山豆根羽扇豆烷醇的用途的制作方法

本发明涉及医药食品保健品领域，特别是涉及一种山豆根化合物羽扇豆烷醇的医药用途。
背景技术：
肿瘤是指机体在各种致瘤因子作用下，局部组织细胞增生所形成的新生物。随着人们物质生活水平的提高，生活中接触的饮食等种类越来越多，人们在享受的同时也增加了罹患肿瘤的机率，其中，鼻咽癌、食道癌和喉癌发病率增加幅度较大。鼻咽癌已经成为耳鼻咽喉恶性肿瘤的主要癌种和病死因素，在我国发病率由南向北递减，在两广地区尤其高发。发病率在20岁以上的人群中随着年龄增长递增，在45～60岁左右达到峰值。鼻咽癌的病因可能与遗传、环境和eb病毒感染等因素有关，目前比较有效的治疗手段提倡调强放疗。未来随着我国人口老龄化不断加重，鼻咽癌的发病、死亡水平可能还将不断上升，而由此带来的癌症负担也将持续增长，防控形势严峻，而目前有效治疗鼻咽癌的药物十分紧缺。食管癌是常见的消化道肿瘤，全世界每年约有30万人死于食管癌。其发病率和死亡率各国差异很大。我国是世界上食管癌高发地区之一，每年平均病死约15万人。男多于女，发病年龄多在40岁以上。食管癌典型的症状为进行性咽下困难，先是难咽干的食物，继而是半流质食物，最后水和唾液也不能咽下。喉癌是最常见的头颈肿瘤之一，在呼吸道肿瘤中发病率居第二位，以鳞状细胞癌为主，约占95％。有调查表明，喉癌的发病率不断升高，每年约增加25％，常见于中老年男性。根据最新的研究，虽然近30年来新的外科手术方法、化疗药物及更先进的放射治疗手段己应用在喉癌的治疗中，喉癌患者的总生存率不但并未得到提高，甚至有下降的趋势，仅约50％，晚期喉癌的生存率更低达30～40％。已确认喉癌的病因包括吸烟、酗酒、空气污染、职业因素等。根据分子生物学的研究证实喉癌的发生发展是多基因、多步骤渐进发展的结果。山豆根为豆科植物越南槐(sophoratonkinensisgagnep.)的干燥根和根茎。主产于广西、广东、四川、湖南等省区。具有清热解毒，消肿利咽功效。用于治疗火毒蕴结，乳蛾喉痹，咽喉肿痛，齿龈肿痛，口舌生疮。技术实现要素：本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本发明还有一个目的是提供一种山豆根羽扇豆烷醇的用途，山豆根羽扇豆烷醇可以显著抑制鼻咽癌、宫颈癌、食道癌、肝癌、喉癌、乳腺癌和前列腺癌细胞的生长以及抑制鼻咽癌细胞的转移，具有发展成为治疗鼻咽癌等疾病药物的良好应用前景。为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种山豆根羽扇豆烷醇的用途，所述山豆根羽扇豆烷醇在制备治疗肿瘤的药物制剂中的应用。优选的是，所述的山豆根羽扇豆烷醇的用途，所述山豆根羽扇豆烷醇在制备治疗鼻咽癌的药物制剂中的应用。优选的是，所述的山豆根羽扇豆烷醇的用途，所述山豆根羽扇豆烷醇在制备治疗食道癌的药物制剂中的应用。优选的是，所述的山豆根羽扇豆烷醇的用途，所述山豆根羽扇豆烷醇在在制备治疗高脂血症、高甘油三酯血症、肥胖和/或糖尿病，的药物制剂中的应用。优选的是，所述的山豆根羽扇豆烷醇的用途，所述山豆根羽扇豆烷醇在制备治疗重症肌无力的药物制剂中的应用。优选的是，所述的山豆根羽扇豆烷醇的用途，所述药物制剂中包括有效量的山豆根羽扇豆烷醇和药学上可接受的辅料制成。优选的是，所述的山豆根羽扇豆烷醇的用途，所述山豆根羽扇豆烷醇为从山豆根中提取得到。本发明至少包括以下有益效果：本发明提供一种山豆根羽扇豆烷醇的医药用途，山豆根羽扇豆烷醇可以显著抑制鼻咽癌、宫颈癌、食道癌、肝癌、喉癌、乳腺癌和前列腺癌细胞的生长以及抑制鼻咽癌细胞的转移，具有发展成为治疗鼻咽癌等疾病药物的良好应用前景；此外，山豆根中的提取物羽扇豆烷醇对于治疗重症肌无力也有很好的疗效；同时具有显著的降血糖作用，可用于制备治疗高脂血症、高甘油三酯血症、肥胖和/或糖尿病，的药物制剂。本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。附图说明图1为本发明在一个实施例中加入浓度为50μg/ml的羽扇豆烷醇处理48小时后鼻咽癌细胞cne-2细胞形态显微镜及染色图片。具体实施方式下面结合附图及实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。<实施例1>山豆根羽扇豆烷醇的制备方法，其包括以下步骤：步骤一、按重量份数计，将55重量份的山豆根粉置于山豆根粉的5倍重量的体积百分数为75％的乙醇中浸泡，7d后过滤，收集滤液，重复浸泡、过滤三次，合并三次滤液并减压浓缩回收乙醇得提取液；步骤二、用浓盐酸将提取液酸化至ph＝3～4，然后用乙酸乙酯作为溶剂，进行萃取，收集上层溶液并加压回收乙酸乙酯，得到粗提浸膏；步骤三、将粗提浸膏与其1倍重量的硅胶拌样后，加入硅胶柱的上部，硅胶柱所用硅胶的重量为粗提浸膏拌样后重量的10倍，且所用硅胶的粒径均为100～200目，然后分别用石油醚：氯仿，氯仿：甲醇系统梯度洗脱：首先采用石油醚：氯仿3:1；1:1；再用氯仿洗脱；然后采用氯仿：甲醇100:1；50:1；20:1；10:1；7:1；5:1；3:1；1:1；0:1依次洗脱，得到54个流份。点板分为a、b、c、d、e、f、g、h、i、j部位。其中c部位经凝胶柱层析柱分离，以石油醚：氯仿仿＝1:1洗脱，得到1～6号馏分，2号有白色粉末析出，过滤得到白色粉末，即得山豆根羽扇豆烷醇经核磁及质谱检测，化学结构如式(ⅰ)所示。实施例1得到的山豆根羽扇豆烷醇的相对分子量：426物理性质：白色结晶(氯仿)，分子式为c30h50o，表征：核磁共振氢谱数据：1hnmr(600mhz,dmso)δh:1.65(1h,m,h-1),0.89(1h,m,h-1),1.50-1.70(2h,m,h-2),3.17(1h,dd,h-3),0.66(1h,d,j＝9.0,h-5),1.50(1h,m,h-6),1.36(1h,m,h-6),1.36(1h,m,h-7),2.27(1h,m,h-7),1.25(1h,s,h-9),1.38(1h,m,h-11),1.23(1h,m,h-11),1.65(1h,s,h-12),1.01(1h,s,h-12),1.64(1h,s,h-13),0.96(1h,m,h-15),1.10(1h,m,h-15),1.47(1h,m,h-16),1.36(1h,m,h-16),2.36(1h,m,h-18),1.35(1h,m,h-19),1.24(1h,s,h-21),1.38(1h,m,h-22),1.18(1h,m,h-22),1.50(1h,h-5),0.95(3h,s,h-23),0.74(3h,s,h-24),0.81(3h,s,h-25),1.02(3h,s,h-26),0.93(3h,s,h-27),0.77(3h,s,h-28),1.66(3h,m,h-30)。核磁共振碳谱数据：13cnmr(151mhz,dmso)δc：150.97(c-20),109.30(c-29),78.99(c-3),55.24(c-10),50.39(c-8),48.25(c-19),47.96(c-18),42.97(c-17),42.79(c-14),40.79(c-7),39.97(c-22),38.83(c-4),38.66(c-1),38.00(c-13),37.13(c-9),35.54(c-16),34.23(c-6),29.80(c-21),27.96(c-23),27.41(c-2),27.37(c-15),25.09(c-12),20.89(c-11),19.30(c-30),18.29(c-5),17.98(c-28),16.10(c-25),15.94(c-26),15.35(c-24),14.52(c-27)。如本领域的普通技术人员所知，本发明的羽扇豆烷醇可用本领域的常规方法从山豆根(拉丁学名：radixsophoraetonkinensis)中提取获得。其纯度均符合药用标准。以将本发明的羽扇豆烷醇制成药物为例。本发明的羽扇豆烷醇可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成分的本发明的羽扇豆烷醇及可药用载体。较佳地，本发明的药物组合物含有0.1～99.9％重量百分比的作为活性成分的本发明的羽扇豆烷醇。“可药用载体”不会破坏本发明的羽扇豆烷醇的药学活性，同时其有效用量，即能发挥药物载体作用时的用量对人体无毒。所述可药用载体包括但不限于离子交换材料、自乳化药物传递系统、吐温或其他表面活化剂、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、水、盐、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸镁、饱和脂肪酸部分甘油酉旨混合物等。其他常用的药物辅料如粘合剂(如微晶纤维素)、填充剂(如淀粉、葡萄糖、无水乳糖和乳糖珠粒)、崩解剂(交联梭甲基淀粉钠、交联梭甲基纤维素钠、低取代轻丙基纤维素)、润滑剂(如硬脂酸镁)以及吸收促进剂、吸附载体、香味剂、甜味剂、赋形剂、稀释齐日、润湿剂等。本发明的羽扇豆烷醇以及其药物组合物可按本领域常规方法制备并可以通过肠道或非肠道或局部途径给药。口服制剂包括胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等；非肠道给药制剂包括注射液等；局部给药制剂包括霜剂、贴剂、软膏剂、喷雾剂等。优选为局部给药制剂。本发明的羽扇豆烷醇以及其药物组合物的给药途径可以为口服、舌下、经皮、经肌肉或皮下、皮肤粘膜、静脉等。<实施例2>如图1所示，通过mtt实验验证羽扇豆烷醇对于鼻咽癌细胞具有特别明显的生长抑制效果：实验材料：四甲基偶氮唑盐(mtt)和dmso购自于美国sigma公司。实验方法：空白对照组：100μl的密度为2×104个/ml的细胞悬液和100μl的rpmi-1640培养基。阴性对照组：100μl的密度为2×104个/ml的细胞悬液和100μl的含0.1％dmso的rpmi-1640培养基。实验组：100μl的密度为2×104个/ml的细胞悬液和分别加入100μl浓度为50μg/ml的羽扇豆烷醇。取对数生长期鼻咽癌细胞cne-2，制成浓度为2×104个/ml单个细胞悬液并接种于96孔板中，每个孔中加入100μl细胞悬液，将96孔板置于37℃、5％co2的饱和湿度培养箱中培养，12h后按分组向每孔中加入100μl浓度为50μg/ml的药物，于37℃、5％co2的饱和湿度的培养箱中继续培养48小时后，每孔加入20μl的浓度为5mg/mlmtt，在37℃、5％co2的饱和湿度培养箱中孵育4h后，移去每孔的上清液，并向每孔中加入150μl的dmso，在微量振荡器振荡10min至结晶完全溶解后，使用酶标仪在570nm处测定od值，6个平行复孔的平均值为一次实验结果。实验独立重复三次，用excel计算ic50值。细胞增殖率＝(治疗组的平均值-空白组平均值)/(阴性组的平均值-空白组的平均值)×100％抑制率＝100％-细胞增殖率当细胞的抑制率达到50％时的浓度即为ic50值。实验数据均用平均值士标准误差表示，采用统计spss11.5软件进行分析，以one-wayanova方式进行方差分析，两两比较采用lsd法，p＜0.01为具有统计学显著性差异标准。实验结果：表1为山豆根豆烷醇对cne-2的抑制效果如表1所示，羽扇豆烷醇对于cne-2细胞株具有较强的抑制生长作用，其于50μg/ml作用cne-2细胞48小时后，抑制率达到90.53％，这说明对于抑制鼻咽癌细胞cne-2的生长特别有效。<实施例3>羽扇豆烷醇对于食道癌细胞具有特别明显的生长抑制效果：实验材料：四甲基偶氮唑盐(mtt)和dmso购自于美国sigma公司。实验方法：空白对照组：100μl的密度为2×104个/ml的细胞悬液和100μl的rpmi-1640培养基。阴性对照组：100μl的密度为2×104个/ml的细胞悬液和100μl的含0.1％dmso的rpmi-1640培养基。实验组：100μl的密度为2×104个/ml的细胞悬液和分别加入100μl浓度为50μg/ml的羽扇豆烷醇。取对数生长期食道癌细胞eca-109，制成浓度为2×104个/ml单个细胞悬液并接种于96孔板中，每个孔中加入100μl细胞悬液，将96孔板置于37℃、5％co2的饱和湿度培养箱中培养，12h后按分组向每孔中加入100μl浓度为50μg/ml的药物，于37℃、5％co2的饱和湿度的培养箱中继续培养48小时后，每孔加入20μl的浓度为5mg/mlmtt，在37℃、5％co2的饱和湿度培养箱中孵育4h后，移去每孔的上清液，并向每孔中加入150μl的dmso，在微量振荡器振荡10min至结晶完全溶解后，使用酶标仪在570nm处测定od值，6个平行复孔的平均值为一次实验结果。实验独立重复三次，用excel计算ic50值。细胞增殖率＝(治疗组的平均值-空白组平均值)/(阴性组的平均值-空白组的平均值)×100％抑制率＝100％-细胞增殖率当细胞的抑制率达到50％时的浓度即为ic50值。实验数据均用平均值士标准误差表示，采用统计spss11.5软件进行分析，以one-wayanova方式进行方差分析，两两比较采用lsd法，p＜0.01为具有统计学显著性差异标准。实验结果：表2为山豆根豆烷醇对eca-109的抑制效果如表2所示，羽扇豆烷醇对于eca-109细胞株具有较强的抑制生长作用，其于50μg/ml作用eca-109细胞48小时后，抑制率达到87.45％，这说明对于抑制食道癌细胞eca-109的生长有显著的效果。<实施例4>细胞水平测试羽扇豆烷醇对胰岛素分泌的影响：1、实验原理：促胰岛素分泌药物在治疗糖尿病中起着重要的作用。由于胰岛β细胞受损，不能充分的分泌胰岛素，从而导致体内的血糖水平增高，导致2型糖尿病的发生。当体内血糖浓度升高时，胰岛素代偿性分泌增加促进外周组织的葡萄糖吸收，从而降低血糖水平。通过用体外培养的胰岛β细胞系，发明人将胰岛素分泌水平作为生物指标，进行了山豆根羽扇豆烷醇的活性评价。2、实验材料：1)细胞培养：min6细胞，用dmem培养基(加10％血清)在24孔板里培养(培养条件为37℃，5％co2)。2)实验所使用的试剂：a.试剂盒：检测胰岛素水平试剂盒(millipore公司)。b.牛血清白蛋白：bsa(5g/前尘生物科技有限公司)。c.krb缓冲液：124mmnacl，5mmkcl，1.3mmmgso4，26mmnahco3，1.2mmkh2po4，1.8mmcacl2。3、胰岛素分泌水平测试实验min6细胞用dmem培养基(加10％血清)在24孔板里培养，当细胞生长至80-90％密度时用0.2％bsa的无糖krb缓冲液洗两次，每孔加入500μl该缓冲液孵育2小时。将羽扇豆烷醇配制于含16.8mm葡萄糖的高糖krb缓冲液中，然后将无糖的krb缓冲液吸出，用含有羽扇豆烷醇的16.8mm葡萄糖的0.2％bsakrb缓冲液孵育2小时。随即小心吸取缓冲液到1.5ml的ep管中，室温3000转/分，5min。取上清用酶联免疫吸附试剂盒检测胰岛素含量。酶联免疫检测主要实验参数：实验所使用的试剂如实验材料中所述。取上述样品各10μl进行酶联免疫检测。待结合2小时后，洗掉结合的样品，用洗涤缓冲液洗三次。然后加入酶，孵育30分钟后。吸走酶，用洗涤缓冲液洗六次。然后加入显色底物作用20分钟。待出现蓝色后，加入终止试剂终止反应。立即使用酶标仪检测光吸收变化。检测od450和od590，od450显示胰岛素的含量，od590反映实验的均一性。4、实验结果以dmso为对照，本发明通过酶联免疫方法考察了羽扇豆烷醇在min6细胞系中对胰岛素分泌的影响。羽扇豆烷醇增加胰岛素分泌作用与dmso的比值为5.5，由此可见羽扇豆烷醇能够在细胞水平上增加胰岛素的分泌水平；随后检测羽扇豆烷醇对胰岛素分泌的作用是否具有浓度依赖性，试验结果显示羽扇豆烷醇能明显增加胰岛素的水平，并呈浓度依赖性，其ec50值为55.6μm。<实施例5>羽扇豆烷醇对db/db小鼠空腹血糖、胰岛素耐量(itt)、甘油三酯(tg)、血清胰岛素的影响：本发明通过测定口服羽扇豆烷醇后的2型糖尿病模型小鼠(db/db小鼠)的空腹血糖水平、胰岛素耐量、甘油三酯、血清胰岛素等糖尿病相关指标，来研究羽扇豆烷醇对2型糖尿病的治疗或改善作用。结果表明羽扇豆烷醇具有显著的降血糖、降甘油三酯、改善胰岛素耐量和提高血清胰岛素的作用。1、实验原理：db/db小鼠(leptin受体缺乏)属于自发性ii-型糖尿病动物模型，是由c57bl/ksj近亲交配株常染色体隐性遗传衍化而来。本发明以该品系的小鼠作为评价羽扇豆烷醇抗2型糖尿病的动物模型。2、实验材料与方法1)动物来源：遗传型自发性糖尿病db/db小鼠购自美国jackson公司。2)动物培养条件：spf级动物房饲养；温度：22-24℃；湿度：45-80％；光照：150-300lx，12小时昼夜交替。其饲养，给药，血糖测定和处死均严格按照动物实验和福利的指导。3)动物分组与给药：db/db小鼠饲养于spf级动物房中，适应性驯养一周后。根据测定禁食6小时后空腹血糖结果的均值将小鼠分为空白对照组、阳性对照组和受试物组，每组9只。各组小鼠每日早上10:00-11:00分别灌胃给予溶剂(5％tween80，空白对照)，10mg/kg阳性化合物[文迪雅(马来酸罗格列酮片)，购自葛兰素史克，阳性对照组]，40mg/kg羽扇豆烷醇(受试物组)。4)观察指标：a、对小鼠血糖的长期作用：给药期间每周监测空腹血糖一次，空腹血糖为小鼠禁食不禁水后6h(从上午9:30-10:30到下午3:30-4:30)后的血糖值，并统计各组平均血糖，结果详见表3：表3各组小鼠的平均血糖值(mm)时间(周)空白组阳性对照组受试物组0101010115612215713320816418818517720b、胰岛素耐量试验(itt)：各组小鼠于给药后第5周进行胰岛素耐量试验，小鼠禁食6h后腹腔注射1.5u/kg胰岛素(购自elililly(礼来公司)，测定给胰岛素后15、30、45、60、90和120min血糖值，结果详见表4：表4给胰岛素后每组小鼠的平均血糖值(mm)c、对血清甘油三酯和胰岛素含量影响分析：各组动物于给药后第5周处死小鼠，进行解剖，眼眶采血，离心，利用生化分析仪检测血清中甘油三脂(tg)的水平以及胰岛素检测试剂盒检测血清中胰岛素的水平，分别测定其中甘油三酯tg和胰岛素的含量，结果详见表5；表5各组小鼠的平均甘油三酯(mm)和血清胰岛素含量(mm)空白组阳性对照组受试物组甘油三酯(mm)0.90.60.3胰岛素(mm)1.00.71.83、实验结果分析：由表3可知，空白对照组小鼠实验期间空腹血糖一直维持在相对较高水平。阳性对照组的空腹血糖第一周就表现出明显的下降现象，这种现象一直持续到实验结束。受试物组从第一周也表现出明显的空腹血糖下降现象，这种现象一直持续到实验结束。由此可见受试物组空腹血糖与空白对照组相比有所下降，并具有显著性差异(*p＜0.05)。由表4可知，羽扇豆烷醇组小鼠在给胰岛素前和给胰岛素后15、30、45、60、90和120min的血糖值与空白对照组相比表现出明显的胰岛素敏感性并具有显著性差异(*p＜0.05)；由表5可知，与空白对照组相比，羽扇豆烷醇给药对甘油三酯具有显著性降低作用(*p＜0.05)，羽扇豆烷醇能显著性的提高血浆中的胰岛素含量(*p＜0.05，与空白对照组相比)。<实施例6>山豆根羽扇豆烷醇在治疗重症肌无力中的应用重症肌无力(myastheniagravis，mg)是一种主要累及神经肌肉接头突触后膜上乙酰胆碱受体(acetylcholinereceptor，achr)的自身免疫性疾病。临床主要表现为部分或全身骨骼肌无力和易疲劳，活动后症状加重，经休息和胆碱酯酶抑制剂(cholinesteraseinhibitors，chei)治疗后症状减轻。患病率为77～150/100万，年发病率为4～11/100万。女性患病率大于男性，约3:2，各年龄段均有发病，儿童1～5岁居多。重症肌无力的发病原因分两大类，一类是先天遗传性，极少见，与自身免疫无关；第二类是自身免疫性疾病，最常见。发病原因尚不明确，普遍认为与感染、药物、环境因素有关。同时重症肌无力患者中有65～80％有胸腺增生，10～20％伴发胸腺瘤。1、重症肌无力小鼠模型的建立eamg模型用achr和福氏佐剂1:2混匀后免疫小鼠，初次致敏取achr15μg制成200μl抗原乳剂，于背部、肢体、尾基部多处皮内接种。4周后用含15μgachr的抗原乳剂100μl再次接种。佐剂对照组用等量福氏佐剂免疫。末次免疫后7～14d对模型进行判定。判定标准：(1)临床表现：eamg小鼠出现毛发干枯、隆背、食量下降、活动减少和跛足等不同程度的肌无力表现；(2)游泳试验：eamg小鼠游泳时间明显短于佐剂对照组。2、山豆根羽扇豆烷醇治疗实验性重症肌无力小鼠的临床疗效60只体重为18～22g的重症肌无力昆明种小鼠，随机分成2组(每组30只)，分别进行如下处理：羽扇豆烷醇处理组：将实施例1制备的羽扇豆烷醇与氯化钠按照重量比为4:1进行混合，并溶解于注射用水中，过滤得注射剂；实验第1天，向小鼠腹腔中注射注射剂；实验第8天，再次腹腔注射注射剂；实验第22天，再次腹腔注射注射剂。每次注射剂量均为200μg羽扇豆烷醇/只；对照组：实验第1天腹腔注射ph7.4、0.01mol/lpbs缓冲液，实验第8天，再次腹腔注射ph7.4、0.01mol/lpbs缓冲液；实验第22天，再次腹腔注射ph7.4、0.01mol/lpbs缓冲液。每次注射剂量均为100μl/只。1)体重检测：羽扇豆烷醇治疗当日起每日称重小鼠。2)临床评分：采用盲法由两个观察者对小鼠进行eamg严重性的临床评估。0分:肌力正常；1分:活动轻度减少，抓握无力或低吟，易疲劳；2分:活动明显减少，体重明显减轻，休息时呈弓背、头低伏，前趾弯曲、周身发抖；3分:严重的周身无力，无低吟，无抓握动作，呈濒死状态或死亡。症状居中间者分别评分为0.5、1.5、2.5分。分别于治疗后第4周进行临床评分。羽扇豆烷醇对小鼠体重影响的检测结果见表6。结果表明，与对照组小鼠相比，经羽扇豆烷醇免疫治疗后的小鼠的体重显著升高。表6羽扇豆烷醇对小鼠体重的影响(平均值±sd值)组别n治疗前治疗后对照组3013.63±1.015.67±0.98处理组3013.86±1.317.89±0.54注：与对照组相比，*p<0.01.羽扇豆烷醇对小鼠临床评分的影响检测结果见表7。结果表明，与对照组小鼠相比，经羽扇豆烷醇免疫小鼠的临床评分显著降低。表7羽扇豆烷醇免疫治疗对小鼠临床评分的影响(平均值±sd值)组别n治疗前治疗后对照组301.97±0.452.12±0.38处理组302.03±0.350.45±0.43注：与对照组相比，*p<0.01.上述结果表明，用羽扇豆烷醇免疫治疗小鼠，能够有效的治疗或减轻重症肌无力的症状。这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。当前第1页12