本发明涉及医药技术领域，具体是一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物及药物。
背景技术：
我国每年新患癌症约160万人、死于癌症者约130万人。全世界和我国的癌症发病率在逐年明显增加。而我国癌症病人就诊时晚期病人仍占多数，具有已失去了手术等根治机会、治疗效果较差的特点。按现在我国癌症死亡的水平，全国每1分钟就有2个人死于癌症，每天将有2800多人被癌症夺走生命，1年将相当于一个有百万人口的城市被毁灭。可见，癌症是常见病、多发病，对人们生命和健康有者严重威胁，对国民经济建设的影响也是巨大的。在美国，每年癌症治疗费用830亿美元，占全国医疗费用的14％。几乎每个人都感受到癌症的威胁。因为全世界每年因癌症死亡的人数高达630万人，而我国每年因癌症死亡的人数已达130万人，并且癌症病人每年以3％的速度递增，相当于每200个家庭中就有1个家庭受到癌症的威胁。
目前，人人“谈癌色变”，如何预防和治疗癌症是一个世界性的难题。临床上虽然有很大抗癌药物，但没有一种药物能完全预防和治愈癌症。人参皂苷Rg3最早从红参中获得，其含量仅为0.003％，因其含量太低，生产工艺复杂，导致生产成本较高。人参皂苷Rg3具有显著的抗肿瘤和提高肌体免疫功能的活性，适合早、中、晚期肿瘤患者及免疫低下预防肿瘤发生人群服用。其作用机理为抑制肿瘤内新生血管形成；阻止脱落癌细胞在血管壁的着床；抑制肿瘤细胞对血管壁基底膜的浸润，有显著抗浸润、抗转移作用。临床实验证实其具有较好的抑制肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、乳腺癌等癌细胞生长，明显改善临床症状、提高生存质量、预防和治疗癌症、改善心脏血管功能、抗血小板凝集、保护脑神经细胞、提高机体免疫力。直接服用具有预防癌症以及治疗癌症的功效，适用于急、重、晚期癌症患者，体质较虚弱，服用可提高自身免疫功能，增强抗瘤能力，减轻化疗后毒副作用。人参皂苷rg3与其它抗癌药物联合应用，其抗癌和提高肌体免疫功能方面具有更好的功效。临床上使用的参一胶囊有效成分即为人参皂苷rg3，主要用于治疗癌症和癌症的辅助治疗。
水飞蓟素(英语：silymarin)是抗氧化剂，从一种名为乳蓟(Milk Thistle)植物提炼而成。水飞蓟素能稳定肝细胞膜，维持肝细胞之完整性，使毒素无法穿透破坏肝脏，并能加速合成肝脏细胞的DNA(去氧核糖核酸)，可预防肝硬化、脂肪肝、胆管炎、牛皮癣等症，同时具有肝癌、前列腺癌、乳癌及子宫颈癌细胞的生长及分化抑制作用。是目前世界上所发现最具肝疾疗效的类黄酮。
如果能将二者在药理上进行结合，充分发挥各自功效，且激发协同免疫、抗癌、保健功效，将在医药领域获得较为重要的进步。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物，它通过将人参皂苷Rg3和水飞蓟素进行一定比例的组合，使发挥优异的协同药效，有效抑制肿瘤细胞，刺激淋巴细胞增殖，具有高效抗癌、增强免疫力的药效及保健效果。
本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：
一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物，其组分按重量份数计包括：人参皂苷Rg33～7份，水飞蓟素3～7份。
优选的，其组分按重量份数计包括：人参皂苷Rg3 4～6份，水飞蓟素4～6份。
作为一种最优方案，其组分包括重量份数相同的人参皂苷Rg3和水飞蓟素。
一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物注射液的制备方法，包括以下步骤：将50～70g精氨酸和50～70g的水混匀，加入人参皂苷Rg3 100～170g和水飞蓟素100～170g，加热至45～55℃，搅拌溶解后，将PH值调整至4.4～4.8，加入400～800ml的水，搅拌均匀后加入活性炭，活性炭加入的量为总物料的0.05～0.15％g/ml，搅拌20～30分钟后，粗滤脱炭，再过0.20～0.25μm滤膜，得精滤液；灌封，110～125℃热压灭菌15～20分钟，即得注射液成品。
优选的，上述步骤为：
将58g精氨酸和58g的水混匀，加入人参皂苷Rg3和水飞蓟素各137g，加热至50℃，搅拌溶解后，使用9％的盐酸水溶液将PH值调整至4.6，加入500ml的水，搅拌均匀后加入活性炭，活性炭加入的量为总物料的0.1％g/ml，搅拌25分钟后，粗滤脱炭，再过0.22μm滤膜，得精滤液；按每瓶装量2mL灌封，118℃热压灭菌18分钟，即得注射液成品。
一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物片剂，其原料按重量份数计包括：人参皂苷Rg3 5～30份、水飞蓟素5～30份、乳糖40～65份、羧甲基淀粉钠2～3份、微粉硅胶4～5份、精氨酸50～70份、羧甲基淀粉钠4～6份、微粉硅胶1～2份。
优选的，所述一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物片剂的原料按重量份数计包括：人参皂苷Rg3 15份、水飞蓟素15份、乳糖55份、羧甲基淀粉钠2.6份、微粉硅胶4.3份、精氨酸63份、羧甲基淀粉钠5.2份、微粉硅胶1.5份。
对比现有技术，本发明的有益效果在于：
通过药理学实验，人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物抗癌活性和增强机体免疫功能活性均优于人参皂苷Rg3，即组合物药理活性比单一组分的抗癌药物强，说明二者组合具有协同的药理作用，且在1:1的重量配比时协同作用效果最佳，具有优异的药理药效作用。这一发现对预防和治疗癌症的药物及保健品开发方面具有积极意义。
本发明组合物经试验证明可有效抑制肿瘤细胞，刺激淋巴细胞增殖，小剂量组合物均没有刺激淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ的能力，大剂量组合物有明显刺激刺激淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ。
在实际运用中，本发明的组合物可以制成片剂、胶囊剂、汤剂、口服液、冲剂、丸剂、注射剂的剂型。所述片剂包括糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、口含片剂；所述胶囊剂包括硬胶囊剂、软胶囊剂；所述冲剂包括颗粒剂和散剂；所述注射剂包括冻干粉针、静脉乳剂、注射液剂。其中，口服制剂优选为片剂、胶囊剂、颗粒剂；注射用制剂优选为冻干粉针、静脉乳剂、注射液剂。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
下述实施例中所涉及的仪器、试剂、材料等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规仪器、试剂、材料等，可通过正规商业途径获得。下述实施例中所涉及的实验方法，检测方法等，若无特别说明，均为现有技术中已有的常规实验方法，检测方法等。
实施例1：一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物，其组分按重量份数计包括人参皂苷Rg3 3.5份，水飞蓟素6.5份。
实施例2：一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物，其组分按重量份数计包括人参皂苷Rg3 6份，水飞蓟素4份。
实施例3：一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物，其组分按重量份数计包括人参皂苷Rg3 1份，水飞蓟素1份。
实施例4：一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物注射液
其制备方法为：
称取精氨酸58g、等质量的水，搅拌均匀，加入人参皂苷Rg3 125g、水飞蓟素150g，加热至50℃，搅拌溶解，用含9％盐酸的水溶液调pH值至4.6，加水至500ml量，搅拌均匀；再加入配液量0.l％(g/ml)的活性炭，搅拌25分钟，粗滤脱炭；过0.22μm滤膜，得精滤液；灌封，每瓶装量2mL；118℃热压灭菌18分钟，检验，包装，入库。
实施例5：一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物片剂
其制备方法为：
1)将人参皂苷Rg3 20g、水飞蓟素10g混合后搅拌均匀，得粉末状固体；
2)将步骤(1)所得的粉末与乳糖55g、羧甲基淀粉钠2.6g和微粉硅胶4.3g混合均匀，加入精氨酸63g制成适宜软材，20目筛制粒；
3)羧甲基淀粉钠5.2g和微粉硅胶1.5g与步骤(2)所得的干颗粒混匀，压片，得片剂。
实施例6：一种含有人参皂苷Rg3和水飞蓟素的组合物抗肿瘤应用的小鼠实验
细胞：
B16黑色素瘤细胞(B16melanoma cell)；
人肝癌细胞(HepG2)细胞从美国典型细胞库(ATCC,Hanassas,VA,USA)购买获取。
培养基：
细胞培养用DMEM液培养(FBS；HyClone,Logan,UT,USA)，培养液添加10％胎牛血清(FBS；HyClone,Logan,UT,USA)，0.03％L–谷氨酰胺,100U/L青酶素，100mg/L链霉素，5％NaCO2调pH至6.8–7.0。
样品：
实验组1：人参皂苷Rg3 30％和水飞蓟素70％；
实验组2：人参皂苷Rg3 50％和水飞蓟素50％；
实验组3：人参皂苷Rg3 70％和水飞蓟素30％。
组合物用20μl二甲基亚砜(DMSO)溶解，用于配置不同浓度的DMEM细胞培养基。紫杉醇(TAX：Paclitaxel)和顺铂(PPD：Cisplatin)购自Sigma Chemical公司(St.Louis,MO)。
设备：
酶标仪Bio-RAD 680(USA)；
CO2培养箱Thermo Forma 3310(美国)；
倒置生物显微镜XD-101型(南京)等。
对肿瘤细胞的生长抑制评价：
原代培养的正常昆明鼠肾细胞，B16细胞以及HepG2细胞以细胞密度为1×104/ml接种于96孔板中培养24小时后，把普通DMEM培养基换为含有终浓度为0μg，25μg，50μg，75μg，100μg不同组化合的DMEM培养基，每个浓度设3个孔，并在24小时之后用MTT法检测细胞的活性，细胞抑制活性用抑制浓度IC50(median inhibitory concentration)表示。抑制浓度(IC50)为细胞活性抑制率为50％时的药物浓度，计算方法为IC50＝(A细胞对照组－A供试样品组)/A细胞对照组－A空白组)×100％。
MTT法：根据Mosmann建立的MTT法检测药物的细胞毒性(Y.Nakajima,Y.Saton,M.Katsumata,K.Tsujiyama,Y.Ida,and J.Shoji,Phytochemistry 1994,36,119-127)。具体方法是：向吸去上清的细胞孔中加入0.4mg/mL MTT，0.1mL/孔，37℃5％CO2培养4h，去上清，每孔加入0.1mL二甲基亚砜(DMSO)，孵育10min，在酶标仪上测定溶液在570nm下的吸光度值。
表1对肿瘤细胞的半数抑制浓度IC50(μg/mL)
实验结果如表1所示，阳性对照组(TAX，PPD)以及三个实验组均对B16和HepG2细胞有抑制作用。对B16细胞的半数抑制浓度IC50在50μg/ml以下。并且，所有实用组对正常小鼠肾细胞均没有毒性。
免疫调节活性检测：
将125只18～20g昆明小鼠按照每组5只随机分为：生理盐水组，12组1mg/kg和12组4mg/kg的试验组，实验组为：实验组1：人参皂苷Rg3 30％和水飞蓟素70％；实验组2：人参皂苷Rg3 50％和水飞蓟素50％；实验组3：人参皂苷Rg3 70％和水飞蓟素30％。每天分别腹腔注射生理盐水或者4mg/kg的化合物组。7天后处死，并脱臼取脾预备下面实验。
1)MTT法测定淋巴细胞增殖能力
无菌制备脾细胞悬液，调细胞浓度为1×107/mL。每孔100μL。设细胞对照孔(加DMEM培养液)和伴刀豆球蛋白(ConA)刺激孔(ConA的浓度为5mg/L)。于37℃CO2培养48h，加入5mg/mL的MTT溶液，37℃5％CO2培养4h，去上清，每孔加入100μL二甲基亚砜(DMSO)，孵育10min，在酶标仪上测定溶液在570nm下的吸光度值A。计算刺激指数(SI)。SI＝刺激孔A平均值/对照孔A平均值。
实验结果见表2，阳性对照组(TAX，PPD)均没有刺激淋巴细胞增殖的作用，三个实验组均能刺激淋巴细胞增殖。
2)NK细胞对肿瘤细胞杀伤毒性测定
将100μL小鼠脾细胞(1×107/mL)与100μL YAC-1细胞按细胞浓度50：1的比例加入96孔板。设靶细胞(YAC-1细胞)对照、效应细胞(各化合物组小鼠脾细胞)对照，各3复孔。于37℃、5％CO2孵箱培养18h，加入MTT溶液，测定A570值。计算NK细胞毒百分率：NK细胞毒百分率＝[1-(效靶孔A值-效应对照孔A值)/靶对照孔A值]×100％。
验结果见表2，阳性对照组(TAX，PPD)均没有加强NK细胞对肿瘤细胞杀伤的作用。NK细胞对肿瘤细胞杀伤毒性实验表明，小剂量实验组均能增强NK细胞的杀伤性，均有较强活性。
表2淋巴细胞增殖能力(SI)及NK细胞对肿瘤细胞杀伤毒性的影响(％)
(n＝5，*表示和刺激组比较P<0.05)
3)脾细胞培养上清中IL-2和IFN-γ分泌测定
IL-2活性测定采用小鼠T淋巴母细胞增殖法，MTT法所测A570值与IL-2活性呈正相关，IFN-γ活性测定采用L929细胞病变抑制法，结晶紫染色所测A540值大小反映IFN-γ活性的高低。将脾细胞培养上清加入到小鼠T淋巴母细胞或L929细胞中，两种细胞的生长状况反映相应的细胞因子含量。
表3实验组对IL-2和IFN-γ分泌的影响(n＝5，*表示和刺激组比较P<0.05)
实验结果见表3，阳性对照组(TAX，PPD)均没有刺激淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ的能力。三个实验组小剂量组均没有刺激淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ的能力，大剂量组有明显刺激刺激淋巴细胞分泌IL-2和IFN-γ。