本发明涉及一种纳豆激酶组合物，尤其涉及一种纳豆激酶组合物及其制备方法。
背景技术：
纳豆源自古代中国，是一种大豆经纳豆菌发酵而成的食品。唐朝时，纳豆由鉴真大师传入日本，其首先在寺庙得到发展，并逐渐风靡日本民间，在日本人的餐桌上占有重要的位置。20世纪80年代，在美国从事血栓研究的hiroyukisumi(须见洋行)用人工血栓板对各种天然产物进行大量筛选，以寻找新的抗血栓物质。一次偶然的尝试，他发现纳豆具有极强的溶解人工血栓的能力，在进行深入研究后，终于从纳豆的粘性物质中分离出一种能够溶解血栓的丝氨酸蛋白酶，并命名为纳豆激酶。
纳豆激酶是胞外酶，可以利用纳豆菌的发酵液提取，传统的分离纯化技术多层次盐析法，但酶回收入率偏低(18-50％)。另外还有层析柱层析法，但这些方法基本上都存在酶活力低，生产率低，生产成本高等问题。为此很多学者尝试了很多不同的分离纯化技术，如金属螯合双水相亲合分离、反胶团相转移分离、磁性高分子微球分离、泡沫分离以及扩张床吸附分离等，均取得不同程度进展。纳豆激酶制剂通常会带有一种独特的气味，这种气味令很多非日本裔人群感到厌恶，而纯的纳豆激酶为无臭、无味的白色或淡黄色粉末，产品的纯度级别问题是限制纳豆激酶发展瓶颈。
基于纳豆激酶的纤溶活性、溶栓能力和安全性，拉动了市场的强烈需求，国内外学者们已经在纳豆激酶的生产技术及纳豆中有效成分的研究进行了大量的工作。市场有见转基因技术产品、纳豆提取激酶、纳豆冻干粉产品面世，这些产品技术上存在临床安全性、纳豆激酶以外有效物质缺失、纳豆激酶活性不高等弊端，所以研发一种具有高活力全营养的纳豆激酶产品有着重要的意义。
技术实现要素：
针对现有技术中存在的上述不足，本发明所要解决的技术问题是提供一种纳豆激酶组合物及其制备方法。
本发明所要解决的技术问题，是通过如下技术方案实现的：
一种纳豆激酶组合物，包括下述原料制备而成：纳豆激酶、糊精、香料、甘味料。
一种纳豆激酶组合物，由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶5-15份、糊精80-90份、香料1-5份、甘味料1-5份。
一种纳豆激酶组合物，由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶7-11份、糊精82-88份、香料1.5-3.5份、甘味料1-3份。
一种纳豆激酶组合物，由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶9-11份、糊精84-86份、香料2.4-2.6份、甘味料1.9-2.2份。
优选地，所述香料为柠檬酸、苹果酸、酒石酸、维生素c、香草酸、甘草酸中的一种或多种的混合物。
更优选地，所述香料为柠檬酸。
优选地，所述甘味料为木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、甜菊糖中的一种或多种的混合物。
优选地，所述糊精为β-环糊精、羟丙基-β-环糊精中的一种或其混合物。
优选地，所述纳豆激酶组合物为颗粒剂或粉剂或片剂或胶囊剂。
一种纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纳豆激酶、糊精、香料、甘味料投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀5-10分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度80-90℃，出风温度40-50℃，停止喷雾并干燥0.5-1.0小时，检测水分2-5wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以20-40目筛进行整粒即得。
本发明对配方组分及用量进行深入研究，优选出合适的甘味料、香料的种类，具有较好的预防血栓形成以及溶栓效果；并且制备方法简单，生产成本低，易于大规模化生产；本发明的纳豆激酶组合物口感好，服用方便，对心脑血管具有很好的保健作用。本发明纳豆激酶可溶栓、抗凝、调压降脂肪、改善血液循环，刺激血管内皮细胞产生组织型纤溶酶原(t-pa)，将纤溶酶原激活为纤溶酶，从而溶解纤维蛋白，降解血栓；其特点是温和、持续溶栓，抑制血小板凝聚。
具体实施方式
稳定性测试：本发明纳豆激酶组合物中包含的纳豆激酶是主要功效成分。将纳豆激酶组合物用铝塑复合膜袋密封包装，将它们置于38℃温度下放置3个月，测定各试样中3月时的纳豆激酶活力相对于该试样0月时纳豆激酶活力的残余的酶活力百分比。残余酶活力百分比(％)＝3月时的纳豆激酶活力/0月时的纳豆激酶活力×100％
酶活力测试方法：
1.标准曲线的测定
依据《中华人民共和国卫生部ws2011(x2006)95》中“尿激酶琼脂糖-纤维蛋白平板法”进行测定。
(1)将牛纤维蛋白原溶解于ph7.4的磷酸盐缓冲液(0.01mmol/l)中，制成100mg/ml可凝结蛋白溶液；凝血酶溶解于ph7.4的磷酸盐缓冲液中，制成1000iu/ml的溶液。
(2)琼脂糖-纤维蛋白平板制备：取1wt％琼脂糖溶液12ml，先在水浴45℃恒温10min，然后分别将100mg/ml牛纤维蛋白原91μl、1000iu/ml凝血酶溶液47μl溶于0.5mlpbs缓冲液中，45℃水浴中恒温10min。待两者温度一致时，将0.5ml凝血酶、0.5ml牛纤维蛋白原与琼脂糖溶液迅速混匀，立即倒平板，尽量不产生气泡。37℃孵育1h，贮存于4℃冰箱备用，贮存期一般不超过3d。
(3)取尿激酶标准品用0.9％无菌生理盐水稀释成5、10、20、40、60、80和100iu/ml各取10μl点样于新配制的平板上，37℃保温17h。取出后测出标准品和待测品的溶圈最大直径及垂直于最大直径的另一直径，求出溶圈直径的平均值，以溶圈直径平均值的平方表示，从而计算出待测品的活性相当于尿激酶的单位数。以酶活(iu/ml)为横坐标，溶解圈面积(cm2)为纵坐标，得到尿激酶标准曲线和标准曲线的回归方程。
2.纳豆激酶酶活性的测定
将2g纳豆激酶组合物加入5ml质量分数为0.9％生理盐水中，4℃浸提4h，4℃，4500r/min离心20min，上清液即为酶溶液；用微量加样器移取10μl酶溶液点种于纤维蛋白平板上，同时以一定单位的标准尿激酶作对照，做好标记，37℃保温18h，测量透明圈直径，计算溶解圈面积，与标准曲线比对，计算酶活力。
保鲜性能测试：将纳豆激酶组合物，置于温度为40℃，相对湿度为85％的环境下敞开存放，30天后进行大肠杆菌(atycc25922)菌落总数测试，参照gbt4789.2-2008食品卫生微生物学检验菌落总数测定。
实施例中各原料及设备介绍：
纳豆激酶，参照专利申请号：201310547971.3中实施例1所示方法制备，纳豆激酶活力为375万u/g。
实施例1-5
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按表1的原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、柠檬酸、木糖醇投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
表1：纳豆激酶组合物的原料配比及性能测试结果表
由表1看出，采用实施例2、实施例3的原料配比，即纳豆激酶为9-11重量份，β-环糊精为84-86重量份，柠檬酸2-3重量份、木糖醇2-3重量份时纳豆激酶组合物的性能较为理想。
实施例6-10
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按表2的原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、柠檬酸、木糖醇投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
表2：纳豆激酶组合物原料配比及性能测试结果表
由表2看出，采用实施例8的原料配比，即柠檬酸为2.5重量份时纳豆激酶组合物的性能较为理想。
实施例11-15
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按表3的原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、柠檬酸、木糖醇投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
表3：纳豆激酶组合物原料配比及性能测试结果表
实施例16
纳豆激酶组合物由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶10.45份、β-环糊精85份、苹果酸2.5份、木糖醇2.05份。
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按上述原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、苹果酸、木糖醇投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
实施例17
纳豆激酶组合物由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶10.45份、β-环糊精85份、酒石酸2.5份、木糖醇2.05份。
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按上述原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、酒石酸、木糖醇投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
实施例18
纳豆激酶组合物由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶10.45份、β-环糊精85份、维生素c2.5份、木糖醇2.05份。
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按上述原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、维生素c、木糖醇投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
实施例19
纳豆激酶组合物由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶10.45份、β-环糊精85份、香草酸2.5份、木糖醇2.05份。
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按上述原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、香草酸、木糖醇投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
实施例20
纳豆激酶组合物由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶10.45份、β-环糊精85份、甘草酸2.5份、木糖醇2.05份。
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按上述原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、甘草酸、木糖醇投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
实施例21
纳豆激酶组合物由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶10.45份、β-环糊精85份、柠檬酸2.5份、赤藓糖醇2.05份。
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按上述原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、柠檬酸、赤藓糖醇投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
实施例22
纳豆激酶组合物由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶10.45份、β-环糊精85份、柠檬酸2.5份、麦芽糖醇2.05份。
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按上述原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、柠檬酸、麦芽糖醇投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
实施例23
纳豆激酶组合物由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶10.45份、β-环糊精85份、柠檬酸2.5份、甜菊糖2.05份。
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按上述原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、柠檬酸、甜菊糖投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。
实施例24
更优选地，所述甘味料由40-60wt％木糖醇和40-60wt％甜菊糖组成。
纳豆激酶组合物由下述重量份的原料制备而成：纳豆激酶10.45份、β-环糊精85份、柠檬酸2.5份、木糖醇1.025份、甜菊糖1.025份。
纳豆激酶组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)按上述原料配比将纳豆激酶、β-环糊精、柠檬酸、木糖醇、甜菊糖投入沸腾制粒器中，开启沸腾制粒器将各种原辅料在沸腾制粒器充分混匀8分钟，然后以水为润湿剂进行喷雾制粒，控制进风温度85℃，出风温度45℃，停止喷雾并干燥1小时，检测颗粒的水分为3wt％；
(2)将制备的颗粒用颗粒整粒机以30目筛进行整粒即得。纳豆激酶组合物性能测试结果：残余酶活力百分比为92.6％，大肠杆菌菌落总数为127cfu/g。
测试例1
将实施例16-23制备的纳豆激酶组合物进行性能测试。具体结果如表4所示。
表4：纳豆激酶组合物性能测试结果表
由表4看出，实施例16-23中，香料采用柠檬酸，甘味料采用甜菊糖，纳豆激酶组合物性能最优异。