一种药物组合物及其应用的制作方法

[0001]
本发明属于医药领域，涉及一种药物组合物及其应用，具体涉及包含淫羊藿苷元和羟基积雪草酸的组合物及其用于制备治疗溃疡性结肠炎或褥疮药物中的用途。


背景技术：

[0002]
淫羊藿苷元属黄酮醇类化合物，少量存在于淫羊藿药材中，其化学结构式如下：
[0003][0004]
淫羊藿苷元可以从淫羊藿药材中分离得到(孙朋悦，徐颖，文晔等，朝鲜淫羊藿的化学成分，中国植物化学杂志，1998，8(2)：122-125)，或将淫羊藿苷经酶解分离得到(叶海涌，刘健，楼宜嘉，淫羊藿苷衍生物的制备及其雌激素样作用研究，浙江大学学报，2005，34(2)：131-136)。
[0005]
有文献报道淫羊藿苷元具有抗aβ肽致大鼠原代培养神经细胞凋亡的作用(张翔南，王欢欢，王志强等，淫羊藿苷元抗aβ肽致大鼠原代培养神经细胞凋亡的作用，浙江大学学报，2007，36(3)：224-226)。中国专利cn101836976a公开了淫羊藿苷元具有抗肿瘤血管生成的作用。中国专利cn101428015a公开了淫羊藿苷元具有抗内毒素血症的作用。中国专利cn101284000a公开了淫羊藿苷元具有防治肥胖症或脂肪肝的作用。中国专利cn1869204a公开了淫羊藿苷元在诱导干细胞体外定向分化方面的用途。中国专利cn1194701c公开了淫羊藿苷元或去甲基淫羊藿苷元具有在制备雌激素受体调节剂中的应用。
[0006]
羟基积雪草酸是伞形科植物积雪草中的一种重要的五环三萜酸类化合物，化学结构式如下：
[0007][0008]
近年来的研究表明，积雪草酸和羟基积雪草酸在抗氧化、抗癌等方面具有一定的作用。中国专利cn201110040181.7公开了羟基积雪草酸对实验性大鼠的乳腺增生具有明显
的抑制作用。中国专利cn200910067429.1公开了积雪草酸与羟基积雪草酸在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂的药物中的应用。
[0009]
羟基积雪草酸等苷元在积雪草中的含量比羟基积雪草苷低得多，积雪草中皂苷含量一般为1.8～5％，而皂苷元同皂苷的含量比通常为1：2.5。中国专利cn201610728601.3公开了一种水解羟基积雪草苷制备羟基积雪草酸的方法。该方法在常温常压下即可快速断开糖苷键，水解过程温和，水解彻底，且不会产生羟基积雪草酸的构型变化。
[0010]
溃疡性结肠炎又名慢性非特异性溃疡性结肠炎，是以直、结肠的表浅性疾病为主，伴有肠外多器官损害的疾病，目前认为本病与遗传因素有关，以自身免疫机制为根本，感染、神经因素为诱因，病变主要在直肠、乙状结肠。首先是粘膜浅层的弥漫性炎症改变，继之充血、水肿、肥厚和脆性增加，产生小溃疡，进而发展成大溃疡，晚期由于结肠组织增生，肠壁变厚、变窄、肠管变短。其病程漫长，严重影响患者的身体健康和生活质量，且随病程的延长发生大肠癌的几率增加，因此被世界卫生组织列为现代难治病之一。本病在我国较欧美少见，且病程一般较轻，但近年患病率日趋增高，重症也常有报道。
[0011]
国内外对溃疡性结肠炎治疗的方案基本一致，临床主要使用柳氮磺胺吡啶水杨酸制剂、强的松或地塞米松等激素制剂、免疫抑制剂硫唑嘌呤等进行治疗，但疗效欠佳，且有较大不良反应。因此，长期以来人们非常重视研究与开发治疗溃疡性结肠炎疾病的药物，其对于减轻患者痛苦，改善患者的生活质量具有十分重要的意义。
[0012]
褥疮即压力性溃疡、压疮。它是身体局部组织长期受压，导致血液循环障碍、组织营养缺乏而致皮肤失去正常功能，引起的破损、坏死。在老年、脊髓损伤、重症和卧床病人中高发。一旦发生，不仅给病人带来痛苦，加重病情，延长疾病康复时间，而且可因继发感染而危及生命。褥疮感染出现并发症在住院条件下病死率可达50％。
[0013]
褥疮常由于病程迁延难愈，给临床治疗和护理带来极大困难。同时由于褥疮的发生，导致患者经济负担加重，生活质量严重下降。故寻求快速有效治愈褥疮的方法，是临床医生和护理人员亟待研究的一项重要课题。目前，临床上对于褥疮的治疗较多局限于西医的局部换药治疗，往往效果较差。单纯的局部换药处理对于褥疮创面的愈合是不够的，特别是严重褥疮患者，促进局部创面组织的血液循环，增强局部组织的抗感染能力，增强组织的愈合能力才是快速治愈褥疮的根本。
[0014]
鉴于目前中西医治疗褥疮均存在一定的局限，因此研发一种安全有效、使用方便的治疗褥疮的药品意义重大。
[0015]
溃疡性结肠炎和褥疮发病过程中均伴有组织破损、坏死。
[0016]
经检索，目前尚无以淫羊藿苷元和羟基积雪草酸为活性成分的药物组合物。现有技术中也没有以淫羊藿苷元和羟基积雪草酸为活性成分的药物组合物在医学方面用途的相关报道。


技术实现要素：

[0017]
本发明目的之一在于提供一种安全有效的药物组合物，该药物组合物以淫羊藿苷元和羟基积雪草酸为主要活性成分。
[0018]
上述药物组合物中淫羊藿苷元与羟基积雪草酸的重量比优选为1：0.01-30。
[0019]
本发明还提供了含有上述药物组合物的药物制剂，本发明药物组合物可以根据需
要制备成合适的、临床上可接受的药物制剂。
[0020]
发明人考虑到患者用药方便的需要以及一次性服用两种药物相对于分次服用两种药物来说具有方便的特点，根据活性成分羟基积雪草酸与淫羊藿苷元的性质，将本发明的药物组合物制备成固体药物制剂，如片剂、胶囊、颗粒剂、丸剂、滴丸等；其中片剂包括普通片、包衣片、糖衣片、薄膜衣片、肠溶衣片、泡腾片、咀嚼片、多层片、崩解片、分散片、舌下片、口含片、缓释片等。
[0021]
本发明采用固体药物制剂具有携带、使用方便，给药途径简单易行的优点，易于为患者接受。
[0022]
此外，本发明药物组合物还可以制备成软膏剂等外用制剂，便于患者使用。
[0023]
本发明目的之二是提供上述药物组合物的医药用途，即该药物组合物用于制备治疗结肠炎或褥疮药物中的用途。
[0024]
上述结肠炎可以是由遗传、感染、自身免疫反应、精神因素等一种或多种原因引起的。
[0025]
优选的，上述结肠炎为特异性结肠炎或非特异性结肠炎中的一种。
[0026]
进一步优选的，所述特异性结肠炎为感染性结肠炎、缺血性结肠炎、伪膜性结肠炎中的一种；所述非特异性结肠炎为溃疡性结肠炎。
[0027]
更优选的，上述结肠炎为溃疡性结肠炎。
[0028]
本发明人长期致力于治疗药物的开发，在前期研究的基础上，本发明人研究中意外发现淫羊藿苷元和羟基积雪草酸联合应用对于组织破损、坏死具有显著的修复作用，在治疗溃疡性结肠炎或褥疮，尤其是溃疡性结肠炎方面具有很好的治疗效果，两药联用呈现显著的协同治疗作用。
[0029]
本发明实施例1显示本发明淫羊藿苷元和羟基积雪草酸的组合物对溃疡性结肠炎大鼠有明显的治疗作用，能显著改善肠黏膜一般形态学及病理学变化，保护肠粘膜屏障，并且，本发明组合物改善肠黏膜一般形态学及病理学变化的效果显著优于淫羊藿苷元单药、显著优于羟基积雪草酸单药。
[0030]
本发明实施例2显示本发明淫羊藿苷元和羟基积雪草酸的组合物对褥疮大鼠有明显的治疗作用，能显著增加创面愈合率。
[0031]
本发明药物组合物治疗溃疡性结肠炎的效果不仅显著优于两种药物单独使用时的效果，更优于两者效果的加和；两种药物联合使用可以明显减少各自用量，减少不良反应发生；同时，增加溃疡性结肠炎或褥疮患者的临床用药选择，有很好的临床应用前景。
[0032]
与现有技术相比，本发明药物组合物在治疗溃疡性结肠炎或褥疮方面具有如下突出的优势：
[0033]
(1)与单独给药淫羊藿苷元或羟基积雪草酸相比，本发明含有淫羊藿苷元和羟基积雪草酸的药物组合物对溃疡性结肠炎或褥疮模型治疗效果更好，并且两种药物活性成分在治疗溃疡性结肠炎或褥疮方面体现出很好的协同增效作用。
[0034]
(2)本发明药物组合物含有羟基积雪草酸和淫羊藿苷元，二者联合用药在具有协同作用的同时，可以显著降低二者用量，从而显著降低患者用药时的毒副作用，减少不良反应发生。
[0035]
(3)本发明药物组合物以固定组合的形式治疗溃疡性结肠炎或褥疮，与同时服用
单药相比服用更佳方便，提高了患者的顺应性和依从性，一定程度上增强了对疾病的治疗效果。
[0036]
本发明的药物组合物在临床上可用于治疗溃疡性结肠炎或褥疮。上述所述的医药用途中，根据动物病情以及用药部位可以将淫羊藿苷元和羟基积雪草酸药物组合物制备成合适的药物制剂以方便用药，对于本发明治疗溃疡性结肠炎或褥疮的药物组合物的给药时间和给药次数需要根据病情的具体诊断结果而定，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对大鼠或小鼠溃疡性结肠炎或褥疮的治疗方案应用于人身上，所有药物对人的有效剂量可以通过该药物对大鼠或小鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的。
具体实施方式
[0037]
以下通过具体实施方法进一步描述本发明，但本发明的应用范围不仅仅限于下列实施例。在本发明的内容、精神和/或范围内，对本发明技术特征的替换和/或组合，对本领域的技术人员来说是显而易见的，且包含在本发明之中。
[0038]
值得说明的是，以下动物试验例中，发明人仅仅列举了本发明组合物对溃疡性结肠炎及褥疮大鼠的治疗作用，对于本发明中所提到的其他类型的结肠炎，发明人亦做了相关的动物实验研究，研究结果表明，本发明组合物对其他类型的结肠炎亦可达到相同或类似的治疗效果，以下试验例并不能限制本发明。
[0039]
实施例1组合物对溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜免疫屏障的干预作用
[0040]
1.动物造模、分组及给药
[0041]
1.1造模
[0042]
将大鼠按体重随机分为7组，每组10只，分别为空白对照组、模型对照组、淫羊藿苷元组、羟基积雪草酸组、组合物a组、组合物b组、组合物c组。
[0043]
取spf级sd大鼠，雌雄各半，体重150～170g，根据经典的2，4，6-三硝基苯磺酸(tnbs)法造模。造模前大鼠禁食24h，10％水合氯醛4ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，将石蜡油润滑过的0.4mm直径聚乙烯软管插入直肠，深度约为8cm，缓慢注入5％tnbs50mg/kg+50％乙醇0.25ml，再将大鼠提尾倒置60s，使药液充分停留结直肠内，正常组予以等体积的生理盐水灌肠，清醒后自由饮水，造模组用tnbs灌肠造模1次后，连续1周从体质量变化、大便性状、便血情况、内脏敏感性、结肠病理等方面评价模型。造模7d后随机抽取2只解剖，结肠病理显示充血、水肿、炎细胞浸润、隐窝脓肿、杯状细胞减少、腺体破坏及小溃疡形成等一系列变化，提示造模成功。
[0044]
1.2分组
[0045]
取造模成功的大鼠60只，分为模型对照组、淫羊藿苷元组、羟基积雪草酸组、组合物a组、组合物b组、组合物c组，每组10只。
[0046]
取正常大鼠10只，为空白对照组。
[0047]
1.3给药
[0048]
1.3.1供试药物给药剂量
[0049]
淫羊藿苷元组：1mg/kg淫羊藿苷元；
[0050]
羟基积雪草酸组：30mg/kg羟基积雪草酸；
[0051]
组合物a组：10mg/kg淫羊藿苷元+3mg/kg羟基积雪草酸；
[0052]
组合物b组：1mg/kg淫羊藿苷元+30mg/kg羟基积雪草酸；
[0053]
组合物c组：10mg/kg淫羊藿苷元+1mg/kg羟基积雪草酸；
[0054]
1.3.2给药
[0055]
自造模后第7天起，各供试药物用0.5％羧甲基纤维素钠混悬，每日1次；正常组及模型组给予等体积的0.5％羧甲基纤维素钠，每天1次；连续灌胃给药7d。
[0056]
2.实验方法及数据处理
[0057]
2.1标本采集
[0058]
末次给药后禁食、禁水24h后，10％水合氯醛4.0ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，取血结束后处死大鼠，收集血液、结肠组织等进行指标检测，-20℃保存待测。
[0059]
2.2大鼠结肠一般形态学观察
[0060]
自肛门处向上取结肠8
±
2cm处，沿纵轴剪开，用生理盐水冲洗干净，参照luketal标准(xu b,liu x l,dong w w,et al.egcg maintains th1/th2 balance and mitigates ulcerative colitis induced by dextran sulfate sodium through tlr4/myd88/nf-κb signaling pathway in rats[j].can j gastroenterol hepatol,2017)进行结肠黏膜损伤程度评分：0分，无炎症和溃疡；1分，局部充血但无溃疡；2分，充血而且肠壁变厚但没有溃疡；3分，1处溃疡及炎症，直径约0～1cm；4分，2处或2处以上溃疡及炎症，直径约1～2cm，但肠管与外周脏器无粘连；5分，溃疡延伸超过2cm，肠管增厚，与周围脏器粘连严重，评估结肠黏膜大体形态损伤。
[0061]
2.3观察大鼠结肠组织病理变化
[0062]
用4％多聚甲醛固定结肠组织，经脱钙，脱水，透化，石蜡包埋、切片4～5μm后，将切片用二甲苯脱蜡，用无水乙醇水合，并用he染色固定，在显微镜下观察组织学变化，并按组织学等级进行病理评分：0分，肠黏膜和绒毛完整，结构完全正常；1分，轻度黏膜下和/或固有层分离；2分，中度黏膜下和/或固有层分离；黏膜下层和/或肌层水肿；3分，严重黏膜下和/或固有层分离，黏膜下和/或肌层水肿，局部肠绒毛脱落；4分，肠绒毛消失，肠坏死)(hou y,lu x,zhang y.irak inhibitor protects the intestinal tract of necrotizing enterocolitis by inhibiting the toll-like receptor(tlr)inflammatory signaling pathway in rats[j].med sci monit,2018,24:3366-3373.)。
[0063]
2.4数据统计与分析
[0064]
数据以表示，采用spss17.0软件进行方差分析。
[0065]
3.结果与讨论
[0066]
3.1大鼠一般情况和疾病活动度变化
[0067]
空白对照组大鼠精神良好，毛发有光泽，活动、进食、大便正常，体质量自然增加。模型组大鼠表现精神沉郁，毛发无光泽，体质量下降，活动减少，并伴粘液便、血便等，各给药组一般状况较模型组明显好转。
[0068]
模型对照组大鼠结肠黏膜肉眼可见明显充血、水肿，以及不同程度的结肠黏膜糜烂，肠腔内可见多个小溃疡及伪膜出现。
[0069]
与空白对照组比较，模型组大鼠肠黏膜损伤程度评分显著升高(p<0.01)。
[0070]
与模型对照组比较，各给药组肠黏膜损伤程度评分显著下降(p<0.05，p<0.01)。
[0071]
与淫羊藿苷元组比较，组合物a组、组合物b组、组合物c组结肠黏膜损伤程度评分显著下降(p<0.05，p<0.01)。
[0072]
与羟基积雪草酸组比较，组合物a组、组合物b组、组合物c组结肠黏膜损伤程度评分显著下降(p<0.05，p<0.01)。
[0073]
与组合物c组比较，组合物a组、组合物b组的结肠黏膜损伤程度评分显著下降(p＜0.05)。
[0074]
结果见表1。
[0075]
表1本发明组合物对溃疡性结肠炎大鼠肠粘膜损伤程度评分的影响
[0076][0077][0078]
注：与空白对照组相比，
￥
p<0.05，
￥￥
p<0.01；与模型对照组相比，
#
p<0.05，
##
p<0.01；与淫羊藿苷元组相比，
&
p<0.05，
&&
p<0.01；与羟基积雪草酸组相比，
★
p<0.05，
★★
p<0.01；与组合物c组相比，
＊
p<0.05，
＊＊
p<0.01。
[0079]
模型对照组肠黏膜明显充血、水肿，可见明显溃疡形成，溃疡周围腺体缺损，分布杂乱，肠壁广泛纤维化，模型对照组病变深达黏膜下层、肌层。
[0080]
各给药组大鼠肠黏膜及黏膜下层充血、水肿状况减轻，肠黏膜溃疡呈愈合性改变，部分溃疡周围伴见新生腺体。
[0081]
与空白对照组比较，模型对照组病理学评分显著升高(p<0.01)。
[0082]
与模型对照组比较，各给药组肠黏膜病理学评分显著下降(p<0.05，p<0.01)。
[0083]
与淫羊藿苷元组比较，组合物a组、组合物b组、组合物c组组织病理学评分显著下降(p<0.05，p<0.01)。
[0084]
与羟基积雪草酸组比较，组合物a组、组合物b组、组合物c组组织病理学评分显著下降(p<0.05，p<0.01)。
[0085]
与组合物c组比较，组合物a组、组合物b组的组织病理学评分显著下降(p＜0.05)。
[0086]
结果见表2。
[0087]
表2本发明组合物对溃疡性结肠炎大鼠肠粘膜病理学评分的影响
[0088][0089][0090]
注：与空白对照组相比，
￥
p<0.05，
￥￥
p<0.01；与模型对照组相比，
#
p<0.05，
##
p<0.01；与淫羊藿苷元组相比，
&
p<0.05，
&&
p<0.01；与羟基积雪草酸组相比，
★
p<0.05，
★★
p<0.01；与组合物c组相比，
＊
p<0.05，
＊＊
p<0.01。
[0091]
淫羊藿苷元与羟基积雪草酸联用，与单药相比，具有显著的协同增效作用，对于溃疡性结肠炎具有显著的治疗作用。这在临床应用上具有十分重要的意义。
[0092]
实施例2淫羊藿苷元和羟基积雪草酸组合物对大鼠褥疮的疗效观察
[0093]
1.动物造模、分组及给药
[0094]
1.1造模
[0095]
取spf级sd大鼠，雌雄各半，体重150～170g。经普通饲料适应性喂养1周后，参考tsuji s等(shinsaku tsuji md，shigeru ichioka md，naomi sekiya mt，takashi nakatsuka md.analysis of ischemia-reperfusion injury in a microcirculatory model of pressure ulcers[j].wound repair and regeneration，2005，13(2))的压疮模型制备方法，制作大鼠压疮模型。具体方法：大鼠腹腔麻醉后，背部脱毛消毒，于大鼠背部脊柱附近腰背部两侧，做3cm长的贯穿皮肤全层横切口，将经过高压蒸汽灭菌的磁片置于皮肤切口内并缝合，磁片直径13mm，厚2mm。动物术后d2，体外用一块磁通量密度1500高斯的永久性磁铁作用于大鼠背部磁片植入区吸附2h引起缺血，然后移开磁铁使该区皮肤的血流再灌注0.5h，此为一个循环，每天5个循环，重复5d。缺血/再灌注总次数25次，缺血时间总计50h，以皮肤变黑、变硬、针刺不出血作为判断溃疡的标准，即认为褥疮模型制备成功。每只大鼠制模所用磁片大小一致，以保证初始压疮面积大小一致；在本实验中，造模成功后，每只大鼠压疮面积经硫酸铜板纸测量后，经统计分析无明显统计学意义，即基本上每只大鼠初始褥疮面积是一致的。
[0096]
1.2分组
[0097]
取造模成功的大鼠60只，按体重随机分为6组，每组10只，分别为模型对照组、淫羊藿苷元组、羟基积雪草酸组、组合物a组、组合物b组、组合物c组。
[0098]
从造模成功次日起，每天分组换药，各组分别给予下述药物：
[0099]
淫羊藿苷元组：1％淫羊藿苷元；
[0100]
羟基积雪草酸组：0.1％羟基积雪草酸；
[0101]
组合物a组：2％淫羊藿苷元+0.02％羟基积雪草酸；
[0102]
组合物b组：1％淫羊藿苷元+0.1％羟基积雪草酸；
[0103]
组合物c组：0.2％淫羊藿苷元+0.1％羟基积雪草酸。
[0104]
以上各供试药物用丙三醇溶解，涂敷于褥疮部位。
[0105]
模型对照组：等体积的丙三醇，涂敷于褥疮部位。
[0106]
在造模后第6、9、12天记录创面大小，并计算各组大鼠皮肤压疮的愈合率。
[0107]
2.实验方法及数据处理
[0108]
2.1创面愈合率
[0109]
于造模后第6、9、12天测量大鼠压疮面积，由于创面可能是不规则愈合，用透明硫酸铜板纸贴在圧疮皮肤表面，用笔在纸上描出圧疮面积(cm2)，用photoshop图像处理软件进行统计；用公式p＝(1-a1/a0)
×
100％计算创面愈合率，评价创面的愈合速度。(p：愈合率；a1：现有伤口面积；a0：原伤口面积。)
[0110]
2.2数据统计与分析
[0111]
数据以表示，采用spss17.0软件进行方差分析。
[0112]
3.结果与讨论
[0113]
3.1创面愈合率
[0114]
与模型对照组比较，除淫羊藿苷元组，其余各给药组创面愈合率明显增加(p<0.01)。
[0115]
与淫羊藿苷元组比较，组合物a组、组合物b组、组合物c组创面愈合率明显增加(p<0.05，p<0.01)。
[0116]
与羟基积雪草酸组比较，组合物a组、组合物b组、组合物c组创面愈合率明显增加(p<0.05，p<0.01)。
[0117]
与组合物c组比较，组合物a组、组合物b组的创面愈合率明显增加(p＜0.05)。
[0118]
结果见表3。
[0119]
表3本发明组合物对大鼠褥疮愈合率的影响
[0120][0121][0122]
注：与模型对照组相比，
#
p<0.05，
##
p<0.01；与淫羊藿苷元组相比，
&
p<0.05，
&&
p<
0.01；与羟基积雪草酸组相比，
★
p<0.05，
★★
p<0.01；与组合物c组相比，
＊
p<0.05，
＊＊
p<0.01。
[0123]
淫羊藿苷元与羟基积雪草酸联用，与单药相比，具有显著的协同增效作用，对于褥疮具有显著的治疗作用。
[0124]
实施例3片剂的制备
[0125][0126]
制备工艺:将淫羊藿苷元、羟基积雪草酸和辅料微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合均匀，加入适量的淀粉浆制软材，然后过16目筛制粒。湿颗粒在60℃干燥，干颗粒过20目筛整粒，筛出干粒中的细粉，与硬脂酸镁混匀，然后再与干颗粒混匀，压片，每片约200mg，即得。
[0127]
实施例4淫羊藿苷元注射液
[0128][0129]
制备工艺：将处方量的丙二醇和乙醇混合均匀，加入淫羊藿苷元、羟基积雪草酸，搅拌溶解，加入处方量的0.9％氯化钠溶液，搅拌均匀，加入0.5％针用活性炭，搅拌，脱炭，即得。
[0130]
实施例5胶囊剂的制备
[0131][0132]
制备工艺:将淫羊藿苷元、羟基积雪草酸和辅料微晶纤维素、羧甲基淀粉钠混合均匀，加入适量的淀粉浆制软材，然后过16目筛制粒。湿颗粒在60℃干燥，干颗粒过20目筛整粒，装入胶囊，即得。