引起动物的炎症反应，大剂量的脂多糖注射动物腹腔可以导致动物严重的全身炎症反应，从而导致动物的死亡。取6-8周雌性BABL/c小鼠随机分为3组，各组小鼠分别通过尾静脉注射0.2毫升溶剂，对照多肽、PDT-P15多肽(多肽注射量为75毫克/公斤体重)，24小时后，每组的半数动物(10只)通过腹腔注射脂多糖(LPS，50毫克/公斤体重，购自Sigma公司，从大肠杆菌菌株Escherichia coli0111:B5中分离纯化，活性为I X 105EU/mg)，组中的其他动物不做任何处理，2小时后，取250微升小鼠血液用作有关血液中炎症因子(TNF-a)浓度测定，动物放回动物房，每天观测各组动物存活情况，共观测10天，小鼠存活结果用相应的计算机统计软件分析。小鼠注射成分、注射量及生存率见表1。
[0062]表1小鼠注射成分、注射量及生存率表
[0063]
【权利要求】
1.P15多肽在制备治疗核因子- K B异常活化疾病药物中的用途，所述P15多肽的氨基酸序列为:甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸-天门冬氨酸-脯氨酸，该多肽通过抑制核因子-K B的活化，从而阻断核因子-K B介导的信号转导通路，影响核因子-K B结合DNA有关基因序列而改变多个参与炎症过程的蛋白质因子的表达和产生。
2.根据权利要求1所述P15多肽在制备治疗核因子-KB异常活化疾病药物中的用途，其特征在于:所述疾病包括哺乳动物的病毒感染、炎症和自身免疫性疾病，及其他和核因子-K B异常活化有关的疾病。
3.P15多肽的核苷酸编码序列在制备治疗核因子-K B异常活化疾病药物中的用途。
4.根据权利要求3所述P15多肽的核苷酸编码序列在制备治疗NF-K B异常活化疾病药物中的用途，其特征在于:所述疾病包括哺乳动物的病毒感染、炎症和自身免疫性疾病，及其他和核因子-K B异常活化有关的疾病。
5.PTD-P15融合多肽在制备治疗核因子-K B异常活化疾病药物中的用途，所述PTD-P15融合多肽的氨基酸序列为:精氨酸-天门冬氨酸-亮氨酸-酪氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-天门冬氨酸-赖氨酸-天门冬氨酸-精氨酸-甲硫氨酸-脯氨酸-酪氨酸-丝氨酸-苏氨酸-谷氨酸-亮氨酸-异亮氨酸-苯丙氨酸-酪氨酸-异亮氨酸-谷氨酸-甲硫氨酸-天门冬氨酸-脯氨酸。
6.根据权利要求5所述PTD-P15融合多肽在制备治疗核因子-κΒ异常活化疾病药物中的用途，其特征在于:所述疾病包括哺乳动物的病毒感染、炎症和自身免疫性疾病，及其他和核因子- K B活化异 常有关的疾病。
【文档编号】A61P31/12GK104043102SQ201410123289
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2014年3月28日 优先权日:2014年3月28日
【发明者】胡俊波, 夏献民, 王桂华, 王晶 申请人:武汉益承生物科技股份有限公司