一种组合物在制备预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物中的应用的制作方法

本申请涉及医药领域，具体而言，涉及一种组合物在制备预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物中的应用。

背景技术：

sftsv(severefeverwiththrombocytopeniasyndromevirus，sftsv)，sftsv感染引起的主要症状包括发热、出血、胃肠道不适、肌肉酸痛、淋巴结肿大及血小板和白细胞减少等；该病毒主要由蜱虫携带、传播，蜱虫叮咬是引起人类感染的重要原因，sftsv可感染近乎全年龄段人群，尤其对老年人群威胁较大，有较高的病死率。sftsv属于布尼亚病毒目(bunyavirales)，phenuiviridae病毒科，白蛉病毒属(phlebovirus)。是一种基因组分节段的负链rna病毒，基因组按长度分三段(l、m、s),并包裹有核衣壳蛋白(nucleocapsidprotein，np)。

对于病毒性疾病的预防和治疗主要依靠疫苗和药物。当前，sftsv的疫苗研制和药物研发报道较少。目前针对sftsv感染的治疗方法也相当有限，主要治疗手段为对症支持治疗和广谱抗病毒疗法，其疗效有限，个体差异较大。

技术实现要素：

本申请实施例的目的在于提供一种组合物在制备预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物中的应用，其旨在提供一种能够用于预防和/或治疗sftsv的药物。

本申请提供一种组合物在制备预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物中的应用，组合物包括硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。

硝苯地平具有抗sftsv的作用，能够用于抑制sftsv的复制。硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物能够减小sftsv感染引发的小鼠的死亡率。硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物可以用于制备预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物。该药物能有治疗sftsv，拓展硝苯地平的用途。

在本申请第一方面的一些实施例中，组合物包括50μmol/l-400μmol/l的所述硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。

在该浓度下，剂量安全且抗sftsv效果明显。

在本申请第一方面的一些实施例中，组合物包括120μmol/l-170μmol/l的所述硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。

在本申请第一方面的一些实施例中，组合物包括150μmol/l-155μmol/l的所述硝苯地平。

在该浓度下，剂量安全且抗sftsv效果较佳。

在本申请第一方面的一些实施例中，组合物用于制备抑制发热伴血小板减少综合征病毒复制的药物。

硝苯地平能够抑制sftsv的复制，因此可以用于制备sftsv抑制剂。

在本申请第一方面的一些实施例中，组合物还包括药学上可接受的辅剂。

在本申请第一方面的一些实施例中，组合物的剂型为片剂。

在本申请第一方面的一些实施例中，药物的剂型为经胃肠道给予剂型。

在本申请第一方面的一些实施例中，药物的给药方式为口服。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1示出了本申请试验例1的测试结果。

图2示出了本申请试验例2的测试结果。

图3示出了本申请试验例3的测试结果。

图4示出了本申请试验例4的测试结果。

图5示出了本申请试验例5的测试结果。

具体实施方式

为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本申请实施例的组合物在制备预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物中的应用进行具体说明。

一种组合物在制备预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物中的应用，组合物包括硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。

进一步地，组合物包括硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物是指，组合物包括硝苯地平、硝苯地平在药学上可接受的盐、硝苯地平在药学上可接受的溶剂合物或者硝苯地平在药学上可接受的水合物中的至少一种。

在本实施例中，“预防”指减少或消除疾病的可能性。“治疗”指完全或部分地消除或减轻疾病和/或其伴随的症状。

“/”是指或者的意思。预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物，是指：预防和治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物，或者，预防发热伴血小板减少综合征病毒的药物，或者，治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物。

发热伴血小板减少综合征(severefeverwiththrombocytopeniasyndrome，简称sfts)。

硝苯地平：1,4-二氢-2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二羧酸二甲酯，中文别名：利心平、心痛定、硝苯吡啶；英文名：nifedipine，分子式：c17h18n2o6。

结构式：

硝苯地平在药学上可接受的溶剂合物，例如硝苯地平-1,4二氧六环溶剂合物，硝苯地平-吗啉溶剂合物。

需要说明的是，在本申请的实施例中，硝苯地平可以为晶体、非晶体等，相应地，也不对晶体的晶型进行限制。

发明人研究后发现，硝苯地平具有抗sftsv的作用，能够用于抑制sftsv的复制。硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物能够减小sftsv感染引发的小鼠的死亡率。能够有效抑制抑制发热伴血小板减少综合征病毒的复制。

进一步地，组合物包括50-400μmol/l的硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。在该浓度下，剂量安全且抗sftsv效果明显。

需要说明的是，组合物包括50-400μmol/l的硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物；是指，组合物可以包括50-400μmol/l的硝苯地平，或者组合物可以包括50-400μmol/l的硝苯地平在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。

进一步地，硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物浓度为100-300μmol/l，进一步为200-280μmol/l，例如可以为60μmol/l、80μmol/l，100μmol/l，120μmol/l，150μmol/l，170μmol/l，200μmol/l，250μmol/l，300μmol/l等。

进一步地，硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物浓度为120-170μmol/l。进一步地，硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物浓度为150-155μmol/l。在该浓度下，剂量安全且抗sftsv效果较佳。

进一步地，组合物还包括药学上可接受的辅剂。组合物的形态可以为固体或者液体或者膏体。

进一步地，药物可以使用药学上可接受的载体和/或赋形剂作为辅料与组合物进行配置，从而以单位剂量形式制备，或包含在多剂量容器中。制剂可以是在油或水性介质中的溶液、悬浮液或乳液(乳化的溶液)、提取物、粉剂、颗粒剂、片剂或胶囊，并可进一步包含分散剂或稳定剂。

药学上可接受的辅剂包括但不限于填充剂、粘合剂、防腐剂、崩解剂、甜味剂、释放控制剂、稳定剂等等。

作为示例性地，填充剂可以选自葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉、山梨醇、麦芽糖醇、木糖醇、糊精、麦芽糊精纤维素或纤维素衍生物中的至少一种。

粘合剂可以选自聚维酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、明胶、树胶、蔗糖或者淀粉中的至少一种。

防腐剂可以选自苯甲酸、苯甲酸钠、苯甲醇、丁羟茴醚、丁羟甲苯、氯丁醇、没食子酸酯、羟基苯甲酸酯或者edta中的至少一种。

崩解剂可以选自羟基乙酸淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素、淀粉或者微晶纤维素中的至少一种。

甜味剂可以选自三氯蔗糖、糖精、糖精钠、糖精钾、糖精钙、乙酰舒泛钾或环拉酸钠、甘露醇、果糖、蔗糖或者麦芽糖中的至少一种。

在本实施例中，药物的剂型为经胃肠道给予剂型，例如口服液、含片或者片剂等。进一步地，在本实施例中为片剂，药物的给药方式为口服。

需要说明的是，在本申请的其他实施例中，药物可经胃肠外给予，胃肠外给予可包括静脉内注射、皮下注射、肌内注射、腹膜内注射、内皮给予、局部给予、鼻内给予、直肠给予等。

在口服给予的情况下，组合物可通过任何能够将活性物质转移到靶细胞的装置给予。给药途径可取决于要治疗的受试者的一般状况和年龄，治疗状况的性质和所选择的活性成分而变化。

此外，药物的剂型可以为栓剂、喷雾剂、软膏剂、霜剂、凝胶剂、吸入剂或皮肤贴剂的形式给予。

药物组合物还可经制备用于给予动物，例如给予人类。

进一步地，在本申请的实施例中，药物的计量可以根据诸多因素进行调节，例如配制方法，给予方法，患者的年龄、体重和性别，病理状况，饮食，给药次数，给药途径，排泄率和反应敏感性而变化，具有普通技能的医生可容易地确定对所需治疗或预防有效的剂量并对该剂量开具处方。

一种预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒的药物的制备方法，包括，混合组合物与辅料，组合物包括硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物。

本申请实施例提供的应用，能够增加硝苯地平或其在药学上可接受的盐、溶剂合物或水合物的使用范围，其具有抗sftsv的新的用途。

以下结合实施例对本申请的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

本实施例提供一种药物，该药物通过组合物和辅料制得，组合物包括硝苯地平。硝苯地平在组合物中的浓度为150μmol/l。

上述药物可以预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒。

实施例2

本实施例提供一种药物，该药物通过组合物和辅料制得，组合物包括170μmol/l的硝苯地平。

上述药物可以预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒。相应地，上述药物可以抑制发热伴血小板减少综合征病毒复制。

实施例3

本实施例提供一种药物，该药物通过组合物和辅料制得，组合物包括170μmol/l的硝苯地平。

上述药物可以预防和/或治疗发热伴血小板减少综合征病毒。

试验例1

nifedipine的细胞毒性检测

在vero细胞中，对nifedipine的细胞毒性进行检测。

vero细胞按1×10⁴细胞/孔接种于96孔板细胞培养板中，于37℃，5％co2培养箱中培养12-16h，分别用50μmol/l，100μmol/l，200μmol/l，300μmol/l，和400μmol/l的nifedipine(溶剂均为dmso)进行处理，每组三个复孔，对照组加相同量的二甲基亚砜(dmso)。药物作用24h后用mtt染色，检测od(opticaldensity)492nm，分析细胞存活率，测试结果如图1所示。图1中，nifedipine的cc50(致半数细胞毒性所需浓度)大于250μmol/l。从图1可知，nifedipine细胞毒性低，具有较好的生物安全性。

试验例2

nifedipine对sftsv复制的影响

vero细胞按2×10⁵细胞/孔接种于24孔板细胞培养板中，于37℃，5％co2培养箱中培养12-16h，使用浓度为25，50，75，100和150μm的nifedipine进行处理，阴性对照加入同体积dmso。孵育1h后，分别用sftsv病毒感染，37℃1h后，更换培养基为2％fbs的dmem培养基，16h后，通过实时荧光定量pcr(qpcr)方法检测nifedipine抑制病毒复制的效果，结果如图2所示，从图2可知，化合物nifedipine对sftsv的复制有显著抑制作用。在150μmol/l浓度条件下，化合物nifedipine对sftsv的复制有显著抑制作用。

试验例3

nifedipine对sftsv的抗病毒活性检测

vero细胞按2×10⁵细胞/孔接种于24孔板细胞培养板中，于37℃，5％co2培养箱中培养12-16h，使用浓度为1μmol/l，5μmol/l，10μmol/l，20μmol/l和40μmol/l的nifedipine进行处理，阴性对照加入同体积二甲基亚砜(dmso)。孵育10h后，用sftsv感染，在37℃培养箱，孵育1h后，更换培养基为2％fbs的dmem(dulbecco’smodifiedeagle’smedium)培养基，16h后，通过滴度检测nifedipine抑制病毒复制的效果，如图3所示，在不同浓度条件下，化合物nifedipine对sftsv的复制均有显著抑制作用。进一步对nifedipine抑制sftsv的ic50(halfmaximalinhibitoryconcentration，半抑制浓度)进行检测。检测结果如图3所示。

由图3中sftsv的抑制曲线可知，nifedipine显著抑制sftsv的活性，经计算其ic50为98μm。

试验例4

nifedipine对sftsv感染人源化小鼠的影响

nod.cg-prkdcem1idmoil2rgem2idmo小鼠(nod-prkdcnullil2rγnull,)被用于人源化小鼠构建，全部饲养于spf(specificpathogenfree，spf)环境，在移植改造前2天，小鼠经腹膜内注射白消安(20mg/kg)处理。随后，纯化自人脐血，纯度达90％以上的cd34⁺细胞通过尾静脉注射移植到小鼠体内，获得人源化小鼠模型。

人源化小鼠被分为2组：(1)溶媒对照组：sftsv+vehicle组(小鼠数量7个),(2)实验组：sftsv+nifedipine(小鼠数量6个)。

两组小鼠均感染采用腹腔注射法，接sftsv毒量为200μl。实验组灌胃给药，nifedipine的剂量为100mg/kg/d，每天两次，共计10天。溶媒对照组为灌胃给药等体积的dmem培养基。

整个实验流程严格遵守动物保护和使用委员会操作指南所规定的美国国立卫生研究院的指导方针。小鼠每日监测指标包括：弓背、立毛、活动力、应激反应、体重、体温等。记录两个小组小鼠的死亡率，结果如图4所示。

如图4所示，与对照组的57.1％相比，给药组小鼠死亡率显著降低至0％。说明nifedipine可以在小鼠水平显著抑制sftsv的复制，从而显著提高感染小鼠的存活率。

试验例5

nifedipine对sftsv感染患者的影响

2011-2017年间，中国人民解放军154医院共接收sftsv感染患者共计2087例，采用回顾性分析研究设计分析了硝苯地平治疗sftsv感染的临床疗效。在回顾性分析中，首次剔除了136例参与了其它临床试验的患者、以及135例无法提供ca²⁺通道抑制剂药物使用情况的患者，其次剔除了12例使用其它ca²⁺通道抑制剂药物的患者，最终选取83例患者为nifedipine治疗组(nifedipine-treatedgroup，试验开展前已使用过nifedipine进行治疗，试验期间延用nifedipine进行治疗)、48例患者为非nifedipine治疗组(non-nifedipinetreatedgroup，试验开展前使用过nifedipine进行治疗，但试验期间停止使用nifedipine)，并且采用倾向性匹配方法(根据年龄、性别、发病至入院治疗的延迟时间，进行3:1匹配)从1673例从未使用ca²⁺通道抑制剂药物的患者中，随机选择249例作为一般用药组(generalsftsgroup，入院前后，未使用过任何ca²⁺通道抑制剂类药物进行治疗)。研究开展前已获得院方伦理委员会许可，全程严格遵守国家医学研究准则，所有采样相关操作已事先征求病人的书面同意。

组间的连续变量比较采用t检验或非参数检验(mann-whitney检验)，组间的分类变量比较采用卡方检验或fisher’s精确检验。基线数据的比较分析发现：三个组别患者的年龄、性别、以及发病至入院治疗的延迟时间的差异无统计学意义(所有p>0.05)；三个组别患者的入院时sftsv病毒载量的差异无统计学意义(所有p>0.05)；三个组别患者的住院期间接受的支持性治疗的差异无统计学意义(所有p>0.05)。采用kaplan-meier方法进行生存分析(如图5)，发现nifedipine治疗组死亡率为3.6％，显著低于一般用药组(死亡率19.7％，p<0.001)、以及非nifedipine治疗组(死亡率20.8％，p<0.001)。

从试验例1-试验例5可知，硝苯地平(nifedipine)能抑制sftsv的复制。sftsv感染小鼠在使用nifedipine后，可以显著减少死亡率和体重变化。nifedipine可以显著提高临床sftsv感染患者的治愈率。

此外，硝苯地平在细胞、动物水平和临床上均体现出明确的抗病毒效果，具有较好的应用前景，可用于制备抗sftsv的药物。

以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。