新的三烯类视黄酸化合物及方法

专利名称：新的三烯类视黄酸化合物及方法
发明的领域本发明涉及具有视黄酸受体和类视黄酸X受体活性的化合物，以及这些化合物的治疗应用方法。
发明的背景很早就已认识到维生素A代谢产物视黄酸可诱导广谱的生物学效应。此外，已合成了各种视黄酸的结构类似物，并已发现这些类似物也是有生物活性的。已发现例如Retin-A和Accutane等类似物可作为治疗多种病理学状态的治疗剂。再者，还发现合成的类视黄酸(retinoid)可模拟视黄酸的许多药理学作用。
医学专业人员已逐渐对类视黄酸的治疗应用产生了浓厚兴趣。在它们的应用中，由FDA批准的是治疗重型痤疮和牛皮癣。也有大量证据表明这些化合物可用于阻止并在一定程度上逆转因长期暴露于阳光而引起的皮肤损害。其他证据则表明这些化合物可用于治疗和预防各种癌的或癌变前的病变，例如黑素瘤、子宫颈癌、某些类型的白血病、口腔粘膜白斑病，以及基底细胞癌和鳞状细胞癌。也已显示类视黄酸可有效地治疗和预防眼、心血管系统、免疫系统、皮肤、呼吸道及消化道的疾病，并且可作为有利于伤口愈合和调节编程性细胞死亡的药剂。
对视黄酸信号转导之分子机理的主要认识是1988年获得的，当时证明类固醇/甲状腺激素细胞内受体超族(superfamily)的一个成员可转导视黄酸信号(Evans,Science,240:889-95(1988)；Giguere et al.,Nature,330:624-29(1987)；Petkovich et al.,Nature,330:444-50(1987))。现已知道类视黄酸可调节两个不同的细胞内受体亚族，即视黄酸受体(RAR)和类视黄酸X受体(RXR)以及它们的异型(isoforms)即RARα、β、γ及RXRo、β、γ的活性。就这个方面来说，一种调节RAR的转录活性的内源性低分子量配体是全反式视黄酸(ATRA)，而RXR的一种内源性配体是9-顺式视黄酸(9-cis)[Heyman et al.,Cell,68:397-406(1992)和Levin et al.,Nature,355:359-61(1992)]。
虽然RAR和RXR在体内对ATRA均有反应，但由于有些ATRA在体内转化成9-cis，所以这些受体在几个重要的方面有所差异。首先，RAR和RXR在一级结构上显著不同(例如RARα和RXRα的配体结合区域只有27％的氨基酸相同)。这些结构差异反映在RAR和RXR对各种维生素A代谢物及合成的类视黄酸有不同的相对反应程度。此外，可看到RAR和RXR有不同的组织分布图。例如，与在内脏组织中表达水平并不高的RAR相反，已显示RXRα mRNA在肝、肾、肺、肌肉和肠中极为丰富。最后，RAR和RXR具有不同的靶基因特异性。例如，最近已在Ⅱ型细胞视黄醛结合蛋白质(CRBPⅡ)和载脂蛋白AI基因中鉴定了赋予针对RXR而不是RAR的反应性的反应元件。再者，最近也已显示RAR可通过CRBPⅡ RXR反应元件抑制RXR介导的激活作用(Manglesdorf et al.,Cell,66:555-61(1991))。这些资料表明两种视黄酸反应途径不单纯是繁复的，而且表现出一种复杂的相互作用。
鉴于这些受体的性质相关但又明显的不同，对RAR亚族或RXR亚族更具选择性的类视黄酸对于选择性地控制由一种或多种RAR或RXR异型介导的过程应有很大价值，并将提供独立控制由RAR或RXR介导的生理过程的能力。此外，激活RAR和RXR的一种或多种异型(isoforms)的全激动剂(Pan-agonist)类视黄酸对于控制由类视黄酸受体的这些亚族介导的过程也应是很有价值的。再者，当用于治疗应用时，优选影响一种或多种但不是所有受体异型的类视黄酸也有可能增加治疗效果和降低副作用。
已公开了各种可用于治疗炎症、牛皮癣、变态反应，以及用于化妆品防晒制剂的多烯化合物(例如参见美国专利NO.4,534,979和5,320,833)。另外，已证明己二烯酸的三烯二醇酯可用于合成视黄酸和去甲视黄酸(nor-retinoic acid)(参见M.J.Aurell,et al.,49 Tetrahedron,6089(1993))。然而，尚没有这些化合物的类视黄酸活性的报道。
发明的概要本发明提供对RAR和RXR具有选择活性，或对一种或多种RAR和RXR异型有全激动剂活性的新的三烯化合物。本发明还提供标记的类视黄酸化合物，掺入这些新的三烯化合物的药物组合物，以及这些化合物和药物用于治疗的方法。
本文后附的权利要求中特别指出了表征本发明的这些和其他多方面的优点及新颖性特征，其构成本发明的一部分。但为了更好地理解本发明、其优点及其应用方面所达到的目的，尚须参阅给出的详细描述材料，其中举例说明并描述了本发明优选实施方案。定义除另有陈述外，依据本发明并如本文中使用的下列术语均由以下意义来定义。
术语烷基是指可选择性的为饱和或未饱和(从而生成链烯基和炔基结构)的直链、支链或环结构，及其组合。
术语芳基是指选择性取代的六元芳环。
术语杂芳基是指选择性取代的、含有一个或多个选自由氧、氮和硫组成的元素组的杂原子的五元或六元杂环。
术语类视黄酸是指结合和/或激活一种或多种类视黄酸受体，从而影响其结合了被活化受体和化合物复合物的靶基因之转录活性的化合物。
术语全激动剂是指激活RAR亚族(即RARα、RARβ、或RXRγ)和RXR亚族(即RXRα、RXRβ、或RXRγ)中的至少一个成员的类视黄酸。这样的全激动剂类视黄酸较好能激活类视黄酸受体之RAR和RXR亚族的所有成员。
本文中所说的同位素标记或放射性标记是指用氘、氚、碳13和/或碳14标记的取代基，其中包括但不只限于14CH3、13CH3、CD3、C3H3，和13CD3。本发明实施方案的详细描述根据本发明的第一个方面，我们开发了具有下列结构式的新的三烯化合物
或
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其中R1、R2和R4各自分别是氢、芳基、杂芳基、CF3或可被14CH3、13CH3、CD3、C3H3，和/或13CD3选择性取代的C2-C6烷基、氟烷基或全氟烷基；R3和R5各自分别是氢、CF3、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基或全氟烷基、或OR6，其中R6是氢、CF3、C1-C2烷基或C1-C2氟烷基或全氟烷基，但条件是当R3是CF3或烷基、氟烷基或全氟烷基时，R1和R5不能是CF3或烷基、氟烷基或全氟烷基；R7是可被14CH3、13CH3、CD3、C3H3，和/或13CD3选择性取代的C1-C4烷基或者是CH2OR8，其中R8代表氢、C1-C6烷基、可被C1-C4烷基、F、Cl、Br、I、OH、CF3、OR6、NR6选择性取代的C3-C7饱和或不饱和的环烷基，其中R6具有上文给出的定义；R9是C1-C4烷基；R10至R15各自分别是氢、C1-C6烷基或CF3；X是COOR16、CONR17或CONHR17R18，其中R16代表氢或C1-C6烷基，且其中R17和R18各自分别代表C1-C6烷基、或可被OH、F、Br、Cl或I选择性取代的芳基或杂芳基，但条件是R17和R18不能都是芳基或杂芳基；Y是C、O、S或N，条件是当Y是O时，则R14和R15不存在，当Y是N时，则R14和R15不能是CF3，另外当Y是S时，则R14和R15可独自或一起代表O，或者可能都不存在；W是N或CR16，这里R16具有如上文给出的同样定义；R19是可被选自由氢、F、Cl、Br、I或C1-C6烷基组成的基团组的一个或多个取代基选择性取代的芳基或杂芳基，其中X具有上文给出的同样定义；n是0、1或2；虚线表示选择性的双键；波状线表示呈顺式或反式构型的碳-碳键，但条件是当R1、R2、R4和R5都是氢时，R3不能是芳基。
R1、R2和R4较好各自代表C3-C6支链烷基、氟烷基或全氟烷基，其中R2和R4更佳地是各自代表C3-C6支链烷基、氟烷基或全氟烷基，而R1、R3和R5都是氢，且R2和R4最好选自由异丙基、叔丁基和CF3组成的基团组，同时R1、R3和R5都是氢。
本发明的化合物还包括所有医药上可接受的盐、以及酯、酰胺和前体药物。这些盐、酯和酰胺较好是在R16、R17和/或R18位置上形成的。本公开中使用的医药上可接受的盐包括但不只限于与吡啶、铵、哌嗪、二乙胺、烟酰胺、甲酸、脲、钠、钾、钙、镁、锌、锂、肉桂酸、甲氨基、甲磺酸、苦味酸、酒石酸、三乙氨基、二甲氨基及三(羟甲基)氨基甲烷形成的盐。其他一些医药上可接受的盐都是本领域技术人员已知的。
本发明的化合物显示出类视黄酸活性，并特别适用于治疗与皮肤相关的疾病，其中包括但不只限于光化角化病、砷角化病、炎症和非炎症性座疮、牛皮癣、鱼鳞癣及皮肤的其他角质化和高增殖性疾病、湿疹、特应性皮炎、毛囊角化病、扁平苔癣、预防和逆转糖皮质激素损伤(类固醇萎缩)、用作局部抗微生物剂、皮肤色素沉着剂以及治疗和逆转年龄和光对皮肤的损伤。这些化合物也可用于预防和治疗癌和癌前期病变，包括恶性前和恶性过度增殖疾病，例如乳腺、皮肤、前列腺、子宫颈、子宫、结肠、膀胱、食管、胃、肺、喉、口腔、血液和淋巴系统的癌、组织变形、发育异常、瘤形成、粘膜的粘膜白斑病和乳头状瘤，以及治疗卡波济氏(Kaposis)肉瘤。此外，本发明的化合物可用于治疗眼睛的疾病，其中包括但不限于增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)、视网膜脱离、干眼病和其他角膜病变，以及治疗和预防各种心血管病，其中包括但不只限于与脂质代谢有关的疾病如脂血异常，还可用于预防(心瓣膜口)再狭窄，以及用作增加循环组织纤维蛋白溶酶原激活剂(TPA)水平的药剂。本发明化合物的其他应用包括预防和治疗与人乳头状瘤病毒(HPV)相关的病症，包括疣、生殖器疣、各种炎性疾病如肺纤维化、回肠炎、结肠炎和Krohn氏病、神经变性疾病如Alzheimer病、帕金森氏病和肌萎缩性侧索硬化症(ALS)、脑垂体功能异常、包括生长激素产生不足、调节编程性细胞死亡(apoptosis)、包括诱导编程性细胞死亡和抑制T细胞激活的编程性细胞死亡、恢复毛发生长，包括用本发明的化合物和其他治疗剂如Minoxidil联合治疗与免疫系统相关的疾病，包括使用本发明化合物作为免疫抑制剂和免疫调节剂，调节器官移植物排斥和促进伤口愈合，包括调节瘢痕形成。本领域技术人员还可理解到，本发明的类视黄酸化合物将适用于任何可使用包括RAR选择性类视黄酸、RXR选择性类视黄酸及全激动剂类视黄酸在内的各种类视黄酸的疗法中。
此外，本领域技术人员将会理解到，本发明的化合物包括含有这些化合物的药物组合物及配方，可用于各种联合疗法中以治疗上述的那些疾病和病变。因此，本发明的化合物可与其他疗法，其中包括但不只限于与化学治疗剂如细胞生长繁殖抑制剂和细胞毒性剂、免疫修饰剂如干扰素、白细胞间素、生长激素及其他细胞活素，激素疗法、外科和放射疗法联合使用。
本发明的有代表性的化合物包括但不只限于(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基〕-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸乙酯、(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二-异丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二-异丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(4-叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基〕-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基〕辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基〕辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-乙氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二叔丁基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-环己基-7-(3,5-二叔丁基苯基)庚-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基苯基)壬-2,4,6-三烯酸、及(2E,4E,6Z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基-6-甲基苯基)壬-2,4,6-三烯酸。
本领域技术人员可用常规的化学合成方法，例如通过已公开化合物的改性或全合成法等，来制得本发明的化合物。这方面，按照已有的如M.I.Dawson及W.H.Okanmara[“合成类视黄酸的化学和生物学”3,8,14和16章，CRC Press,Inc.,Florida(1990)]、M.H.Dawson及P.D.Hobbs[“类视黄酸的合成化学”第2章“类视黄酸，生物学，化学和医学”M.B.Spornet al.,Eds.(2nd ed.),Raven Press,New York,New York,PP.5-178(1994)]和R.S.H.Liu及A.E.Asorto[“维生素A立体异构体的光化学和合成”40Tetrahedron,1931(1984)](其公开内容列入本文作为参考)所述的合成类视黄酸的路线和技术可很好地合成本发明的化合物。合成本发明化合物的一般方法的各系列步骤如下文所示。此外，本发明特定化合物的更详细的描述举例说明性合成路线将在本文的实施例中给出。通用方法1
在通用方法1中，为制备本发明的化合物，可以用例如氰甲基膦酸二乙基酯等膦酸酯处理芳基酮A以得到腈B，然后在如氢化二异丁基铝(Dibal)等还原剂存在下还原B(虚线表示可选择性地为单或双键)，以提供醛C。可在此阶段通过薄层色谱(TLC)或本领域技术人员已知的其他方法分离醛C的顺式或反式异构体。然后用如三乙基-3-烷基-4-膦酰基丁烯酸酯等膦酸酯处理这些分离的醛C，得到三烯酸酯D，后者则可于碱性条件下经皂化而得到羧酸E。
或者，亦可利用如下所示的通用方法2，从炔F制备醛C的顺式异构体。具体地说，于如二异丙基氨基化理(LDA)等强碱存在下，用如CIPO(EtO)2等磷酰化剂处理芳基乙酰苯以制备芳基炔F。然后用合适的如PhOCN等腈源化合物，于如正丁基锂(nBuLi)等碱存在下处理芳基炔F，以得到腈G，后者再经还原性甲基化处理即无例外地得到腈B的顺式异构体。然后将腈B还原成相应的醛B，并按前述通用方法1中的同样方法得到化合物D和E。通用方法2
可通过通用方法3制备本发明的化合物的其他类似物。首先还原腈B的双键(其中虚线表示选择性单或双键)，得到腈I。然后于Dibal存在下还原腈I得到醛J，后者经用如三乙基-3-烷基-4-膦酰基丁烯酸酯等膦酸酯处理后得到二烯酸酯K。通过如KOH/MeOH等碱皂化二烯酸酯K，得到二烯酸L。通用方法3
可按下述通用方法4制备本发明化合物的放射性标记的同系物。具体他说，将化合物A氧化成甲基酯B，然后用如LiAl3H4等氚氢化物来源，将其还原成醇C。氧化氚化的醇C得到醛D，然后与三乙基膦酰基丁烯酸酯的内鎓盐缩合得到氚化的酯E。将酯E皂化后以高产率得到有高比活性(＞20Ci/毫摩尔)的最后氚标记的酸F。Boehm等人在“高比活性[3H]-9-顺式-视黄酸的合成及其应用于鉴别类视黄酸异常结合性质”，37 J.Med.Chem.,408-414(1994)(其中公开的内容列入本文作为参考)中详细描述了这一方法。通用方法4放射性标记同系物的制备
本领域技术人员可以理解到，对上述方法的某些改动仍包括于本发明的范围之内。例如，也可以以相应的酰胺或酯的形式制备本发明的化合物，可用适当的正膦取代膦酸酯，并且可以在上述合成中利用除LiAl3H4以外的还原剂。另外，应理解到可以利用包括13CH3、13CD3等在内的其他同位素标记。可以利用适当标记的MeLi(如13CH3Li)如方法1中所示引入这些标记。而合成的其余步骤同方法1中所示。
另一方面，本发明的类视黄酸化合物、其医药上可接受的盐或可水解的酯可与医药上可接受的载体混合形成混合物，以提供可用于治疗哺乳动物，更好是病人体内如上文提到的生物学状态或疾病的药物组合物。在这些药物组合物中使用的特定载体可依据所需的给药型式的不同(例如静脉内注射、口服、局部用药，栓剂或胃肠道外给药〕而采取多种不同的形式。
在制备口服液体剂型(如悬浮液、酏剂和溶液剂)的组合物时，可使用例如水、乙二醇、油、醇、香味剂、防腐剂、着色剂等典型的药物介质。同样，当制备口服固体剂型(如粉末、片剂和胶囊剂)时，可以使用如淀粉、糖等载体、稀释剂、造粒剂、润滑剂、粘结剂、崩解剂等。由于片剂和胶囊剂用药方便，所以它们代表了本发明药物组合物的最为有利的口服剂型。
为了胃肠道外给药，典型的载体将包括无菌水，但也可以使用有助于溶解度或作为防腐剂的其他成分。此外，也可以制备可注射的悬浮液，其中可利用适当的液体载体及悬浮剂等。
为了局部给药，可以使用无刺激性的润湿基质如软膏或乳膏配制本发明的化合物。适用的软膏基质包括凡士林、凡士林加挥发性硅氧烷、羊毛脂和油包水乳剂例如EucerinTM(Beiersdorf)。适用的乳膏基质包括NiveaTMCream(Beiersdorf)、冷霜(USP)、Purpose CreamTM(Johnson & Johnson)、亲水软膏(USP)、和LubridermTM(Waner-Lambert)。
本发明的药物组合物和化合物一般以大约每公斤体重大约1μg至500毫克，较好大约10μg至250毫克，最好大约20μg至100毫克的剂量单位形式给药。如本领域技术人员所理解到的，用于病人的本发明药物组合物的特定给药量将取决于多种因素，其中包括但不只限于预期的生物学活性、病人的状况，以及对药物的耐受性。
当进行标记并用于检测是否存在RAR和RXR的检测法中时，也可体现本发明的化合物所具有的实用性。由于它们能够与RAR和RXR亚族的成员特异性地结合，并因而可于其他类视黄酸受体或相关的细胞内受体存在下用于确定RAR和RXR异型的存在，所以是特别有用的。
因此，本发明还提供同位素标记的和放射性标记的化合物，包括氘、氚、碳13和碳14标记的类似物，以及它们的合成方法。在一个优选的方面，本发明的标记的化合物表现有至少15Ci/毫摩尔，较好至少25Ci/毫摩尔，且最好至少40Ci/毫摩尔的比活性。这些标记的化合物也将证明可在动物代谢研究中用于鉴定化合物代谢产物。
由于本发明化合物对类视黄酸受体的选择性异性，所以这些化合物也可用于体外纯化RAR和RXR的样品。可将含有类视黄酸受体的样品与一种或多种本发明的化合物混合，以使化合物(配体)结合到受体上。然后再用本领域技术人员已知的分离技术分离出已结合的配体/受体结合物，以完成这一纯化目的。所说的分离技术包括柱分离、过滤、离心、标记和物理分离，以及抗体复合等。
本发明的化合物还包括外消旋物，单独的立体异构体及其混合物。然而用标准的拆分技术例如分步结晶和手征性柱色谱技术分离这些异构体。
本发明的化合物和药物组合物可有利地用于治疗本文所述的疾病和病理状态。就这方面来说，这些化合物和组合物特别适用于治疗皮肤相关疾病和病变，例如痤疮、牛皮癣和光损伤、癌的和癌前期的病变、眼科疾病、心血管病、炎症和神经退化性疾病、与人乳头状瘤病毒相关的疾病、异常脑垂体功能以及调节编程性细胞死亡、治疗免疫系统疾病、促进伤口愈合及恢复头发生长。
此外，本发明的化合物和药物组合物具有许多超越已鉴定之类视黄酸化合物的优点。例如，如在下文中描述的共转染试验中所证明的，这些化合物是RAR和RXR的极好激活剂，在一般小于100nM、较好小于50nM、更好小于20nM，且最好小于10nM的浓度下，可对一种或多种类视黄酸受体表现有50％最大激活作用(即EC50)。另外，本发明的RAR和RXR选择性化合物能够以比激活其他类视黄酸受体亚族至少大2倍，较好至少大5倍，更好至少大10倍，最好至少大100倍的效力水平优先激活一个类视黄酸受体亚族。再者，本发明的化合物也易于合成，具有更大的稳定性和生物可利用性，而且与已知的RAR和RXR活性化合物即全反式视黄酸和9-顺式视黄酸相比，致畸形作用也较少。
以下参照非限制性实施例进一步举例描述本发明。
实施例1-2按照下文图解显示和详细描述的合成路线1制备(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(9)和(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(10)。合成路线1
3,5-二叔丁基乙酰苯(2)于-78℃向溶于100毫升无水THF的20克(85.5毫摩尔)3,5-二叔丁基苯甲酸1溶液内，加入94.0毫升(188.0毫摩尔)2N MeLi的乙醚溶液。将反应混合物慢慢加温至室温，并再继续搅拌30分钟，然后倒入饱和的NH4Cl水溶液(200毫升)中。用己烷(2×100毫升)萃取有机产物，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，并用色谱法(SiO2,2EtOAc-己烷)纯化后，得到15克(64.7毫摩尔)酮2(75.7％产率)TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.8,1H-NMR(CDCl3)δ1.39(s,18H,6(CH3)),2.61(s,3H,CH3),7.64(t,J=1Hz,1H,Ar-H),7.80(d,J=1Hz,2H,Ar-H)。
3-(3,5-二-叔丁基苯基)丁-2-烯腈(3)(反式)和(4)(顺式)向溶于10毫升无水THF的2.43克(13.7毫摩尔)的氰甲基膦酸二乙酯溶液加入440毫克(10.96毫摩尔)NaH(溶于矿物油中的60％溶液)。将反应混合物搅拌30分钟，然后加入溶于5毫升无水THF中的1.59克(6.85毫摩尔)酮2的溶液。搅拌12小时后，用饱和的NH4Cl水溶液(50毫升)使混合物骤冷，并用乙醚(2×50毫升)萃取产物。洗涤乙醚萃取物(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，并用制备性TLC法(SiO2,2.5％EtOAc-己烷)纯化后得到1.1g(4.4毫摩尔)反式异构体和104毫克(0.4毫摩尔)顺式异构体4(合并产率70％)。反式异构体3:TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.9,1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s,18H,6(CH3)),2.49(s,3H,CH3),5.59(s,1H,=CH),7.25(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.50(d,J=1Hz,1H,Ar-H)。顺式异构体4:TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.8,1H-NMR(CDCl3)δ1.42(s,18H,6(CH3)),2.31(s,3H,CH3),5.34(s,1H,=CH),7.39(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.49(d,J=1Hz,1H,Ar-H)。
3-(3,5-二-叔丁基苯基)丁-2-烯醛(5)(反式异构体)在78℃下向溶于5毫升CH2Cl2的736毫克(2.89毫摩尔)化合物3中，加入2.31毫升(3.47毫摩尔)溶于甲苯的1.5MDIBAL溶液。于-78℃下搅拌15分钟后，加10毫升Rochelle盐的饱和水溶液使反应混合物骤冷。用乙醚(2×20毫升)萃取产物，洗涤(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，并用色谱法(SiO2,3％ETOAc-己烷)纯化，得到462.3毫克(1.80毫摩尔)化合物5(产率62％):TLC(10％EtOAc-90％己烷)Rf0.5,1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,18H,6(CH3)),2.59(s,3H,CH3),6.50(d,J=8.0Hz,1H,=CH),7.39(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.51(d,J=1Hz,1H,Ar-H),10.18(d,J=8.0 Hz,1H,CHO)。
3-(3,5-二-叔丁基苯基)丁-2-烯醛(6)(顺式异构体)使用制备化合物5的同样方法从相应的顺式异构体4制备顺式异构体6:TLC(10％EtOAc-90％己烷)Rf0.55,1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,1 8H,6(CH3)),2.34(s,3H,CH3),6.12(d,J=8.0Hz,1H,=CH),7.10(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.46(t,J=1Hz,1H,Ar-H),9.45(d,J=8.0Hz,1H,CHO)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二-叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(7)于-78℃下向溶于8毫升无水THF的790毫克(3.0毫摩尔)三乙基-3-甲基-4-膦酰基丁烯酸酯溶液中，加入l.2毫升溶于己烷的2.5MnBuLi溶液。搅拌15分钟后，于-78℃将此含有三乙基膦酰基丁烯酸酯的内鎓盐的溶液加到溶于8毫升无水THF的258毫克(1.0毫摩尔)的反式异构体5中。将反应混合物加温至室温，用NH4Cl饱和水溶液(20毫升)使之骤冷，并用乙醚(2×50毫升)萃取产物。洗涤(先用水，再用盐水)乙醚萃取物、干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，并用柱色谱法(SiO2,5％EtOAc-己烷)纯化后，得到294毫克(0.8毫摩尔)E,E,E异构体7(产率49％):TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.78,1H-NMR(CDCl3)δ1.30(t,J=7.7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),2.28(s,3H,CH3),2.39(s,3H,cH3),4.17(m,2H,CH2CH3),5.82(s,1H,=CH),6.40(d,J=15Hz,1H,=CH),6.54(d,J=15Hz,1H,=CH),7.04(m,1H,=CH),7.21(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.39(d,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(8)按照制备2E,4E,6E-异构体7的同样方法制备2E,4E,6Z异构体8，但其中用6替代5:TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.82,1H-NMR(CDCl3)δ1.27(t,J=7.7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),2.17(s,3H,CH3),2.22(s,3H,CH3),4.15(m,2H,CH2CH3),5.74(s,1H,=CH),6.26(dd,J=8Hz,2H,=CH),6.80(m,1H,=CH),7.10(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.37(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(9)向溶于5毫升MeOH的180毫克(0.49毫摩尔)2E,4E,6E-乙酯7溶液中加入1毫升5N NaOH水溶液。将混合物加回流10分钟，冷却至室温，用20％HCl水溶液酸化，并用乙醚(2×10毫升)萃取有机物。洗涤(先用水，再用盐水)乙醚层、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。经柱色谱法(SiO2,20％EtOAc-己烷)纯化后，得到157毫克(0.46毫摩尔)2E,4E,6E-异构体9(产率93％)TLC(10％MeOH-90％CHCl3)Rf0.6，熔点196-198℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s,18H,6(CH3)),2.29(s,3H,CH3),2.41(s,3H,CH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(d,J=15Hz,1H,=CH),6.54(d,J=15Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.32(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.39(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(10)按照制备9的同样方法制备2E,4E,6Z-异构体10，但其用8代替7:TLC(10％MeOH-90％CHCl3)Rf0.57,熔点221-222℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,18H,6(CH3)),2.18(s,3H,CH3),2.23(s,3H,CH3),5.77(s,1H,=CH),6.27(m,2H,=CH),6.84(m,1H,=CH),7.10(d,J=1Hz,2H Ar-H),7.37(d,J=1Hz,1H,Ar-H)。
实施例3按照下文图解显示并详述的合成路线2制备(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸(14)。合成路线2
3-(3,5-二叔丁基苯基)丁烷腈(11)向溶于5毫升EtOAc的300毫克(1.18毫摩尔)3-(3,5-二叔丁基苯基)-丁-2-烯腈3溶液中加入20毫克(催化量)10％Pd/C。将混合物在真空下放置0.5分钟，然后通入氢气。于氢气氛下搅拌2小时后，通过硅藻土过滤溶液，用EtOAc(3×5毫升)洗硅藻土，并浓缩溶液后，得到300毫克(1.17毫摩尔)还原的产物11(产率99％):TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.8,1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,18H,6(CH3)),1.50(d,3H,CH3),2.60(m,2H,CH2),3.15(m,1H,CH),7.05(d,J=1Hz,2H,=Ar-H),7.33(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)丁醛(12)于-78℃下向溶于5毫升CH2Cl2的300毫克(1.17毫摩尔)腈11中，加入0.93毫升(1.4毫摩尔)溶于甲苯的1.5MDIBAL溶液。将反应混合物搅拌5分钟，用NH4Cl(10毫升)饱和水溶液使之骤冷，用乙醚(2×20毫升)萃取、干燥(MgSO4)、过滤、浓缩并用色谱法(SiO2,5％EtOAc-己烷)纯化后，得到188毫克(0.72毫摩尔)所需的醛12(产率62％):TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.8,1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,18H,6(CH3)),1.35(d,3H,CH3),2.70(m,2H,CH2),3.36(m,1H,CH),7.06(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.28(t,J=1Hz,1H,Ar-H),9.70(t,1H,CHO)。
(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸乙酯(13)按照制备化合物7的相似方法从化合物12制备化合物13:TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.88,1H-NMR(CDCl3)δ1.30(m,6H,CH2CH3+CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),2.20(s,3H,CH3),2.40(m,2H,CH2),2.85(m,1H,CH),4.14(m,2H,CH2CH3),5.62(s,1H,=CH),6.03(m,2H,=CH),7.00(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.24(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸(14)按照制备化合物9的相似方法从13制备化合物14:TLC(10％MeOH-90％CHCl3)Rf0.5，熔点127-128℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.28(d,J=8Hz,3H,CH3),1.32(s,1 8H,6(CH3)),2.23(s,3H,CH3),2.46(m,2H,CH2),2.86(m,1H,CH),5.69(s,1H,=CH),6.10(m,2H,=CH),7.01(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.26(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
实施例4按照如下图示和描述的合成路线3再制备(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(10)。合成路线3
1,3-二叔丁基-5-乙炔基苯(15)在-78℃下向溶于THF的9.86毫升(24.7毫摩尔)2.5N LDA溶液内，加入溶于3毫升无水THF的4.75克(20.47毫摩尔)酮2(得自实施例1-2)。搅拌30分钟后，加入2.96毫升(20.47毫摩尔)二乙基膦酰基氯，并将反应混合物加温至室温保持1小时。再次将反应混合物冷却到-78℃，然后加入溶于THF的19.7毫升(49.2毫摩尔)2.5NLDA溶液并加温至室温。加入水(50毫升)，并用己烷(2×40毫升)萃取混合物。洗涤(先用水，再用盐水)合并的有机萃取物、干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，并经柱色谱法(SiO2,2％EtOAc-己烷)纯化后，得到3.02克(14.1毫摩尔)化合物15(产率69％):TLC(己烷)Rf0.9,1H-NMR(CDCl3)δ1.31(s 18H,6(CH3)),3.02(s,1H,C≡CH),7.35(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.42(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)丙炔腈(16)于-78℃下向溶于25毫升无水THF中的1.68克(7.8毫摩尔)丙炔15内，加入3.75毫升(9.38毫摩尔)nBuLi(2.5M，溶于己烷)。搅拌15分钟后，加入1.12克(9.41毫摩尔)PhOCN，并将反应混合物加温至室温。加入25毫升6N NaOH水溶液使混合物骤冷、萃取(EtOAc,2×25毫升)、洗涤(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，并经柱色谱法(SiO2,5％EtOAc-己烷)纯化后，得到1.71克(7.16毫摩尔)白色固体化合物16(产率92％):TLC(己烷)Rf0.4,1H-NMR(CDCl3)δ1.32(,s 18H,6(CH3)),7.45(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.58(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)丁-2-烯腈(4)(顺式异构体)在250毫升火焰干燥的园底烧瓶内装入3.27g(17.17毫摩尔)无水碘化铜和25毫升无水THF。将混合物冷却至0℃，然后缓慢加入24.5毫升(34.3毫摩尔)MeLi(1.4M乙醚溶液)。在溶液逐渐澄清并变得无色后，将其冷却至-78℃，并滴加溶于10毫升无水THF的1.71g(7.16毫摩尔)化合物16的溶液。将混合物于-78℃下搅拌45分钟，用40毫升MeOH与NH4Cl饱和水溶液的1∶1混合物使之骤冷。用EtOAc(2×40毫升)萃取产物、洗涤(先用2％NaOH，然后用饱和NH4Cl，再用水，最后用盐水)、干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，并通过短硅胶垫纯化得到1.64g(6.80毫摩尔)顺式异构体4(产率95％):TLC(5％EtOAC-95％己烷)Rf0.8,1H-NMR(CDCl3)δ1.42(s,18H,6(CH3)),2.31(s,3H,CH3),5.34(s,1H,=CH),7.39(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.49(d,J=1Hz,1H,Ar-H)。
按照实施例1-2中所述方法继续合成化合物6、8及终产物10。
实施例5-6按照如下图示并描述的合成路线4制备(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸(27)和(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸(28)。合成路线4
3.5-二叔丁基苄基醇(17)0℃下向溶于20毫升无水THF的10.0g(42.7毫摩尔)酸1中，加入42.7毫升(42.7毫摩尔)LAH(1.0M，溶于THF)。将反应混合物升温至50℃，并搅拌15分钟。冷却至室温后，加入20％HCl水溶液直到溶液转为澄清。用EtOAc(2×50毫升)萃取溶液，并洗涤(先用水，再用盐水)合并的EtOAc提取物、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩后，得到8.8克(40.0毫摩尔)化合物17(产率94％)。将产物直接用于下步骤。TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf0.4,1H-NMR(CDCl3)δ1.33(s,18H,6(CH3)),4.68(s,2H,CH2),7.22(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.38(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
3,5-二叔丁基苯甲醛(18)向溶于20毫升CH2Cl2的8.8g(40.0毫摩尔)醇17中，加入50.0克(575毫摩尔)MnO2。将反应混合物强烈搅拌8小时，通过由顶层硅藻土和底层氧化硅组成的过滤垫进行过滤。用50毫升等分的CH2Cl2反复洗滤垫直到不再有产物洗脱为止。经1HNMR检测其为纯产物并直接用于下一个合成步骤(产率95％):TLC(20％EtOAC-80％己烷)Rf0.6,1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,18H,6(CH3)),7.72(m,3H,Ar-H),10.01(s,’1H,CHO)。
1-(3,5-二叔丁基苯基)丁-1-醇(19):0℃下向溶于10毫升无水乙醚的2.0克(9.17毫摩尔)醛18溶液内，加入5.5毫升(11.0毫摩尔)氯化丙基镁(2.0M，溶于乙醚中)。使反应混合物升温至室温，并用水(50毫升)使之骤冷、用乙醚(2×50毫升)萃取、洗涤(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)、过滤、并浓缩后，得到2.37g(9.05毫摩尔)可直接用于下一个步骤的醇19(经1H-NMR检测为纯样)(产率98％):TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ0.96(t,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.66(m,2H,CH2),1.84(m,1H,CH),4.66(m,1H,CHOH),7.18(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.34(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
1-(3,5-二叔基基苯基)丁-1-酮(20)向溶于18毫升CH2Cl2的2.37g(9.05毫摩尔)醇19内，加入7.86g(90.45毫摩尔)MnO2。将反应混合物搅拌3小时，然后过滤(通过硅胶上有硅藻土的垫层)，并用20毫升等分的CH2Cl2反复洗滤垫。浓缩后，经色谱法(SiO2,3％EtAOc-己烷)纯化酮20，得到941毫克(3.62毫摩尔)的产物20(产率40％):TLC(10％EtAOc-90％己烷)Rf0.7；1H-NMR(CDCl3)δ1.01(t,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.78(m,2H,CH2CH3),2.96(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),7.63(t,J=1Hz,1H,Ar-H),7.83(d,J=1Hz,2H,Ar-H)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)己-2-烯腈(21)(反式)和(22)(顺式)向溶于5毫升无水THF的661毫克(3.73毫摩尔)二乙基氰甲基膦酸酯内，加入127毫克(3.17毫摩尔)氢化钠(60％分散在矿物油中)。将混合物搅拌5分钟，然后加入484毫克(1.87毫摩尔)溶于2毫升无水THF的酮20。将反应混合物加热回流30分钟，冷却至室温、用NH4Cl(15毫升)饱和水溶液使之骤冷、用乙醚(2×15毫升)萃取、洗涤(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。用色谱法(制备性TLC,SiO2,10％EtAOc-己烷)纯化后，得到329毫克(1.16毫摩尔)反式异构体21和70.5毫克(0.25毫摩尔)顺式异构体22(合并的产率为75％)。反式异构体21:TLC(10％EtAOc-90％己烷)Rf0.8；1H-NMR(CDCl3)δ0.97(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.33(s,18H,6(CH3)),1.54(m,2H,CH2CH2CH3),2.88(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),5.50(s,1H,=CH),7.23(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.50(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。顺式异构体22:TLC(10％EtOAc-90％己烷)Rf0.9；1H-NMR(CDCl3)δ,0.93(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.48(m,2H,CH2CH2CH3),2.57(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),5.32(s,1H,=CH),7.28(d,J=2Hz,2H,Ar-H),7.45(t,J=2Hz,1H,Ar-H)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)己-2-烯醛(23)(反式)于-78℃向溶于4毫升CH2Cl2的166毫克(0.59毫摩尔)腈21中，加入0.59毫升(0.88毫摩尔)DIBAL(1.5M，溶于甲苯)。将反应混合物搅拌10分钟，并用10毫升Rochelle盐的饱和水溶液使之骤冷。用乙醚(2×20毫升)萃取产物、洗涤(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，并用色谱法(制备性TLC,SiO2,3％EtOAc-己烷)纯化后，得到141毫克(0.49毫摩尔)油状化合物23(产率83％):TLC(10％EtOAc-90％己烷)Rf0.7；1H-NMR(CDCl3)δ0.97(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.57(m,2H,CH2CH2CH3),3.03(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),6.32(d,J=8Hz,1H,=CH),7.33(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.48(t,J=1Hz,1H,Ar-H),10.15(d,J=8Hz,1H,CHO)。
3-(3,5-二叔丁基苯基)己-2-烯醛(24)(顺式)按照制备化合物23的同样方法，但以顺式异构体22代替21制备化合物24:TLC(10％EtOAc-90％己烷)Rf0.8；1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,9H,CH3),1.35(s,9H,CH3),1.51(m,2H,CH2CH2CH3),2.58(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),6.10(d,J=8Hz,1H,=CH),7.04(d,J=2Hz,2H,Ar-H),7.43(t,J=2Hz,1H,Ar-H),9.42(d,J=8Hz,1H,CHO)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯(25)于-78℃向溶于5毫升无水THF的391毫克(1.48毫摩尔)三乙基-3-甲基-4-膦酰基丁烯酸酯内，加入0.59毫升(1.48毫摩尔)溶于己烷的2.5MnBuLi溶液和2.5毫升DMPU。搅拌15分钟后，于-78℃将含有三乙基膦酰基丁烯酸酯的内鎓盐的溶液加到溶于5毫升无水THF的141毫克(0.49毫摩尔)化合物23中。使反应混合物升温至室温，用饱和的NH4Cl水溶液(20毫升)使之骤冷，并用乙醚(2×25毫升)萃取产物，洗涤乙醚萃取物(先用水，再用盐水)，过滤，浓缩并用柱色谱法(SiO2,5％EtOAc-己烷)纯化，得到171毫克(0.43毫摩尔)全反式异构体25(产率88％):TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.29(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.52(m,2H,CH2CH2CH3),2.39(s,3H,CH3),2.70(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),4.18(m,2H,CH2CH3),5.80(s,1H,=CH),6.42(d,J=15Hz,2H,=CH),6.47(d,J=15Hz,1H,=CH),7.03(m,1H,=CH),7.27(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.36(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯(26)按照制备化合物25的同样方法，用顺式异构体24代替23制备化合物26TLC(5％EtOAc-95％己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.29(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.33(s,1 8H6(CH3)),1.44(m,2H,CH2CH2CH3),2.15(s,3H,CH3),2.48(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),4.16(m,2H,-COCH2CH3),5.73(s,1H,=CH),6.22(d,J=11Hz,1H,=CH),6.26(d,J=11Hz,1H,=CH),6.74(dd,J=11Hz,1H,=CH),7.26(d,J=2Hz,2H,Ar-H),7.34(t,J=2Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸(27)向溶于5毫升MeOH的171毫克(0.44毫摩尔)化合物25的溶液内，加入1毫升5NNaOH水溶液。将混合物加热回流10分钟，冷却至室温，用20％HCl水溶液酸化，并用乙醚(2×10毫升)萃取有机物。先用水再用盐水洗涤乙醚层、干燥(MgSO4)，过滤并浓缩。用色谱法(制备性TLC,SiO2,20％EtOAc-己烷)纯化后，得到28毫克(0.08毫摩尔)全反式异构体27(产率80％):TLC(10％MeOH-90％CHCl3)Rf0.8；熔点143-144℃；1H-NMR(CDCl3)δ0.94(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.34(s,18H,6(CH3)),1.52(m,2H,CH2CH2CH3),2.40(s,3H,CH3),2.71(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(t,J=15Hz,1H,=CH),6.47(d,J=15Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.26(d,J=1Hz,2H,Ar-H),7.37(t,J=1Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸(28)按照制备化合物27的同样方法，以顺式异构体26代替25制备化合物28TLC(10％MeOH-90％CHCl3)Rf0.8；熔点166-169℃；1H-NMR(CDCl3)δ0.89(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.31(s,9H,CH3),1.32(s,9H,CH3)1.42(m,2H,CH2CH2CH3),2.15(s,3H,CH3),2.49(t,J=7Hz,2H,CH2CH2CH3),5.76(s,1H,=CH),6.23(t,J=11Hz,1H,=CH),6.28(d,J=1 5Hz,1H,=CH),6.78(dd,J=15Hz,1H,=CH),7.04(s,2H,Ar-H),7.35(s,1H,Ar-H)。
实施例7-8按照下文图示和描述的合成路线5制备(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,,4,6-三烯酸(29)和(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸(40)。合成路线5
3,5-二叔丁基-2-羟基乙酰苯(30)向溶于60毫升二氯乙烷的10g(48.5毫摩尔)2,5-二叔丁基苯酚29和4.56g(58.16毫摩尔)乙酰氯中，加入11.9毫升(97.0毫摩尔)BF3·OEt2，并将反应混合物加热回流10分钟。冷却反应混合物，并倒入1∶1冰-20％HCl水溶液内，搅拌并萃取(2×100毫升，EtOAc)之。洗涤(先用水，再用盐水)有机萃取物、干燥(MgSO4)、浓缩并纯化(SiO2色谱法，5％EtOAc-己烷)，得到7.0g(28.22毫摩尔)油状化合物30(58％产率):TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.1；1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s,9H,CH3),1.42(s,9H3(CH3)),2.68(s,3H,CH3),7.55(m,2H,AR-H)。
6,8-二叔丁基-2-羟基苯并二氢吡喃-4-酮(31)在火焰干燥的500毫升园底烧瓶内，向其中的1.8g(78.26毫摩尔)钠金属中逐滴加入溶于120毫升甲酸乙酯的7.5克(30.24毫摩尔)苯酚30。加完之后将混合物在0℃下搅拌1小时，然后冷却至室温，并倒入1NHCl水溶液中。当混合物的变得透明时，萃取有机物(2×150毫升EtOAc)、洗涤(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)并浓缩，得到7.4g(26.81毫摩尔)油状化合物31(产率89％)。该产物直接用于下一个步骤TLC(20％EtOAc-己烷)Rf0.4；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(s,9H,3(CH3)),1.42(s,9H,3CH3),2.87(dd,J=16.0,5.5Hz,1H,CH2),3.01(dd,J=16.0,3.1Hz,1H,CH2),5.87(dd,J=5.5,3.3Hz,1H,CHOH),7.58(d,J=2.5Hz,1H,Ar-H),7.79(d,J=2.5Hz,1H,Ar-H)。
4H-6，8-二叔丁基-苯并吡喃-4-酮(未示出)向溶于20毫升MeOH的7.4g(26.81毫摩尔)化合物30中，加入8毫升20％HCl水溶液，并将混合物加热回流20分钟。冷却至室温后加入水(30毫升)，并萃取(2×30毫升EtOAc)产物、洗涤(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)并浓缩，得到大约6.0g(25.00毫摩尔)4H-6,8-二叔丁基-苯并吡喃-4-酮油状物，然后将其放置几小时，固化(产率约93％)。该产物被直接用于步骤TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ1.37(s,9H,3CH3),1.49(s,9H,3CH3),6.35(d,J=5.6Hz,1H,CH=CH),7.70(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),7.91(d,J=5.6 Hz,1H,CH=CH),8.10(d,J=2.4Hz,1H,AR-H)。
6,8-二叔丁基-苯并二氢吡喃-4-酮(32)向溶于8毫升EtOAc的1.0g(3.87毫摩尔)4H-6,8-二叔丁基-苯并吡喃-4-酮内，加入200毫克10％Pd/C。使混合物脱气，然后通入氢气并于氢气氛中室温搅拌2小时。过滤(硅藻土)后，浓缩并纯化(SiO2色谱法，5％EtOAc-己烷)产物，得到857毫克(3.29毫摩尔)白色固体化合物32(产物85％):TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.7；1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s,9H,CH3),1.42(s,9H,CH3),2.78(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.52(t,J=6.0Hz,2H,CH2),7.53(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),7.81(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H)。
(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)乙腈(33)(反式)和(34)(顺式)向溶于6毫升无水THF的891毫克(5.03毫摩尔)氰甲基膦酸酯中，加入188毫克(4.69毫摩尔)NaH(60％，在油中)，并将混合物搅拌20分钟。向此溶液内加入溶于2毫升无水THF的436毫克(1.80毫摩尔)化合物32，并将反应混合物加热回流2小时。冷却至室温后，用饱和NH4Cl溶液(10毫升)使反应骤冷，萃取(2×10毫升EtAOc)、洗涤(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)、浓缩并纯化(SiO2色谱法，5％EtOAc-己烷)，得到358毫克(1.32毫摩尔)反式异构体33和95毫克(0.35毫摩尔)顺式异构体34(合并产率93％)。反式异构体33:TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(s,9H,3CH3),1.36(s,9H,3CH3),3.00(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.27(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.73(s,1H,=CH-CN),7.35(d,J=2.4 Hz,1H,Ar-H),7.41(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H)；顺式异构体34:TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.4；1H-NMR(CDCl3)δ1.34(s,9H,3CH3),1.39(s,9H,3CH3),2.76(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.29(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.11(s,1H,=CH-CN),7.42(d,J=2Hz,1H,Ar-H),8.28(d,J=2Hz,1H,AR-H)。
(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)乙醛(35)(反式)于-78℃下，向溶于5毫升己烷的100毫克(0.36毫摩尔)腈33溶液内，加入0.35毫升(0.53毫摩尔)溶于甲苯的1.5M DIBAL溶液。将混合物搅拌5分钟，然后加入10毫升Rochelle盐饱和水溶液，并使之升温至室温。萃取(2×10毫升EtOAc)该溶液，洗涤(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩，得到86毫克(0.30毫摩尔)相对纯的醛35(产率83％):TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s,9H,3CH3),1.41(s,9H,3CH3),3.27(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.30(t,J=6.0Hz,2H,CH2),6.57(d,J=8Hz,1H,=CH-CHO),7.41(d,J=2.4 Hz,1H,Ar-H),7.51(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),10.14(d,J=8Hz,1H,CHO)。
(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)乙醛(36)(顺式)按照制备化合物35的同样方法，但用顺式异构体34代替33制备化合物36:TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.4；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(s,9H,3CH3),1.38(s,9H,3CH3),2.80(t,J=6.5 Hz,2H,CH2),4.42(t,J=6.5Hz,2H,CH2),5.95(d,J=8Hz,1H,=CH),7.12(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),7.44(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),10.00(d,J=8Hz,1H,CHO)。
(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯(37)于-78℃下，向溶于3毫升无水THF的238毫克(0.902毫摩尔)三乙基-3-甲基-4-膦酰基丁烯酸酯中，加入0.36毫升溶于己烷的2.5MnBuLi溶液，及3毫升DMPU。搅拌15分钟后，在-78℃下将此含有三乙基膦酰基丁烯酸酯内鎓盐的溶液移入溶于4毫升1∶1 THF-DMPU的86毫克(0.30毫摩尔)化合物35中。使反应混合物升温至室温，用饱和NH4Cl水溶液(20毫升)使反应骤冷，并用EtOAc(2×20毫升)萃取产物。洗涤(先用水，再用盐水)萃取物、干燥(MgSO4)、过滤、浓缩，并经柱色谱法(SiO2,5％EtOAc-己烷)纯化，得到85.3毫克(0.22毫摩尔)2E,4E,6E-异构体37(产率73％)和5.6毫克(0.014毫摩尔)2Z,4E,6E异构体(产率5％)。化合物37:TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.33(s,9H,3CH3),1.37(s,9H,3CH3),2.37(s,3H,CH3),2.88(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.17(q,2H,CH2),4.23(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.81(s,1H=CH),6.43(d,J=15 Hz,1H,=CH),6.73(d,J=15Hz,1H,=CH),6.96(m,1H,=CH),7.25(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H),7.50(d,J=2.4Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯(38)按照制备化合物37的同样方法，但以顺式异构体36代替化合物35制备化合物38，化合物36:TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(t,J=7Hz,3H,CH2CH3),1.30(s,9H,3CH3),1.38(s,9H,3CH3),2.32(s,3H,CH3),2.66(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.16(m,2H,CH2),4.35(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.80(s,1H=CH),6.08(d,J=11Hz,1H,=CH),6.36(d,J=15Hz,1H=CH),7.27(d,J=2Hz,1H,Ar-H),7.29(d,J=2Hz,1H,Ar-H),7.28(dd,J=15,11Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸(39)向溶于6毫升1∶1THF-MeOH的85.3毫克(0.22毫摩尔)酯37中，加入3毫升5NNaOH水溶液。将所得溶液加热回流10分钟，冷却室温，酸化(20％HCl水溶液)，并萃取(2×6毫升EtOAc)。合并萃取物、洗涤(先用水，再用盐水)、干燥(MgSO4)、过滤并浓缩。以制备性TLC法(5％MeOH-CHCl3)，然后结晶(EtOAc-己烷，1∶4)纯化，得到74.5毫克(0.20毫摩尔)酸39的淡黄色固体物(产率94％):TLC(5％EtAOc-己烷)Rf0.5；熔点237-239℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.33(s,9H,3CH3),1.38(s,9H,3CH3),2.37(s,3H,CH3),2.89(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.23(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.86(s,1H,=CH),6.43(d,J=15Hz,1H,=CH),6.74(d,J=11Hz,1H,=CH),6.97(dd,11,15Hz,1H,=CH),7.25(d,J=2.3Hz,1H,Ar-H),7.50(d,J=2.3Hz,1H,Ar-H)。
(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸(40)按照制备化合物39的同样方法，但以顺式异构体37代替化合物36制备化合物40，化合物37:TLC(5％EtAOc-己烷)Rf0.5；熔点233-235℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.32(s,9H,3CH3),1.37(s,9H,3CH3),2.33(s,3H,CH3),2.68(t,J=6.0Hz,2H,CH2),4.35(t,J=6.0Hz,2H,CH2),5.83(s,1H,=CH),6.10(d,J=11Hz,1H,=CH),6.39(d,J=15Hz,1H,=CH),7.26(d,J=2Hz,1H,Ar-H),7.30(d,J=2Hz,1H,Ar-H),7.35(dd,J=11,15Hz,1H,=CH)。
实施例9按照合成路线1制备(2E,4E,6E)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(41)按照制备化合物9的方法，但使用3,5-二-三氟甲基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯合成该化合物TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔点225-227℃；1H-NMR(CDCl3)δ2.30(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),5.90(s,1H,=CH),6.52(d,J=15Hz,1H,=CH),6.66(d,J=12Hz,1H,=CH),7.03(m,1H,=CH),7.78(s,1H,Ar-H),7.87(s,1H,Ar-H)。
实施例10按照合成路线1制备(2E,4E,6E)-7-(3,5-二异丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(42)
按制备化合物9的类似方法合成该化合物，但其中使用3,5-二异丙基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔点157-160℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.28(d,J=8Hz,12H,CH3),2.27(s,3H,CH3),2.42(s,3H,CH3),2.90(p,J=8Hz,2H,CH),5.83(s,1H,=CH),6.42(d,J=15Hz,1H,=CH),6.60(d,J=15Hz,1H,=CH),7.02(s,1H,Ar-H),7.08(m,1H,=CH),7.45(s,2H,Ar-H)。
实施例11按照合成路线1制备(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二异丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(43)按照合成化合物10的相似方法合成该化合物，但在第一个步骤中使用3,5-二异丙基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔点177-179℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.25(d,J=7Hz,12H,CH3),2.18(s,3H,CH3),2.21(s,3H,CH3),2.90(p,J=7Hz,2H,CH),5.77(s,1H,=CH),6.25(d,J=11Hz,1H,=CH),6.27(d,J=15Hz,1H,=CH),6.85(dd,J=11,15Hz,1H,Ar-H),6.94(d,J=2Hz,2H,Ar-H),7.02(bs,H,Ar-H)。
实施例12按照合成路线1制备(2E,4E,6E)-7-(4-叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(44)以合成化合物9的相似方法合成该化合物，但其中使用4-叔丁基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯。TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔点198-200℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.33(s,9H,3CH3),2.26(s,3H,CH3),2.39(s,3H,CH3),5.84(s,1H,=CH),6.40(d,J=15Hz,1H,=CH),6.60(d,J=12Hz,1H,=CH),7.07(m,1H,=CH),7.38(s,1H,Ar-H),7.43(s,1H,Ar-H)。
实施例13按照合成路线1制备(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(45)以合成化合物9的相似方法合成该化合物，但其中使用3,5-二叔丁基-4-甲氧基乙酰苯代替3,5-二叔丁基-乙酰苯TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔点244-246℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.30(,s,9H,3CH3),1.42(s,9H,3CH3),2.27(s,3H,CH3),2.42(s,3H,CH3),3.67(s,3H,OCH3),5.83(s,1H,=CH),6.34(d,J=15Hz,1H,=CH),6.35(d,J=15Hz,1H,=CH),7.00(d,J=2Hz,1H,Ar-H),7.06(m,1H,=CH),7.27(d,J=2Hz,1H,Ar-H)。
实施例14按照合成路线1制备(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(46)按合成化合物10的类似方法合成该化合物，但其中使用3,5-二-三氟甲基-乙酰苯代替3,5-二叔丁基-乙酰苯。TLC(5％EtOAc-己烷)Rf0.5；熔点225-227℃；1H-NMR(CDCl3)δ2.15(s,3H,CH3),2.24(s,3H,CH3),5.82(s,1H,CH=,6.36(d,J=15Hz,1H,CH=),6.39(d,J=9.7Hz,1H,CH=),6.53(dd,J=15Hz,9.7Hz,1H,CH=),7.70(s,2H,Ar-CH),7.83(s,1H,Ar-CH)。
实施例15按照合成路线1制备(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(47)以合成化合物9的类似方法合成该化合物，但其中用3,5-二叔丁基-4-甲氧基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(50％EtOAc-50％己烷)Rf0.5；熔点213-216℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.45(s,18H,6(CH3)),2.25(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),3.70(s,3H,OCH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(d,J=15Hz,1H,=CH),6.52(d,J=11.2Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.35(s,2H,Ar-H)。
实施例16按照合成路线1制备(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(48)按照合成化合物9的类似方法合成该化合物，但其中使用3,4-二乙基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf0.3；熔点153-155℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.45(dd,J=14.1Hz,7.5Hz 6H,2CH3),2.25(s,3H,CH3),2.39(s,3H,CH3),2.66(m,4H,2CH2),5.83(s,1H,=CH),6.40(d,J=15Hz,1H,=CH),6.59(d,J=11.2Hz,1H,=CH),7.07(m,1H,=CH),7.14(d,J=7.8Hz,1H,Ar-H),7.27(d,J=7.8Hz,1H,Ar-H),7.28(s,1H,Ar-H)。
实施例17按照合成路线1制备(2E,4E,6Z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(49)以制备化合物10的同样方法制备化合物49，但其中以3,4-二乙基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf0.32；1H-NMR(CDCl3)δ1.23(dd,J=14.1Hz,7.5Hz,6H,2CH3),2.18(s,6H,2CH3),2.67(m,4H,2CH2),5.76(s,1H,=CH),6.23(d,J=11.8Hz,1H,=CH),6.28(d,J=15Hz,1H,=CH),6.83(m,1H,=CH),7.04(d,J=7.8Hz,1H,Ar-H),7.06(s,1H,Ar-CH),7.17(d,J=7.8Hz,1H,Ar-CH)。
实施例18按照合成路线1制备(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-乙氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(50)以合成化合物9的相似方法合成该化合物，但其中使用3,5-二叔丁基-4-乙氧基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(50％EtOAc-50％己烷)Rf0.5；熔点236-239℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.41(t,J=7.0Hz,3H,CH3),1.44(s,18H,6(CH3)),2.66(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),3.77(q,J=7Hz,2H,OCH2CH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(d,J=15Hz,1H,=CH),6.51(d,J=11.2Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.35(s,2H,Ar-H)。
实施例19按照合成路线1制备(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二叔丁基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(51)以合成化合物9的类似方法合成该化合物，但其中用3,4-二叔丁基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(20％ EtOAc-80％己烷)Rf0.3；熔点195-199℃；1H-NMR(CDCl3)d 1.56(s,9H,3CH3),1.58(s,9H,3CH3),2.26(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(d,J=15Hz,1H,=CH),6.59(d,J=11Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.23(dd,J=8.5,2.3Hz,1H,Ar-H),7.57(d,J=8.5Hz,1H,Ar-H),7.72(d,J=2.3Hz,1H,Ar-H)。
实施例20按照合成路线4制备(2E,4E,6E)-3-甲基-7-环己基-7-(3,5-二叔丁基苯基)庚-2,4,6-三烯酸(52)以制备化合物27的类似方法合成该化合物，但其中以3,4-二叔丁基苯基环己基酮代替3,5-二叔丁基丁-1-酮TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf 0.3；1H-NMR(CDCl3)1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s,9H),1.9-1.1(m,m,8H),2.40(s,3H),2.85(m,1H),5.81(s,1H),6.08(d,1H,J=11.3Hz),6.30(d,1H,J=15.8Hz),7.02(s,2H,Ar-H),7.14(dd,1H,J=15.2,15.2Hz),7.33(s,1H,Ar-H)。
实施例21按照合成路线1制备(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基苯基)壬-2,4,6-三烯酸(53)
以合成化合物9的类似方法合成该化合物，不同的是以3,5-二叔丁基-4-甲氧基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(50％EtOAc-50％己烷)Rf0.5；熔点213-216℃；1H-NMR(CDCl3)δ1.45(s,18H,6(CH3)),2.25(s,3H,CH3),2.40(s,3H,CH3),3.70(s,3H,OCH3),5.84(s,1H,=CH),6.41(d,J=15Hz,1H,=CH),6.52(d,J=11.2Hz,1H,=CH),7.08(m,1H,=CH),7.35(s,2H,Ar-H)实施例22按照合成路线1制备(2E,4E,6z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基-6-甲基苯基)壬-2,4,6-三烯酸(54)以制备化合物10的类似方法合成该化合物，所不同的是用3,4-二乙基-6-甲基乙酰苯代替3,5-二叔丁基乙酰苯TLC(20％EtOAc-80％己烷)Rf0.3；1H-NMR(CDCl3)δ1.22(t,J=7.5Hz,3H,CH3),1.24(t,J=7.5Hz,3H,CH3),2.08(s,3H,CH3),2.09(s,3H,CH3),2.17(s,3H,CH3),2.60(m,4H,2(CH2),5.73(s,1H,=CH),6.25(m,3H,3(=CH)),6.81(s,1H,Ar-H),7.01(s,1H,Ar-H)。
实施例23按照如下图示和描述的合成路线6，制备(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(69)合成路线6
5-叔丁基-1,3-苯二甲醇(56)于0C下冷却溶于THF(200毫升)的20.0g(89.9毫摩尔)5-叔丁基-1,3-苯二甲酸(15)的溶液，并于强烈搅拌下通过加液漏斗经20分钟缓慢加入溶于THF(190毫升)的甲硼烷-THF复合物的溶液。使混合物升温至室温，并继续搅拌90分钟。缓慢加入水-THF(1∶1,200毫升)的混合物，然后再加入200毫升水。用乙酸乙酯萃取混合物。用EtOAc(2×100毫升)萃取水层，并用水(2×100毫升)、盐水(2×100毫升)洗涤合并的有机层，并在毫克SO4上干燥之。蒸发除去溶剂得到纯的二醇(产率98％):1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.32(s,2H),7.19(s,1H)；4.69(s,4H)；1.75(br.s；2H)；1.33(s,9H)。
5-叔丁基-1,3-对苯二醛将5-叔丁基-1,3-苯二甲醇(56)(20.0g；103毫摩尔)加到强烈搅拌的氯铬酸吡啶鎓(66.0g；306毫摩尔)和硅藻土(130g)在二氯甲烷(DCM)(500毫摩尔)中制成的混合物内。室温下将混合物搅拌3小时直到反应完成(TLC)。通过硅胶的短滤垫(2″× 4″)过滤反应混合物，并用DCM(1L)洗脱。蒸发除去溶剂得到18.7g所需的二醛(产率94％)1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):10.11(s,2H)；8.18(s,3H)；1.41(s,9H)。
(R,S)-5-叔丁基-1,3-苯-[2,2’-二乙醇](57)将5-叔丁基-1,3-对苯二醛(18.7g,96.4毫摩尔)在THF(400毫升)中的溶液冷却到-78℃，缓慢加入溴化甲基镁(80.0毫升3M溶液)溶液，并使反应混合物升温至室温。搅拌60分钟后，用饱和NH4Cl溶液(100毫升)使所得溶液骤泠，再加入HCl(1N,50毫升)，并用EtOAc萃取。用水(2×100毫升)、盐水(2×100毫升)洗涤有机层，并在MgSO4上干燥之。蒸发除去溶液。将粗残留物溶解在热EtOAc(30毫升)中，并加入戊烷(200毫升)。在-4℃冰箱中将澄清的溶液冷却3小时。过滤所得到的白色固体物，并用冷戊烷淋洗。在真空中干燥该固体，得到15.3g(70％产率)所需的化合物1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.32(s,2H),7.2(s,1H)；4.92(m,2H)；1.82(d,2H,J=2.5Hz)；1.52(d,6H,J=6.5Hz)；1.35(s,9H)。
(R,S)-5-叔丁基-1,3-苯基-[2-乙醇，2’-乙烷-叔丁基二甲基甲硅烷基醚](58)用己烷(2×10毫升)洗涤氢化钠(2.75g,60％矿物油混合物)，将其悬浮于THF(200毫升)中，并在强烈搅拌下加入5-叔丁基-1,3-苯-2,2’-二乙醇(12.69g；57毫摩尔)。室温下将混合物搅拌45分钟得到白色浆液，然后一次加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯(8.61g,57毫摩尔)。将反应混合物搅拌2小时，并加入水(25毫升)。用EtOAc(350毫升)萃取混合物。用饱和NH4Cl溶液(100毫升)、水(2×100毫升)、盐水(2×100毫升)洗涤有机层，并在MgSO4上干燥之。蒸发掉溶剂，并在硅胶上经闪蒸色谱法纯化残留物，得到所需的油状单甲硅烷基化的产物(14.45g；75％产率)(回收到2.14g起始物)1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.32(s,1H),7.28(s,1H)；7.12(2s,1H)；4.92(m,2H)；1.85(s,1H)；1.5(d,3H,J=6.5Hz)；1.43(d,3 H,J=6.5Hz)；1.35(s,9H)；0.9(s,9H)；0.05(s,6H)。
(R,S)-3-(乙基-2-叔丁基二甲基甲硅烷基醚)-5-叔丁基乙酰苯(59)将氯铬酸吡啶鎓(15.0g；69毫摩尔)和硅藻土(30g)混入DCM(500毫升)中，同时于强烈搅拌下加入5-叔丁基-1,3-苯-(2-乙醇，2’-乙烷-叔丁基二甲基甲硅烷基醚)(14.45g；44毫摩尔)在DCM(100毫摩尔)制成的溶液。室温下反应3小时后，通过硅胶短滤热(2″×4″)过滤混合物，并用DCM(500L)洗脱。蒸发除去溶剂，得到所需的酮(14.4g,99％产率)。1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm)；7.89(s,1H),7.73(s,1H)；7.65(s,1H)；4.94(q,1H,J=6.3Hz)；2.63(s,3H)；1.45(d,3H,J=6.3Hz)；1.37(s,9H)；0.96(s,9H)；0.12(s,3H)；-0.05(s,3H)。
5-叔丁基-1-(2-乙醇)-3-(2-[2-甲基丙-1-醛)-苯(60)在火焰干燥的三颈园底烧瓶内装入THF(90毫升)，并冷却到-78℃。缓慢加入n-BuLi(12.0毫升2M溶液；24毫摩尔)并将混合物搅拌10分钟。加入溶于THF(15毫升)的N-亚苄基二乙基氨甲基膦酸酯(6.14g；24毫摩尔)，并于-78℃将所得混合物搅拌60分钟。向上述溶液内加入溶于THF(15毫升)的N-亚苄基二乙基氨甲基膦酸酯(N-benzylidene diethyl aminomethyl phosphonate)(6.14g；24毫摩尔)的溶液，将所得混合物在-78℃下搅拌60分钟。将5-叔丁基-3-(乙烷-2-叔丁基二甲基甲硅烷基乙醚)乙酰苯(7.0g,20.9毫摩尔)在THF(15毫升)中的溶液加入上述溶液中，使此混合物升温到室温，搅拌30分钟，然后回流2小时。使混合物冷却到室温并蒸发掉溶剂。加入二乙醚(400毫升)，并用氯化钠(200毫升)洗涤此溶液。用乙醚(200毫升)萃取水层，用盐水(200毫升)洗涤合并的有机层，并在MgSO4上干燥。蒸发除去溶剂，得到黄色残留物，于高真空(1mmHg)下将其干燥1小时。向该残留物中加入THF(90毫升)，并冷却到-78℃。缓慢加入n-BuLi(12.0毫升2M溶液，24毫摩尔)，并将带深颜色的溶液搅拌60分钟。加入甲基碘(6.52毫升)，使所得混合物升温至室温并搅拌4小时。用HCl(3N,100毫升)使反应混合物骤冷，并于室温下将两相溶液搅拌16小时。加入EtOAc(300毫升)，分离出有机层，用水(2×100毫升)、盐水(2×100毫升)洗涤，然后在MgSO4上干燥之。蒸发除去溶剂后，得到残留物，其经硅胶色谱法纯化，即得到3.3克所得需的醛(产率65％)1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):9.5(s,1H),7.33(s,1H)；7.17(s,1H)；7.11(s,1H)；4.91(m,1H)；1.80(d,1H,J=3.4Hz)；1.5(d,3 H,J-6.3Hz)；1.47(s,3H)；1.32(s,9H)。
5-叔丁基-3-(2-甲基丙-1-醇)乙酰苯(61)将5-叔丁基-1-(2-乙醇)-3-(2-[2-甲基丙-1-醛])苯(1.77克，7.53毫摩尔)在MeOH(50毫升)中制成的溶液冷却到0℃，并分批加入NaBH4(300毫克，7.93毫摩尔)。使反应混合物升温至室温，并搅拌30分钟。蒸发除去溶剂，并使残留物重新溶解在EtOAc(50毫升)中，然后用HCl(10％,3×10毫升)、水(3×20毫升)和盐水(3×20毫升)洗涤。MgSO4上干燥有机层，并蒸发至干，得到所需的二醇(1.76g；99％产率)、将该二醇(1.65g,6.78毫摩尔)溶解在DCM(20毫升)中，并一次加入MnO2(18.7克，0.17毫摩尔)。将反应混合物强烈搅拌4小时，然后在硅藻土短滤垫上过滤。蒸发除去溶剂得到1.63克所需的酮(产率97％):1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.85(s,1H),7.8(s,1H)；7.63(s,1H)；3.64(d；2H,J=4.5Hz)；2.6(s,3H)；1.38(s,6H)；1.35(s,9H)。
5-叔丁基-3-(2-[2-甲基丙-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚])乙酰苯(5-tert-butyl-3-(2-[2-methylpropan-l-tert-butyl diphenyl silylether]acetophenone)(62)向5-叔丁基-3-(2-甲基丙-1-醇)乙酰苯(1.63克；6.96毫摩尔)在DCM(30毫升)中形成的溶液内，加入咪唑(500毫克，7.35毫摩尔)、一滴DMF和叔丁基二苯甲硅烷基氯(2.01g；7.33毫摩尔)。将混合物室温搅拌过夜，并用过量饱和NH4Cl使之骤冷。加入DCM(50，毫升)，并用水(3×20毫升)和盐水(3×20毫升)洗涤有机层。在MgSO4上干燥有机层，并蒸发至干，得到残留物，经硅胶色谱法纯化该残留物，得到所需的醚(2.77克，83％产率):1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.85(s,1H),7.76(s,1H)；7.63(s,1H)；7.48-7.25(mm,10H)；3.62(s,2H)；2.56(s,3H)；1.38(s,6H)；1.33(s,9H)；0.94(s,9H)。
5-叔丁基-3-(2-[2-甲基丙-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚])-1-(2E)-3-(2-丁烯腈)-苯(63)于0℃下向溶于THF(30毫升)的氰甲基膦酸二乙酯(1.7g,9.55毫摩尔)溶液内，加入n-BuLi(4.64毫升，溶于己烷的2.0M溶液)。搅拌10分钟后，加入5-叔丁基-3-(2-[2,2’-二甲基丙-叔丁基二苯基甲硅烷基醚])乙酰苯在THF(10毫升)中形成的溶液。将反应混合物搅拌30分钟，并用饱和NH4Cl溶液使之骤冷。加入EtOAc(50毫升)，并用水(3×20毫升)和盐水(3×20毫升)洗涤有机层。在MgSO4上干燥有机层，并蒸发至干得到残留物，其经硅胶色谱法纯化后，得到所需腈，其为反式顺式混合物(经1HNMR分析约为4∶1)。经硅胶色谱法纯化后得到所需的反式异构体(1.70g,63％产率)1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.85(s,1H),7.48-7.22(mm,13H,ArH)；5.5(s,1H)；3.59(s,2H),2.43(s,3H)；1.35(s,6H)；1.27(s,9H)；0.94(s,9H)。
5-叔丁基-3-(2-[2-甲基丙-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚)-1-(2E)-(3-[2-丁烯醛)苯(64)将5-叔丁基-3-(2-[2-甲基丙-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚])-1-(3-[3-甲基-2-丙烯腈)苯(1.7g,3.42毫摩尔)在无水DCM(20毫升)中形成的溶液冷却至-78℃，并逐滴加入Dibal(3.5毫升在甲苯中形成的1M溶液)。于-78℃下将反应混合物搅拌60分钟，用过量Rochelle盐使之骤冷，然后将其升温至室温。加入EtOAc(50毫升)，并用水(3×20毫升)和盐水(3×20毫升)洗涤此混合物。在MgSO4上干燥有机层，再蒸发至干后得到残留物，经硅胶色谱法纯化后，得到1.25g所需的醛(74％产率):1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):10.17(d,1H；J=8Hz),7.48-7.22(mm,13H,ArH)；6.36(d,1H,J=8Hz)；3.60(s,2H)；2.54(s,3H)；1.37(s,6H)；1.32(s,9H)；0.94(s,9H)。
(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙-1-醇)]-1′-苯)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(66)将3-乙氧基羰基-2-甲基丙-2-烯基膦酸二乙酯(1.20g,4.52毫摩尔)在无水THF(200毫升)中形成的溶液泠却至0℃，并加入无水DMPU(3.5毫升)和n-BuLi在己烷中制成的溶液(2.15毫升2.0M溶液，4.50毫摩尔)。在此温度下将混合物搅拌20分钟，然后冷却到-78℃。缓慢加入5-叔丁基-3-(2-[2-甲基丙烷-1-叔丁基二苯基甲硅烷基醚])-1-(3-[3-甲基-2-丙烯醛)苯(1.25g,2.52毫摩尔)在THF(10.0毫升)中形成的溶液，并于-78℃下将反应混合物继续搅拌60分钟。搅拌下使反应混合物升温至23℃，保持1小时。加入氯化铵的饱和溶液(5毫升)，并使用EtOAc(3×10毫升)萃取混合物。用水(2×25毫升)和盐水(50毫升)洗涤有机层，在MgSO4上干燥并浓缩之。在短硅胶色谱柱上纯化残留物，得到1.35g(86％产率)所需的酯(65)。将上述甲硅烷基醚(1.05g,1.68毫摩尔)溶解于THF(20毫升)中，并加入氟化四丁基铵(17毫升溶于THF的1M溶液)。室温下将反应混合物搅拌12小时，加入EtOAc(50毫升)，然后用水(2×20毫升)和盐水(20毫升)洗涤。分离出有机层，在MgSO4上干燥，并蒸发至干。经硅胶色谱法纯化残留物，得到479毫克(80％产率)所需的醇1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.9(d,1H；J=16Hz,2顺式异构体；～15％)；7.34(s,2H)；7.29(s,1H)；7.03(dd,1H,J=16Hz)；6.53(d,1H,J=12Hz)；6.38(d,1H,J=16Hz)；5.72(s,1H)；5.68(s,1H,2顺式异构体～15％)；4.15(q,2H,J=6.7Hz)；3.62(s,2H)；2.38(s,3H)；2.28(s,3H)；1.6(br.s:1H)；1.37(s,6H)；1.33(s,9H)；1.26(t,3H,J=6.7Hz)。
(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙-1-醛)]-1′-苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(67)向强烈搅拌的氯铬酸吡啶鎓(350毫克，1.39毫摩尔)和硅藻水(750毫克)在DCM(20毫升)中的混合物内，加入(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙-1-醇)]-1′-苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(330毫克，0.889毫摩尔)在DCM(10毫升)中形成的溶液。室温下将混合物搅拌3小时，并通过硅胶短滤垫过滤。蒸发除去溶剂并经硅胶色谱法纯化，得到290毫克(87％产率)所需的醛1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):9.5(s,1H)；7.9(d,1H；J=16Hz,2顺式异构体；～15％)；7.34(s,2H)；7.29(s,1H)；7.03(dd,1H,J=16Hz)；6.53(d,1H,J=12Hz)；6.38(d,1H,J=16Hz)；5.79(s,1H)；5.68(s,1H,2顺式异构体～15％)；4.15(q,2H,J=6.7Hz)；3.62(s 2H)；2.38(s,3H)；2.28(s,3H)；1.37(s,6H)；1.33(s,9H)；1.26(t,3H,J=6.7Hz)。
(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙-1-醛)]-1′-苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯对甲苯磺酰腙(68)向(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙醛)]-1′-苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯(250毫克，0.67毫摩尔)在乙醇(5毫升)中的溶液内加入对甲苯磺酰肼(137毫克，0.73毫摩尔)和大约10毫升浓盐酸。在40-45℃下将混合物加热15分钟。蒸发除去溶剂，并经硅胶色谱法纯化残留物，以得到330毫克所需产物(产率89％):1H-NMR(CDCl3；400MHz)δ(ppm):7.82(d,2H；J=7.4Hz),7.5(2s,2H)；7.3(d,2H,J=7.4Hz)；7.18(s,1H),7.05(s,1H)；7.0(dd,1H,J=16Hz)；6.45(d,1H,J=12Hz)；6.38(d,1H,J=12Hz)；5.82(s,1H)；4.2(q,2H,J=6.7Hz)；3.62(s 2H)；2.42(s,3H)；2.38(s,3H)；2.28(s,3H)；1.37(s,6H)；1.33(s,9H)；1.26(t,3H,J=6.7Hz)。
(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸(69)**向(2E,4E,6E)-7-(5-叔丁基-3-[2-(2-甲基丙-1-醛)]-1′-苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯对甲苯磺酰脘(68)(80毫克)在乙酸(2.0毫升)中形成的溶液内，分批加入氢硼化钠*(80毫克)。于50℃下将混合物加热1小时，冷却至室温，并加到冰中；然后使之升温至室温，并用EtOAc(3×10毫升)萃取。用水(3×10毫升)、NaHCO3(2×10毫升)、水(3×10毫升)、盐水(3×10毫升)洗涤有机层，在MgSO4上干燥并蒸发至干。经硅胶色谱法纯化残留物以得到所需的酯。将该酯(20毫克)溶解于EtOH中，并加入KOH(1M,1毫升)，然后将混合物加热回流3小时。将反应混合物冷却至室温，用HCl(10％)中和，并用EtOAc萃取。用水(3×10毫升)、盐水(3×10毫升)洗涤有机层，在MgSO4上干燥，并蒸发，得到所需的酸。
本领域技术人员将会理解到，可采用上述方法，以标记的和放射性标记的NaBnH4(n=1,2,3)生成如合成路线6中所示的标记的(即氚标记的)化合物。
此上，本领域技术人员还可理解到，可于NaCNBnH3(n=1,2,3)和ZnCl2存在下，经在甲醇中加热8小时，然后进行皂化(KOH,EtOH)，而从腙(68)制得同样标记的(氚和氚)化合物(69)。在另一个可选用的实施方案中，用放射性标记的NaBnH4(n=1,2,3)还原醛(67)，然后将所得到的醇氧化成相应的氚化醛。使这种醛转化成其甲苯磺酰腙，然后在甲醇中用氰基氢硼化钠和ZnCl2还原，并皂化产生相应的酸(参见合成路线6的化合物68至69)。类视黄酸受体亚族活性的估测利用Evans等人(Science 240:889-95(May 13,1988)，其公开内容列于此作为本文参考)所述的“顺-反”或“其转染”检测法，试验本发明的类视黄酸化合物，并发现具有很强的作为RAR激动剂、选择性RXR激动剂，或RAR和RXR受体之全激动剂活化剂的特异活性。美国专利4,981,784号和5071,773(其公开内容列于此作为参考)中详细描述了这一检测法。
共转染检测法提供了鉴定那些模拟或抑制天然激素之作的功能激动剂或拮抗剂，并定量检测它们对反应性IR蛋白的活性。在这方面，共转染检测法可在实验室中模拟体内系统。重要的是，共转染检测中测得的活性与已知的体内活性密切相关，因而共转染检测法具有定性和定量预测被检化合物体内药理学活性的功能(参见T.Berger et al,41.J.Steroid Biochem.Molec.Biol.773(1992)，其列入本文作为参考)。
在共转染检测法中，通过转染(一种诱导细胞摄入外来基因的方法)将处于组成型启动子(如SV40启动子)控制下的克隆的IR(如人体RARα、RARβ、RXRr)的cDNA导入实质上没有内源性IR的本底细胞中。该被导入的基因指导接受体细胞制造感兴趣的IR蛋白质。还将第二个基因以与IR基因接合的方式导入(共转染)到同样的细胞中。由含有激素反应元件(HRE)的适当的激素反应性启动子控制含有编码报导蛋白质如虫萤光素(LUC)之cDNA的第二个基因。该报导质粒具有报告靶IR之转录调节活性的功能。因此，该报导蛋白可作为由处于靶受体和其天然激素控制下的基因正常表达之产物(mRNA，然后是蛋白质)的代用品。
共转染检测法可检测靶IR的小分子激动剂或拮抗剂。使被转染的细胞暴露于激动剂配体化合物可提高被转染细胞中的报导蛋白活性。可以方便地检测该活性，例如可根据萤光素酶产生量的增加来完成这一检测，萤光素酶产生量增加反映了化合物依赖性的、IR介导的报导基因转录能力的增加。为了检测拮抗剂，于恒定浓度靶IR(例如RARα的全反式视黄酸)激动剂(已知其可诱导限定的报导信号)的存在下完成共转染检测。增加推测的拮抗剂的浓度将降低报导信号(例如萤光素酶产生量)。因此共转染检测法可用于检测特异性IR的激动剂和拮抗剂。此外，其不仅可确定某化合物是否与特定IR相互作用，而且可确定这种相互作用是否模拟(激动)或阻断(拮抗)靶基因表达的天然调节分子的作用，以及确定这种相互作用的特异性及强度。
按照下文实施例23举例描述的共转染检测法估测本发明类视黄酸化合物的活性。
实施例23共转染检测法于添加了10％活性炭树脂解吸之胎牛血清的Dulbecco’s改良的Eagle培养基(DMEH)存在下，培养CV-1细胞(非洲绿猴肾成纤维细胞)，然后在转染前一天转移到96孔微量滴定板中。
为了检测本发明化合物的RAR和/或RXR激动剂活性，按照Bevger等人[41.J.Steroid Biochem,Mol.Biol.,733(1992)]的方法，用下列受体表达质粒pRShRARα[Giguere et al.,330 Nature,624(1987)]、pRShRARβ和pRShRARr[Ishikawa et al.,4 Mol.Endocrin.837(1990)]、pRShRXRα[Mangelsdorf et al.,345 Nature 224(1990)]及pRSmRXRβ和pRSmRXRr[Mangelsdorf et al.,6 Gene & Devel.,239(1992)](这些公开内容均列入本文作为参考)，经磷酸钙共沉淀瞬对转染CV-1细胞。用于转染的各个这些受体表达质粒的浓度为5ng/孔，同时基本报导质粒浓度为100ng/孔，内部控制质粒pRS-β-Gal浓度为50ng/孔，且填充DNA即pGEM浓度为45ng/孔。
在RAR转染中使用基本报导质粒D-MTV-LUC[Hollenberg andEvans,55 Cell,899(1988)，其内容列入本文作为参考]，该质粒含有如Umesono等人[336 Nature,262(1988)，其公开内容列入本文作为参考]描述的TRE-回文序列反应元件的两个拷贝；而在RXR转染中则使用报导质粒CRBPIIFKLUC，该质粒含有如Mangelsdorf等人[66 Cell,555(1991)，其公开内容列入本文作为参考]描述的RXRE(类视黄酸X受体反应元件)。这些报导质粒均含有编码虫萤光素酶(LUC)的cDNA，而该cDNA则处于包含适当RAR或RXR反应元件的组成型启动子控制之下。如上文指出的，其中包含编码组成性表达大肠杆菌β半乳糖苷酶(β-Gal)的pRS-β-Gal，以其作为内部控制质粒用以估计转染效率和化合物毒性。
转染后6小时，除去培养基，并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗细胞。向细胞内加入含有浓度范围为10-12至10-5M之本发明化合物的培养基。同样，以相似的浓度加入参考化合物全反式视黄酸(ATRA))(SigmaChemical公司生产；已知的RAR选择性化合物)和9-顺式视黄酸(9-cis)(按Heymanttal.,Cell,397-406(1992)中所述方法合成，为RXR有已知活性的化合物)，以便为分析本发明化合物的活性提供参考点。用反相高效液相色谱法证实类视黄酸纯度大于99％。将类视黄酸溶解于二甲亚砜中用于转录激活试验。每种样品均重复测四份。
40小时后，用PBS洗细胞，用基于Triton X-100的缓冲液裂解细胞，并分别使用发光计或分光光度计检测LUC和β-Gal活性。对于每种重复样品，均按下式计算标准化反应(NR)LUC反应/β-Gal比率其中βGal比率=β-Gal·1×10-5/β-Gal保温时间计算NR的平均值和平均值的标准误差(SEM)。用所得数据作图，在剂量反应曲线范围内将本发明的反应与参考化合物相比较。就本发明的激动剂化合物来说，定量检测产生50％最大反应(EC50)的有效浓度。
下列表1中显示了经选择的本发明类视黄酸化合物的效力(nM)。
表1本发明选择的类视黄酸化合物对RARα、β、r和RXRα、β、r的效力，其中将本发明的化合物与已知的RAR活性类视黄酸化合物全反式视黄酸(ATRA)和RXR活性类视黄酸化合物9-顺式视黄酸(9-cis)相比较，并与比较实施例化合物A、B、C和D比较
na=无活性(效力＞10,000和/或效率＜20％)如从表1中看到的，化合物9、39、41和47是能力极强的RAR活性化合物，化合物9对RARγ表现出亚毫微摩尔活性，而化合物47则对RARβ和RARr表现有选择性。事实上，这些化合物对RAR的反应能力比已知的RAR活性化合物ATRA强10至100倍以上。同样，化合物28是能力强的和选择性好的RXR活性化合物。此外，全激动剂化合物10和43表现有比已知的RXR活性全激动剂化合物9-顺式视黄酸更强的效力。虽然表1中没有展示效率，但那些表现小于20％效率的化合物被认为是无类视黄酸激活剂(效力限定为＞10,000)活性的，尽管这些化合物展示有临界(marginal)效力。在这方面，除作用于RARβ的比较化合物A外，其余比较实例化合物均表现出小于20％的效率。
其他已知的结构上相似的化合物没有展示出本发明的化合物对RAR和/或RXR受体的类视黄酸活性。如表1中进一步显示的，结构上与本发明的化合物相似的比较实例化合物，例如M.J.Aurell等人(49 Tetrahedron,6089(1993)，流程2，化合物d和e)所述的(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二甲氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(A)和(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(4-甲氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(B)，美国专利No.4,534,979(实施例17)中公开的(2E,4E,6E)-2-甲基-7-(2,3,6-三甲基-4-甲氧基苯基)庚-2,4,6-三烯酸(C)，以及美国专利No.5,320,833(化合物80)中公开的(2E,4E,6E)-3-甲氧基-7-(4-叔丁基苯基)辛-2,4,6-三烯酸(D)对任何RAR或RXR均没有或实际上没有活性。
实施例24除了实施例15的共转染数据外，还按照M.F.Boehm等人[“新类视黄酸X受体选择性类视黄酸的合成以及结构与活性的关系”，37 J.Med.Chem.,2930(1990)；“高比活性[3H]-9-cis视黄酸的合成及其以特异的结合性能用于鉴定类视黄酸”37 J.Med.Chem.,408(1994)]和E.A.Allegretto等人[“Characteriztion and comparison of Hormone-Binding andTransactivation Properties of Retinoic Acid and Retinoid X ReceptorsExpressedin Mamnialiam Cells and Yeast”,268 J.Biol.Chem.,22625(1993)](这些文献均列入本文作为参考)所述的方法研究了本发明选择的化合物与RAR和RXR受休的结合。
非特异性结合定义为在500nM适当的未标记化合物存在下所保留的结合。保温时间结束时，将结合的化合物与游离配体分离开。用液体闪烁计数法检测等分(700毫升)的上层清液或羟基磷灰石沉淀物(hydroaylapatitepellet)以确定结合的氚化类视黄酸的量。
校正非特异性结合后，确定IC50值。IC50值定义为使特异性结合降低50％所需的竞争配体的浓度。对数据制作对对数座标图以确定IC50值。将IC50值、标记的配体浓度和标记之配体的Kd值代入Cheng-Prussof方程式算出Ki值。
下列表2中显示本发明选择的类视黄酸化合物和参考化合物ATRA与9-cisRA的结合活性(以nM为单位的Kd值)结果。
表2本发明选择的化合物对RARα、β、r和RXRα、β、r蛋白质的结合，并与已知的RAR活性类视黄酸化合物全反式视黄酸(ATRA)和RXR活性类视黄酸化合物9-顺式视黄酸(9-cis)的结果相比较
从表2中可看出，本发明的化合物9和10具有与已知的RAR活性化合物ATRA及已知的RXR活性化合物9-cis相等或更强结合活性。相比之下，实施例14的所有比较实例化合物则显示对所有类视黄酸受体完全没有结合，一个例外是比较实例化合物A，该化合物在312nM浓度时显示对RARα有微弱结合。
实施例25
本发明化合物的类视黄酸活性的另一种已确定的检测法是最先由Verma和Boutwell(33 Cancer Research，2196(1997)，其内容列入本文作为参考)描述的鸟氨酸脱羧酶检测法。在Verma和Boutwell最初使用视黄酸完成的工作中，证实了乌氨酸脱羧酶(ODC)活性增加与多胺生物合成有关。另外，以前也已证实多胺生物合成量增加与细胞增殖相关。因此，如果能够抑制ODC活性，即可能调节细胞的过度增殖。虽然还不知道增加ODC活性的所有原因，但已知12-邻-十四酰佛波(phorbor)-13-乙酸酯(TPA)可诱导ODC活性。更重要的是，视黄酸可抑制TPA对ODC的这种诱导作用。
使用基本上与35 Cancer Reserch,1662(1975)(其公开内容列于此作为参考)中提出的方法相同的ODC检测法，证明本发明化合物对TPA诱导的ODC增加的抑制作用。下列表3中显示了对本发明选择的实例化合物，和参考化合物ATRA及已知的RAR活性化合物(E)-4-[2-(5,6,7,8-四氢-5,5,8,8-四甲基-2-萘基)-1-丙烯基]苯甲酸(TTNPB)所做此检测的结果。所有数值均以抑制TPA诱导之ODC增加达80％抑制率所需的各化合物的浓度(即以nM为单位的IC-80值)。
表3化合物7、8、9和10，及参考化合ATRA和TTNBP抑制所观察到的TPA对ODC的诱导作用达到80％所需的抑制浓度(ODCIC80,nM)
其中包括分别为化合物9和10之酯的化合物7和8，以显示这些酯类似物表现有类视黄酸活性。虽然并不拘泥于理论，但据信这些酯可以在体内起到前体药物的作用，这可能是由于这些酯在体内被裂解成本发明化合物的活性酸形式。
实施例26研究选择的本发明化合物对已认定的肿瘤细胞系RPMI8226、ME180和A毫升-193[均得自美国典型培养物保藏中心(ATCC,Rockvill,MD]的体外影响。
RPMI8226是得自患多发性骨髓瘤病人之外周血的人造血细胞系，并且是已认定的研究多发性骨髓瘤和相关恶性疾病的细胞模型(Y.Matsuoka,G.E.Moore,Y.Yagi and D.Pressman,“Production of free lightchains of immunoglobulin by a hematopoietic cell line derived from a patientwith multiple myeloma”,125 Proc.Soc.Exp.Biol.Med.,1246(1967)其内容列入本文作为参考)。该细胞类似于其他人淋巴细胞系的淋巴母细胞样细胞并分泌免疫球蛋白的λ-型轻链。RPMI8226细胞培养于添加了10％胎牛血清、谷氨酰胺和抗生素的RPMI培养基(Gibco)中。作为生长于37℃，合5％ CO2的湿气环境中的悬浮培养物维持细胞生长。每周两次将细胞稀释到1×105个/毫升的浓度。
ME180是得自子宫颈的人表皮样癌细胞系，并且是已认定的鳞状细胞癌和相关恶性疾病的细胞模型(J.A.Sykes,J.Whitescarver,P.Jernstrom,J.F.Nolan and P.Byatt,“Some properties of a new epithelial cell line ofhuman origin”,45MH-Adenoviridae J.Natl.Cancer Inst.,107(1970)；其内容列入本文作为参考)。此肿瘤是有不规则细胞簇的高侵犯性鳞状细胞癌并且没有明显的角化。将ME180细胞培养并维持于添加了10％胎牛血清、谷氨酰胺和抗生素的McCoy氏5a培养基(Gibco)中。细胞作为生长于37℃，含5％ CO2之湿气环境中的单层培养物得到维持。
A毫升-193细胞系是由患白血病之病人的母细胞建立的并被分类为M5急性单核细胞白血病细胞，其为已认定的白血病和相关恶性疾病的细胞模型(G.Rovera et al.,139 J.Immunol.,3348(1987)，其内容并入本文作为参考〕。经免疫荧光检测，这些细胞中75％以上是骨髓单核细胞抗原CS15呈阳性反应的。细胞生长于含5μg/毫升运铁蛋白、5μg/毫升胰岛素和2ng/毫升rh GM-CSF的Iscove氏改良的Dulbecco氏培养基中。该细胞作为生长于37℃，含5％ CO2之湿气环境中的悬浮培养物得以维持。每周两次将细胞稀释到1×105个/毫升的浓度。3H-胸苷的掺入检测掺入上述细胞系中的放射性标记胸苷水平，以直接检测本发明化合物的抗增殖性质。用于检测放射性标记胸苷掺入的方法是采用如S.Shrivastar等人(“An in vitro assay procedure 40 test chemotherapeuticdrugs on cells from human solid tumors”40 Cancer Res.,4438(1980)，其内容列入本文作为参考)描述的方法。将RPMI8226或A毫升-193细胞以每孔1000个细胞的密度铺敷在96孔园底微滴定板(costar)中。以所指出的终浓度向适当的孔内加入类视黄酸试验化合物，达到150μL/孔的终体积。于37℃，在含5％ CO2的湿气环境中将滴定板保温96小时。然后，向各孔内加入1μCi溶于25μL培养基中的[5′-3H]-胸苷(Amersham,U.K,43Ci/毫摩尔比活性)，并将细胞继续保温6小时。继续按下述方法处理培养物。
以每孔2000个细胞的密度将通过胰酶消化收获的ME180细胞铺敷在96孔平底微量滴定板(Costar)中。按上述处理RPMI8226细胞的方法处理此培养物，但其中包括如下改动即保温之后，小心除去上清液，并用加于磷酸盐缓冲盐水中的0.5mM胸苷溶液洗细胞。用50μL 2.5％胰蛋白酶筒单地处理ME180细胞，以从平板中移出细胞。然后按下述步骤处理两细胞系使用SKATRON多孔细胞收获器(Skatron Instruments,Sterling VA),用10％三氯乙酸使细胞DNA沉淀于玻璃纤维滤垫上。以液体闪烁计数法检测作为细胞生长之直接指标的掺入到DNA中的放射活性。测定三个重复孔已掺入胸苷的每分钟平均衰变率。下列表4、5和6分别显示了利用RPMI8226、ME180和A毫升-193细胞系检测的本发明化合物9和10，以及参考化合物ATRA和TTNBP的IC50值(即抑制50％最大胸苷掺入量所需的nM浓度值)。存活性还检测了本发明选择的化合物对上述细胞系的细胞毒性。所用方法基本上与T.Mosmann(“Rapid colorimetric assay for cellular growth andsurvival:application to proliferation and cytotoxicity assays”,65 J.Immunol.Meth.,55(1983)，其内容列入本文作为参考)所述的检测法相同，只是稍加改动。以每孔1000个细胞的密度将RPMI8226或A毫升-193细胞铺敷在96孔圆底微量滴定板(Costar)中。以所指出的终浓度向适当的孔内加入类视黄酸试验化合物，达到每孔150μL的终体积。于37℃下在含5％CO2的湿气环境中，将滴定板保温96小时。然后，向各孔内加入15μL滤膜除菌的、溶于磷酸盐缓冲盐水的四唑染料(Promega,Madison,WI)，并将细胞继续保温4小时。按下述方法对培养物作进一步处理。
以每孔2000个细胞的密度将通过胰酶消化收获的ME180细胞铺敷在96孔平底微量滴定板(Costar)中。按照上述处理RPMI8226的方法处理该培养物。
保温4小时后，向各孔内加100μL加溶/中止溶液(Promega,Madison,WI)。在湿气环境中将平板于37℃放置过夜。使用Biomek ELISA平板读数器(Beckman Intruments)记录各孔在570-600nm波长处的吸光率。下列表4、5和6中分别显示了利用RPMI8226、ME180和A毫升-193细胞系检测的本发明化合物9和10，以及参考化合物ATRA及TTNBP的IC50值(即抑制50％线粒体功能，以及最终的细胞存活性所需的nM浓度值)。
表4化合物9和10，以及参考化合物ATRA和TTNBP在RPMI8226细胞系中抑制50％最大放射性标记胸苷掺入量所需的抑制浓度(TdR IC50)(nM)，以及抑制50％线粒体功能所需的抑制浓度(MTS IC50)(nM)
表5化合物9和10，以及参考化合物ATRA和TTNBP在ME180细胞系中抑制50％最大放射性标记胸苷掺入量所需的抑制浓度(TdR IC50)(nM)，以及抑制50％线粒体功能所需的抑制浓度(MTS IC50)(nM)
表6化合物9和10，以及参考化合物ATRA和TTNBP在A毫升-193细胞系中抑制50％最大放射性标记胸苷掺入量所需的抑制浓度(TdR IC50)(nM)，以及抑制50％线粒体功能所需的抑制浓度(MTS IC50)(nM)
实施例27下列实施例举例说明药物组合物配方。使用下列成分制备硬明胶胶囊量(毫克/胶囊)化合物9 140干燥的淀粉100硬脂酸镁 10总量 250毫克混合上述成分，并以250毫克的量装入硬明胶胶囊内。使用下述成分制备片剂
量(毫克/片)化合物9 140微晶纤维素200雾化的二氧化硅10硬脂酸10总量 360毫克混合上述成分，并以每片360毫克的量压制成片剂。
如下制造每片含60毫克活性成分的片剂量(毫克/片)化合物9 60淀粉 45微晶纤维素35聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(在水中的10％溶液)4羧基甲基淀粉钠(SCMS) 4.5硬脂酸镁 0.5滑石粉1.0总量 150毫克使活性成分、淀粉和纤维素通过45号目美国标准网筛，并彻底混合之。将PVP的溶液与所得粉末混合，然后通过14号目美国网筛。于50℃干燥如此产生的颗粒，并通过18号目美国网筛。然后将预先已通过60号目美国网筛的SCMS、硬脂酸镁和滑石粉加到上述颗粒中，混合后在压片机上压成每片重150毫克的片剂。
用下列成分制造每剂含225毫克活性成分的栓剂化合物9 225毫克饱和脂肪酸甘油酯2000毫克总量2225毫克使活性成分通过60号目美国网筛，并悬浮于预先已用最小加热温度熔化的饱和脂肪酸甘油酯中。然后将混合物倒入常规2克容积的栓模中，并使之冷却。
如下制备静脉内给药制剂化合物9 100毫克等渗盐水1000毫升甘油100毫升将化合物溶解在甘油中，然后用等渗盐水慢慢稀释该溶液。上述成分的溶液可以以每分钟1毫升的速率静脉注射给病人。
本文虽然已按照专利法律提供了有关优选实施方案和制备条件的描述，但本发明的范围并不只限于这些。对本发明所做的各种改动和替换对本领域技术人员来说都是显而易见的，且并未背离本发明范围和精神。
因此为了了解本发明的范围，须参考下列权利要求。
权利要求
1．一种化合物，其具有下列结构式
或
或
或
或
其中R1、R2和R4各自分别是氢、芳基、杂芳基、CF3或可被14CH3、13CH3、CD3、C3H3、和/或13CD3选择性取代的C2-C6烷基、氟烷基或全氟烷基；R3和R5各自分别是氢、CF3、C1-C3烷基、C1-C3氟烷基或全氟烷基、或OR6，其中R6是氢、CF3、C1-C2烷基或C1-C2氟烷基或全氟烷基，但条件是当R3是CF3或烷基、氟烷基或全氟烷基时，R1和R5不能是CF3或烷基、氟烷基或全氟烷基；R7是可被14CH3、13CH3、CD3、C3H3，和/或13CD3选择性取代的C1-C4烷氢或者是CH2OR8，其中R8代表氢、C1-C6烷基、可被C1-C4烷基、F、Cl、Br、I、OH、CF3、OR6、NR6选择性取代的C3-C7饱和或不饱和的环烷基，其中R6具有上文给出的定义；R9是C1-C4烷基；R10至R15各自分别是氢、C1-C6烷基或CF3；X是COOR16、CONR17、或CONR17R18，其中R16代表氢或C1-C6烷基，且其中R17和R18各自分别代表C1-C6烷基、或可被OH、F、Br、Cl或I选择性取代的芳基或杂芳基，但条件是R17和R18不能都是芳基或杂芳基；Y是C、O、S或N，条件是当Y是O时，则R14和R15不存在，且当Y是N时，则R14和R15不能是CF3另外当Y是S时，则R14和R15可独自或一起代表O，或者可能都不存在；W是N或CR16，这里R16具有如上文给出的同样定义；R19是可被选自由氢、F、Cl、Br、I或C1-C6烷基组成的基团组的一个或多个取代基选择性取代的芳基或杂芳基，其中X具有上文给出的同样定义；n是0、1或2；虚线表示选择性的双键；波状线表示呈顺式或反式构型的碳-碳键，但条件是当R1、R2、R4和R5都是氢时，R3不能是芳基。
2．根据权利要求1所述的化合物，其中R1、R2和R4各自代表C3-C6支链烷基、氟烷基或全氟烷基。
3．根据权利要求1所述的化合物，其中R2和R4各自代表C3-C6支链烷基、氟烷基或全氟烷基，且R1、R3和R5都是氢。
4．根据权利要求1所述的化合物，其中R2和R4各自代表异丙基、叔丁基或CF3，且R1、R3和R5都是氢。
5．根据权利要求1所述的化合物，其选自包括(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸乙酯、(2E,4E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4-二烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二叔丁基苯基)-3-甲基癸-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基〕3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸乙酯、(2E,4E,6E)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-6-(6,8-二叔丁基苯并二氢吡喃-4-亚基)-3-甲基己-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二-三氟甲基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、2E,4E,6E)-7-(3,5-二-异丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-7-(3,5-二-异丙基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(4-叔丁基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基)-3-甲基辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-甲氧基苯基〕辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6Z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基-4-乙氧基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,4-二叔丁基苯基)辛-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-环己基(3,5-二叔丁基苯基)庚-2,4,6-三烯酸、(2E,4E,6E)-3-甲基-7-(3,5-二叔丁基苯基)壬-2,4,6-三烯酸、以及(2E,4E,6Z)-3-甲基-7-(3,4-二乙基-6-甲基苯基)壬-2,4,6-三烯酸在内的化合物组。
6．根据权利要求1所述的化合物，其中该化合物构成类视黄酸化合物。
7．根据权利要求6所述的化合物，其中该化合物在浓度小于100nM时表现出对一种或多种类视黄酸受体有50％最大激活效力。
8．根据权利要求6所述的化合物，其中该化合物在浓度小于50nM时表现出对一种或多种类视黄酸受体有50％最大激活效力。
9．根据权利要求6所述的化合物，其中该化合物在浓度小于20nM时表现出对一种或多种类视黄酸受体有50％最大激活效力。
10．根据权利要求6所述的化合物，其中该化合物在浓度小于10nM时表现出对一种或多种类视黄酸受体有50％最大激活效力。
11．根据权利要求6所述的化合物，其中该化合物表现有作为选择性RAR激动剂的活性。
12．根据权利要求11所述的化合物，其中该化合物作为RAR激活剂比作为RXR激活剂的效力至少高2倍以上。
13．根据权利要求11所述的化合物，其中该化合物作为RAR激活剂比作为RXR激活剂的效力至少高5倍以上。
14．根据权利要求11所述的化合物，其中该化合物作为RAR激活剂比作为RXR激活剂的效力至少高10倍以上。
15．根据权利要求11所述的化合物，其中该化合物作为RAR激活剂比作为RXR激活剂的效力至少高100倍以上。
16．根据权利要求6所述的化合物，其中该化合物表现有作为选择性RXR激动剂的活性。
17．根据权利要求16所述的化合物，其中该化合物作为RXR激活剂比作为RAR激活剂的效力至少高2倍以上。
18．根据权利要求16所述的化合物，其中该化合物作为RAR激活剂比作为RXR激活剂的效力至少高5倍以上。
19．根据权利要求16所述的化合物，其中该化合物作为RAR激活剂比作为RXR激活剂的效力至少高10倍以上。
20．根据权利要求16所述的化合物，其中该化合物作为RAR激活剂比作为RXR激活剂的效力至少高100倍以上。
21．根据权利要求6所述的化合物，其中该化合物表现有作为RAR和RXR之激活剂的全激动剂活性。
22．根据权利要求1所述的化合物，其中该化合物以从每公斤体重大约1微克到每公斤体重大约500毫克的剂量单位投用于病人。
23．根据权利要求1所述的化合物，其中该化合物以从每公斤体重大约10微克到每公斤体重大约250毫克的剂量单位投用于病人。
24．根据权利要求1所述的化合物，其中该化合物以从每公斤体重大约20微克到每公斤体重大约100毫克的剂量单位投用于病人。
25．根据权利要求1所述的化合物，其中该化合物在治疗皮肤相关疾病和状态、癌的和癌前期的状态、眼科疾病、心血管病、炎性疾病、神经变性疾病、涉及调节编程性细胞死亡的疾病、免疫系统疾病、脑垂体功能异常、涉及人乳头状瘤病毒的疾病、创伤愈合或恢复头发生长中是有效的。
26．一种药物组合物，其含有一种权利要求1所述的化合物和一种药学上可接受之载体。
27．根据权利要求26所述的药物组合物，其中该组合物是为口服、局部、静脉内、作为栓剂或胃肠道外给药而配制的。
28．根据权利要求26所述的药物组合物，其中该化合物以从每公斤体重大约1微克到每公斤体重大约500毫克的剂量单位投用于病人。
29．根据权利要求26所述的药物组合物，其中该化合物以从每公斤体重大约10微克到每公斤体重大约250毫克的剂量单位投用于病人。
30．根据权利要求26所述的药物组合物，其中该化合物以从每公斤体重大约20微克到每公斤体重大约100毫克的剂量单位投用于病人。
31．根据权利要求26所述的药物组合物，其中该组合物在治疗皮肤相关疾病和状态、癌的和癌前期的状态、眼科疾病、心血管病、炎性疾病、神经变性疾病、涉及调节编程性细胞死亡的疾病、免疫系统疾病、脑垂体功能异常、涉及人乳头状瘤病毒的疾病、创伤愈合或恢复头发生长中是有效的。
32．一种影响RAR和/或RXR活性的方法，其包括体内投用根据权利要求1所述的化合物。
33．一种调节由RAR和/或RXR受体介导之过程的方法，其包括给病人投用有效量的根据权利要求6所述的化合物。
34．一种医治需进行类视黄酸治疗之病人的方法，其包括给病人投用药学上有效量的根据权利要求6所述的化合物。
35．根据权利要求34所述的医治病人的方法，其中该化合物在治疗皮肤相关疾病和状态、癌的和癌前期的状态、眼科疾病、心血管病、炎性疾病、神经变性疾病、涉及调节编程性细胞死亡的疾病、免疫系统疾病、脑垂体功能异常、涉及人乳头状瘤病毒的疾病、创伤愈合或恢复头发生长中是有效的。
36．一种医治需要进行类视黄酸治疗的病人的方法，其包括给病人投用药学上有效量的根据要求26所述的药物组合物。
37．根据权利要求36所述的医治病人的方法，其中该组合物在治疗皮肤相关疾病和状态、癌的和癌前期的状态、眼科疾病、心血管病、炎性疾病、神经变性疾病、涉及调节编程性细胞死亡的疾病、免疫系统疾病、脑垂体功能异常、涉及人乳头状瘤病毒的疾病、创伤愈合或恢复头发生长中是有效的。
38．一种检测样品中是否存在一种或多种RAR和/或RXR受体的方法，其包括将根据权利要求1所述的化合物与含有一种或多种未知类视黄酸受体的样品混合，并检测所说的化合物是否与样品中的受体结合。
39．一种配体-类视黄酸受体复合物，其由根据权利要求1所述的化合物与RAR和/或RXR受体结合所形成。
40．一种纯化类视黄酸受体的方法，其包括将根据权利要求1所述的化合物与含有RAR和/或RXR受体的样品混合在一起，使所说的化合物与所说的受体结合，并分离出所说的化合物和所说的RAR和/或RXR受体结合之组合体。
41．一种制造氚标记的根据权利要求1所述的化合物，即结构Ⅰ化合物的方法，其包括(a)使具有下结构式
的三烯酯醛与芳基磺酰肼偶联，以产生相应的腙，并且(b)用氚化物还原该腙，以产生相应的氚标记的三烯酯，其中R1和R2至R10具有如权利要求1中给出的定义。
42．根据权利要求41所述的方法，其还包括皂化氚标记的三烯酯以产生具有下列结构式的相应的三烯酸
其中R1和R2至R10具有如权利要求1中给出的定义。
全文摘要
本发明提供了具有视黄酸受体和类视黄酸X受体活性的新的三烯类视黄酸化合物,还提供了含有这些化合物的药物组合物及其使用方法。
文档编号A61P27/02GK1220656SQ95197736
公开日1999年6月23日 申请日期1995年12月21日 优先权日1994年12月30日
发明者马库斯·F·贝姆, 张 林, 尤塞夫·L·本纳尼, 亚历克斯·M·纳德赞 申请人:配位体药物股份有限公司