本发明涉及提取技术领域，特别涉及一种具有增强抑菌作用的藜麦皂苷及其制备方法与应用。
背景技术：
藜麦是原产于南美洲的一种粮食作物，具有非常高的营养价值。近年来，我国山西、吉林、青海、甘肃、河北等地均有大规模藜麦种植。藜麦在加工成藜麦米的过程中通常会产生约20％-30％的藜麦麸皮。藜麦麸皮中含有约2％-4％的皂苷成分，导致藜麦麸皮味道苦涩，不能直接作为动物饲料进行利用。研究藜麦麸皮中的成分，充分利用藜麦麸皮资源，变废为宝，可产生显著的经济价值。
口臭通常是由于口腔致病菌在口腔内大量生长繁殖产生的硫化物而导致的。据中华口腔医学会统计，我国约有1.3亿口臭患者，因此，具有防治口臭作用的产品需求旺盛。
目前，关于藜麦麸皮中皂苷组分的研究已有报道，如藜麦皂苷具有免疫调节及减肥活性，但有关藜麦皂苷抑菌作用，尤其是抑制口腔细菌作用的研究方面尚未见相关报道。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种具有具有增强抑菌作用的藜麦皂苷及其制备方法，其克服了现有技术的上述缺陷，能使藜麦皂苷的抑菌效果显著增强。
本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：
一种具有增强抑菌作用的藜麦皂苷的制备方法，包括以下步骤：对藜麦麸皮粉碎70％甲醇提取、过滤浓缩提取液、乙酸乙酯和正丁醇除杂、碱溶液改性、脱盐、大孔树脂纯化，最后冷冻干燥得藜麦皂苷。
优选地，上述技术方案中，包括以下步骤：
1)提取：将藜麦麸皮粉碎，过60目筛，加入8-12倍量70％的甲醇，在45-65℃水浴中搅拌提取，得提取液；
2)浓缩：将提取液离心过滤，再将滤液旋蒸浓缩到一定体积，得浓缩液；
3)除杂：向浓缩液中加入2倍量体积的乙酸乙酯，震荡分层，去掉乙酸乙酯层，再加入2倍量体积的正丁醇，震荡分层，取正丁醇层，于50℃水浴挥干，得藜麦粗皂苷；
4)改性：用蒸馏水配制5-10g/L的藜麦粗皂苷溶液，加入0.1-0.2倍量体积1mol/L的NaOH溶液，于90-95℃下搅拌反应2-4小时，冷却至室温，加入0.1mol/L的盐酸调节pH至7，得中和液；
5)脱盐：将步骤4)得到的中和液置于透析袋中，透析脱盐，浓缩；
6)纯化：将步骤5)脱盐后的浓缩液过AB-8大孔树脂柱，进行分离纯化，收集目的洗脱液，冷冻干燥得藜麦皂苷。
优选地，上述技术方案中，所述70％甲醇提取的条件为：在45-65℃水浴中搅拌提取两次，每次3-5小时，得提取液。
优选地，上述技术方案中，所述过滤旋蒸的条件为：将提取液离心过滤，合并两次滤液，在温度50℃，真空度0.1Mpa条件下旋蒸浓缩。
优选地，上述技术方案中，所述脱盐过程具体为：将改性处理后的中和液置于截留分子量为100道尔顿的透析袋中，蒸馏水透析至无NaCl检出，于55℃、0.1Mpa真空度将透析截留液浓缩到一定体积。
优选地，上述技术方案中，所述大孔树脂柱分离纯化方法具体为：分别用水、30％和80％的乙醇洗脱，洗脱体积为1倍柱体积，收集80％乙醇洗脱的部分，于50℃水浴挥干乙醇，得藜麦粗皂苷。
一种根据上述任一所述的具有增强抑菌作用的藜麦皂苷的制备方法制备得到的藜麦皂苷。
一种根据任一所述的具有增强抑菌作用的藜麦皂苷的制备方法制备得到的藜麦皂苷在制备具有防口臭的产品中的应用。
本发明基于以下原理：
通过碱处理改变藜麦皂苷的结构，从而使其抑菌效果显著增强。
本发明上述技术方案，具有如下有益效果：
本发明能够快速高效地制备具有增强抑菌效果的藜麦皂苷。细菌培养实验证明，碱处理后的藜麦皂苷较未碱处理的皂苷抑菌效果显著增强。尤其经过三种口腔致病菌(牙龈卟啉单胞菌、产气荚膜梭杆菌、具核梭杆菌)体外培养实验证明，碱处理后的藜麦皂苷较未碱处理藜麦皂苷的抑菌作用明显增强。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施例进行详细描述，以便于进一步理解本发明。
以下实施例中所有使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
以下实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。
实施例1
一种具有增强抑菌作用的藜麦皂苷，其制备方法如下：
(1)藜麦麸皮粉碎，过60目筛，取200g置于锥形瓶中，加入70％的甲醇1600mL，在45℃水浴中搅拌提取两次，每次5小时；
(2)合并两次滤液，旋蒸温度50℃，真空度0.1Mpa，浓缩提取液到80mL；
(3)浓缩液加入160mL的乙酸乙酯，震荡分层，去掉乙酸乙酯层，再加入160mL正丁醇，震荡分层，取正丁醇层于50℃水浴挥干，得藜麦粗皂苷；
(4)用蒸馏水配制5g/L的藜麦粗皂苷溶液1L，加入1mol/L的NaOH溶液100mL，于90℃下搅拌反应4小时，冷却至室温，加入0.1mol/L的盐酸调节pH到7；
(5)将(4)得到的中和液置于截留分子量为100D的透析袋中，蒸馏水透析至无NaCl检出，于55℃、0.1Mpa真空度将透析截留液浓缩到100mL；
(6)采用AB-8大孔树脂对(5)得到的浓缩液进行分离纯化，分别用水、30％和80％的乙醇洗脱，洗脱体积为1个柱体积；
(7)收集80％乙醇洗脱的部分，于50℃水浴挥干乙醇，冷冻干燥制得藜麦皂苷。
实施例2
一种具有增强抑菌作用的藜麦皂苷，其制备方法如下：
(1)藜麦麸皮粉碎，过60目筛，取400g置于锥形瓶中，加入70％的甲醇3200mL，在65℃水浴中搅拌提取两次，每次3小时；
(2)合并两次滤液，旋蒸温度50℃，真空度0.1Mpa，浓缩提取液到150mL；
(3)浓缩液加入300mL的乙酸乙酯，震荡分层，去掉乙酸乙酯层，再加入300mL正丁醇，震荡分层，取正丁醇层于50℃水浴挥干，得藜麦粗皂苷；
(4)用蒸馏水配制10g/L的藜麦粗皂苷溶液1L，加入1mol/L的NaOH溶液200mL，于95℃下搅拌反应2小时，冷却至室温，加入0.1mol/L的盐酸调节pH到7；
(5)将(4)得到的中和液置于截留分子量为100D的透析袋中，蒸馏水透析至无NaCl检出，于55℃、0.1Mpa真空度将透析截留液浓缩到100mL；
(6)采用AB-8大孔树脂对(5)得到的浓缩液进行分离纯化，分别用水、30％和80％的乙醇洗脱，洗脱体积为1个柱体积；
(7)收集80％乙醇洗脱的部分，于50℃水浴挥干乙醇，冷冻干燥制得藜麦皂苷。
实施例3
一种具有增强抑菌作用的藜麦皂苷，其制备方法如下：
(1)藜麦麸皮粉碎，过60目筛，取800g置于锥形瓶中，加入70％的甲醇8000mL，在60℃水浴中搅拌提取两次，每次4小时；
(2)合并两次滤液，旋蒸温度50℃，真空度0.1Mpa，浓缩提取液到200mL；
(3)浓缩液加入400mL的乙酸乙酯，震荡分层，去掉乙酸乙酯层，再加入400mL正丁醇，震荡分层，取正丁醇层于50℃水浴挥干，得藜麦粗皂苷；
(4)用蒸馏水配制8g/L的藜麦粗皂苷溶液1L，加入1mol/L的NaOH溶液150mL，于92℃下搅拌反应3小时，冷却至室温，加入0.1mol/L的盐酸调节pH到7；
(5)将(4)得到的中和液置于截留分子量为100D的透析袋中，蒸馏水透析至无NaCl检出，于55℃、0.1Mpa真空度将透析截留液浓缩到150mL；
(6)采用AB-8大孔树脂对(5)得到的浓缩液进行分离纯化，分别用水、30％和80％的乙醇洗脱，洗脱体积为1个柱体积；
(7)收集80％乙醇洗脱的部分，于50℃水浴挥干乙醇，冷冻干燥制得藜麦皂苷。
实施例4
实施例1、2、3具增强抑菌作用的藜麦皂苷，通过体外抑菌实验来具体说明本发明的抑菌增强效果：
方法：采用牙龈卟啉单胞菌(ATCC52066)、产气荚膜梭杆菌(ATCC28188)、具核梭杆菌(ATCC9533)为代表菌，检验藜麦皂苷的抑菌作用。配制藜麦皂苷系列浓度溶液，加入到细菌浓度为1×107cfu/mL的3种菌液中，于37℃孵育24h，测定最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。本实验对照组样品(未碱处理藜麦皂苷)按照实施例3不包括第(4)和第(5)步以外的步骤制备。
表1为藜麦皂苷抑菌活性实验结果。
结果证明(如表1所示)，碱处理藜麦皂苷对三种受试菌的MIC和MBC均小于未碱处理藜麦皂苷，表明碱处理藜麦皂苷对牙龈卟啉单胞菌、产气荚膜梭杆菌、具核梭杆菌的抑菌作用强于未碱处理藜麦皂苷。在三种受试菌中，碱处理藜麦皂苷对具核梭杆菌的抑制作用最强。
因此，根据本发明制备方法制备得到的藜麦皂苷，其可作为有效活性成分进一步加工成具有防口臭的产品，该产品的剂型可根据需要选择喷雾剂、汤剂、散剂、丸剂等各种不同的剂型。
虽然本发明已以实施例公开如上，然其并非用于限定本发明，任何本领域技术人员，在不脱离本发明的精神和范围内，均可作各种不同的选择和修改，因此本发明的保护范围由权利要求书及其等同形式所限定。