1.一种以铁蛋白为载体的抗肿瘤药物的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)制备铁蛋白;
(2)对铁蛋白和抗肿瘤药物的混合溶液在200-800MPa压力下进行高压处理6-20h;
(3)对步骤(2)处理后的产物进行分离纯化得到以铁蛋白为载体的抗肿瘤药物。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)所述铁蛋白的制备方法包括以下步骤:
a、将表达有铁蛋白的工程菌破碎后收集上清液,上清液经过热处理后进行冰浴得到粗样品;
b、将粗样品离心去除沉淀,取上清液,经层析柱纯化得到铁蛋白。
3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,步骤a所述工程菌的构建采用PET-28a作为载体,将铁蛋白基因克隆至所述载体上构建重组质粒,而后将重组质粒转至大肠杆菌BL21进行铁蛋白原核表达;
优选地,步骤a所述热处理在温度70-80℃下进行;
优选地,步骤a所述热处理的时间为5-15min;
优选地,步骤a所述冰浴的时间为10-25min。
4.根据权利要求2或3所述的制备方法,其特征在于,步骤b所述离心的转速为8000-15000rpm;
优选地,步骤b所述离心的时间为20-40min;
优选地,步骤b所述离心在4℃下进行;
优选地,步骤b所述层析柱为Superdex 200凝胶过滤层析柱。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述抗肿瘤药物为小分子抗肿瘤药物;
优选地,步骤(2)所述抗肿瘤药物为阿霉素、5-氟尿嘧啶、紫杉醇或顺铂中的任意一种或至少两种的组合,优选阿霉素;
优选地,步骤(2)所述铁蛋白与抗肿瘤药物的质量比为1:1-3:1;
优选地,步骤(2)所述铁蛋白和抗肿瘤药物的混合溶液是将铁蛋白和抗肿瘤药物加入至缓冲溶液中得到的溶液;
优选地,所述缓冲溶液为醋酸缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液或Tris-HCl缓冲溶液中的任意一种;
优选地,所述缓冲溶液为pH值4.5-8.5的缓冲溶液;
优选地,所述缓冲溶液为pH 4.5的20mM醋酸-醋酸钠缓冲溶液、pH 5.5的20mM醋酸-醋酸钠缓冲溶液、pH 6.5的20mM磷酸盐缓冲液、pH 7.5的20mM磷酸盐缓冲液或pH 8.5的20mM Tris-HCl缓冲溶液中的任意一种,优选为pH 5.5的20mM醋酸-醋酸钠缓冲溶液。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述混合溶液中还包含添加剂;
优选地,所述添加剂为氯化钠、脲或精氨酸中的任意一种或至少两种的组合,优选精氨酸;
优选地,所述添加剂在混合溶液中的浓度为0.01-2mol/L。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)所述高压处理为在650MPa压力下作用16h。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的制备方法,其特征在于,步骤(3)所述分离纯化利用Sephedax G25脱盐层析来实现;
优选地,所述Sephedax G25脱盐的方法为:将高压处理后的产物直接上样,收集蛋白洗脱峰,采用280nm和480nm双波长检测,得到装载药物的铁蛋白和游离的抗肿瘤药物;
优选地,所述Sephedax G25脱盐过程中使用的缓冲液为pH 7.4的200mM磷酸盐缓冲液;
优选地,经Sephedax G25脱盐后得到的游离的抗肿瘤药物经过冻干、有机溶剂复溶、冷乙醚沉淀和干燥进行提纯回收。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的制备方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)制备铁蛋白:将表达有铁蛋白的工程菌破碎后收集上清液,上清液在70-80℃下进行热处理5-15min,而后进行冰浴10-25min得到粗样品,将粗样品8000-15000rpm下离心去除沉淀,取上清液,经Superdex 200凝胶过滤层析柱纯化得到铁蛋白;
(2)将质量比为1:1-3:1的铁蛋白和抗肿瘤药物加入至pH值4.5-8.5的缓冲溶液中,混合均匀,并向其中加入添加剂,得到混合溶液,将混合溶液在200-800MPa压力下进行高压处理6-20h;
(3)利用Sephedax G25脱盐层析对步骤(2)处理后的产物进行分离纯化得到以铁蛋白为载体的抗肿瘤药物。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的制备方法制备得到的以铁蛋白为载体的抗肿瘤药物。