专利名称：环状促生长素抑制素类似物的制作方法
背景技术：
本发明涉及含有咪唑顺式酰胺键模拟物的环状衍生物，该化合物可选择性地与促生长素抑制素受体亚型结合。本发明还涉及制备本发明化合物的方法。
促生长素抑制素(SRIF)是一种在3位和14位之间含有二硫键的环状十四肽激素，它可以抑制生长激素(GH)和甲状腺刺激激素(TSH)的释放、抑制胰岛素和胰高血糖素的释放以及减少胃的分泌。促生长素抑制素由氨基肽酶和羧基肽酶代谢，作用时间很短。
促生长素抑制素可与五种不同的受体(SSTR)亚型结合，对每一种亚型都有较高的亲和性。本发明较小的、刚性较强的类似物对多种受体亚型显示出很高的选择性。与不同类型的促生长素抑制素亚型结合与治疗如下病症和/或疾病有关。2和5型的激活与生长激素抑制、特别是GH分泌腺瘤(肢端肥大症)和TSH分泌腺瘤有关。激活2型但不激活5型与治疗催乳素分泌腺瘤有关。与激活促生长素抑制素亚型有关的其它适应症是再狭窄、胰岛素和/或胰高血糖素的抑制，特别是糖尿病、高脂血症、胰岛素不敏感、X综合征、血管病、增殖性视网膜病、黎明现象和肾病；胃酸分泌的抑制，特别是消化性溃疡、肠皮肤瘘和胰皮肤瘘、过敏性肠疾病、倾倒综合征、水泻综合征、与AIDS有关的腹泻、化疗引起的腹泻、急性或慢性胰腺炎和胃肠激素分泌肿瘤；癌症如肝细胞瘤的治疗；血管生成的抑制、炎性疾病如关节炎的治疗；慢性同种异体移植物排斥反应；血管成形术；预防移植血管和胃肠出血。促生长素抑制素激动剂还可用于降低患者的体重。据报道，促生长素抑制素激动剂还可用于抑制幽门螺旋杆菌的增殖。
一个优选的式(I)化合物是化合物H-Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly-OH。
另一方面，本发明提供了式(II)的化合物或其可药用的盐， 其中，Y和Z在每次出现时彼此独立地是D-或L-天然或非天然的α-氨基酸；
m是0或1到10的整数；n在每次出现时彼此独立地是0至6；R1在每次出现时彼此独立地是H、(C1-C4)烷基或芳基-(C1-C4)烷基；R2是H或选自(C1-C4)烷基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基和杂环基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分，其中，选择性取代的部分选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自(C1-C4)烷基、环烷基、-O-R6、-S(O)q-R7、-N(R9R9)、-NHCO-R6、-NHSO2R9、-CO2R9、-CONR9R9和-SO2NR9R9，其中q是0、1、2或3；R3和R4彼此独立地是H、卤素或选自(C1-C4)烷基、环烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分；其中，选择性取代的部分选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基选自OH、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOH、-CONR9R9和卤素；或者R3和R4与它们所连接的碳合在一起形成选择性取代的芳基，其中的芳基选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自OH、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOR5、-CONR9R9和卤素；R5在每次出现时彼此独立地是H或选自(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分，其中，选择性取代的部分选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自(C1-C4)烷基、OH、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、NO2、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、COOH、-CONR9R9和卤素；R6在每次出现时彼此独立地选自H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳基-(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷氧基；当q是3时，R7是H；或者当q是0、1或2时，R7在每次出现时彼此独立地选自(C1-C4)烷基、芳基或芳基-(C1-C4)烷基；
R9在每次出现时彼此独立地选自H、NO2、(C1-C4)烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基；X1是天然或非天然的D-或L-α-氨基酸，其中，当X1是Phe、Nal、Trp、Tyr、Pal或His时，其芳环在碳或氮上选择性地被R6所取代，或者当X1是Ser或Thr时，其侧链氧选择性地被一个或多个R1所取代；X2是D-或L-Trp、N-甲基-D-Trp或N-甲基-L-Trp；X3是Lys、α-N-甲基-Lys或ε-N-(C1-C4)烷基-Lys或ε-N-[芳基-(C1-C4)烷基]-Lys；X4是天然或非天然的D-或L-α-氨基酸，其中，当X4是Phe、Nal、Trp、Tyr或His时，其芳环在碳或氮上选择性地被R8所取代，或者当X4是Ser、Tyr或Thr时，其侧链氧可以被一个或多个R1所取代。
X1、X2、X3和X4之间的键与X1和Z之间的键以及X4和Y之间的键一样是酰胺键。
一组优选的式(II)化合物(指定为A组)是，其中，n是2；m是0或1至5；R1在每次出现时彼此独立地是H、甲基或芳基-(C1-C4)烷基；R2是选自苯基-(C1-C4)烷基和杂环基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分，其中，选择性取代的部分被选自(C1-C4)烷基和-O-R6的取代基所取代；R3和R4彼此独立地是H、卤素或选自(C1-C4)烷基和芳基的选择性取代的部分；其中，选择性取代的部分选择性地被选自OH、(C1-C4)烷氧基、芳氧基和卤素的取代基所取代。
A组中，一组优选的化合物(指定为B组)是，其中，X1是Phe、Nal、Trp、Tyr、Pal或His，其中，它们的芳环在碳或氮上选择性地被R6所取代；
X4是Val、Abu、Ser、Thr、Nal、Trp、Tyr或His，其中，Nal、Trp、Tyr和His的芳环在碳和/或氮上选择性地被R8所取代，或者当X4是Ser、Tyr或Thr时，侧链氧选择性地被R1所取代。
B组化合物中，一组优选的化合物(指定为C组)是，其中，X1是Phe、Trp或Tyr，其中，它们的芳环在碳或氮上选择性地被R6所取代；X2是D-Trp或N-甲基-D-Trp；X3是Lys或α-N-甲基-Lys；X4是Val、Thr、Abu、Nal或Tyr，其中Thr和Tyr的羟基的侧链氧选择性地被R1所取代；R1在每次出现时彼此独立地是H、甲基或苄基；R2是选自苯甲基和杂环基-甲基的选择性取代的部分，其中，选择性取代的部分被选自(C1-C4)烷基和-O-R6的取代基所取代；R3是(C1-C4)烷基或选择性取代的芳基；其中，选择性取代的芳基被选自OH、(C1-C4)烷氧基、芳氧基和卤素的取代基所取代；R4是H；R6在每次出现时彼此独立地选自H和芳基-(C1-C4)烷氧基。
C组化合物中，一组优选的化合物(指定为D组)是，其中X1是Phe、Trp、Tyr或Tyr(OBzl)；X4是Val、Thr、Abu、Nal或Tyr，其中Thr和Tyr的羟基选择性地被苄基所取代；m是0、2或4；R2是选自苯甲基或3-吲哚基甲基的选择性取代的部分，其中，该选择性取代的部分选择性地被-O-R6所取代；R3是1，1-二甲基乙基或选择性取代的芳基；其中，选择性取代的芳基选择性地被选自OH、(C1-C4)烷氧基和卤素的基团所取代；D组化合物中，一组优选的化合物(指定为E组)是，其中R2是苯甲基；R3是1，1-二甲基乙基或选择性取代的苯基，其中，选择性取代的苯基选择性地被OH或OCH3所取代；R6在每次出现时彼此独立地选自H或苄基甲氧基。
E组化合物中，一组优选的化合物(指定为F组)是，环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，
环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(ε)Ahx]和环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑-(γ)Abu]。
F组化合物中，一组优选的化合物(指定为G组)是，环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]和环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]。
G组化合物中，一组优选的化合物(指定为H组)是，
环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]或环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]。
H组化合物中，一组优选的化合物(指定为I组)是，环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]和环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]。
F组化合物中，另一组优选的化合物(指定为J组)是，环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，
环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-(ε)Ahx]和环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑-(γ)Abu]。
J组化合物中，一组优选的化合物(指定为K组)是，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]和环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]。
K组化合物中，一组优选的化合物(指定为L组)是，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，
环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑-Gly]和环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]。
另一方面，本发明提供了含有有效量的式(I)或式(II)化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。
另一方面，本发明还提供了在存在需要的哺乳动物中诱导促生长素抑制素受体激动剂作用的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用有效量的式(I)或式(II)化合物或其可药用盐。
另一方面，本发明还提供了在存在需要的哺乳动物中诱导促生长素抑制素受体拮抗剂作用的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用有效量的式(I)或式(II)化合物或其可药用盐。
另一方面，本发明还提供了在需要治疗的哺乳动物中治疗催乳素分泌腺瘤再狭窄、糖尿病、高脂血症、胰岛素不敏感、X综合征、血管病、增殖性视网膜病、黎明现象、肾病、胃酸分泌、消化性溃疡、肠皮肤瘘和胰皮肤瘘、过敏性肠疾病、倾倒综合征、水泻综合征、与AIDS有关的腹泻、化疗引起的腹泻、急性或慢性胰腺炎、胃肠激素分泌肿瘤、癌症、肝细胞瘤、血管生成、炎性疾病、关节炎、慢性同种异体移植物排斥反应、血管成形术、移植血管出血或胃肠出血的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用式(I)或式(II)化合物或其可药用盐。
另一方面，本发明还提供了在需要治疗的哺乳动物中抑制幽门螺旋杆菌增殖的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用式(I)或式(II)化合物或其可药用盐。
另一方面，本发明提供了制备下面式中化合物的方法 或 该方法包括，通过裂解Prt基团将下面式中的化合物脱保护， 或 其中，Prt是氨基酸侧链保护基；Y和Z彼此独立地是选择性带有保护的侧链的D-或L-天然或非天然α-氨基酸，其中H-N*是Y所定义的N-末端的氨基酸的氨基，O＝C*是Z所定义的C-末端氨基酸的羧基；n在每次出现时彼此独立地是1至50；其它所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。
另一方面，本发明提供了制备下面式中化合物的方法， 或 该方法包括； 或 对于式(a)化合物，通过将式(a’)的化合物与肽偶联剂和添加剂反应，在Y所定义的最后一个氨基酸的末端氨基和Z所定义的最后一个氨基酸的末端羧基之间形成酰胺键；或者，对于式(b)化合物，通过将式(b’)的化合物与肽偶联剂和添加剂反应，在末端氨基和Z所定义的最后一个氨基酸的末端羧基之间形成酰胺键；或者，对于式(c)化合物，通过将式(c’)的化合物与肽偶联剂和添加剂反应，在Y所定义的最后一个氨基酸的末端氨基和末端羧基之间形成酰胺键；其中，Prt是氨基酸侧链保护基；Y和Z彼此独立地是选择性带有保护的侧链的D-或L-天然或非天然α-氨基酸，其中H-N*是Y所定义的N-末端的氨基酸的氨基，O＝C*是Z所定义的C-末端氨基酸的羧基；n在每次出现时彼此独立地是1至50；其它所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。
另一方面，本发明提供了制备下式化合物的方法，
该方法包括，将式 的化合物与式X’-CH(R3)CO(R4)的α-卤代酮在碱和极性非质子溶剂的存在下反应直至反应基本结束；蒸除极性非质子溶剂得到固体；将固体溶于非质子有机溶剂和过量的NH4OAc水溶液以形成溶液；将溶液回流并同时除去极性层得到式(A)化合物；其中X是胺保护基；X’是卤素；其它所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。
另一方面，本发明涉及制备式(I)化合物的方法， 该方法包括，将式(B)的化合物 与Nα-保护的氨基酸，(Prt)-Y，在碱的存在下偶联直至反应基本结束生成式(C)的化合物，其中，Nα-保护的氨基酸是其活泼酯、酸酐或酰卤的形式， 选择性地通过常规的脱保护反应将Nα-保护的氨基酸(Prt)-Y的氨基脱保护，然后与另一个Nα-保护的氨基酸重复进行偶联反应直至获得所需的式(I)化合物；Y在每次出现时彼此独立地是选择性带有含保护基的侧链的D-或L-天然或非天然α-氨基酸；Prt是氨基保护基；R’是烷基酯或苄基酯；n是1至100；其它所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。
另一方面，本发明提供了制备以上定义的式(I)化合物的方法，该方法包括，将以其活泼酯、酸酐或酰卤的形式活化了的式(B)化合物与通过熟悉肽合成的技术人员熟知的方法制备的N-脱保护的肽-树脂(A’)偶联，用哌啶在DMF、TAEA或类似的碱中将N-末端的Fmoc基团脱保护，然后用强酸将形成的中间体(B’)脱保护并且从树脂上裂解下来。所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。
另一方面，本发明提供了制备式(I)化合物的方法，该方法包括，将以其活泼酯、酸酐或酰卤的形式活化了的式(B)化合物与通过熟悉肽合成的技术人员熟知的方法制备的N-脱保护的肽-树脂(H)偶联，用哌啶在DMF、TAEA或类似的碱中将N-末端的Fmoc基团脱保护，将释放出的N-末端的氨基用Nα-Fmoc-保护的氨基酸(x)和本领域熟知的肽偶联反应酰化，根据需要重复碱脱保护和偶联步骤，以掺入另外的氨基酸(x)，用强酸将形成的中间体(C’)脱保护并从树脂上裂解下来。所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。 另一方面，本发明提供了制备式(I)化合物的方法，该方法包括，将以其活泼酯、酸酐或酰卤的形式活化了的式(B)化合物与氨基取代的树脂如三-(烷氧基)-苄基胺树脂(PAL树脂)、4-(2’，4’-二甲氧基苯基-氨基甲基)-苯氧基树脂(N-脱保护的Rink树脂)或二苯甲基胺树脂偶联，用哌啶在DMF、TAEA或类似的碱中将N-末端的Fmoc基团脱保护，将释放出的N-末端的氨基用Nα-Fmoc-保护的氨基酸(x)通过本领域技术人员熟知的肽偶联反应酰化，根据需要重复碱脱保护和偶联步骤以掺入另外的氨基酸(x)，用强酸将形成的中间体(D’)脱保护并从树脂上裂解下来。所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。 另一方面，本发明提供了制备式(I)化合物的方法，该方法包括，将式(B)化合物与碱如Cs2CO3反应，将形成的酚的铯盐(E’)与卤代甲基化的聚苯乙烯树脂如Merrifield肽树脂反应，用哌啶或类似的有机碱除去Fmoc保护基，将释放出的N-末端的氨基用Nα-Fmoc-保护的氨基酸(x)通过本领域技术人员熟知的肽偶联反应酰化，根据需要重复碱脱保护和偶联步骤以掺入另外的氨基酸(x)，用哌啶或类似的有机碱在最终的保护的肽序列的N-末端脱保护并用Tfa在C-末端脱保护，将形成的中间体(F’)通过本领域技术人员熟知的肽偶联反应环化，用强酸将形成的中间体(G’)从树脂上裂解下来。所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。 另一方面，本发明提供了制备以上定义的式(I)化合物的方法，该方法包括，将以其活泼酯、酸酐或酰卤的形式活化了的式(B)化合物与通过本领域技术人员熟知的方法制备的N-脱保护的肽-树脂(A’)偶联，用Tfa将N-末端的Boc基团脱保护，然后用强酸如HF将侧链保护基脱保护并将形成的中间体(H’)从树脂上裂解。所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。 另一方面，本发明提供了制备式(I)化合物的方法，该方法包括，将以其活泼酯、酸酐或酰卤的形式活化了的式(B)化合物与通过本领域技术人员熟知的方法制备的N-脱保护的肽-树脂(H)偶联，用Tfa将N-末端的Boc基团脱保护，将释放出的N-末端的氨基用Nα-Boc-保护的氨基酸(x)通过本领域技术人员熟知的肽偶联反应酰化，根据需要重复Tfa脱保护和偶联步骤以掺入另外的氨基酸(x)，用强酸将形成的中间体(I’)脱保护并从树脂上裂解。所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。 另一方面，本发明提供了制备式(I)化合物的方法，该方法包括，将式(B)化合物与碱如Cs2CO3反应，将形成的酚的铯盐(J’)与卤代甲基化的聚苯乙烯树脂如Merrifield肽树脂反应，用Tfa除去Boc保护基，将释放出的N-末端的氨基用Nα-Boc-保护的氨基酸(x)通过本领域技术人员熟知的肽偶联反应酰化，根据需要重复Tfa脱保护和偶联步骤以掺入另外的氨基酸(x)，用Tfa在最终的保护的肽序列的N-末端脱保护并用无机碱如LiOH在含水DMF中对C-末端脱保护，将形成的中间体(K’)通过本领域技术人员熟知的肽偶联反应环化，用强酸将形成的中间体(L’)从树脂上裂解。所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。 另一方面，本发明提供了制备式(I)化合物的方法，该方法包括，将以其活泼酯、酸酐或酰卤的形式活化了的式(B)化合物与通过本领域技术人员熟知的方法制备的N-脱保护的肽、4-硝基二苯酮肟树脂(M’)偶联，用Tfa将N-末端的Boc基团脱保护，将释放出的N-末端的氨基用Nα-Boc-保护的氨基酸(x)通过本领域技术人员熟知的肽偶联反应酰化，根据需要重复Tfa脱保护和偶联步骤以掺入另外的氨基酸(x)，用Tfa将N-末端的Boc基团脱保护，通过用适宜的有机碱中和将形成的N’-脱保护的中间体(N’)环化和裂解，然后用强酸如HF除去侧链保护基。所有变量均如以上所示的式(I)中所定义。 详细描述本文所用的术语“杂环”是指可以出现在氨基酸侧链上的任意杂环。其例子包括但不仅限于，苯并噻吩基、苯并呋喃基(coumaryl)、咪唑基、吲哚基、嘌呤基、吡啶基、嘧啶基、喹啉基、噻唑基、噻吩基和三唑基等杂环。
本文所用的术语“芳基”是指在每个环中含有最多7个碳原子的任何稳定的单环或二环碳环，其中至少有一个环是芳香性的。芳基的例子包括联苯基、茚基、萘基、苯基和1，2，3，4-四氢萘。
在本申请中，对氨基酸成分、某些优选的保护基、试剂和溶剂采用了缩写的符号。这些缩写符号的含义如表1所示。
表1
体外试验通过测量对[125I-Tyr11]SRIF-14与CHO-K1转染细胞结合的抑制作用来确定化合物对人促生长素抑制素亚型受体1至5(分别为sst1、sst2、sst3、sst4和sst5)的亲和性。
将人sst1受体基因以基因组片段的形式克隆。通过加入BglII接头对含有100bp 5’-非翻译区、1.17Kb的完整编码区和230bp的3’-非翻译区的1.5Kb Pstl-Xmnl进行修饰。将得到的DNA片段亚克隆到pCMV-81的BamHl位点以产生哺乳动物表达质粒(由Dr.Graeme Bell提供，芝加哥大学)。通过用磷酸钙共沉淀法(1)转染到CHO-K1细胞(ATCC)中获得稳定表达sst1受体的克隆细胞系。含有质粒pRSV-neo(ATCC)作为可选择的标记。在含有0.5mg/ml的G418(Gibco)的RPMI 1640培养液中选择克隆细胞系，环克隆然后扩展到培养基中。
人sst2促生长素抑制素受体基因作为1.7Kb BamHI-HindIII基因组DNA片段分离，然后亚克隆到由Dr.G.Bell(芝加哥大学)提供的质粒载体pGEM3Z(Promega)中。通过将1.7Kb BamHl-HindII片段插入到质粒pCMV5的相容性限制核酸内切酶位点来构建哺乳动物细胞表达载体。用磷酸钙共沉淀法转染到CHO-K1细胞中获得克隆细胞系。含有质粒pRSV-neo作为可选择的标记。
将人sst3作为基因组片段分离，在2.4Kb BamHI/HindIII片段中含有完整的编码序列。在修饰末端并加入EcoR1接头后，通过将2.0KbNcoI-HindIII片段插入pCMV载体的EcoR1位点来构建哺乳动物表达质粒pMCV-h3。用磷酸钙共沉淀法转染到CHO-K1细胞(ATCC)中获得稳定表达sst3受体的克隆细胞系。含有质粒pRSV-neo(ATCC)作为可选择的标记。在含有0.5mg/ml的G418(Gibco)的RPMI 1640培养液中选择克隆细胞系，环克隆然后扩展到培养基中。
由Dr.Graeme Bell(芝加哥大学)提供人sst4受体表达质粒pCMV-HX。该载体含有1.4Kb NheI-NheI编码人sst4的基因组片段、456bp的5’-非翻译区和200bp的3’-非翻译区，然后克隆入PCMV-HX的XbaI/EcoR1位点。用磷酸钙共沉淀法转染到CHO-K1细胞(ATCC)中获得稳定表达sst4受体的克隆细胞系。含有质粒pRSV-neo(ATCC)作为可选择的标记。在含有0.5mg/ml的G418(Gibco)的RPMI 1640培养液中选择克隆细胞系，环克隆然后扩展到培养基中。
用λ基因组克隆作为模板通过PCR得到人sst5基因，由Dr.GraemeBell(芝加哥大学)提供。所得的1.2Kb PCR片段含有5’-非翻译区的21个碱基对和3’-非翻译区的55bp。将所述克隆插入质粒pBSSK(+)的EcoR1位点。以1.2Kb HindIII-XbaI片段回收该插入片段，然后亚克隆到pCVM5哺乳动物表达载体中。用磷酸钙共沉淀法转染到CHO-K1细胞(ATCC)中获得稳定表达sst5受体的克隆细胞系。含有质粒pRSV-neo(ATCC)作为可选择的标记。在含有0.5mg/ml的G418(Gibco)的RPMI 1640培养液中选择克隆细胞系，环克隆然后扩展到培养基中。
使稳定表达人sst受体之一的CHO-K1细胞在含有10％胎牛血清和0.4mg/ml遗传霉素的RPMI 1640中生长。用0.5mM EDTA收集细胞，以500g在约4℃下离心约5分钟。将沉积物重新悬浮在50mM Tris、pH7.4中并两次以500g在约4℃下离心约5分钟。通过超声处理并以39000g在约4℃下离心约10分钟使细胞溶解。将沉积物重新悬浮在相同的缓冲液中并以50000g在约4℃下离心约10分钟，将得到的沉积物中的膜于-80℃下存放。SRIF-14结合的竞争性抑制实验一式两份地在聚丙烯96孔板中进行。将细胞膜(10μg蛋白质/孔)与[125I-Tyr11]SRIF-14(0.05nM)一起在约37℃下在50mM HEPES(pH7.4)、0.2％BSA、5mM的MgCl2、200KIU/ml抑肽酶，0.02mg/ml杆菌肽和0.02mg/ml苯甲磺酰氟中保温约60分钟。
通过立即用预先用0.1％聚乙烯亚胺(P.E.I.)浸泡过的GF/C玻璃纤维滤板(Unifilter，Packard)过滤，用Filtermate 196(Packard)细胞收集器分离由游离的[125I-Tyr11]SRIF-14产生的结合。将滤纸用50mM HEPES在约0-4℃洗涤4秒钟，然后用Packard Top Count检测放射性。
从总的结合中减去非特异性结合(在0.1μM SRIF-14的存在下测定)得到特异性结合。将结合数据通过计算机辅助的非线性回归分析(MDL)进行分析并确定抑制常数(Ki)值。
通过如下试验来确定本发明的化合物是激动剂还是拮抗剂。
功能试验cAMP细胞内产生的抑制作用
将表达人促生长素抑制素(SRIF-14)亚型受体的CHO-K1细胞接种在24-孔组织培养板中的含有10％FCS和0.4mg/ml遗传霉素的RPMI 1640培养液中。在实验前一天更换培养液。
将细胞(105细胞/孔)用0.5ml含有0.2％BSA和0.5mM(1)3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)的新鲜的RPMI洗涤两次，然后在约37℃保温约5分钟。
·通过加入1mM毛喉素(FSK)在约37℃下约15-30分钟刺激环AMP的生产。
·通过同时加入FSK(1μM)、SRIF-14(10-12M至10-6M)和试验化合物(10-10M至10-5M)测定化合物的激动剂作用。
·通过同时加入FSK(1μM)、SRIF-14(1至10nM)和试验化合物(10-10M至10-5M)测定化合物的拮抗剂作用。
除去反应液并加入200ml 0.1N的HCl。用放射免疫试验方法(KitFlashPlate SMP001A，New England Nuclear)测定cAMP。
放射性配体结合试验用于体外受体结合试验的膜通过如下方法制得将表达hsst受体亚型的CHO-K1细胞在冰冷的50mM Tris-HCl中匀化(Polytron，设置6、15秒)，然后以39,000g(10分钟)离心两次，在两次之间用新鲜的缓冲液重新悬浮。将最终的沉积物重新悬浮在10mM Tris-HCl中用于试验。对于hsst1、hsst3、hsst4、hsst5试验，将膜制备物的等分试样在约37℃下与0.05nM[125I-Tyr11]SRIF-14一起在含有BSA(10mg/ml)、MgCl2(5mM))、抑肽酶(200KIU/ml)、杆菌肽(0.02mg/ml)和苯甲磺酰氟(0.02mg/ml)的50mM HEPES(pH7.4)中保温约30分钟。最终的试验体积为0.3ml。
对于hsst2试验，采用[125I]MK-678(0.05nM)作为放射性配体，在约25℃下保温约90分钟。通过迅速用GF/C滤纸(预先在0.3％聚乙烯亚胺中浸泡过)用Brandel过滤歧管过滤终止保温。然后将各试管和滤纸用每份5ml冰冷的缓冲液洗涤3次。
特异性结合的定义为，总的放射性配体结合减去在1000nM SRIF-14(hsst1、3、4、5)或1000nM MK678(hsst2)存在下的结合。
可以通过本领域技术人员熟知的方法体内检测本发明化合物与促生长素抑制素受体结合有关的应用，包括与促生长素抑制素亚型受体的特异性结合，本领域技术人员熟知的所述方法的例子可以参见I.Shimon等，“在人胎儿脑垂体培养物中的促生长素抑制素受体亚型特异性”，《临床研究杂志》(J.Clin.Invest.)、99卷、No.4、789-798页，1997；和C.Gilon等，“骨架-环状，受体5-选择性促生长素抑制素类似物合成、生物活性和核磁共振构象分析”，《药物化学杂志》(J.Med.Chem.)1998，41，919-929。
正如本领域技术人员所熟知的，促生长素抑制素激动剂和/或拮抗剂的已知及潜在的应用是多种多样的。促生长素抑制素的这些不同用途可以概括如下促生长素抑制素激动剂可用于抑制生长激素、特别是GH分泌腺瘤(肢端肥大症)和TSH分泌腺瘤；治疗催乳素分泌腺瘤；抑制胰岛素和/或胰高血糖素，特别是糖尿病、血管病、增殖性视网膜病、黎明现象和肾病；抑制胃酸分泌，特别是消化性溃疡；肠皮肤瘘和胰皮肤瘘；过敏性肠疾病；倾倒综合征；水泻综合征；与AIDS有关的腹泻；化疗引起的腹泻；急性或慢性胰腺炎和胃肠激素分泌肿瘤；治疗癌症如肝细胞瘤；抑制血管生成；治疗炎性疾病如关节炎；视网膜病；慢性同种异体移植物排斥反应；血管成形术；预防移植血管和胃肠出血。
因此，本发明包括含有至少一种文中所述的本发明化合物作为活性成分以及可药用载体的药物组合物。
本发明的化合物可以通过口服、胃肠外(例如肌肉内、腹膜内、静脉内或皮下注射，或植入)、鼻、阴道、直肠、舌下或局部给药途径进行给药，并且可以用可药用载体配制成适于各种给药途径的剂量形式。
用于口服给药的固体剂量形式包括胶囊、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在所述固体剂量形式中，活性化合物与至少一种惰性可药用载体如蔗糖、乳糖或淀粉混合。通常，所述剂量形式还可以含有除所述惰性稀释剂之外的其它物质，例如润滑剂如硬脂酸镁。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂量形式可以含有缓冲剂。片剂和丸剂还可以用肠溶包衣制备。
用于口服给药的液体剂量形式包括含有本领域常用的惰性稀释剂例如水的可药用乳液、溶液、混悬液、糖浆、酏剂。除所述惰性稀释剂外，组合物中还可含有辅剂，例如湿润剂、乳化剂和助悬剂，以及甜味剂、矫味剂和加香剂。
用于胃肠外给药的本发明制剂包括无菌的含水或非水溶液、混悬液或乳液。非水溶剂或载体的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄榄油和玉米油、明胶、可注射的有机酯例如油酸乙酯。所述剂量形式还可以含有辅剂如防腐剂、湿润剂、乳化剂和分散剂。它们可以通过，例如，用能够保留细菌的滤纸过滤、在组合物中掺入杀菌剂、对组合物进行照射或者将组合物加热进行灭菌。还可以将其制成可在临用前立刻溶于无菌水或其它无菌可注射溶媒的无菌固体组合物的形式。
用于直肠或阴道给药的组合物优选栓剂，所述栓剂除活性物质外，还含有赋形剂如可可脂或栓剂蜡。
用于鼻或舌下给药的组合物也可以用本领域熟知的常规赋形剂制备。
此外，本发明的化合物还可以以如下专利中描述的缓释组合物的形式给药。美国专利5,672,659教导了含有生物活性剂和聚酯的缓释组合物。美国专利5,595,760教导了可凝胶化形式的含有生物活性剂的缓释组合物。U.S.申请号08/929,363(申请日1997年9月9日)教导了含有生物活性剂和脱乙酰壳多糖的聚合的缓释组合物。U.S.申请号08/740,778(申请日1996年11月1日)教导了含有生物活性剂和环糊精的缓释组合物。U.S.申请号09/015,394(申请日1998年1月29日)教导了含有生物活性剂的可吸收的缓释组合物。上述专利和专利申请的教导引入本文作为参考。
本发明组合物中的活性成分的剂量可以改变；但是，活性成分的量必需能够获得适宜的剂量形式。所选择的剂量取决于所需的治疗作用、给药途径以及治疗的持续时间。通常，向人和其它动物、例如哺乳动物施用0.0001至100mg/kg体重的每日剂量以达到治疗作用。
优选的剂量范围是0.01至5.0mg/kg体重/天，所述剂量可以单次给药或分成多次给药。
本发明的化合物可以按照反应路线I中的描述合成。在第一步中，将在α-氨基上用Boc、Cbz或其它适宜的基团保护了的氨基酸用无机碱如NaOH、KOH、K2CO3或者首选的CsCO3在极性溶剂例如水、DMF、THF等中转变成羧酸盐。真空蒸除溶剂，将残余的盐重新溶于极性非质子溶剂如DMF中并在约-20℃至约100℃、首选室温下搅拌的同时加入适宜的α-卤代酮。继续搅拌约10分钟至约24小时，或者直至TLC分析证实酯的形成已经完全，此时，将溶液在约0℃至约100℃、首选约40℃至约70℃下真空浓缩。将中间体重新溶于非质子有机溶剂如苯、甲苯或者首选的二甲苯中，然后加入约5倍至100倍、首选约15-20倍摩尔过量的NH4OAc。将该两相混合物加热回流并在约1至约4小时的时间内通过Dean-Stark分水器彻底除去极性层得到粗品中间体(A)，该中间体可以粗品的形式使用，或者通过结晶或柱色谱纯化。 反应路线I在第二步，采用催化氢化或强酸如HF、盐酸、HBr或Tfa对中间体(A)进行脱保护。然后，可对α-氮进行保护，可以采用碱敏感性保护基团如Fmoc基团，使用商购的N-(9-芴基甲氧基羰氧基)琥珀酰亚胺和碳酸钾的乙腈和水溶液。或者，Nα-Cbz-保护的咪唑氮可用保护的羧酸酯卤化物进行烷基化，和用催化氢化对α-氨基基团进行脱保护，得到B’(V＝H，W＝-(CH2)mCR5-CO2R’，其中，R’表示烷基或苄基酯)。咪唑氮可采用商购的三苯基甲基氯化物和叔胺碱如4-甲基-吗啉、二异丙基乙基胺或三乙胺进行保护以得到Fmoc-保护的中间体，其可随后采用碱，例如TAEA对α-氨基进行脱保护，得到中间体(B)(V＝H，W＝Trt)。或者，N-脱保护的咪唑B”(V＝H，W＝H)可不经进一步修饰即可使用。
在第三步，中间体B、B’或B”用作目标肽的连续溶液相合成的锚基团。因此，将锚基团溶解于乙酸乙酯中，浓度为约50-200mmol/L，以及加入活化酯、酸酐或酰卤形式的约1-5摩尔当量，或更优选为1.1-1.5摩尔当量的Nα-Fmoc保护的氨基酸。将混合物在弱碱如碳酸钠水溶液，或者更优选碳酸氢钠溶液的第二层上方进行搅拌，直至反应完成。除去水层，加入约1-10ml/mmol，或者更优选约2-4ml/mmol的TAEA或哌啶，将混合物搅拌约30分钟。然后，溶剂用饱和氯化钠溶液洗涤(2次，约30ml/mmol)，然后用10％磷酸盐缓冲溶液调节至pH＝5.5(3次，约10ml/mmol)。随后，以与第一循环类似的方式进行随后的循环。最后的氨基酸可用Boc或Fmoc基团对Nα进行保护。
在第四步，N-末端的和C-末端的保护基可采用碱或强酸的水溶液除去，形成的肽中间体可采用典型的肽偶联技术进行环化，如下述文献所述“肽合成实践(The Practice of Peptide Synthesis)”，Bodanszky和Bodanszky，Springer-Varlag，1984。此后，再将肽中间体溶解于非质子溶剂如DMF中，通过加入叔胺碱如4-甲基-吗啉对溶液进行碱化。中间体的羧酸部分可通过加入1至6倍摩尔过量的碳化二亚胺如DCC或EDC和一种添加剂如1-羟基苯并三唑进行活化。将混合物在约0℃至100℃下搅拌，更优选在大约室温下搅拌，直至反应完成。
在最后一步，采用催化氢化或强酸如HF、盐酸、HBr或Tfa对保护的肽脱除保护基，得到最后的产物(C)，其中，R4至R5、a、b、Y、Z、和n均如式(I)所定义。
采用备有ESI(电子喷射电离)源的Finnigan SSQ 7000分光仪测量注入质谱数据。NMR数据是采用300MHz的Varian Unity光谱仪获得的，样品为在约10-20mg/ml浓度范围内在指定溶剂中的样品。
或者，本发明的化合物可采用固相肽合成技术制备。因此，中间体A(X＝Boc)例如用溴乙酸乙酯和适宜的碱如在非质子溶剂如DMF中的碳酸钾进行烷基化反应，形成的乙基酯中间体采用碱水溶液如氢氧化钠水溶液进行水解，得到中间体B(V＝Boc，W＝-CH2CO2H)。中间体B(V＝Boc，W＝-CH2CO2H)可采用公知的活化技术活化，所述技术如下述文献所述“肽合成实践(The Practice of Peptide Synthesis)”，Bodanszky和Bodanszky，Springer-Varlag，1984，并且直接用于与固体载体上的生长肽进行偶联，或者，中间体B(V＝Boc，W＝-CH2CO2H)也可直接与固体载体关联以开始固体相合成。N-末端的Boc基团可采用例如Tfa进行脱保护，在本领域技术人员公知的条件下继续进行肽合成。
中间体B(例如，V＝Fmoc，W＝-CH2CO2t-Bu)可用酸如Tfa处理以除去羧酸盐保护的叔丁基酯，并且形成的中间体B(例如，V＝Fmoc，W＝-CH2CO2H)可用于利用Fmoc策略的固相肽合成。因此，中间体B(V＝Fmoc，W＝-CH2CO2H)可采用公知的活化技术活化，所述技术如下述文献所述“肽合成实践(ThePractice of Peptide Synthesis)”，M.Bodanszky和A.Bodanszky，Springer-Varlag，1984，并且直接用于与固体载体上的生长肽进行偶联。N-末端的Fmoc基团可采用例如哌啶进行脱保护，在本领域技术人员公知的条件下继续进行肽合成。
环状类似物的固体相合成也可按照以下的反应路线II进行。
中间体A(X＝Boc或Cbz、R3＝2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基或4-甲氧基苯基)可用1M的BBr3的二氯甲烷溶液处理约1/2小时，得到游离的酚A(X＝H、R3＝2-羟基苯基、3-羟基苯基或4-羟基苯基)。然后，α-氮可用酸敏感性保护基团如Boc基团进行保护，采用二叔丁基二碳酸酯和一种碱如氢氧化钠在有机水不混溶的溶剂如二噁烷与水的混合物中的溶液。中间体A(X＝Boc、R3＝2-羟基苯基、3-羟基苯基或4-羟基苯基)例如用溴乙酸乙酯和适宜的碱如在非质子溶剂如DMF中的碳酸钾进行烷基化反应，得到形成的乙基酯中间体D。然后，将中间体D通过用碳酸铯进行作用而转化成其铯盐。铯盐过量地与Merrifield树脂反应，得到中间体E。中间体E再采用标准Boc固相肽合成技术或如前所述的标准Fmoc固相合成进行加工，得到中间体F。当构建了完整的氨基酸序列时，C-末端的乙基酯采用适宜的碱如LiOH的含水DMF溶液进行脱保护(unmask)，肽采用标准的活化方法进行环化，例如，采用碳化二亚胺和例如羟基苯并三唑和叔胺碱，例如，二异丙基乙基胺，得到中间体G。最后的侧链脱保护和与从树脂分裂是通过加入非常强的酸来实现，如加入HF，得到本发明的化合物。
以下通过实施例进一步说明本发明，但并非用以对本发明保护范围的限制。
实施例1环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly] 实施例1是按照如下的合成反应路线1进行合成 反应路线1
步骤a2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑将Cbz-(L)-苯基丙氨酸(10.0g，33.4mmol)和碳酸铯(5.44g，16.7mmol)合并于2∶1的DMF∶水(75ml)中，将混合物搅拌直至均匀。减压除去溶剂，将残余物溶解于DMF(70ml)中，加入2-溴-3’-甲氧基苯乙酮(7.65g，33.4mmol)的DMF(30ml)溶液。将混合物在室温下搅拌约30分钟，然后，减压浓缩。将形成的酮-酯溶解于二甲苯(150ml)中，滤出CsBr。加入乙酸铵(40.0g，0.52mol)，再将混合物加热回流约2小时，采用Dean-Stark分水器除去过量的NH4OAc并释放出水。将反应混合物冷却，并用饱和碳酸氢钠溶液(50ml)和饱和氯化钠溶液(50ml)洗涤。二甲苯层用硫酸钠干燥、过滤及真空浓缩。
将残余物溶解于二噁烷(30ml)中，加入6N的盐酸(115ml)，将混合物回流下加热约3小时。将溶液真空浓缩，并用乙醚(4×100ml)研制。再将残余物在真空下干燥至恒重，得到12.15g(99％)的中间体1a，质谱294.2 MH+。
步骤b2-(1-(S)-((芴基甲氧基)羰基)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑将中间体1a(11.8g，32.2mmol)溶解于1∶1/乙腈∶水(200ml)中，分批连续小心地加入碳酸钾(5.38g，39mmol)，加入9-芴基甲基-琥珀酰亚胺基碳酸酯，将形成的混合物剧烈搅拌约20分钟。产物用乙酸乙酯(100ml)萃取，乙酸乙酯层用水(2×50ml)洗涤。乙酸乙酯层再用硫酸钠干燥、过滤、真空浓缩。将产物用硅胶闪蒸色谱纯化(150g)，用2∶2∶1的二氯甲烷∶己烷∶乙酸乙酯淋洗，然后用1∶1的己烷∶乙酸乙酯淋洗。将产物馏分合并并真空浓缩，得到中间体1b，为一种浅黄色泡沫物，14.77g(85％)。质谱516.3 MH+，NMR(300MHz，DMSO-d6)，11.8-12.0(1H，s)，7.8-8.0(3H，d)，7.6-7.8(2H，d)，7.5(1H，s)，7.1-7.5(12H，m)，6.7-6.9(1H，d)，4.8-5.0(1H，m)，4.1-4.3(3H，m)，3.7-3.9(3H，s)，3.0-3.4(2H，m)。
步骤c2-(1-(S)-((芴基甲氧基)羰基)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基-苯基)-1-三苯基甲基-咪唑在氮气氛下，将中间体1b(13.9g，26.9mmol)溶解于二氯甲烷(50ml)中，加入4-甲基吗啉(2.96ml，26.9mmol)和氯代三苯基甲烷(7.51g，26.9mmol)，将溶液在室温下搅拌约45分钟。过滤除去固体，将滤液用硅胶闪蒸色谱纯化(300g)，采用70∶30的己烷∶乙酸乙酯作为淋洗剂。将产物馏分合并，真空浓缩，得到中间体1c，为一种泡沫物，18.0g(88％)，NMR(300MHz，DMSO-d6)，7.84-7.95(2H，d)，7.7-7.8(1H，d)，7.6-7.7(1H，d)，6.7-7.5(29H，m)，4.3-4.5(1H，m)，3.75-3.95(2H，m)，3.75-3.85(3H，s)，3.6-3.7(1H，m)，2.65-2.85(1H，d，d)，2.05-2.2(1H，m)。
步骤d2-(1-(S)-((Fmoc-Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-1-(三苯基甲基)-咪唑将中间体1c(1.89g，2.50mmol)溶解于乙酸乙酯(40ml)中，加入三(2-氨基乙基)胺(9ml)，将混合物剧烈搅拌约1/2小时。乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液(2×120ml)洗涤，再用10％磷酸盐缓冲溶液调节至约pH＝5.5(3×40ml)。乙酸乙酯层再用饱和碳酸氢钠溶液(40ml)搅拌，加入Fmoc-Val-F(1.02g，3.00mmol)。将反应混合物搅拌约1小时，除去水层。
然后，中间体顺序进行脱保护和偶联，采用的是Fmoc-Lys(Cbz)-OSu、Fmoc-D-Trp-OSu和Fmoc-Tyr(OBzl)-OSu，以与上述Fmoc-Val-F循环类似的方式进行。乙酸乙酯层用1.5倍体积的己烷稀释，并通过闪蒸色谱的硅胶柱进行纯化，首先采用50∶30∶20的二氯甲烷∶乙酸乙酯∶己烷，然后采用4∶1的乙酸乙酯∶己烷作为淋洗剂。合并产物馏分并真空浓缩，得到中间体1d，为一种白色泡沫物，1.90g(46％)。质谱1581.2 MNa+，1559.5MH+。
步骤e1-((2-乙氧基-2-氧代)乙基)-2-(1-(S)-((Fmoc-Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑将中间体1d(519mg，0.33mmol)溶解于包含iPr3SiH(205μl，1.0mmol)的Tfa(10ml)中，将混合物搅拌约15分钟。加入乙醚(60ml)沉淀出中间体，过滤。质谱1316 MH+。将中间体溶解于DMF(3ml)中，加入碳酸氢钾(198mg，2.0mmol)和溴乙酸乙酯(721μl，6.5mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物真空浓缩、溶解于二氯甲烷(10ml)中，用水(10ml)洗涤。二氯甲烷层用硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩，得到中间体1e的粗产物(540mg)，其无需纯化即可使用。
步骤f环[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]将中间体1e(540mg，0.33mmol)悬浮于乙酸乙酯(10ml)中，加入三(氨基乙基)胺(1ml)，将混合物剧烈搅拌约1/2小时。加入乙酸乙酯(10ml)，溶液用饱和氯化钠溶液(2×25ml)洗涤，再用10％磷酸盐缓冲溶液(pH＝5.5，3×10ml)洗涤。加入己烷(40ml)沉淀出中间体，滗析出溶剂。将残余物溶解于甲醇(10ml)中，在室温下与2.5N氢氧化钠(0.5ml)搅拌过夜。将混合物用水稀释剂至浑浊，并将pH调节至约6.7。滤出脱保护的中间体并真空干燥。将固体吸收于DMF(25ml)中，加入DCC(340mg，1.65mmol)和HOBt(252mg，1.65mmol)。将混合物在室温下搅拌约2小时和减压浓缩。将粗产物用硅胶闪蒸色谱纯化，采用乙酸乙酯作为淋洗剂。将产物馏分合并，真空浓缩，得到中间体1f，为-种玻璃状物(180mg，48％，由中间体1d计)。质谱1134.5 MH+。
步骤g环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]将中间体1f(180mg，0.16mmol)溶解于包含10％Pd/C(24mg)的乙酸(10ml)中，将混合物在氢气氛(25psi)下，于室温下振摇约8小时。滤出催化剂，将残余物真空浓缩。粗混合物由完全脱保护的物质(均除去了Cbz和苄基醚)和部分脱保护的物质(除去Cbz和苄基醚完整)组成。将混合物通过制备色谱HPLC纯化，在VYDAC蛋白质&肽C18柱(The Nest GroupInc.，Southborough，MA)上进行，采用20％至70％的CH3CN/0.1％Tfa梯度洗脱，时间为约55分钟。将更具极性峰值的纯化馏分合并、浓缩、冷冻干燥(2×10ml 0.5％盐酸，然后1×10ml水)，得到实施例1的标题化合物，45mg(29％)。质谱910.4 MH+。
实施例2环[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]基本按照实施例1的合成反应路线1进行实施例2，只是采用适宜的氨基酸。合并1g的来自纯化过程的较低极性峰值的纯化馏分，浓缩和冷冻干燥(2×10ml 0.5％盐酸，然后1×10ml水)，得到实施例2的标题产物，33mg(21％)。质谱1000.4 MH+。
实施例3环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]以与实施例1基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例3，其区别如下步骤d2-(1-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-1-(三苯基甲基)-咪唑将中间体1c(757mg，1.0mmol)溶解于乙酸乙酯(20ml)中，加入三(2-氨基乙基)胺(3ml)，将混合物剧烈搅拌约1/2小时。乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液(2×60ml)洗涤，然后用10％磷酸盐缓冲溶液调节至pH为约5.5(3×20ml)。将乙酸乙酯层与饱和碳酸氢钠溶液(20ml)一起搅拌，加入Fmoc-Val-F(825mg，2.33mmol)。再将反应混合物搅拌约1小时，除去水层。
以与如前所述类似的方式，将中间体顺序进行脱保护和偶联，采用Fmoc-Lys(Cbz)-OSu、Fmoc-D-Trp-OSu和Fmoc-Trp-OSu。乙酸乙酯层用1.5倍体积的己烷稀释，首先通过闪蒸色谱的硅胶柱纯化，采用的是50∶30∶20的二氯甲烷∶乙酸乙酯∶己烷作为淋洗剂，然后采用4∶1的乙酸乙酯∶己烷作为淋洗剂。将产物馏分合并，真空浓缩，得到中间体3d，为一种白色泡沫物，1.02g(68％)。质谱11492.0 MNa+，1514.2 MH+。
步骤e1-((2-乙氧基-2-氧代)乙基)-2-(1-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-)氨基-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑将中间体3d(1.00g，0.67mmol)溶解于二氯甲烷(10ml)、Tfa(1ml)和iPr3SiH(205μl，1.0mmol)的混合物中，将混合物搅拌约20分钟。加入1∶1的乙醚∶己烷(100ml)的混合物，将中间体过滤并干燥(0.88g)。再将中间体溶解于DMF(10ml)中，加入碳酸氢钾(200mg，2.00mmol)和溴代乙酸乙酯，将反应混合物在室温下搅拌过夜。再将混合物减压浓缩，得到中间体3e，其可不经纯化直接使用。质谱1335.7 MH+。
步骤f环[Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]将中间体3e(粗产物，0.67mmol)溶解于甲醇(10ml)中，将在室温下与2.5N氢氧化钠(10ml)一起搅拌约45分钟。将混合物用水稀释至混浊，将pH值调节至6.9。滗析出溶剂，将残余物用水研制，得到一种浅黄色的粉末(650mg，质谱1085.5 MH+)。将这种粉末(629mg)溶解于DMF(20ml)中，然后，加入NMM(220μl，2.0mmol)、EDC(192mg，1.0mmol)和HOBt(153mg，1.0mmol)。将混合物在室温下搅拌约2小时，真空浓缩。将粗产物溶解于二氯甲烷(15ml)中，用10％磷酸盐缓冲溶液(调节至pH＝5.5)洗涤。将二氯甲烷层用硫酸钠干燥、过滤，然后浓缩至2ml。加入乙醚沉淀出产物，将其过滤和干燥，得到中间体3f(440mg，71％)。质谱1067.4MH+。
步骤g环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]将中间体3f(200mg，0.19mmol)溶解于包含10％Pd/C(40mg)的乙酸(15ml)中，将混合物在氢气氛(25psi)下，于室温下振摇约2天。滤出催化剂，将残余物真空浓缩。将粗混合物通过制备色谱HPLC纯化，在C18柱(Rainin MicrosorbTM80-220-C5)上进行，采用20％至70％CH3CN/0.1％Tfa梯度洗脱，时间为约55分钟。第二次通过，采用30％至50％CH3CN/0.1％Tfa梯度洗脱，时间为约55分钟，以获得优良的分离效果。将纯化馏分合并，浓缩、冷冻干燥(2×10ml 0.5％盐酸，然后1×10ml水)，得到实施例3的标题化合物，26mg(14％)。质谱933.5 MH+。
实施例4环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]以与实施例1基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例4，其区别如下步骤g环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑-Gly]将中间体3f(150mg，0.14mmol)溶解于二氯甲烷(12ml)中，在氮气氛下加入1M的BBr3的己烷溶液。将形成的浆液搅拌约1/2小时。加入甲醇(10ml)，将混合物真空浓缩。将粗混合物通过制备HPLC在C18柱上纯化，采用24％至48％的CH3CN/0.2％NH4OAC梯度洗脱，时间为约50分钟。合并纯化馏分，浓缩、冷冻干燥(2×10ml水)，得到实施例4的标题化合物，40mg(29％)。质谱919.4 MH+。
实施例5环[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]以与实施例3基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例5，只是在步骤d中采用Fmoc-Thr(OBzl)-F代替Fmoc-Val-F。质谱1025.5 MH+。
实施例6环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑-Gly]以与实施例4基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例6，只是采用中间体5f，环[Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Thr(Obzyl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]代替步骤g中的中间体3f。质谱1025.5 MH+。
实施例7H-Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly-OH以与实施例3基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例7，只是在步骤3d中采用Fmoc-Abu-F代替Fmoc-Val-F，并用碳化二亚胺和HOBt进行环化，而不进行步骤3f。质谱937.3 MH+。
实施例8环[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]
以与实施例3基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例8，只是在步骤3d中，采用Fmoc-Abu-F代替Fmoc-Val-F。质谱919.5 MH+。
实施例9环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)-Gly]实施例9按照反应路线2制备。 反应路线2
步骤a2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-4-(1，1-二甲基乙基)-咪唑将Boc-(L)-苯基丙氨酸(5.31g，20.0mmol)和碳酸铯(3.26g，10.0mmol)合并于1∶1/DMF∶水(50ml)中，将混合物进行搅拌直至获得均匀的混合物。减压除去溶剂，将残余物溶解于DMF(50ml)中，加入1-氯频哪酮(2.63ml，20.0mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜，减压浓缩。将形成的酮-酯溶解于二甲苯(100ml)中，滤除CsBr。加入乙酸铵(25.0g，0.33mol)，将混合物加热回流约2小时，采用Dean-Stark分水器，除去过量的乙酸铵并释放出水。将反应混合物冷却，用饱和碳酸氢钠溶液(50ml)洗涤，用硫酸钠干燥、过滤和真空浓缩。对保护的中间体通过闪蒸色谱的硅胶柱进行纯化，采用80∶20的己烷∶乙酸乙酯作为淋洗剂，得到3.45g(50％)的结晶中间体(质谱344.3 MH+)。将这种中间体溶解于甲醇(30ml)中，加入浓盐酸(5.0ml)，将混合物搅拌约3小时。将溶液真空浓缩，残余物从THF和乙醚中沉淀出来。将固体真空干燥，得到1.89g(95％)的中间体9a。NMR(300MHZ，DMSO-d6)，8.5-10.5(3H，宽s)，7.3-7.4(1H，s)，7.15-7.35(3H，m)，7.0-7.1(2H，m)，4.9-5.1(1H，t)，3.5-3.65(2H，d)，1.2-1.3(9H，s)。
步骤h2-(1-(S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl))-氨基-2-苯基乙基)-4-(1，1-二甲基乙基)-1H-咪唑将中间体9a(790mg，2.50mmol)溶解于乙酸乙酯(40ml)中，加入三(2-氨基乙基)胺(9ml)，将混合物剧烈搅拌约1/2小时。乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液(2×120ml)洗涤，然后用10％磷酸盐缓冲溶液调节至pH＝5.5(3×40ml)。乙酸乙酯层用饱和碳酸氢钠溶液(40ml)搅拌，加入FmocTyr(OBzl)-OSu(1.02g，3.00mmol)。将反应混合物搅拌约1.5小时，除去水层。
以与前述类似的方式，将中间体顺序进行脱保护和偶联，采用Fmoc-Lys(Cbz)-OSu、Fmoc-D-Trp-OSu和Fmoc-Phe-OSu。将乙酸乙酯层通过闪蒸色谱的硅胶柱进行纯化，采用1％乙酸/乙酸乙酯作为淋洗剂。将产物馏分合并，真空浓缩。将粗产物再溶解于乙酸乙酯中，加入己烷进行沉淀、过滤。将固体进行真空干燥，得到中间体9h，1.67g(52％)。质谱1280.7MH+。
步骤e4-(1，1-二甲基乙基)-2-(1-(S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl))氨基-2-苯基乙基)-1-(2-乙氧基-2-氧代-乙基)-咪唑将中间体9h(128mg，0.10mmol)溶解于DMF(2ml)中，加入碳酸钾(35mg，0.25mmol)和溴乙酸乙酯(28μl，0.25mmol)，将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物真空浓缩，溶解于乙酸乙酯(10ml)中，再用水(10ml)洗涤。将乙酸乙酯层用硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩，得到粗中间体9e(126mg，92％)，其可不经纯化直接使用。
步骤f环[Phe-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]将中间体9e(116mg，0.085mmol)悬浮于乙酸乙酯(2ml)中，加入三(氨基乙基)胺(0.5ml)，将混合物剧烈搅拌约1/2小时。加入乙酸乙酯(10ml)，将溶液用饱和氯化钠溶液(2×5ml)洗涤，然后用10％磷酸盐缓冲溶液(pH＝5.5，3×5ml)洗涤。加入己烷(40ml)沉淀出中间体，对中间体(76mg)进行过滤。将残余物溶解于甲醇(2ml)中，在室温下与2.5N的氢氧化钠(0.1ml)一起搅拌过夜。将混合物用水稀释至混浊，将pH值调节至约6.0。将脱保护的中间体过滤和真空干燥。将固体吸收于DMF(20ml)中，加入DCC(126mg，0.60mmol)和HOBt(90mg，0.60mmol)。将混合物在室温下搅拌约6小时，真空浓缩。将其溶解于乙酸乙酯(5ml)中，用饱和碳酸氢钠水溶液(1×5ml)洗涤，再用饱和氯化钠溶液(5ml)洗涤。用硫酸钠干燥、过滤和真空浓缩，得到中间体9f。质谱1098.5 MH+。
步骤g环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)-Gly]将中间体9f(粗产物，0.085mmol)溶解于包含iPr3SiH的Tfa(9.4ml)和水(0.5ml)中，搅拌约20分钟，真空浓缩。将粗混合物在C18柱上进行制备HPLC纯化，采用30％至60％CH3CN/0.1％Tfa进行梯度洗脱，时间为约50分钟。第二次通常，采用32％至80％CH3CN/0.2％乙酸铵进行梯度洗脱，时间为约50分钟，以获得优良的分离效果。合并纯化馏分、浓缩和冷冻干燥(2×10ml 0.5％盐酸，然后1×10ml水)，得到实施例9的标题化合物，9mg(10％)。质谱998.4 MH+。
实施例10环[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以与实施例3基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例10，只是在步骤d中，采用Fmoc-Phe-OSu代替Fmoc-Trp-F。质谱894.4 MH+。
实施例11环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以与实施例3基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例11，只是在步骤d中，采用Fmoc-Phe-OH代替Fmoc-Trp-F，采用Fmoc-Tyr(OBzl)-OH代替Fmoc-Val-F。Fmoc-Tyr(OBzl)-OH用DCC和商购的HOAt活化。在步骤g中的粗混合物由完全脱保护的物质(Cbz和苄基醚均除去)和部分脱保护的物质(Cbz除去而苄基醚完整)组成。由部分脱保护形成的较低极性峰得到实施例11的标题化合物。质谱1048.5 MH+。
实施例12环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以与实施例3基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例12，只是在步骤d中，采用Fmoc-Phe-OH代替Fmoc-Trp-F，采用Fmoc-Tyr(OBzl)-OH代替Fmoc-Val-F。用DCC和商购的HOAt活化Fmoc-Tyr(OBzl)-OH。在步骤g中的粗混合物由完全脱保护的物质(Cbz和苄基醚均除去)和部分脱保护的物质(Cbz除去而苄基醚完整)组成。由完全脱保护形成的较高极性峰得到实施例12的标题化合物。质谱958.4 MH+。
实施例13环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑-Gly]以与实施例4基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例13，只是在步骤g中，采用中间体11f，环[Phe-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]代替中间体3f。质谱944.6 MH+。
实施例14环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以与实施例9基本类似的方式，按照合成反应路线2进行实施例14，其区别如下步骤h2-(1-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(Bzl))-氨基)-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-1-(三苯基甲基)-咪唑以与步骤9h类似的方式进行肽合成，只是采用Fmoc-Trp-OSu代替Fmoc-Phe-OSu，采用Fmoc-Lys(Boc)-OSu代替Fmoc-Lys(Cbz)-OSu和采用Fmoc-Tyr(Bzl)-OSu代替Fmoc-Val-OSu。得到783mg(57％)，质谱＝1370.6 MH+。
步骤e1-((2-乙氧基-2-氧代)乙基)-2-(1-(S)-((Fmoc-Trp-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl))-氨基)-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)咪唑中间体14h的烷基化反应以与反应9h类似的方式完成，得到640mg(80％)，质谱＝1456.3 MH+。
步骤f环[Trp-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]将中间体14e(640mg，0.44mmol)溶解于15ml甲醇中，加入2.5N氢氧化钠(1ml，2.5mmol)。将混合物搅拌约1/2小时，然后加入5％盐酸溶液将pH值调节至约7.0。减压除去甲醇，滗析出水层。将残余物在减压下充分干燥，然后，再溶解于15ml DMF中。加入DCC(206mg，1.0mmol)和HOBt(153mg，1.0mmol)，将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩，再溶解于乙酸乙酯(10ml)中，用10％磷酸盐缓冲液(pH＝5.5)洗涤两次。将乙酸乙酯层放在硅胶柱上，产物用较多的乙酸乙酯淋洗。合并产物馏分并浓缩，得到240mg(46％)的中间体14f。
步骤g环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]将中间体14f(240mg，0.20mmol)溶解于二氯甲烷(10ml)中，加入包含iPr3SiH(205μl，1.0mmol)的Tfa(10ml)。将混合物在室温下搅拌约15分钟。减压蒸出二氯甲烷，加入醚沉淀出粗产物。滗析出溶剂，将残余物进一步在C18柱上通过制备HPLC纯化，采用30％至50％CH3CN/0.1％Tfa进行梯度洗脱，时间为约55分钟。合并纯化馏分，浓缩和冷冻干燥(2×10ml0.5％盐酸，然后1×10ml水)，得到实施例14的标题化合物，25mg(11％)。质谱1087.4 MH+。
实施例15环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑-Gly]以与实施例4基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例15，其区别如下步骤g环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]将中间体1f(130mg，0.115mmol)溶解于二氯甲烷(5ml)中，在氮气气氛下，加入1M BBr3的己烷溶液(5ml)。将形成的浆液搅拌约1/2小时，然后冷却至约0℃。加入甲醇(10ml)，将混合物真空浓缩。将粗混合物放于C18柱上，用1％乙酸铵溶液洗涤，再用0.1％Tfa溶液洗涤，然后用20％至35％CH3CN/0.1％Tfa进行梯度洗脱，时间为约50分钟。合并纯化馏分、浓缩和冷冻干燥(2×10ml 0.5％盐酸)，得到实施例15的标题化合物，60mg(54％)。质谱896 MH+。
实施例16环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑-Gly]以与实施例3基本类似的方式，按照合成反应路线1进行实施例16，其区别如下步骤d2-(1-(S)-((Fmoc-Phe-D-Trp-Lys(Cbz)-Nal)氨基)-2-苯基乙基)-4-(3-甲氧基苯基)-1-(三苯基甲基)-咪唑以与中间体1d基本类似的方式制备中间体16d，只是采用Fmoc-Nal-OAt代替Fmoc-Val-F和采用Fmoc-Phe-OH代替Fmoc-Tyr(Bzl)-OH。
步骤g环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]以与步骤4g基本相同的方式进行步骤16g，获得实施例16的标题化合物。质谱实施例17环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以与实施例16基本类似的方式，按照反应路线1进行实施例17，其区别如下步骤g环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]将中间体17f(310mg，0.27mmol)悬浮于茴香醚(3ml)中，将悬浮液在约12ml的无水HF中处理。将混合物在约0℃下搅拌约1小时。蒸出HF，通过加入醚沉淀出产物。将粗产物过滤，再用制备HPLC进一步纯化，采用20-80％CH3CN/0.1％Tfa进行梯度洗脱，时间为约40分钟。合并纯化馏分，浓缩和在稀盐酸溶液中冷冻干燥两次，得到产物56mg(19％)，质谱992.4 MH+。 反应路线3实施例18环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]按照合成反应路线3进行实施例18。
步骤i2-(1-(S)-((苯基甲氧基)羰基)-氨基-2-苯基乙基)-4-(4-甲氧基苯基)-咪唑将Cbz-(L)-苯基丙氨酸(10.0g，33.4mmol)和碳酸铯(5.44g，16.7mmol)合并入2∶1/DMF∶水(75ml)中，将混合物进行搅拌直至获得均匀的混合物。减压除去溶剂，将残余物溶解于DMF(70ml)中，加入2-溴-3’-甲氧基苯乙酮(7.65g，33.4mmol)的DMF(30ml)溶液。将混合物在室温下搅拌约1/2小时，然后减压浓缩。将形成的酮-酯溶解于二甲苯(150ml)中，滤除CsBr。加入乙酸铵(40.0g，0.52mol)，将混合物加热回流约2小时，采用Dean-Stark分水器，除去过量的乙酸铵并释放出水。将反应混合物冷却，用饱和碳酸氢钠溶液(50ml)和饱和氯化钠溶液(50ml)洗涤。用硫酸钠干燥二甲苯层，过滤和真空浓缩，得到中间体18i，为一种棕褐色固体(13.8g，96％)。质谱428.2(MH+)。
步骤j2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-1-(4-(1，1-二甲基乙氧基)-4-氧代-丁基)-4-(4-甲氧基苯基)-咪唑将中间体18i(2.14g，5.0mmol)溶解于DMF(11.5ml)中，用碳酸氢钾(1.50g，15.0mmol)和丁酸4-溴-叔丁基酯(4-bromo-t-butylbutyrate)(6.69g，30mmol)分三次进行处理，在约50℃下搅拌约18小时。将混合物用乙醚稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤一次和用饱和氯化钠溶液洗涤一次。醚层用硫酸钠干燥，过滤和浓缩形成一种油。用硅胶柱色谱进行处理，采用二氯甲烷作为淋洗剂，得到一种油状产物。
将烷基化的粗产物通过在乙酸中采用10％ Pd/C作为催化剂进行氢化而脱保护。滤除催化剂，减压蒸出溶剂。将残余物溶解于乙酸乙酯中，用饱和碳酸氢钠溶液和饱和氯化钠溶液洗涤，用硫酸钠进行干燥并浓缩得到中间体18j，为一种油(450mg)，其可不经进一步纯化即用于下一步骤。
步骤k2-(1-(S)-((Boc-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)-氨基-2-苯基乙基)-1-((4-(1，1-二甲基乙氧基)-4-氧代)丁基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑以与步骤1d详述的合成过程相同的方式进行溶液合成，只是采用Boc-Trp-OSu代替Fmoc-Tyr(OBzl)-OSu和采用Fmoc-Tyr(OBzl)-OAt代替Fmoc-Val-F，得到中间体18k。得到产物1.03g(81％)。
步骤12-(1-(S)-((H-Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Val)-氨基-2-苯基乙基)-1-((4-羟基-4-氧代)丁基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑中间体18k用含有(iPr)3SiH(593μl，2.90mmol)的Tfa(10ml)溶液处理，搅拌约1小时。将反应混合物浓缩，用1∶1乙醚∶己烷溶液进行研制，得到中间体181，为一种棕褐色固体，其可不经进一步纯化即可用于下一步骤。质谱1267.7 MH+。
步骤f环[Trp-D-Trp-Lys(Cbz)-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]将中间体18l溶解于DMF(20ml)中，加入4-甲基吗啉(159μl，1.45mmol)、HOBt(196mg，1.45mmol)和EDC(278mg，1.45mmol)，将反应混合物搅拌过夜。再将反应混合物真空浓缩，用硅胶闪蒸色谱纯化，采用二氯甲烷∶甲醇(9∶1)作为淋洗剂，得到中间体18f，得到产物220mg(24％)。质谱1249.7 MH+。
步骤g环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]在30psi的氢气气氛下，于室温，将中间体18f(220mg，176μmol)在乙酸中部分氢化14小时，采用的催化剂为10％Pd/C。滤除催化剂，将滤液进行真空浓缩。将粗混合物在C18柱上进行制备HPLC纯化，采用0％至75％CH3CN/0.1％Tfa进行梯度洗脱，时间为40分钟。合并产物峰的纯化馏分，浓缩和冷冻干燥(2×10ml 0.5％盐酸，然后1×10ml水)，得到实施例18的标题化合物，72mg(37％)。质谱1115.6 MH+。
实施例19环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑-Gly]以与实施例18基本类似的方式，按照合成反应路线3进行实施例19，其区别如下步骤j2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-1-(2-(1，1-二甲基乙氧基)-2-氧代-乙基)-4-(4-甲氧基苯基)-咪唑将中间体18i(854mg，2.0mmol)溶解于DMF(10ml)中，加入溴代乙酸叔丁酯(646μl，4.0mmol)和碳酸钾(552mg，4.0mmol)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。减压除去溶剂，将残余物溶解于乙酸乙酯中，用饱和氯化钠溶液洗涤。乙酸乙酯层用硫酸钠干燥，过滤和真空浓缩，得到1.02g的泡沫物。质谱428.2 MH+，NMR(300MHZ，DMSO-d6)，7.85-8.0(1H，d)，7.6-7.75(2H，d)，7.85-7.95(1H，s)，7.1-7.35(10H，m)，6.9-7.0(2H，d)，4.75-5.05(5H，m)，3.7-3.9(3H，s)，3.1-3.4(2H，m)，1.3-1.5(9H，s)。
将中间体白色泡沫物(1.02g，1.88mmol)溶解于包含10％Pd/C(50mg)的HOAc(50ml)中，在30psi的氢气气氛下进行氢化10小时。滤除催化剂，加入2N盐酸(940μL，1.88mmol)。将混合物冷冻干燥一次，然后再在20％CH3CN/水中冷冻干燥，得到中间体19j，为一种浅褐色固体(862mg)，其可不经进一步纯化直接使用。质谱408.2 MH+。
步骤g以与步骤18g基本类似的方式进行催化氢化和处理，得到标题产物(22mg，4％)，为一种白色固体。质谱1088.2 MH+。
实施例20环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑-Gly]以与实施例18基本类似的方式，按照合成反应路线3进行实施例20，只是在步骤i中，采用2-溴苯乙酮代替2-溴-3′-甲氧基苯乙酮。质谱1057.4 MH+。
实施例21环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(ε)Ahx]以与实施例18基本类似的方式，按照合成反应路线3进行实施例21，其区别如下步骤j2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-1-(6-(乙氧基)-6-氧代-己基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑将中间体21i(855mg，2.0mmol)溶解于DMF(8.0ml)中，并用碳酸氢钾(200mg，2.0mmol)和6-溴己酸乙酯(3.56ml，20mmol)在约120℃下处理约8小时。将混合物浓缩，将残余物通过硅胶柱色谱进行纯化，采用2∶1的己烷∶乙酸乙酯作为淋洗剂，得到纯化产物，为一种胶状物(0.94g)。
将烷基化的粗产物通过在乙酸中进行氢化脱保护，采用10％Pd/C作为催化剂。滤除催化剂，减压蒸出溶剂。将残余物溶解于稀盐酸中，冷冻并冷冻干燥，得到中间体21j，为一种浅黄色固体(720mg，91％)，其不经进一步纯化即可用于下一步骤。质谱436.2 MH+。
步骤k和步骤l2-(1-(S)-((H-Trp-D-Trp-Lys(Boc)-Tyr(OBzl)-2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-1-(6-(乙氧基)-6-氧代-己基)-4-(3-甲氧基苯基)-咪唑通过将Fmoc-Tyr(OBzl)-OH(493mg，1.00mmol)、HOAt(136mg，1.0mmol)和DCC(206mg，1.0mmol)在8ml乙酸乙酯中混合约1/2小时，然后除去二环己基脲而制得Fmoc-Tyr(OBzl)-OAt。将形成的溶液加至中间体21j(457mg，0.9mmol)的乙酸乙酯(4ml)溶液中，将混合物与饱和碳酸氢钠溶液(10ml)搅拌，直至经质谱分析表明反应完成。除去水层，乙酸乙酯层用硫酸钠干燥，过滤并再用三(2-氨基乙基)胺(2.7ml)处理。将混合物剧烈搅拌约1/2小时。乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液(2×60ml)洗涤，然后用10％磷酸盐缓冲溶液调节pH值至约5.5(3×15ml)。
以与如上所述Fmoc-Tyr(OBzl)-OAt循环类似的方式，将中间体顺序进行脱保护和偶联，采用Fmoc-Lys(Cbz)-OSu、Fmoc-D-Trp-OSu和Fmoc-Trp-OSu。最后的Fmoc脱保护得到N-末端的脱保护的中间体乙基酯。将乙酸乙酯层用硫酸钠干燥，过滤并用4倍体积的己烷进行稀释。倒出溶剂，将残余物用己烷研制，得到一种固体状产物(0.67g，58％)，其可不经进一步纯化即可使用。质谱1289.6 MH+。
通过用1.7M的氢氧化钠溶液(1.7ml)过夜处理在甲醇(5.0ml)中的中间体以除去乙基酯。用5％盐酸溶液将混合物的pH值调节至约8.2，减压除去溶剂。将残余物吸收于DMF中，过滤除去氯化钠，不经进一步纯化即可将DMF溶液用于下一步骤。
以与实施例18类似的方式进行环化反应和脱保护，得到实施例21的标题化合物，为一种白色粉末，62mg。质谱1143.9 MH+。
实施例22
环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑-(γ)Abu]以与实施例18基本类似的方式，按照合成反应路线3进行实施例22，其区别如下步骤j2-(1-(S)-氨基-2-苯基乙基)-1-(4-(乙氧基)-4-氧代-丁基)-4-(4-羟基苯基)-咪唑将中间体22i(2.0g，4.68mmol)溶解于DMF(7.0ml)中，用碳酸氢钾(468mg，4.68mmol)和4-溴-丁酸乙酯(6.70ml，46.8mmol)处理，在约100℃下搅拌约30小时。将混合物用乙醚稀释，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤一次，再用饱和氯化钠溶液洗涤一次。醚层用硫酸钠干燥，过滤并浓缩得到一种油。进行硅胶柱色谱纯化，采用二氯甲烷作为淋洗剂，得到一种油状产物(2.53g，94％)。质谱542.3 MH+。
在15分钟内，于约-10℃下，将在二氯甲烷(50ml)中的烷基化的粗产物(2.53g，4.67mmol)滴加到1M BBr3/己烷(23.4ml)的二氯甲烷(250ml)溶液中。将混合物升温至室温，搅拌约2小时。加入乙醇(40ml)，再将混合物浓缩至约50ml。将溶液用乙醇(100ml)稀释，在室温下搅拌过夜。将混合物减压浓缩，使残余物在乙酸乙酯与饱和碳酸氢钠溶液间进行分配。乙酸乙酯层用硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到一种油(1.41g，76％)，其可不经苯酚保护即可用于下一步骤。质谱394.3 MH+。
HPLC停留时间
HPLC系统A梯度20-80％CH3CN/0.1％Tfa，24分钟流速1.0ml/分钟检测254nm柱 VYDAC蛋白质和肽C18B梯度35-50％CH3CN/0.1％Tfa，24分钟流速1.0ml/分钟检测254nm柱 VYDAC蛋白质和肽C18C梯度32-64％CH3CN/0.1％乙酸铵，24分钟流速1.0ml/分钟检测254nm柱 VYDAC蛋白质和肽C18D梯度20-60％CH3CN/0.1％Tfa，24分钟流速1.0ml/分钟检测254nm柱 VYDAC蛋白质和肽C18E梯度55-75％CH3CN/0.1％Tfa，24分钟流速1.0ml/分钟检测220nm柱 Phenomenex LICHROSPHERE5 RP18(Phenomenex，2320W，205thSt.，Torrance，CA)F梯度60％CH3CN/0.1％Tfa等度洗脱流速1.0ml/分钟检测254nm
柱 VYDAC蛋白质和肽C18G梯度50％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脱流速1.0ml/分钟检测254nm柱 VYDAC蛋白质和肽C18H梯度38％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脱流速1.0ml/分钟检测254nm柱 VYDAC蛋白质和肽C18I梯度20-40％CH3CN/0.1％Tfa，24分钟流速1.0ml/分钟检测254nm柱 VYDAC蛋白质和肽C18J梯度50％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脱流速1.0ml/分钟检测254nm柱 NUCLEOSILTMC18，5微米(Alltech Associates，2051Waukegan Rd.，Deerfield，Illinois)K梯度40％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脱流速1.0ml/分钟检测254nm柱 NUCLEOSILTMC18，5微米L梯度52％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脱流速1.0ml/分钟检测254nm
柱 NUCLEOSILTMC18，5微米M梯度50％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脱流速1.0ml/分钟检测254nm柱 NUCLEOSILTMC18，5微米N梯度48％CH3CN/0.1％Tfa，等度洗脱流速1.0ml/分钟检测254nm柱 NUCLEOSILTMC18，5微米
权利要求
1.式(I)化合物或其可药用盐， 其中，Y和Z在每次出现时彼此独立地是D-或L-天然或非天然的α-氨基酸；n在每次出现时彼此独立地是0至50，条件是两个n不能同时为0；m是0或1到10的整数；a是H或R1；b是OH、-OR1或-NR9R9；或者a与b合在一起形成酰胺键；R1彼此独立地是H、(C1-C4)烷基或芳基-(C1-C4)烷基；R2是H或选自(C1-C4)烷基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基和杂环基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分，其中，选择性取代的部分选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基、-O-R6、-S(O)q-R7、-N(R9R9)、-NHCO-R6、-NHSO2R9、-CO2R9、-CONR9R9和-SO2NR9R9，其中q是0、1、2或3；R3和R4彼此独立地是H、卤素或选自(C1-C4)烷基、(C3-C8)环烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分；其中，选择性取代的部分选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自OH、(C1-C4)烷基、(C4-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOH、-CONR9R9和卤素；或者R3和R4与它们所连接的碳合在一起形成选择性取代的芳基，其中的芳基选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自OH、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOR5、-CONR9R9和卤素；R5在每次出现时彼此独立地是H或选自(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分，其中，选择性取代的部分选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自(C1-C4)烷基、OH、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、NO2、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、COOH、-CONR9R9和卤素；R6在每次出现时彼此独立地选自H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳基-(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷氧基；当q是3时，R7是H；或者当q是0、1或2时，R7在每次出现时彼此独立地选自(C1-C4)烷基、芳基或芳基-(C1-C4)烷基；R9在每次出现时彼此独立地选自H、NO2、(C1-C4)烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基。
2.式(II)的化合物或其可药用盐， 其中，Y和Z在每次出现时彼此独立地是D-或L-天然或非天然的α-氨基酸；m是0或1到10的整数；n在每次出现时彼此独立地是0至6；R1在每次出现时彼此独立地是H、(C1-C4)烷基或芳基-(C1-C4)烷基；R2是H或选自(C1-C4)烷基、苯基、苯基-(C1-C4)烷基和杂环基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分，其中，选择性取代的部分选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自(C1-C4)烷基、环烷基、-O-R6、-S(O)q-R7、-N(R9R9)、-NHCO-R6、-NHSO2R9、-CO2R9、-CONR9R9和-SO2NR9R9，其中q是0、1、2或3；R3和R4彼此独立地是H、卤素或选自(C1-C4)烷基、环烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分；其中，选择性取代的部分选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基选自OH、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOH、-CONR9R9和卤素；或者R3和R4与它们所连接的碳合在一起形成选择性取代的芳基，其中的芳基选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自OH、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、-COOR5、-CONR9R9和卤素；R5在每次出现时彼此独立地是H或选自(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分，其中，选择性取代的部分选择性地被一个或多个取代基所取代，所述取代基彼此独立地选自(C1-C4)烷基、OH、(C1-C4)烷氧基、芳氧基、NO2、芳基-(C1-C4)烷氧基、-NR9R9、COOH、-CONR9R9和卤素；R6在每次出现时彼此独立地选自H、(C1-C4)烷基、(C1-C4)烷氧基、芳基-(C1-C4)烷基和芳基-(C1-C4)烷氧基；当q是3时，R7是H；或者当q是0、1或2时，R7在每次出现时彼此独立地选自(C1-C4)烷基、芳基或芳基-(C1-C4)烷基；R9在每次出现时彼此独立地选自H、NO2、(C1-C4)烷基、芳基和芳基-(C1-C4)烷基；X1是天然或非天然的D-或L-α-氨基酸，其中，当X1是Phe、Nal、Trp、Tyr、Pal或His时，其芳环在碳或氮上选择性地被R6所取代，或者当X1是Ser或Thr时，其侧链氧选择性地被一个或多个R1所取代；X2是D-或L-Trp、N-甲基-D-Trp或N-甲基-L-Trp；X3是Lys、α-N-甲基-Lys或ε-N-(C1-C4)烷基-Lys或ε-N-[芳基-(C1-C4)烷基]-Lys；X4是天然或非天然的D-或L-α-氨基酸，其中，当X4是Phe、Nal、Trp、Tyr或His时，其芳环在碳或氮上选择性地被R8所取代，或者当X4是Ser、Tyr或Thr时，其侧链氧可以被一个或多个R1所取代。
3.根据权利要求2的化合物，其中，n是2；m是0或1至5；R1在每次出现时彼此独立地是H、甲基或芳基-(C1-C4)烷基；R2是选自苯基-(C1-C4)烷基和杂环基-(C1-C4)烷基的选择性取代的部分，其中，选择性取代的部分被选自(C1-C4)烷基和-O-R6的取代基所取代；R3和R4彼此独立地是H、卤素或选自(C1-C4)烷基和芳基的选择性取代的部分；其中，选择性取代的部分选择性地被选自OH、(C1-C4)烷氧基、芳氧基和卤素的取代基所取代。
4.根据权利要求3的化合物，其中，X1是Phe、Nal、Trp、Tyr、Pal或His，其中，它们的芳环在碳或氮上选择性地被R6所取代；X4是Val、Abu、Ser、Thr、Nal、Trp、Tyr或His，其中，Nal、Trp、Tyr和His的芳环在碳和/或氮上选择性地被R8所取代，或者当X4是Ser、Tyr或Thr时，侧链氧选择性地被R1所取代。
5.根据权利要求4的化合物，其中，X1是Phe、Trp或Tyr，其中，它们的芳环在碳或氮上选择性地被R6所取代；X2是D-Trp或N-甲基-D-Trp；X3是Lys或α-N-甲基-Lys；X4是Val、Thr、Abu、Nal或Tyr，其中Thr和Tyr的羟基的侧链氧选择性地被R1所取代；R1在每次出现时彼此独立地是H、甲基或苄基；R2是选自苯甲基和杂环基-甲基的选择性取代的部分，其中，选择性取代的部分被选自(C1-C4)烷基和-O-R6的取代基所取代；R3是(C1-C4)烷基或选择性取代的芳基；其中，选择性取代的芳基被选自OH、(C1-C4)烷氧基、芳氧基和卤素的取代基所取代；R4是H；和R6在每次出现时彼此独立地选自H和芳基-(C1-C4)烷氧基。
6.根据权利要求5的化合物，其中X1是Phe、Trp、Tyr或Tyr(OBzl)；X4是Val、Thr、Abu、Nal或Tyr，其中Thr和Tyr的羟基选择性地被苄基所取代；m是0、2或4；R2是选自苯甲基或3-吲哚基甲基的选择性取代的部分，其中，该选择性取代的部分选择性地被-O-R6所取代；和R3是1，1-二甲基乙基或选择性取代的芳基；其中，选择性取代的芳基选择性地被选自OH、(C1-C4)烷氧基和卤素的基团所取代；
7.根据权利要求6的化合物，其中R2是苯甲基；R3是1，1-二甲基乙基或选择性取代的苯基，其中，选择性取代的苯基选择性地被OH或OCH3所取代；R6在每次出现时彼此独立地选自H或苄基甲氧基。
8.根据权利要求1的化合物，其中，所述化合物是H-Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly-OH。
9.根据权利要求7的化合物，其中，所述化合物是环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)-Abu]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(ε)Ahx]，或环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑-(γ)Abu]。
10.根据权利要求9的化合物，其中，所述化合物是环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Tyr(OBzl)-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，或环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]。
11.根据权利要求10的化合物，其中，所述化合物是环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，或环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]。
12.根据权利要求11的化合物，其中，所述化合物是环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，或环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]。
13.根据权利要求9的化合物，其中，所述化合物是环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Abu-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(1，1-二甲基乙基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr(OBzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Tyr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Tyr-D-Trp-Lys-Val-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-(ε)Ahx]，或环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑-(γ)Abu]。
14.根据权利要求13的化合物，其中，所述化合物是环[Trp-D-Trp-Lys-Thr-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Phe-D-Trp-Lys-Nal-Pheψ(4-(3-羟基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，或环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]。
15.根据权利要求14的化合物，其中，所述化合物是环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(3-甲氧基苯基)咪唑-(γ)Abu]，环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(4-甲氧基苯基)咪唑)-Gly]，或环[Trp-D-Trp-Lys-Tyr(Bzl)-Pheψ(4-(苯基)咪唑)-Gly]。
16.含有有效量的权利要求1的化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。
17.含有有效量的权利要求2的化合物或其可药用盐以及可药用载体的药物组合物。
18.在存在需要的哺乳动物中诱导促生长素抑制素受体激动剂作用的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1的化合物或其可药用盐。
19.在存在需要的哺乳动物中诱导促生长素抑制素受体激动剂作用的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用有效量的权利要求2的化合物或其可药用盐。
20.在存在需要的哺乳动物中诱导促生长素抑制素受体拮抗剂作用的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用有效量的权利要求1的化合物或其可药用盐。
21.在存在需要的哺乳动物中诱导促生长素抑制素受体拮抗剂作用的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用有效量的权利要求2的化合物或其可药用盐。
22.在需要治疗的哺乳动物中治疗催乳素分泌腺瘤再狭窄、糖尿病、高脂血症、胰岛素不敏感、X综合征、血管病、增殖性视网膜病、黎明现象、肾病；胃酸分泌、消化性溃疡、肠皮肤瘘和胰皮肤瘘、过敏性肠疾病、倾倒综合征、水泻综合征、与AIDS有关的腹泻、化疗引起的腹泻、急性或慢性胰腺炎、胃肠激素分泌肿瘤、癌症、肝细胞瘤、血管生成、炎性疾病、关节炎、慢性同种异体移植物排斥反应、血管成形术、移植血管出血或胃肠出血的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用权利要求1的化合物或其可药用盐。
23.在需要治疗的哺乳动物中治疗催乳素分泌腺瘤再狭窄、糖尿病、高脂血症、胰岛素不敏感、X综合征、血管病、增殖性视网膜病、黎明现象、肾病；胃酸分泌、消化性溃疡、肠皮肤瘘和胰皮肤瘘、过敏性肠疾病、倾倒综合征、水泻综合征、与AIDS有关的腹泻、化疗引起的腹泻、急性或慢性胰腺炎、胃肠激素分泌肿瘤、癌症、肝细胞瘤、血管生成、炎性疾病、关节炎、慢性同种异体移植物排斥反应、血管成形术、移植血管出血或胃肠出血的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用权利要求2的化合物或其可药用盐。
24.在需要治疗的哺乳动物中抑制幽门螺旋杆菌增殖的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用权利要求1化合物或其可药用盐。
25.在需要治疗的哺乳动物中抑制幽门螺旋杆菌增殖的方法，该方法包括，向所述哺乳动物施用权利要求2化合物或其可药用盐。
全文摘要
本发明涉及可选择性地与促生长素抑制素受体亚型结合的含有咪唑顺式酰胺键模拟物的环状衍生物,本发明还涉及该化合物在治疗可通过从促生长素抑制素亚型受体诱导激动剂或拮抗剂作用进行治疗的疾病中的用途。本发明还涉及制备本发明化合物的方法。
文档编号A61P13/00GK1305496SQ99807502
公开日2001年7月25日 申请日期1999年6月11日 优先权日1998年6月16日
发明者汤玛斯·D·高登 申请人:研究及应用科学协会股份有限公司