本发明涉及一种从干燥鬼针草中提取黄酮化合物的工业化生产方法。
背景技术：
鬼针草（bidenspilosal.），一年生草本，茎直立，钝四棱形；茎下部叶较小，很少为具小叶的羽状复叶，两侧小叶椭圆形或卵状椭圆形；头状花序直径8-9毫米；总苞基部被短柔毛，条状匙形，上部稍宽。无舌状花，盘花筒状，冠檐5齿裂。瘦果黑色，条形，略扁，具棱，上部具稀疏瘤状突起及刚毛，顶端芒刺3-4枚，具倒刺毛。
产中国多省区，生于村旁、路边及荒地中；广布于亚洲和美洲的热带和亚热带地区。为中国民间常用草药，有清热解毒、散瘀活血的功效，主治上呼吸道感染、咽喉肿痛、急性阑尾炎、急性黄疸型肝炎、胃肠炎、风湿关节疼痛、疟疾，外用治疮疖、毒蛇咬伤、跌打肿痛。
鬼针草为中国民间常用草药，性温，味苦，无毒，全草均可入药，具有清热、解毒、散瘀、消肿等功效，民间常用它治疗肠炎、痢疾等疾病。近年发现，该药对血压具有良好的双相调节作用，高血压病人服了此药可使血压降低，血压偏低者用药后可使血压升至正常，临床则多用作降压。用鬼针草降血压不仅安全可靠，而且还可以避免某些降压药性功能障碍的副作用。
黄酮类化合物（flavonoids）是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮（flavone）结构的化合物。它们分子中有一个酮式羰基，第一位上的氧原子具碱性，能与强酸成盐，其羟基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类，小部分以游离态（苷元）的形式存在。绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方面起着重要的作用。
黄酮类化合物广泛存在于自然界的植物中，属植物次生代谢产物。黄酮类化合物是以黄酮(2-苯基色原酮)为母核而衍生的一类黄色色素，其中包括黄酮的同分异构体及其氢化和还原产物，也即以c6-c3-c6为基本碳架的一系列化合物。黄酮类化合物在植物界分布很广，在植物体内大部分与糖结合成苷类或碳糖基的形式存在，也有的以游离形式存在。
黄酮类化合物中有药用价值的化合物很多，这些化合物用于防治心脑血管疾病，如能降低血管的脆性，改善血管的通透性、降低血脂和胆固醇，防治老年高血压、脑溢血、冠心病、心绞痛、扩张冠状血管，增加冠脉流量。许多黄酮类成分具有止咳、祛痰、平喘及抗菌的活性，同时具有护肝、解肝毒、抗真菌、治疗急、慢性肝炎、肝硬化及抗自由基和抗氧化作用。除此之外，黄酮类化合物还具有与植物雌激素相同的作用。在畜牧业动物生产上，黄酮类化合物的应用能显著提高动物生产性能，提高动物机体抗病力，改善动物机体免疫机能。
现有技术或传统方法中从干燥鬼针草中提取黄酮化合物的方法存在如下问题：
（1）目前，从干燥鬼针草中提取黄酮化合物的方法多以水提过树脂柱、溶剂提取为甲醇水、乙醇水为提取溶剂；由于这些溶剂极性的性质，将黄酮化合物各种杂质一起提取出来，后处理浓缩困难，水用量大，污水排放严重；生产周期长、产品质量低，提取成本高；
（2）相关文献报道的提取方法中，提取含量低，含量大多为60%以下，没有进一步深加工处理，产品副加值低；如要完成后深加工处理必须采用必要的多次柱层析处理，对生产企业来说，柱层析增加了生产周期及生产成本；在工业生产时，增加了工业化生产时的成本控制。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种从鬼针草中提取鬼针草总黄酮的方法，该方法直接用碱性溶剂提取，不沾水，整个工艺用水量小，排污量小。方法简单可控制、价格低廉、提取条件相对较低、副产物较少、色素少、提取收率高，生产周期短，适合工业化生产。
本发明的目的通过如下技术方案实现：
（1）将干燥粉碎的鬼针草作为原料，用甲醇或乙醇与二乙胺混合物在40～50℃下浸泡6～8h，过滤，滤渣加甲醇或乙醇与二乙胺混合物，在40～50℃继续浸泡6～8h，过滤后合并滤液，浓缩至滤液体积的1/5～1/6；
所述鬼针草粒径为80～100目；甲醇或乙醇:二乙胺的体积比为1000:1～2；
（2）将浓缩物ph值至6～7，按浓缩物体积1/3～1/4的比例在浓缩物中加入正戊烷或正庚烷，搅拌2～4h，静置分层后，分出甲醇层或乙醇层，浓缩抽干，得鬼针草总黄酮初提物；
用甲酸调ph值；
（3）按1g鬼针草总黄酮初提物添加3～4ml溶剂的比例，用正丁醇或/和异戊醇50～60℃溶解鬼针草总黄酮初提物，溶清后加入有机溶剂体积1/5～1/6的水萃取一次，充分静置后，分出有机相，在有机相中加入脱色絮泥剂脱色2～4h，过滤，滤液减压浓缩抽干得鬼针草总黄酮粗品，总黄酮含量大于20%；
所述脱色絮泥剂为活性炭和硅藻土按质量比2:1～2的比例混合制得；有机相与脱色絮泥剂l:kg为100:4～5；
（4）将鬼针草总黄酮粗品用甲醇溶解并加入中性氧化铝拌料胶，干燥后上样至中性氧化铝柱中，用二氯甲烷-甲醇混合液或二氯甲烷-乙醇混合液洗脱，收集含有总黄酮的洗脱液，浓缩得黄酮半成品，总黄酮含量大于50%；
所述中性氧化铝粒径为200～300目，料胶质量比1:12～15；二氯甲烷-甲醇混合液中二氯甲烷和甲醇的体积比为8～10:1，二氯甲烷-乙醇混合液中二氯甲烷和乙醇的体积比为6～8:1。
（5）将黄酮半成品用乙酸乙酯-丙酮-水混合液40～50℃溶解，然后冷却至-5～-10℃结晶10～12h，过滤得晶体，晶体干燥得鬼针草总黄酮成品；总黄酮含量大于85%；
所述乙酸乙酯-丙酮-水混合液中乙酸乙酯:丙酮:水体积比为10:10:0.1～0.2；每1g黄酮半成品添加3～4ml乙酸乙酯-丙酮-水混合液。
本发明优点和技术效果：
（1）本发明利用黄酮化合物在碱性有机溶剂中溶解度更好的原理，直接用有机溶剂提取，提取充分，有效物质提取收率高达92%，整个工艺不用水，可以减少后期浓缩水的成本及时间；方法简单可行、生成周期短、收率高、成本低非常适合工业化生产；
（2）本发明利用甲醇与正戊烷或正庚烷不互溶的性质，用于脱酯处理，方法简单，效果明显，达到除杂质、迅速富集有效物质的作用；而且甲醇与两种物质沸点相差很大，可以实现分离，并持续投入使用。方法简单可行、产品质量好、收率高、成本低非常适合工业化生产；
（3）本发明利用中性氧化铝作为柱层析填料，分离效果明显，除杂效果佳，填料可以重复使用多次，方法简单可行、产品质量好、收率高、成本低非常适合工业化生产；
（4）本发明利用冷冻结晶的方式和三相溶剂结晶，结晶效果理想、含量迅速提高至85%以上方法简单可行、产品质量好、收率高、成本低非常适合工业化生产。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明作进一步详细说明，但本发明保护范围不局限于所述内容。
实施例1：本从鬼针草中提取总黄酮的方法如下：
（1）将500kg、80～100目干燥粉碎的鬼针草作为原料，用甲醇与二乙胺混合物（甲醇:二乙胺的体积比为1000:1）在40℃下浸泡8h，过滤，滤渣甲醇与二乙胺混合物，在50℃继续浸泡6h，过滤后合并滤液，浓缩至滤液体积的1/5；
（2）用甲酸调浓缩物ph值至6，按浓缩物体积1/3的比例在浓缩物中加入正戊烷，搅拌4h，静置分层后，分出甲醇层，浓缩抽干，得鬼针草总黄酮初提物；
（3）按1g鬼针草总黄酮初提物添加3ml溶剂的比例，用正丁醇50℃溶解鬼针草总黄酮初提物，溶清后加入有机溶剂体积1/5的水萃取一次，充分静置后，分出有机相，按有机相与脱色絮泥剂l:kg为100:4的比例，在有机相中加入脱色絮泥剂（活性炭和硅藻土质量比2:1）脱色2h，过滤，滤液减压浓缩抽干得鬼针草总黄酮粗品，总黄酮含量23%；
（4）将鬼针草总黄酮粗品用甲醇溶解并加入中性氧化铝拌料胶（拌料料胶质量比=1:0.8），干燥后上样至中性氧化铝（200目）柱中，料胶质量比1:12，用二氯甲烷-甲醇混合液（二氯甲烷和甲醇的体积比为8:1）洗脱，收集含有总黄酮的洗脱液，浓缩得黄酮半成品，总黄酮含量54%；
（5）按每1g黄酮半成品添加3ml乙酸乙酯-丙酮-水混合液的比例，将黄酮半成品用乙酸乙酯-丙酮-水混合液40℃溶解，其中乙酸乙酯:丙酮:水体积比为10:10:0.1，然后冷却至-5℃结晶12h，过滤得晶体，晶体干燥得鬼针草总黄酮成品，总黄酮含量91%。
实施例2：本从鬼针草中提取总黄酮的方法如下：
（1）将500kg、80～100目干燥粉碎的鬼针草作为原料，用甲醇与二乙胺混合物（甲醇:二乙胺的体积比为1000:2）在45℃下浸泡7h，过滤，滤渣加甲醇与二乙胺混合物，在40℃继续浸泡8h，过滤后合并滤液，浓缩至滤液体积的1/6；
（2）用甲酸调浓缩物ph值至7，按浓缩物体积1/4的比例在浓缩物中加入正庚烷，搅拌3h，静置分层后，分出甲醇层，浓缩抽干，得鬼针草总黄酮初提物；
（3）按1g鬼针草总黄酮初提物添加3.5ml溶剂的比例，用异戊醇55℃溶解鬼针草总黄酮初提物，溶清后加入有机溶剂体积1/6的水萃取一次，充分静置后，分出有机相，按有机相与脱色絮泥剂l:kg为100:4.5的比例，在有机相中加入脱色絮泥剂（活性炭和硅藻土质量比1:1）脱色3h，过滤，滤液减压浓缩抽干得鬼针草总黄酮粗品，总黄酮含量24.1%；
（4）将鬼针草总黄酮粗品用甲醇溶解并加入中性氧化铝拌料胶（拌料料胶质量比=1:0.9），干燥后上样至中性氧化铝（300目）柱中，料胶质量比1:13，用二氯甲烷-甲醇混合液（二氯甲烷和甲醇的体积比为10:1）洗脱，收集含有总黄酮的洗脱液，浓缩得黄酮半成品，总黄酮含量53%；
（5）按每1g黄酮半成品添加3.5ml乙酸乙酯-丙酮-水混合液的比例，将黄酮半成品用乙酸乙酯-丙酮-水混合液50℃溶解，其中乙酸乙酯:丙酮:水体积比为10:10:0.2，然后冷却至-8℃结晶11h，过滤得晶体，晶体干燥得鬼针草总黄酮成品，总黄酮含量89.6%。
实施例3：本从鬼针草中提取总黄酮的方法如下：
（1）将500kg、80～100目干燥粉碎的鬼针草作为原料，用乙醇与二乙胺混合物（乙醇:二乙胺的体积比为1000:1.5）在50℃下浸泡6h，过滤，滤渣加乙醇与二乙胺混合物，在40℃继续浸泡8h，过滤后合并滤液，浓缩至滤液体积的1/5；
（2）用甲酸调浓缩物ph值至7，按浓缩物体积1/4的比例在浓缩物中加入正戊烷，搅拌4h，静置分层后，分出乙醇层，浓缩抽干，得鬼针草总黄酮初提物；
（3）按1g鬼针草总黄酮初提物添加4ml溶剂的比例，用正丁醇和异戊醇（体积比1:1）60℃溶解鬼针草总黄酮初提物，溶清后加入有机溶剂体积1/6的水萃取一次，充分静置后，分出有机相，按有机相与脱色絮泥剂l:kg为100:5的比例，在有机相中加入脱色絮泥剂（活性炭和硅藻土质量比1:1）脱色4h，过滤，滤液减压浓缩抽干得鬼针草总黄酮粗品，总黄酮含量25%；
（4）将鬼针草总黄酮粗品用甲醇溶解并加入中性氧化铝拌料胶（拌料料胶质量比=1:1），干燥后上样至中性氧化铝（200-300目）柱中，料胶质量比1:15，用二氯甲烷-乙醇混合液（二氯甲烷和乙醇的体积比为6:1）洗脱，收集含有总黄酮的洗脱液，浓缩得黄酮半成品，总黄酮含量54%；
（5）按每1g黄酮半成品添加4ml乙酸乙酯-丙酮-水混合液的比例，将黄酮半成品用乙酸乙酯-丙酮-水混合液45℃溶解，其中乙酸乙酯:丙酮:水体积比为10:10:0.15，然后冷却至-10℃结晶10h，过滤得晶体，晶体干燥得鬼针草总黄酮成品，总黄酮含量90.1%。
实施例4：本从鬼针草中提取总黄酮的方法如下：
（1）将500kg、80～100目干燥粉碎的鬼针草作为原料，用乙醇与二乙胺混合物（乙醇:二乙胺的体积比为1000:1）在45℃下浸泡6h，过滤，滤渣加乙醇与二乙胺混合物，在50℃继续浸泡6h，过滤后合并滤液，浓缩至滤液体积的1/6；
（2）用甲酸调浓缩物ph值至6，按浓缩物体积1/3的比例在浓缩物中加入正庚烷，搅拌3h，静置分层后，分出乙醇层，浓缩抽干，得鬼针草总黄酮初提物；
（3）按1g鬼针草总黄酮初提物添加3ml溶剂的比例，用正丁醇55℃溶解鬼针草总黄酮初提物，溶清后加入有机溶剂体积1/5的水萃取一次，充分静置后，分出有机相，按有机相与脱色絮泥剂l:kg为100:4的比例，在有机相中加入脱色絮泥剂（活性炭和硅藻土质量比2:1）脱色4h，过滤，滤液减压浓缩抽干得鬼针草总黄酮粗品，总黄酮含量24%；
（4）将鬼针草总黄酮粗品用甲醇溶解并加入中性氧化铝拌料胶（拌料料胶质量比=1:1.1），干燥后上样至中性氧化铝（200-300目）柱中，料胶质量比1:12，用二氯甲烷-乙醇混合液（二氯甲烷和乙醇的体积比为8:1）洗脱，收集含有总黄酮的洗脱液，浓缩得黄酮半成品，总黄酮含量53%；
（5）按每1g黄酮半成品添加3.5ml乙酸乙酯-丙酮-水混合液的比例，将黄酮半成品用乙酸乙酯-丙酮-水混合液50℃溶解，其中乙酸乙酯:丙酮:水体积比为10:10:0.2，然后冷却至-5℃结晶12h，过滤得晶体，晶体干燥得鬼针草总黄酮成品，总黄酮含量89.8%。